Name: establishing 3d endometrial organoids from the mouse uterus
Uploaded: 2023-01-06T13:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus at JoVE.com

Vi takker Dr. Stephanie Pangas og Dr. Martin M. Matzuk (M.M.M.) for kritisk lesing og redigering av manuskriptet vårt. Studier ble støttet av Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health and Human Development tilskudd R00-HD096057 (DM), R01-HD105800 (DM), R01-HD032067 (M.M.M.), og R01-HD110038 (M.M.M.), og av NCI- P30 Cancer Center Support Grant (NCI-CA125123). Diana Monsivais, Ph.D. har en Next Gen Pregnancy Award fra Burroughs Wellcome Fund.

Musehåndtering og eksperimentelle studier ble utført under protokoller godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) fra Baylor College of Medicine og retningslinjer fastsatt av NIH Guide for Care and Use of Laboratory Animals.
1. Isolering av livmorepitel fra mus ved hjelp av enzymatiske og mekaniske metoder
MERK: Denne delen beskriver trinnene som kreves for å etablere, passere, fryse og tine epiteliale endometrieorganoider fra ...

Her beskriver vi metoder for å generere endometrielle epitelorganoider fra musens endometrium og protokollene som rutinemessig brukes til nedstrømsanalyse. Endometrieorganoider er et kraftig verktøy for å studere mekanismene som kontrollerer endometrierelaterte sykdommer, som endometriose, endometriekreft og implantasjonssvikt. Landemerkestudier publisert i 2017 rapporterte forholdene til å dyrke langsiktige og fornybare kulturer av endometrieorganoider fra mus og humant epitel 4,5...

Endometrium - det indre slimhinnen i livmorhulen - er et unikt og svært dynamisk vev som spiller kritiske roller i en kvinnes reproduktive helse. Under reproduktiv levetid har endometrium potensialet til å gjennomgå hundrevis av sykluser av spredning, differensiering og sammenbrudd, koordinert av den samordnede virkningen av eggstokkhormonene - østrogen og progesteron. Studier av genmodifiserte mus har avdekket grunnleggende biologiske mekanismer som ligger til grunn for endometrieresponsen på hormoner og kontroll av embryoimplantasjon, stromalcelledecidualisering og graviditet1. In vitro-studier har imidlertid vært begrenset på grunn av vanskeligheter med å opprettholde ikke-transformert primært museendometrievev i tradisjonelle 2D-cellekulturer 2,3. Nylige fremskritt i kulturen av endometrievev som 3D-organsystemer, eller organoider, presenterer en ny mulighet til å undersøke biologiske veier som styrer endometriecelleregenerering og differensiering. Mus og humane endometriske organoidsystemer er utviklet fra rent endometrieepitel innkapslet i forskjellige matriser4,5, mens humant endometrium har blitt dyrket som stillasfrie epitel-/stromale kokulturer6,7, og mer nylig som kollageninnkapslede epitelial/stromale assembloider8 . Veksten og det regenerative potensialet til epitelorganoidkulturer støttes av en definert cocktail av vekstfaktorer og små molekylhemmere som er empirisk bestemt for å maksimere vekst og regenerering av organoidene 4,5,9. Videre tillater evnen til å fryse og tine endometrieorganoider den langsiktige banken av endometrieorganoider fra mus og mennesker for fremtidige studier.
Genmodifiserte mus har avslørt de komplekse signalveiene som styrer tidlig graviditet og decidualisering, og har blitt brukt som modeller for graviditetstap, endometriekreft og endometriose. Disse genetiske studiene er i stor grad oppnådd med cellespesifikk delesjon av loxP-flankerte alleler ("floxed") ved bruk av cre recombinaser som er spesielt aktive i kvinnelig reproduktivt vev. Disse musemodellene inkluderer den mye brukte progesteronreseptor-cre10, som har sterk rekombinaseaktivitet i endometrieepitel- og stromalvevet, laktoferrin i-cre, som induserer endometrisk epitelrekombinasjon hos voksne mus11, eller Wnt7a-cre, som utløser epitelspesifikk delesjon i Müllerian-avledet vev12 . Dyrking av endometrievev fra genetisk utviklede musemodeller som 3D-organoider har gitt en utmerket mulighet til å undersøke endometrisk biologi og lette identifisering av vekstfaktorer og signalveier som styrer endometriecellefornyelse og differensiering13,14. Metoder for isolering og kultur av mus endometrievev er beskrevet i litteraturen og rapporterer bruken av ulike enzymatiske strategier for isolering av livmorepitel for etterfølgende dyrking av endometriske epitelorganoider4. Mens tidligere litteratur gir et kritisk rammeverk for endometrieepitelorganoidkulturprotokoller 4,5,6, gir dette papiret en klar, omfattende metode for å generere, vedlikeholde, behandle og analysere disse organoider. Standardisering av disse teknikkene er viktig for å akselerere fremskritt innen kvinners reproduktive biologi. Her rapporterer vi en detaljert metodikk for enzymatisk og mekanisk rensing av mus endometrial epitelvev for den etterfølgende kulturen av endometrieorganoider i et gelmatrisestillas. Vi beskriver også metodene for nedstrøms histologiske og molekylære analyser av gelmatrise-innkapslede mus endometrial epitelorganoider.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="4">Organoid Media Formulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Final concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix, *LDEV-free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td>100%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin from Bovine Pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1426-1G</td>
			<td>1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12634010</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17502048</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27&#8482; Supplement (50X), minus vitamin A</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12587010</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primocin</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>ant-pm-1</td>
			<td>100 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Acetyl-L-cysteine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9165-5G</td>
			<td>1.25 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25030024</td>
			<td>2 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>N0636-100G</td>
			<td>10 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALK-4, -5, -7 inhibitor, A83-01</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2939</td>
			<td>500 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td>50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human Noggin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-10C</td>
			<td>100 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human Rspondin-1</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-38</td>
			<td>500 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human FGF-10</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-26</td>
			<td>100 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human HGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-39</td>
			<td>50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WNT3a</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>5036-WN</td>
			<td>200 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other supplies and reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Final concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase from Clostridium histolyticum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0130-1G</td>
			<td>5 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>DN25-100MG</td>
			<td>2 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14190-250</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14170112</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Polystyrene Microplates (24-Well)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#08-772-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Polystyrene Microplates (12-Well)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#0877229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Cell Strainers, 40 &#181;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#08-771-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Direct-zol RNA MiniPrep (50 &#181;g)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>11-331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizol reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12, HEPES, no phenol red</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11039021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, Charcoal stripped</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F6765-500ML</td>
			<td>2%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Estratiol (E2)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E1024-1G</td>
			<td>10 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde 16% in aqueous solution, EM Grade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>15710</td>
			<td>4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Cassette 1 Slotted Tissue Cassettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1000961</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Stainless-Steel Embedding Base Molds</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>64-010-15&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 200 proof (100%)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-032-601&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoclear</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-899-90147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount Mounting Medium</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-277-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Nylon Biopsy Bags</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6774010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoGel Specimen Processing Gel</td>
			<td>VWR</td>
			<td>83009-992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin solution Premium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95057-844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y (yellowish) solution Premium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95057-848</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBS Buffer, 20X, pH 7.4</td>
			<td>GenDEPORT</td>
			<td>T8054</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBST (10X), pH 7.4</td>
			<td>GenDEPORT</td>
			<td>T8056</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0759-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate tribasic dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S4641-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween20</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP337-500&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A2153-100G</td>
			<td>3%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Solution (1 mg/mL)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>62248</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Nail Polish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1849418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22037246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Micro Cover Glasses</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript VILO Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11755050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYBR Green PCR Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4364346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Krt8 Antibody (TROMA-I)&#160;</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>TROMA-I&#160;</td>
			<td>1:50 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin Antobody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>5741S</td>
			<td>1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rat IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary 
			Antibody, Alexa Fluor 594</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-21209</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rabbin IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary 
			Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-21206</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS Stemi 508 Stereo Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS Axio Vert.A1 Inverted Routine Microscope with digital camera</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer Sequence</td>
			<td>Forward (5&#39;-3&#39;)</td>
			<td>Reverse (5&#39;-3&#39;)</td>
			<td>_</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipocalin 2 (Lcn2)</td>
			<td>GCAGGTGGTACGTTGTGGG</td>
			<td>CTCTTGTAGCTCATAGATGGTGC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactoferrin (Ltf)</td>
			<td>TGAGGCCCTTGGACTCTGT</td>
			<td>ACCCACTTTTCTCATCTCGTTC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone (Pgr)</td>
			<td>CCCACAGGAGTTTGTCAAGCTC</td>
			<td>TAACTTCAGACATCATTTCCGG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase (Gapdh)</td>
			<td>CAATGTGTCCGTCGTGGATCT</td>
			<td>GCCTGCTTCACCACCTTCTT</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing 3d endometrial organoids from the mouse uterus

Endometrial vev linjer det indre hulrommet i livmoren og er under syklisk kontroll av østrogen og progesteron. Det er et vev som består av luminal- og kjertelepitel, et stromalt rom, et vaskulært nettverk og en kompleks immuncellepopulasjon. Musemodeller har vært et kraftig verktøy for å studere endometrium, og avslører kritiske mekanismer som styrer implantasjon, placentasjon og kreft. Den nylige utviklingen av 3D endometrial organoid kulturer presenterer en state-of-the-art modell for å dissekere signalveiene som ligger til grunn for endometrisk biologi. Etablering av endometrieorganoider fra genetisk utviklede musemodeller, analyse av transkriptomer og visualisering av morfologi ved encellet oppløsning er avgjørende verktøy for studiet av endometriesykdommer. Dette papiret skisserer metoder for å etablere 3D-kulturer av endometrisk epitel fra mus og beskriver teknikker for å kvantifisere genuttrykk og analysere organoidens histologi. Målet er å gi en ressurs som kan brukes til å etablere, dyrke og studere genuttrykk og morfologiske egenskaper av endometrielle epitelorganoider.

Fasekontrastbilder av musens endometrieorganoider Vi etablerte organoider fra WT-mus endometrisk epitel, som beskrevet i vedlagte protokoll (se figur 1). Etter enzymatisk dissosiasjon av musens endometrieepitel ble epitelarkene mekanisk separert fra livmorstromalcellene og videre dissosiert med kollagenase for å generere en encellet suspensjon. Hvis det utføres riktig, bør denne metoden for epitel- og stromalcelleseparasjon gi prøver med forurensning på ikke mer enn ...

Watch this Scientific Journal Video about Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus at JoVE.com

Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus

Denne protokollen beskriver metoder for å etablere endometrielle organoider for museepitelorganer for genuttrykk og histologiske analyser.

Etablering av 3D Endometrial Organoids fra Mouse Uterus

Endometrial tissue lines the inner cavity of the uterus and is under the cyclical control of estrogen and progesterone. It is a tissue that is composed of ...

Denne protokollen er viktig da den viser en trinnvis metodikk for å isolere svært rent livmorepitel fra musens livmor for kulturen av endometrieorganoider. Denne metoden utnytter effektivt enzymatisk og mekanisk dissosiasjon for å isolere livmorepitelet. Teknikkene ble strømlinjeformet for å etablere, behandle og analysere endometriske epitelorganoider avledet fra det isolerte epitelet.Begynn med å tine gelmatrisen på is i omtrent en til to timer før bruk. Disseker deretter den euthaniserte musen ved å lage et midtlinjeinnsnitt på magen ved hjelp av saks, og forsiktig peeling av huden for å eksponere det underliggende peritoneale laget. Finn livmorhornene ved å forsiktig flytte bukfettputene til side og hold livmorhornene i livmorhalskrysset før du skjærer dem langs mesenterisk fett.Etter disseksjon av musens livmor, fjern grundig fettvev fra livmorhornet med liten saks. Når du er ferdig, kutt hvert livmorhorn i små fragmenter, hver måler omtrent fire til fem millimeter. Plasser alle livmorfragmentene fra en livmor i en brønn på en 24-brønnplate som inneholder 0,5 milliliter 1% trypsin.Inkuber deretter 24-brønnplaten i en 37 grader Celsius fuktet vevskulturinkubator i omtrent en time for enzymatisk separasjon av endometrieepitelet fra den underliggende stroma. Etter inkubasjonen overfører du livmorfragmentene til en 35 millimeter vevskulturplate som inneholder en milliliter Dulbeccos fosfatbufrede løsning eller DPBS. Deretter skiller du livmorepitelet fra livmorrøret under et disseksjonsmikroskop ved å holde den ene enden av et livmorfragment med tangen og forsiktig kjøre pipettespissen i lengderetningen over fragmentet, klemme epitelet ut av den andre enden av livmorrøret.Deretter observerer du de separerte epitelarkene fra livmorfragmentet under disseksjonsmikroskopet. Deretter overfører du forsiktig alle epitelarkene til det samme 1, 5 milliliter røret ved hjelp av en milliliter pipette. Og pellet de dissosierte epitelarkene ved sentrifugering ved 375 x g i fem minutter.Fjern supernatanten forsiktig uten å forstyrre cellepelleten og resuspend cellepelleten i 0,5 milliliter på 2,5 milligram per milliliter kollagenase pluss to milligram per milliliter DNA-løsning. Pipetten opp og ned ca. 10 ganger eller til en enkeltcellesuspensjon er oppnådd. Deretter legger du til 0,5 milliliter DMEM F / 12 pluss 10% føtalt bovint serum eller FBS pluss antibiotika og sentrifuger cellene i fem minutter ved 375 x g.Fjern supernatanten, resuspend cellene i en milliliter DMEM / F12 pluss 10% FBS pluss antibiotika og sentrifuger cellene. Legg gelmatrisen på is til den er klar. Fjern deretter supernatanten fra sentrifugecellene og resuspend cellepelleten ved å bruke 20 ganger volumet av gelmatrisen uten å introdusere boblene.La gelmatrisecellesuspensjonen sette seg ved romtemperatur i ca. 10 minutter. Når gelmatrisecellesuspensjonen blir en halvfast gel, bruk en P200 mikropipette med en bred boring 200 mikroliter spiss og aspirer forsiktig 25 mikroliter av gelmatrisecellesuspensjonen. Dispenser tre separate 25 mikroliter kupler per brønn på en 12-brønnplate og la gelmatrisen herde i 15 minutter og en 37 grader Celsius fuktet vevskulturinkubator.Etter at gelmatrisen er herdet, tilsett 750 mikroliter organoidmedium til hver brønn som inneholder gelmatrisekuppel og inkubator ved 37 grader Celsius i en fuktet vevskulturinkubator. Fasekontrastbilder av musens endometrieorganoider viste at epitel- og stromalcelleseparasjonen ga prøver med ikke mer enn 10% til 15% forurensning av motsatt celletype. Endometrieepitelcellene ble satt sammen til organoider innen tre til fire dager.De seksjonerte formalinfaste parafininnstøpte endometrieorganoider ble visualisert av hematoksylin- og eosinflekker, som viste enkeltlaget av epitel og hule sentre, organoidens lumen. Fluorescensmikroskopavbildningen viste at alle cellene i organoidene var Cytokeratin 8-positive og inneholdt DAPI, noe som indikerer at fiksering, innebygging og behandling av endometrieorganoider er kompatible med antistoffbasert immunostaining. Realtime kvantitativ PCR viste at stimuleringen med 10 nanomolar østradiol økte ekspresjonen av lipokalin 2, laktoferrin og progesteronreseptor i epitelorganoider, noe som indikerer at endometrieepitelorganoider med hell kan brukes til å måle genuttrykksendringene som respons på østradiol.Det er viktig å sikre at klar separasjon av endometrisk epitel oppnås under det mekaniske dissosiasjonstrinnet. Man bør kunne observere epitel som kommer fra livmorrøret. Andre metoder inkluderer etablering av epitelorganoider ved innkapsling i en gelmatrise.Om ønskelig kan stromalrommet fordøyes ytterligere for å skape 3D-epiteliale stromale samkulturer. Metoden kan bidra til å svare på spørsmål om signalene som styrer fornyelsen av endometrium. Det kan bidra til å behandle sykdom hos kvinner, som endometriose, graviditetstap og kreft.

Research

JoVE Journal

Biology

Intravitreous Injection for Establishing Ocular Diseases Model

Intravitreous injection is a widely used technique in visual sciences research. It can be used to establish animal models with ocular diseases or as ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generasjon Mus Utledet fra Utførte pluripotente stamceller

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

RNA Isolation from Mouse Pancreas: A Ribonuclease-rich Tissue

RNA Isolasjon fra Mouse Pancreas: En Ribonuclease rike Tissue

Isolation of high-quality RNA from ribonuclease-rich tissue such as mouse pancreas presents a challenge.  As a primary function of the pancreas is to aid ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Trans-indre cellen masse injeksjon av embryonale stamceller fører til høyere Chimerism priser

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis

Ex vivo metode for vurdering av musen reproduktive tarmkanalen spontan motilitet og en MATLAB-baserte livmor Motion Tracking algoritme for data analyse

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...

3D Culturing of Organoids from the Intestinal Villi Epithelium Undergoing Dedifferentiation

3D Culturing av organoider fra Intestinal Villi Epithelium Gjennomgår Dedifferentiation

Clonogenicity of organoids from the intestinal epithelium is attributed to the presence of stem cells therein. The mouse small intestinal epithelium is ...

Establishing Stable Binary Cultures of Symbiotic Saccharibacteria from the Oral Cavity

Etablering av stabile binære kulturer av symbiotisk saccharibacteria fra munnhulen

Many bacterial species cannot be cultured in the laboratory using standard methods, posing a significant barrier to studying the majority of microbial ...

Multiplexed Fluorescent Immunohistochemical Staining of Four Endometrial Immune Cell Types in Recurrent Miscarriage

Multiplekset fluorescerende immunhiistokjemisk farging av fire endometrie immuncelletyper i tilbakevendende abort

Immunohistochemistry is the most commonly used method for the identification and visualization of tissue antigens in biological research and clinical ...

Establishing Human Lung Organoids and Proximal Differentiation to Generate Mature Airway Organoids

Etablering av humane lungeorganoider og proksimal differensiering for å generere modne luftveisorganoider

The lack of a robust in vitro model of the human respiratory epithelium hinders the understanding of the biology and pathology of the respiratory system. ...