Name: establishing 3d endometrial organoids from the mouse uterus
Uploaded: 2023-01-06T13:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus at JoVE.com

Мы благодарим д-ра Стефани Пангас и д-ра Мартина М. Мацука (M.M.M.) за критическое прочтение и редактирование нашей рукописи. Исследования были поддержаны грантами Национального института детского здоровья и развития человека Юнис Кеннеди Шрайвер R00-HD096057 (D.M.), R01-HD105800 (D.M.), R01-HD032067 (M.M.M.) и R01-HD110038 (M.M.M.), а также грантом поддержки онкологического центра NCI-P30 (NCI-CA125123). Диана Монсивайс, доктор философии, имеет награду Next Gen Pregnancy Award от Burroughs Wellcome Fund.

Обращение с мышами и экспериментальные исследования проводились в соответствии с протоколами, одобренными Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) Медицинского колледжа Бейлора, и руководящими принципами, установленными Руководством NIH по уходу и ис?...

Здесь мы описываем методы генерации эпителиальных органоидов эндометрия из эндометрия мыши и протоколы, обычно используемые для их последующего анализа. Органоиды эндометрия являются мощным инструментом для изучения механизмов, которые контролируют заболевания, связанные с эндомет...

Эндометрий - внутренняя слизистая оболочка полости матки - является уникальной и очень динамичной тканью, которая играет решающую роль в репродуктивном здоровье женщины. В течение репродуктивной жизни эндометрий обладает потенциалом для прохождения сотен циклов пролиферации, дифференцировки и распада, координируемых согласованным действием гормонов яичников - эстрогена и прогестерона. Исследования генетически модифицированных мышей выявили основные биологические механизмы, лежащие в основе реакции эндометрия на гормоны и контроля имплантации эмбриона, децидуализации стромальных клеток и беременности1. Исследования in vitro, однако, были ограничены из-за трудностей в поддержании нетрансформированных первичных тканей эндометрия мыши в традиционных 2D клеточных культурах 2,3. Последние достижения в культуре тканей эндометрия как 3D-систем органов или органоидов представляют собой новую возможность исследовать биологические пути, которые контролируют регенерацию и дифференцировку клеток эндометрия. Органоидные системы эндометрия мышей и человека были разработаны из чистого эпителия эндометрия, инкапсулированного в различные матрицы 4,5, в то время как эндометрий человека культивировался как эпителиальные/стромальные кокультуры без каркаса 6,7, а в последнее время как коллаген-инкапсулированные эпителиальные/стромальные ассамблоиды8 . Рост и регенеративный потенциал эпителиальных органоидных культур поддерживается определенным коктейлем факторов роста и ингибиторов малых молекул, которые были эмпирически определены для максимизации роста и регенерации органоидов 4,5,9. Кроме того, способность замораживать и размораживать органоиды эндометрия позволяет долгосрочно хранить органоиды эндометрия у мышей и людей для будущих исследований.
Генетически модифицированные мыши выявили сложные сигнальные пути, которые контролируют раннюю беременность и децидуализацию, и были использованы в качестве моделей потери беременности, рака эндометрия и эндометриоза. Эти генетические исследования были в значительной степени достигнуты с помощью клеточно-специфической делеции боковых аллелей loxP («floxed») с использованием cre recombinases, которые особенно активны в женских репродуктивных тканях. Эти мышиные модели включают широко используемый рецептор прогестерона-cre10, который обладает сильной активностью рекомбиназы в эпителиальных и стромальных тканях эндометрия, лактоферрин i-cre, который индуцирует рекомбинацию эпителия эндометрия у взрослых мышей11, или Wnt7a-cre, который вызывает эпителиально-специфическую делецию в тканях Мюллера12 . Культивирование тканей эндометрия из генетически модифицированных моделей мышей в качестве 3D-органоидов предоставило отличную возможность исследовать биологию эндометрия и облегчить идентификацию факторов роста и сигнальных путей, которые контролируют обновление и дифференцировку клеток эндометрия13,14. Методы выделения и культивирования тканей эндометрия мышей описаны в литературе и сообщают об использовании различных ферментативных стратегий выделения эпителия матки для последующего культивирования органоидов эпителия эндометрия4. В то время как предыдущая литература обеспечивает критическую основу для протоколов 4,5,6 эпителиальных органоидных культур эндометрия, эта статья предоставляет четкий, всеобъемлющий метод генерации, поддержания, обработки и анализа этих органоидов. Стандартизация этих методов имеет важное значение для ускорения прогресса в области репродуктивной биологии женщин. Здесь мы сообщаем подробную методику ферментативной и механической очистки эпителиальной ткани эндометрия мыши для последующей культивирования органоидов эндометрия в каркасе гелевой матрицы. Мы также описываем методологии последующего гистологического и молекулярного анализа инкапсулированных гелевой матрицей эпителиальных органоидов эндометрия мыши.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="4">Organoid Media Formulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Final concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix, *LDEV-free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td>100%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin from Bovine Pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1426-1G</td>
			<td>1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12634010</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17502048</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27&#8482; Supplement (50X), minus vitamin A</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12587010</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primocin</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>ant-pm-1</td>
			<td>100 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Acetyl-L-cysteine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9165-5G</td>
			<td>1.25 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25030024</td>
			<td>2 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>N0636-100G</td>
			<td>10 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALK-4, -5, -7 inhibitor, A83-01</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2939</td>
			<td>500 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td>50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human Noggin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-10C</td>
			<td>100 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human Rspondin-1</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-38</td>
			<td>500 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human FGF-10</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-26</td>
			<td>100 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human HGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-39</td>
			<td>50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WNT3a</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>5036-WN</td>
			<td>200 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other supplies and reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Final concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase from Clostridium histolyticum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0130-1G</td>
			<td>5 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>DN25-100MG</td>
			<td>2 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14190-250</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14170112</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Polystyrene Microplates (24-Well)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#08-772-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Polystyrene Microplates (12-Well)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#0877229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Cell Strainers, 40 &#181;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#08-771-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Direct-zol RNA MiniPrep (50 &#181;g)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>11-331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizol reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12, HEPES, no phenol red</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11039021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, Charcoal stripped</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F6765-500ML</td>
			<td>2%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Estratiol (E2)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E1024-1G</td>
			<td>10 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde 16% in aqueous solution, EM Grade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>15710</td>
			<td>4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Cassette 1 Slotted Tissue Cassettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1000961</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Stainless-Steel Embedding Base Molds</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>64-010-15&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 200 proof (100%)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-032-601&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoclear</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-899-90147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount Mounting Medium</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-277-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Nylon Biopsy Bags</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6774010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoGel Specimen Processing Gel</td>
			<td>VWR</td>
			<td>83009-992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin solution Premium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95057-844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y (yellowish) solution Premium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95057-848</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBS Buffer, 20X, pH 7.4</td>
			<td>GenDEPORT</td>
			<td>T8054</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBST (10X), pH 7.4</td>
			<td>GenDEPORT</td>
			<td>T8056</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0759-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate tribasic dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S4641-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween20</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP337-500&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A2153-100G</td>
			<td>3%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Solution (1 mg/mL)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>62248</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Nail Polish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1849418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22037246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Micro Cover Glasses</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript VILO Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11755050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYBR Green PCR Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4364346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Krt8 Antibody (TROMA-I)&#160;</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>TROMA-I&#160;</td>
			<td>1:50 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin Antobody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>5741S</td>
			<td>1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rat IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary 
			Antibody, Alexa Fluor 594</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-21209</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rabbin IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary 
			Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-21206</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS Stemi 508 Stereo Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS Axio Vert.A1 Inverted Routine Microscope with digital camera</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer Sequence</td>
			<td>Forward (5&#39;-3&#39;)</td>
			<td>Reverse (5&#39;-3&#39;)</td>
			<td>_</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipocalin 2 (Lcn2)</td>
			<td>GCAGGTGGTACGTTGTGGG</td>
			<td>CTCTTGTAGCTCATAGATGGTGC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactoferrin (Ltf)</td>
			<td>TGAGGCCCTTGGACTCTGT</td>
			<td>ACCCACTTTTCTCATCTCGTTC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone (Pgr)</td>
			<td>CCCACAGGAGTTTGTCAAGCTC</td>
			<td>TAACTTCAGACATCATTTCCGG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase (Gapdh)</td>
			<td>CAATGTGTCCGTCGTGGATCT</td>
			<td>GCCTGCTTCACCACCTTCTT</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing 3d endometrial organoids from the mouse uterus

Ткань эндометрия выстилает внутреннюю полость матки и находится под циклическим контролем эстрогена и прогестерона. Это ткань, которая состоит из просветного и железистого эпителия, стромального компартмента, сосудистой сети и сложной популяции иммунных клеток. Мышиные модели были мощным инструментом для изучения эндометрия, выявляя критические механизмы, которые контролируют имплантацию, плацентацию и рак. Недавняя разработка 3D-культур органоидов эндометрия представляет собой современную модель для анализа сигнальных путей, лежащих в основе биологии эндометрия. Создание органоидов эндометрия из генетически модифицированных моделей мышей, анализ их транскриптомов и визуализация их морфологии с одноклеточным разрешением являются важнейшими инструментами для изучения заболеваний эндометрия. В этой статье описываются методы создания 3D-культур эпителия эндометрия у мышей и описываются методы количественной оценки экспрессии генов и анализа гистологии органоидов. Цель состоит в том, чтобы предоставить ресурс, который может быть использован для установления, культивирования и изучения экспрессии генов и морфологических характеристик эпителиальных органоидов эндометрия.

Фазоконтрастные изображения органоидов эндометрия мыши Мы установили органоиды из эпителия эндометрия мыши WT, как описано в прилагаемом протоколе (см. диаграмму на рисунке 1). После ферментативной диссоциации эпителия эндометрия мыши эпителиальные листы ме?...

Watch this Scientific Journal Video about Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus at JoVE.com

Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus

Этот протокол описывает методологии установления эпителиальных органоидов эндометрия мышей для экспрессии генов и гистологического анализа.

Создание 3D-органоидов эндометрия из мышиной матки

Endometrial tissue lines the inner cavity of the uterus and is under the cyclical control of estrogen and progesterone. It is a tissue that is composed of ...

Этот протокол имеет важное значение, поскольку он показывает пошаговую методологию выделения высокочистого эпителия матки из матки мыши для культуры органоидов эндометрия. Этот метод эффективно использует ферментативную и механическую диссоциацию для выделения эпителия матки. Методы были оптимизированы для установления, лечения и анализа органоидов эпителия эндометрия, полученных из изолированного эпителия.Начните с размораживания гелевой матрицы на льду примерно за один-два часа перед использованием. Затем рассекните усыпленную мышь, сделав разрез средней линии на животе с помощью ножниц и аккуратно отшелушивая кожу, чтобы обнажить нижележащий перитонеальный слой. Найдите рога матки, осторожно отодвинув брюшные жировые подушечки в сторону, и удерживайте рога матки в шейном соединении, прежде чем разрезать их вдоль брыжеечного жира.После рассечения матки мыши тщательно удалите жировую ткань из рога матки небольшими ножницами. После этого разрежьте каждый рог матки на небольшие фрагменты, каждый размером примерно от четырех до пяти миллиметров. Поместите все фрагменты матки из одной матки в один колодец из 24 лунок, содержащих 0,5 миллилитра 1% трипсина.Затем инкубируют 24-луночную пластину в инкубаторе увлажненной культуры тканей при температуре 37 градусов Цельсия в течение примерно одного часа для ферментативного отделения эпителия эндометрия от нижележащей стромы. После инкубации перенесите фрагменты матки на 35-миллиметровую пластину культуры ткани, содержащую один миллилитр буферного раствора фосфатов Дульбекко или DPBS. Далее отделяем эпителий матки от маточной трубы под рассеченным микроскопом, удерживая один конец фрагмента матки щипцами и осторожно проводя кончиком пипетки продольно по фрагменту, выдавливая эпителий из другого конца маточной трубы.Затем наблюдают за отделенными эпителиальными листами от фрагмента матки под рассеченным микроскопом. Затем аккуратно переложите все эпителиальные листы в ту же 1,5-миллилитровую трубку, используя одну миллилитровую пипетку. И гранулируют диссоциированные эпителиальные листы центрифугированием при 375 х г в течение пяти минут.Осторожно удалите супернатант, не нарушая клеточную гранулу, и повторно суспендируйте клеточную гранулу в 0,5 миллилитра 2,5 миллиграмма на миллилитр коллагеназы плюс два миллиграмма на миллилитр раствора ДНК. Пипетка вверх и вниз примерно 10 раз или до тех пор, пока не будет достигнута одноклеточная суспензия. Затем добавьте 0,5 миллилитра DMEM F/12 плюс 10% фетальной бычьей сыворотки или FBS плюс антибиотики и центрифугируйте клетки в течение пяти минут при 375 х г.Удалите супернатант, повторно суспендируйте клетки в одном миллилитре DMEM/ F12 плюс 10% FBS плюс антибиотики и центрифугируйте клетки. Поместите гелевую матрицу на лед, пока она не будет готова. Затем удалите супернатант из клеток центрифуги и повторно суспендируйте гранулу клетки, используя в 20 раз больший объем гелевой матрицы, не вводя пузырьки.Дайте суспензии клеток гелевой матрицы осесть при комнатной температуре в течение примерно 10 минут. Как только суспензия клеток гелевой матрицы станет полутвердым гелем, используйте микропипетку P200 с широким отверстием 200 микролитровых наконечников и осторожно аспирируйте 25 микролитров суспензии клеток гелевой матрицы. Дозируйте три отдельных купола по 25 микролитров на лунку из 12-луночной пластины и дайте гелевой матрице отверждаться в течение 15 минут и инкубатору культуры увлажненной ткани при температуре 37 градусов Цельсия.После того, как гелевая матрица отверждена, добавьте 750 микролитров органоидной среды к каждой скважине, содержащей купол гелевой матрицы, и инкубатор при 37 градусах Цельсия в инкубатор культуры увлажненной ткани. Фазоконтрастные изображения органоидов эндометрия мышей показали, что разделение эпителиальных и стромальных клеток дало образцы с загрязнением не более 10-15% противоположного типа клеток. Эпителиальные клетки эндометрия были собраны в органоиды в течение трех-четырех дней.Секционные формалиновые фиксированные парафиновые встроенные органоиды эндометрия визуализировались пятнами гематоксилина и эозина, которые отображали единый слой эпителия и полые центры, просветы органоидов. Визуализация флуоресцентного микроскопа показала, что все клетки в органоидах были цитокератином 8-положительными и содержали DAPI, что указывает на то, что фиксация, встраивание и обработка органоидов эндометрия совместимы с иммуноокрашиванием на основе антител. Количественная ПЦР в реальном времени показала, что стимуляция 10 наномолярным эстрадиолом увеличивает экспрессию липокалина 2, лактоферрина и рецептора прогестерона в эпителиальных органоидах, что указывает на то, что эпителиальные органоиды эндометрия могут быть успешно использованы для измерения изменений экспрессии генов в ответ на эстрадиол.Важно убедиться, что четкое разделение эпителия эндометрия получено на стадии механической диссоциации. Нужно уметь наблюдать эпителий, выходящий из маточной трубы. Другие методы включают установление эпителиальных органоидов путем инкапсуляции в гелевую матрицу.При желании стромальный компартмент может быть дополнительно переварен для создания 3D эпителиальных стромальных кокультур. Метод может помочь ответить на вопросы о сигналах, контролирующих обновление эндометрия. Это может помочь в лечении заболеваний у женщин, таких как эндометриоз, потеря беременности и рак.

Research

JoVE Journal

Biology

Intravitreous Injection for Establishing Ocular Diseases Model

Intravitreous для закачки Создание глазных болезней Модель

Intravitreous injection is a widely used technique in visual sciences research. It can be used to establish animal models with ocular diseases or as ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

Создание первичных культурах фибробластов взрослых от грызунов

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Генерация Мыши, полученные из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

RNA Isolation from Mouse Pancreas: A Ribonuclease-rich Tissue

Выделение РНК от мыши поджелудочной железы: Рибонуклеаза богатых тканей

Isolation of high-quality RNA from ribonuclease-rich tissue such as mouse pancreas presents a challenge.  As a primary function of the pancreas is to aid ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Транс внутренняя ячейка массы впрыска эмбриональных стволовых клеток приводит к более высоким ставкам химеризма

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis

Метод Ex Vivo для оценки спонтанной подвижности репродуктивных путей мыши и алгоритмотслеживания движения uterus на основе MATLAB для анализа данных

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...

3D Culturing of Organoids from the Intestinal Villi Epithelium Undergoing Dedifferentiation

3D Культивирование органоидов из эпителия ворсинок кишечника, подвергающихся дедифференциации

Clonogenicity of organoids from the intestinal epithelium is attributed to the presence of stem cells therein. The mouse small intestinal epithelium is ...

Establishing Stable Binary Cultures of Symbiotic Saccharibacteria from the Oral Cavity

Создание стабильных бинарных культур симбиотических сахариобактерий из полости рта

Many bacterial species cannot be cultured in the laboratory using standard methods, posing a significant barrier to studying the majority of microbial ...

Multiplexed Fluorescent Immunohistochemical Staining of Four Endometrial Immune Cell Types in Recurrent Miscarriage

Мультиплексированное флуоресцентное иммуногистохимическое окрашивание четырех типов иммунных клеток эндометрия при рецидивирующем выкидыше

Immunohistochemistry is the most commonly used method for the identification and visualization of tissue antigens in biological research and clinical ...

Establishing Human Lung Organoids and Proximal Differentiation to Generate Mature Airway Organoids

Создание органоидов легких человека и проксимальной дифференцировки для генерации зрелых органоидов дыхательных путей

The lack of a robust in vitro model of the human respiratory epithelium hinders the understanding of the biology and pathology of the respiratory system. ...