Name: establishing 3d endometrial organoids from the mouse uterus
Uploaded: 2023-01-06T13:10:00
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Agradecemos a la Dra. Stephanie Pangas y al Dr. Martin M. Matzuk (M.M.M.) por la lectura crítica y edición de nuestro manuscrito. Los estudios fueron apoyados por las subvenciones del Instituto Nacional de Salud Infantil y Desarrollo Humano Eunice Kennedy Shriver R00-HD096057 (D.M.), R01-HD105800 (D.M.), R01-HD032067 (M.M.M.) y R01-HD110038 (M.M.M.), y por la Subvención de Apoyo al Centro Oncológico NCI-P30 (NCI-CA125123). Diana Monsivais, Ph.D. tiene un Premio al Embarazo de la Próxima Generación del Burroughs Wellcome Fund.

El manejo de ratones y los estudios experimentales se realizaron bajo protocolos aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de Baylor College of Medicine y las pautas establecidas por la Guía de los NIH para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio.
1. Aislamiento del epitelio uterino de ratones utilizando métodos enzimáticos y mecánicos
NOTA: Esta sección describe los pasos necesarios para establecer, pasar, c...

Aquí, describimos los métodos para generar organoides epiteliales endometriales a partir del endometrio del ratón y los protocolos utilizados rutinariamente para su análisis posterior. Los organoides endometriales son una herramienta poderosa para estudiar los mecanismos que controlan las enfermedades relacionadas con el endometrio, como la endometriosis, el cáncer de endometrio y el fracaso de la implantación. Estudios históricos publicados en 2017 reportaron las condiciones para cultivar cultivos a largo plazo y...

El endometrio, el tejido mucoso del revestimiento interno de la cavidad uterina, es un tejido único y altamente dinámico que desempeña un papel crítico en la salud reproductiva de una mujer. Durante la vida reproductiva, el endometrio tiene el potencial de someterse a cientos de ciclos de proliferación, diferenciación y descomposición, coordinados por la acción concertada de las hormonas ováricas: estrógeno y progesterona. Los estudios de ratones genéticamente modificados han descubierto mecanismos biológicos básicos que sustentan la respuesta endometrial a las hormonas y el control de la implantación embrionaria, la decidualización de las células estromales y el embarazo1. Sin embargo, los estudios in vitro han sido limitados debido a las dificultades para mantener tejidos endometriales primarios de ratón no transformados en cultivos celulares 2D tradicionales 2,3. Los avances recientes en el cultivo de tejidos endometriales como sistemas de órganos 3D, u organoides, presentan una nueva oportunidad para investigar las vías biológicas que controlan la regeneración y diferenciación de las células endometriales. Los sistemas organoides endometriales de ratón y humano se han desarrollado a partir de epitelio endometrial puro encapsulado en varias matrices4,5, mientras que el endometrio humano se ha cultivado como cocultivos epiteliales/estromales sin andamios 6,7, y más recientemente como ensamblajes epiteliales/estromales encapsulados en colágeno8 . El crecimiento y el potencial regenerativo de los cultivos de organoides epiteliales están respaldados por un cóctel definido de factores de crecimiento e inhibidores de moléculas pequeñas que han sido determinados empíricamente para maximizar el crecimiento y la regeneración de los organoides 4,5,9. Además, la capacidad de congelar y descongelar organoides endometriales permite el almacenamiento a largo plazo de organoides endometriales de ratones y humanos para futuros estudios.
Los ratones genéticamente modificados han revelado las complejas vías de señalización que controlan el embarazo temprano y la decidualización, y se han utilizado como modelos de pérdida de embarazo, cáncer de endometrio y endometriosis. Estos estudios genéticos se han logrado en gran medida con la deleción celular específica de alelos flanqueados por loxP ("floxed") utilizando recombinasas cre que son específicamente activas en los tejidos reproductivos femeninos. Estos modelos de ratón incluyen el ampliamente utilizado receptor de progesterona-cre 10, que tiene una fuerte actividad recombinasa en los tejidos epiteliales y estromales endometriales, lactoferrina i-cre, que induce la recombinación epitelial endometrial en ratones adultos11, o Wnt7a-cre, que desencadena la deleción epitelial específica en tejidos derivados de Müllerian12 . El cultivo de tejidos endometriales a partir de modelos de ratón genéticamente modificados como organoides 3D ha brindado una excelente oportunidad para investigar la biología endometrial y facilitar la identificación de factores de crecimiento y vías de señalización que controlan la renovación y diferenciación de las células endometriales13,14. Los métodos para el aislamiento y cultivo de tejido endometrial de ratón se describen en la literatura y reportan el uso de diversas estrategias enzimáticas para el aislamiento del epitelio uterino para el posterior cultivo de organoides epiteliales endometriales4. Si bien la literatura previa proporciona un marco crítico para los protocolos de cultivo de organoides epiteliales endometriales 4,5,6, este documento proporciona un método claro y completo para generar, mantener, procesar y analizar estos organoides. La estandarización de estas técnicas es importante para acelerar los avances en el campo de la biología reproductiva de la mujer. Aquí, presentamos una metodología detallada para la purificación enzimática y mecánica del tejido epitelial endometrial de ratón para el posterior cultivo de organoides endometriales en un andamio de matriz de gel. También describimos las metodologías para los análisis histológicos y moleculares posteriores de los organoides epiteliales endometriales de ratón encapsulados en matriz de gel.

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	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="4">Organoid Media Formulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Final concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix, *LDEV-free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td>100%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin from Bovine Pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1426-1G</td>
			<td>1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12634010</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17502048</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27&#8482; Supplement (50X), minus vitamin A</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12587010</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primocin</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>ant-pm-1</td>
			<td>100 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Acetyl-L-cysteine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9165-5G</td>
			<td>1.25 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25030024</td>
			<td>2 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>N0636-100G</td>
			<td>10 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALK-4, -5, -7 inhibitor, A83-01</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2939</td>
			<td>500 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td>50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human Noggin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-10C</td>
			<td>100 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human Rspondin-1</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-38</td>
			<td>500 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human FGF-10</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-26</td>
			<td>100 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human HGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-39</td>
			<td>50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WNT3a</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>5036-WN</td>
			<td>200 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other supplies and reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Final concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase from Clostridium histolyticum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0130-1G</td>
			<td>5 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>DN25-100MG</td>
			<td>2 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14190-250</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14170112</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Polystyrene Microplates (24-Well)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#08-772-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Polystyrene Microplates (12-Well)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#0877229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Cell Strainers, 40 &#181;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#08-771-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Direct-zol RNA MiniPrep (50 &#181;g)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>11-331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizol reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12, HEPES, no phenol red</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11039021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, Charcoal stripped</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F6765-500ML</td>
			<td>2%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Estratiol (E2)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E1024-1G</td>
			<td>10 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde 16% in aqueous solution, EM Grade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>15710</td>
			<td>4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Cassette 1 Slotted Tissue Cassettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1000961</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Stainless-Steel Embedding Base Molds</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>64-010-15&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 200 proof (100%)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-032-601&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoclear</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-899-90147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount Mounting Medium</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-277-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Nylon Biopsy Bags</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6774010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoGel Specimen Processing Gel</td>
			<td>VWR</td>
			<td>83009-992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin solution Premium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95057-844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y (yellowish) solution Premium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95057-848</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBS Buffer, 20X, pH 7.4</td>
			<td>GenDEPORT</td>
			<td>T8054</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBST (10X), pH 7.4</td>
			<td>GenDEPORT</td>
			<td>T8056</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0759-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate tribasic dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S4641-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween20</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP337-500&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A2153-100G</td>
			<td>3%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Solution (1 mg/mL)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>62248</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Nail Polish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1849418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22037246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Micro Cover Glasses</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript VILO Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11755050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYBR Green PCR Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4364346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Krt8 Antibody (TROMA-I)&#160;</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>TROMA-I&#160;</td>
			<td>1:50 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin Antobody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>5741S</td>
			<td>1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rat IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary 
			Antibody, Alexa Fluor 594</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-21209</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rabbin IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary 
			Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-21206</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS Stemi 508 Stereo Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS Axio Vert.A1 Inverted Routine Microscope with digital camera</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer Sequence</td>
			<td>Forward (5&#39;-3&#39;)</td>
			<td>Reverse (5&#39;-3&#39;)</td>
			<td>_</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipocalin 2 (Lcn2)</td>
			<td>GCAGGTGGTACGTTGTGGG</td>
			<td>CTCTTGTAGCTCATAGATGGTGC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactoferrin (Ltf)</td>
			<td>TGAGGCCCTTGGACTCTGT</td>
			<td>ACCCACTTTTCTCATCTCGTTC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone (Pgr)</td>
			<td>CCCACAGGAGTTTGTCAAGCTC</td>
			<td>TAACTTCAGACATCATTTCCGG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase (Gapdh)</td>
			<td>CAATGTGTCCGTCGTGGATCT</td>
			<td>GCCTGCTTCACCACCTTCTT</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing 3d endometrial organoids from the mouse uterus

El tejido endometrial recubre la cavidad interna del útero y está bajo el control cíclico del estrógeno y la progesterona. Es un tejido que se compone de epitelio luminal y glandular, un compartimento estromal, una red vascular y una población compleja de células inmunes. Los modelos de ratón han sido una herramienta poderosa para estudiar el endometrio, revelando mecanismos críticos que controlan la implantación, la placentación y el cáncer. El reciente desarrollo de cultivos de organoides endometriales 3D presenta un modelo de vanguardia para diseccionar las vías de señalización que subyacen a la biología endometrial. Establecer organoides endometriales a partir de modelos de ratón genéticamente modificados, analizar sus transcriptomas y visualizar su morfología a una resolución de una sola célula son herramientas cruciales para el estudio de las enfermedades endometriales. Este documento describe métodos para establecer cultivos 3D de epitelio endometrial de ratones y describe técnicas para cuantificar la expresión génica y analizar la histología de los organoides. El objetivo es proporcionar un recurso que pueda usarse para establecer, cultivar y estudiar la expresión génica y las características morfológicas de los organoides epiteliales endometriales.

Imágenes de contraste de fase de organoides endometriales de ratón Establecimos organoides a partir de epitelio endometrial de ratón WT, como se describe en el protocolo adjunto (ver diagrama en la Figura 1). Después de la disociación enzimática del epitelio endometrial del ratón, las láminas epiteliales se separaron mecánicamente de las células del estroma uterino y se disociaron aún más con colagenasa para generar una suspensión unicelular. Si se realiza co...

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Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus

Este protocolo describe metodologías para establecer organoides epiteliales endometriales de ratón para la expresión génica y análisis histológicos.

Establecimiento de organoides endometriales 3D a partir del útero del ratón

Endometrial tissue lines the inner cavity of the uterus and is under the cyclical control of estrogen and progesterone. It is a tissue that is composed of ...

Este protocolo es significativo ya que muestra una metodología paso a paso para aislar epitelio uterino altamente puro del útero de ratón para el cultivo de organoides endometriales. Este método utiliza eficientemente la disociación enzimática y mecánica para aislar el epitelio uterino. Las técnicas se simplificaron para establecer, tratar y analizar organoides del epitelio endometrial derivados del epitelio aislado.Comience descongelando la matriz de gel en hielo durante aproximadamente una o dos horas antes de usarla. Luego disecciona al ratón sacrificado haciendo una incisión en la línea media en el abdomen con tijeras y pelando suavemente la piel para exponer la capa peritoneal subyacente. Localice los cuernos uterinos moviendo suavemente las almohadillas de grasa abdominal a un lado y sostenga los cuernos uterinos en la unión cervical antes de cortarlos a lo largo de la grasa mesentérica.Después de la disección del útero del ratón, retire completamente el tejido graso del cuerno uterino con tijeras pequeñas. Una vez hecho esto, corte cada cuerno uterino en pequeños fragmentos, cada uno mide aproximadamente cuatro a cinco milímetros. Coloque todos los fragmentos uterinos de un útero en un pocillo de una placa de 24 pocillos que contenga 0,5 mililitros de tripsina al 1%.Luego incube la placa de 24 pocillos en una incubadora de cultivo de tejido humidificado de 37 grados centígrados durante aproximadamente una hora para la separación enzimática del epitelio endometrial del estroma subyacente. Después de la incubación, transfiera los fragmentos uterinos a una placa de cultivo de tejido de 35 milímetros que contenga un mililitro de solución tamponada de fosfato de Dulbecco o DPBS. Luego, separe el epitelio uterino de la trompa uterina bajo un microscopio de disección sosteniendo un extremo de un fragmento uterino con los fórceps y pasando suavemente la punta de la pipeta longitudinalmente a través del fragmento, apretando el epitelio fuera del otro extremo de la trompa uterina.Luego observe las hojas epiteliales separadas del fragmento uterino bajo el microscopio de disección. A continuación, transfiera suavemente todas las láminas epiteliales al mismo tubo de 1,5 mililitros con la pipeta de un mililitro. Y granular las láminas epiteliales disociadas por centrifugación a 375 x g durante cinco minutos.Retire con cuidado el sobrenadante sin alterar el pellet celular y vuelva a suspender el pellet celular en 0,5 mililitros de 2,5 miligramos por mililitro de colagenasa más dos miligramos por mililitro de solución de ADN. Pipetear hacia arriba y hacia abajo aproximadamente 10 veces o hasta que se logre una suspensión de una sola célula. A continuación, agregue 0.5 mililitros de DMEM F / 12 más 10% de suero bovino fetal o FBS más antibióticos y centrifugue las células durante cinco minutos a 375 x g.Retire el sobrenadante, resuspenda las células en un mililitro DMEM / F12 más 10% FBS más antibióticos y centrifugue las células. Coloque la matriz de gel en hielo hasta que esté lista. A continuación, retire el sobrenadante de las células centrífugas y resuspenda el pellet celular utilizando 20 veces el volumen de la matriz de gel sin introducir las burbujas.Deje que la suspensión de células de matriz de gel se asiente a temperatura ambiente durante aproximadamente 10 minutos. Una vez que la suspensión de células de matriz de gel se convierta en un gel semisólido, use una micropipeta P200 con una punta de 200 microlitros de diámetro ancho y aspire suavemente 25 microlitros de la suspensión de células de matriz de gel. Dispense tres domos separados de 25 microlitros por pocillo de una placa de 12 pocillos y permita que la matriz de gel se cure durante 15 minutos y una incubadora de cultivo de tejido humidificado de 37 grados centígrados.Después de curar la matriz de gel, agregue 750 microlitros de medio organoide a cada cúpula de matriz de gel que contenga pocillos, e incubador a 37 grados centígrados en una incubadora de cultivo de tejidos humidificados. Las imágenes de contraste de fase de organoides endometriales de ratón mostraron que la separación de células epiteliales y estromales produjo muestras con no más del 10% al 15% de contaminación del tipo de célula opuesta. Las células epiteliales endometriales se ensamblaron en organoides en tres o cuatro días.Los organoides endometriales fijados en parafina con formol seccionados se visualizaron mediante tinciones de hematoxilina y eosina, que mostraban la capa única de epitelio y centros huecos, los lúmenes de los organoides. Las imágenes de microscopio de fluorescencia mostraron que todas las células en los organoides eran positivas para citoqueratina 8 y contenían DAPI, lo que indica que la fijación, incrustación y procesamiento de los organoides endometriales es compatible con la inmunotinción basada en anticuerpos. La PCR cuantitativa en tiempo real mostró que la estimulación con 10 nanomolares de estradiol aumentó la expresión de lipocalina 2, lactoferrina y receptor de progesterona en los organoides epiteliales, lo que indica que los organoides epiteliales endometriales se pueden utilizar con éxito para medir los cambios en la expresión génica en respuesta al estradiol.Es importante asegurarse de que se obtenga una separación clara del epitelio endometrial durante la etapa de disociación mecánica. Uno debe ser capaz de observar el epitelio emergiendo de la trompa uterina. Otros métodos incluyen el establecimiento de los organoides epiteliales por encapsulación en una matriz de gel.Si se desea, el compartimiento estromal se puede digerir aún más para crear cocultivos estromales epiteliales 3D. El método puede ayudar a responder preguntas sobre las señales que controlan la renovación del endometrio. Podría ayudar a tratar enfermedades en las mujeres, como la endometriosis, la pérdida del embarazo y el cáncer.

Research

JoVE Journal

Biology

Intravitreous Injection for Establishing Ocular Diseases Model

Inyección intravítrea para el establecimiento de modelos Enfermedades Oculares

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Investigación

Biología

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

El establecimiento de cultivos primarios de fibroblastos de adultos de los roedores

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generación de ratones derivados de células madre pluripotentes inducidas

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

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Aislamiento de ARN de ratón Páncreas: Un tejido de ribonucleasa-rica

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Trans-interno celular masiva inyección de células madre embrionarias conduce a mayores tasas de quimerismo

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

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Método Ex Vivo para evaluar la motilidad espontánea del tracto reproductivo de ratón y un algoritmo de seguimiento de movimiento del útero basado en MATLAB para el análisis de datos

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...

3D Culturing of Organoids from the Intestinal Villi Epithelium Undergoing Dedifferentiation

Cultivo 3D de organoides del epitelio de las vellosidades intestinales sometidos a desdiferenciación

Clonogenicity of organoids from the intestinal epithelium is attributed to the presence of stem cells therein. The mouse small intestinal epithelium is ...

Establishing Stable Binary Cultures of Symbiotic Saccharibacteria from the Oral Cavity

Establecimiento De Cultivos Binarios Estables De Saccharibacterias Simbióticas De La Cavidad Oral

Many bacterial species cannot be cultured in the laboratory using standard methods, posing a significant barrier to studying the majority of microbial ...

Multiplexed Fluorescent Immunohistochemical Staining of Four Endometrial Immune Cell Types in Recurrent Miscarriage

Tinción inmunohistoquímica fluorescente multiplexada de cuatro tipos de células inmunes endometriales en aborto espontáneo recurrente

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Establishing Human Lung Organoids and Proximal Differentiation to Generate Mature Airway Organoids

Establecimiento de organoides pulmonares humanos y diferenciación proximal para generar organoides maduros de las vías respiratorias

The lack of a robust in vitro model of the human respiratory epithelium hinders the understanding of the biology and pathology of the respiratory system. ...