Name: establishing 3d endometrial organoids from the mouse uterus
Uploaded: 2023-01-06T13:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus at JoVE.com

Vi tackar Dr. Stephanie Pangas och Dr. Martin M. Matzuk (M.M.M.) för kritisk läsning och redigering av vårt manuskript. Studier stöddes av Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health and Human Development bidrag R00-HD096057 (D.M.), R01-HD105800 (D.M.), R01-HD032067 (M.M.M.) och R01-HD110038 (M.M.M.) och av NCI- P30 Cancer Center Support Grant (NCI-CA125123). Diana Monsivais, Ph.D. har ett Next Gen Pregnancy Award från Burroughs Wellcome Fund.

Mushantering och experimentella studier utfördes enligt protokoll som godkänts av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) vid Baylor College of Medicine och riktlinjer som fastställts av NIH Guide for the Care and Use of Laboratory Animals.
1. Isolering av livmoderepitel från möss med enzymatiska och mekaniska metoder
OBS: Detta avsnitt beskriver de steg som krävs för att etablera, passera, frysa och tina epiteliala endometrieorgano...

Här beskriver vi metoder för att generera endometrieepitelorganoider från musendometrium och de protokoll som rutinmässigt används för deras nedströmsanalys. Endometrieorganoider är ett kraftfullt verktyg för att studera de mekanismer som styr endometrierelaterade sjukdomar, såsom endometrios, endometriecancer och implantationsfel. Landmärkestudier som publicerades 2017 rapporterade villkoren för att odla långsiktiga och förnybara kulturer av endometrieorganoider från mus och humant epitel<sup class="xref"...

Endometrium - livmoderhålans inre slemhinnevävnad - är en unik och mycket dynamisk vävnad som spelar kritiska roller i en kvinnas reproduktiva hälsa. Under den reproduktiva livslängden har endometrium potential att genomgå hundratals cykler av spridning, differentiering och nedbrytning, samordnad av den samordnade verkan av äggstockshormonerna - östrogen och progesteron. Studier av genetiskt modifierade möss har avslöjat grundläggande biologiska mekanismer som ligger till grund för endometriesvaret på hormoner och kontroll av embryoimplantation, stromacelldecidualisering och graviditet1. In vitro-studier har dock varit begränsade på grund av svårigheter att upprätthålla icke-transformerade primära musendometrievävnader i traditionella 2D-cellkulturer 2,3. De senaste framstegen inom kulturen av endometriella vävnader som 3D-organsystem, eller organoider, utgör en ny möjlighet att undersöka biologiska vägar som kontrollerar endometrial cellregenerering och differentiering. Mus- och humana endometrieorganoidsystem har utvecklats från rent endometrieepitel inkapslat i olika matriser4,5, medan humant endometrium har odlats som ställningsfria epitel- / stromala samkulturer6,7, och mer nyligen som kollageninkapslade epitel- / stromalsammansättningar8 . Tillväxten och regenerativ potential hos epitelorganoidkulturer stöds av en definierad cocktail av tillväxtfaktorer och småmolekylära hämmare som har bestämts empiriskt för att maximera tillväxt och regenerering av organoiderna 4,5,9. Dessutom tillåter förmågan att frysa och tina endometrieorganoider långsiktig bankning av endometrieorganoider från möss och människor för framtida studier.
Genetiskt modifierade möss har avslöjat de komplexa signalvägarna som styr tidig graviditet och decidualisering och har använts som modeller för graviditetsförlust, endometriecancer och endometrios. Dessa genetiska studier har till stor del uppnåtts med cellspecifik radering av loxP-flankerade alleler ("floxed") med hjälp av cre-rekombinaser som är specifikt aktiva i kvinnliga reproduktionsvävnader. Dessa musmodeller inkluderar den allmänt använda progesteronreceptor-cre 10, som har stark rekombinasaktivitet i endometrieepitel- och stromalvävnaderna, laktoferrin i-cre, som inducerar endometrieepitelrekombination hos vuxna möss11, eller Wnt7a-cre, vilket utlöser epitelspecifik radering i Müllerian-härledda vävnader12 . Odling av endometrievävnader från genetiskt modifierade musmodeller som 3D-organoider har gett ett utmärkt tillfälle att undersöka endometriebiologi och underlätta identifieringen av tillväxtfaktorer och signalvägar som styr endometrial cellförnyelse och differentiering13,14. Metoder för isolering och odling av musens endometrievävnad beskrivs i litteraturen och rapporterar användningen av olika enzymatiska strategier för isolering av livmoderepitel för efterföljande odling av endometrieepitelorganoider4. Medan tidigare litteratur ger en kritisk ram för endometrieepitelorganoidkulturprotokoll 4,5,6, ger detta papper en tydlig, omfattande metod för att generera, underhålla, bearbeta och analysera dessa organoider. Standardisering av dessa tekniker är viktigt för att påskynda framsteg inom kvinnors reproduktionsbiologi. Här rapporterar vi en detaljerad metodik för enzymatisk och mekanisk rening av mus endometrial epitelvävnad för efterföljande odling av endometrieorganoider i en gelmatrisställning. Vi beskriver också metoderna för nedströms histologiska och molekylära analyser av de gelmatrisinkapslade musendometriepitelorganoiderna.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="4">Organoid Media Formulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Final concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix, *LDEV-free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td>100%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin from Bovine Pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1426-1G</td>
			<td>1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12634010</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17502048</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27&#8482; Supplement (50X), minus vitamin A</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12587010</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primocin</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>ant-pm-1</td>
			<td>100 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Acetyl-L-cysteine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9165-5G</td>
			<td>1.25 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25030024</td>
			<td>2 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>N0636-100G</td>
			<td>10 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALK-4, -5, -7 inhibitor, A83-01</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2939</td>
			<td>500 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td>50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human Noggin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-10C</td>
			<td>100 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human Rspondin-1</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-38</td>
			<td>500 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human FGF-10</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-26</td>
			<td>100 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human HGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-39</td>
			<td>50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WNT3a</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>5036-WN</td>
			<td>200 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other supplies and reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Final concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase from Clostridium histolyticum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0130-1G</td>
			<td>5 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>DN25-100MG</td>
			<td>2 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14190-250</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14170112</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Polystyrene Microplates (24-Well)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#08-772-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Polystyrene Microplates (12-Well)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#0877229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Cell Strainers, 40 &#181;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#08-771-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Direct-zol RNA MiniPrep (50 &#181;g)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>11-331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizol reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12, HEPES, no phenol red</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11039021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, Charcoal stripped</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F6765-500ML</td>
			<td>2%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Estratiol (E2)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E1024-1G</td>
			<td>10 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde 16% in aqueous solution, EM Grade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>15710</td>
			<td>4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Cassette 1 Slotted Tissue Cassettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1000961</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Stainless-Steel Embedding Base Molds</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>64-010-15&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 200 proof (100%)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-032-601&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoclear</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-899-90147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount Mounting Medium</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-277-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Nylon Biopsy Bags</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6774010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoGel Specimen Processing Gel</td>
			<td>VWR</td>
			<td>83009-992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin solution Premium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95057-844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y (yellowish) solution Premium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95057-848</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBS Buffer, 20X, pH 7.4</td>
			<td>GenDEPORT</td>
			<td>T8054</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBST (10X), pH 7.4</td>
			<td>GenDEPORT</td>
			<td>T8056</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0759-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate tribasic dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S4641-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween20</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP337-500&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A2153-100G</td>
			<td>3%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Solution (1 mg/mL)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>62248</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Nail Polish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1849418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22037246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Micro Cover Glasses</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript VILO Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11755050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYBR Green PCR Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4364346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Krt8 Antibody (TROMA-I)&#160;</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>TROMA-I&#160;</td>
			<td>1:50 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin Antobody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>5741S</td>
			<td>1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rat IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary 
			Antibody, Alexa Fluor 594</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-21209</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rabbin IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary 
			Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-21206</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS Stemi 508 Stereo Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS Axio Vert.A1 Inverted Routine Microscope with digital camera</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer Sequence</td>
			<td>Forward (5&#39;-3&#39;)</td>
			<td>Reverse (5&#39;-3&#39;)</td>
			<td>_</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipocalin 2 (Lcn2)</td>
			<td>GCAGGTGGTACGTTGTGGG</td>
			<td>CTCTTGTAGCTCATAGATGGTGC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactoferrin (Ltf)</td>
			<td>TGAGGCCCTTGGACTCTGT</td>
			<td>ACCCACTTTTCTCATCTCGTTC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone (Pgr)</td>
			<td>CCCACAGGAGTTTGTCAAGCTC</td>
			<td>TAACTTCAGACATCATTTCCGG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase (Gapdh)</td>
			<td>CAATGTGTCCGTCGTGGATCT</td>
			<td>GCCTGCTTCACCACCTTCTT</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing 3d endometrial organoids from the mouse uterus

Endometrial vävnad leder livmoderns inre hålighet och är under cyklisk kontroll av östrogen och progesteron. Det är en vävnad som består av luminalt och körtelepitel, ett stromalfack, ett vaskulärt nätverk och en komplex immuncellpopulation. Musmodeller har varit ett kraftfullt verktyg för att studera endometrium och avslöjar kritiska mekanismer som styr implantation, placentation och cancer. Den senaste utvecklingen av 3D-endometriella organoidkulturer presenterar en toppmodern modell för att dissekera signalvägarna som ligger till grund för endometriebiologi. Att etablera endometrieorganoider från genetiskt modifierade musmodeller, analysera deras transkriptom och visualisera deras morfologi vid en encellsupplösning är avgörande verktyg för studier av endometriesjukdomar. Denna uppsats beskriver metoder för att etablera 3D-kulturer av endometrieepitel från möss och beskriver tekniker för att kvantifiera genuttryck och analysera organoidernas histologi. Målet är att tillhandahålla en resurs som kan användas för att etablera, odla och studera genuttryck och morfologiska egenskaper hos endometrieepitelorganoider.

Faskontrastbilder av musendometrieorganoider Vi etablerade organoider från WT-mus endometrieepitel, som beskrivs i det bifogade protokollet (se diagram i figur 1). Efter enzymatisk dissociation av musens endometriepitel separerades epitelark mekaniskt från livmoderstromacellerna och dissocierades ytterligare med kollagenas för att generera en encellssuspension. Om den utförs korrekt bör denna metod för epitel- och stromacellsseparation ge prover med kontaminering av...

Watch this Scientific Journal Video about Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus at JoVE.com

Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus

Detta protokoll beskriver metoder för att etablera epitelorganiska epiteloider för mus för genuttryck och histologiska analyser.

Etablera 3D-endometrieorganoider från musens livmoder

Endometrial tissue lines the inner cavity of the uterus and is under the cyclical control of estrogen and progesterone. It is a tissue that is composed of ...

Detta protokoll är betydelsefullt eftersom det visar en steg-för-steg-metod för att isolera mycket rent livmoderepitel från musens livmoder för odling av endometrieorganoider. Denna metod använder effektivt enzymatisk och mekanisk dissociation för att isolera livmoderepitel. Teknikerna strömlinjeformades för att etablera, behandla och analysera endometrieepitelorganoider härledda från det isolerade epitelet.Börja med att tina gelmatrisen på is i ungefär en till två timmar före användning. Dissekera sedan den avlivade musen genom att göra ett snitt i mitten av buken med sax och försiktigt skala tillbaka huden för att exponera det underliggande peritoneala skiktet. Lokalisera livmoderhornen genom att försiktigt flytta bukfettkuddarna åt sidan och håll livmoderhornen vid livmoderhalskorsningen innan du skär dem längs det mesenteriska fettet.Efter dissektion av musens livmoder, ta bort fettvävnad från livmoderhornet noggrant med en liten sax. När du är klar skär du varje livmoderhorn i små fragment, var och en mäter cirka fyra till fem millimeter. Placera alla livmoderfragment från en livmoder i en brunn på en 24-brunnsplatta innehållande 0,5 ml 1% trypsin.Inkubera sedan 24-brunnsplattan i en 37 grader Celsius fuktad vävnadsodlingsinkubator i ungefär en timme för enzymatisk separation av endometriepitelimet från den underliggande stroma. Efter inkubationen överför livmoderfragmenten till en 35 millimeter vävnadsodlingsplatta innehållande en milliliter Dulbeccos fosfatbuffrade lösning eller DPBS. Därefter separera livmoderepitelet från livmoderröret under ett dissektionsmikroskop genom att hålla ena änden av ett livmoderfragment med pincetten och försiktigt köra pipettspetsen i längdriktningen över fragmentet och pressa epitelet ut ur den andra änden av livmoderröret.Observera sedan de separerade epitelarken från livmoderfragmentet under dissektionsmikroskopet. Överför sedan försiktigt alla epitelark till samma 1,5 ml rör med hjälp av en milliliter pipett. Och pellet de dissocierade epitelarken genom centrifugering vid 375 x g i fem minuter.Ta försiktigt bort supernatanten utan att störa cellpelleten och återsuspendera cellpelleten i 0,5 ml 2,5 milligram per milliliter kollagenas plus två milligram per milliliter DNA-lösning. Pipettera upp och ner cirka 10 gånger eller tills en enda cellsuspension uppnås. Tillsätt sedan 0,5 ml DMEM F/12 plus 10% fetalt bovint serum eller FBS plus antibiotika och centrifugera cellerna i fem minuter vid 375 x g.Ta bort supernatanten, återsuspendera cellerna i en milliliter DMEM / F12 plus 10% FBS plus antibiotika och centrifugera cellerna. Placera gelmatrisen på is tills den är klar. Ta sedan bort supernatanten från centrifugcellerna och återsuspendera cellpelleten med 20 gånger volymen av gelmatrisen utan att införa bubblorna.Låt gelmatriscellsuspensionen sätta sig vid rumstemperatur i cirka 10 minuter. När gelmatriscellsuspensionen blir en halvfast gel, använd en P200-mikropipett med en bredborrad 200 mikroliterspets och aspirera försiktigt 25 mikroliter av gelmatriscellsuspensionen. Dispensera tre separata 25 mikroliter kupoler per brunn på en 12-brunnsplatta och låt gelmatrisen härda i 15 minuter och en 37 grader Celsius fuktad vävnadsodlingsinkubator.Efter att gelmatrisen har härdats, tillsätt 750 mikroliter organoidmedium till varje brunn innehållande gelmatriskupol och inkubator vid 37 grader Celsius i en fuktad vävnadsodlingsinkubator. Faskontrastbilder av musendometrieorganoider visade att epitel- och stromacellsseparationen gav prover med högst 10% till 15% kontaminering av motsatt celltyp. De endometrieepitelcellerna samlades i organoider inom tre till fyra dagar.De sektionerade formalinfixerade paraffininbäddade endometrieorganoiderna visualiserades av hematoxylin- och eosinfläckar, som visade det enda skiktet av epitel och ihåliga centra, organoidernas lumen. Fluorescensmikroskopavbildningen visade att alla celler i organoiderna var Cytokeratin 8-positiva och innehöll DAPI, vilket indikerar att fixering, inbäddning och bearbetning av endometrieorganoiderna är kompatibel med antikroppsbaserad immunfärgning. Den kvantitativa PCR i realtid visade att stimuleringen med 10 nanomolar östradiol ökade uttrycket av lipocalin 2, laktoferrin och progesteronreceptor i epitelorganoiderna, vilket indikerar att endometrieepitelorganoider framgångsrikt kan användas för att mäta genuttrycksförändringarna som svar på östradiol.Det är viktigt att säkerställa att tydlig separation av endometriepitelivet erhålls under det mekaniska dissociationssteget. Man bör kunna observera epitel som kommer ut ur livmoderröret. Andra metoder inkluderar etablering av epitelorganoiderna genom inkapsling i en gelmatris.Om så önskas kan stromalfacket smältas ytterligare för att skapa 3D-epitelstromala samkulturer. Metoden kan hjälpa till att svara på frågor om signalerna som styr förnyelsen av endometrium. Det kan hjälpa till att behandla sjukdomar hos kvinnor, såsom endometrios, graviditetsförlust och cancer.

Research

JoVE Journal

Biology

Intravitreous Injection for Establishing Ocular Diseases Model

Intravitreal injektion för Etablera Ocular Sjukdomar Modell

Intravitreous injection is a widely used technique in visual sciences research. It can be used to establish animal models with ocular diseases or as ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

Etablera primärkulturer Vuxen Fibroblast från gnagare

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generering av möss härledda från inducerade pluripotenta stamceller

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

RNA Isolation from Mouse Pancreas: A Ribonuclease-rich Tissue

RNA Isolering från mus Pankreas: En Ribonuclease rika Tissue

Isolation of high-quality RNA from ribonuclease-rich tissue such as mouse pancreas presents a challenge.  As a primary function of the pancreas is to aid ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Trans-inner Cell Mass injektion av embryonala stamceller leder till högre chimärism

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis

Ex vivo metod för att bedöma mus reproduktionsorganen spontan motilitet och en MATLAB-baserade livmodern motion tracking algoritm för data analys

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...

3D Culturing of Organoids from the Intestinal Villi Epithelium Undergoing Dedifferentiation

3D-odling av organoider från intestinala Villi Epitel som genomgår dedifferentiering

Clonogenicity of organoids from the intestinal epithelium is attributed to the presence of stem cells therein. The mouse small intestinal epithelium is ...

Establishing Stable Binary Cultures of Symbiotic Saccharibacteria from the Oral Cavity

Etablera stabila binära kulturer av symbiotiska saccharibacteria från munhålan

Many bacterial species cannot be cultured in the laboratory using standard methods, posing a significant barrier to studying the majority of microbial ...

Multiplexed Fluorescent Immunohistochemical Staining of Four Endometrial Immune Cell Types in Recurrent Miscarriage

Multiplexerad fluorescerande immunohistokemisk färgning av fyra endometrie immuncelltyper vid återkommande missfall

Immunohistochemistry is the most commonly used method for the identification and visualization of tissue antigens in biological research and clinical ...

Establishing Human Lung Organoids and Proximal Differentiation to Generate Mature Airway Organoids

Etablering av mänskliga lungorganoider och proximal differentiering för att generera mogna luftvägsorganoider

The lack of a robust in vitro model of the human respiratory epithelium hinders the understanding of the biology and pathology of the respiratory system. ...