Name: a flexible chamber for time-lapse live-cell imaging with stimulated raman scattering microscopy
Uploaded: 2022-08-31T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Flexible Chamber for Time-Lapse Live-Cell Imaging with Stimulated Raman Scattering Microscopy at JoVE.com

Nous tenons à remercier l’équipe de conception principale de premier cycle 2019 (Suk Chul Yoon, Ian Foxton, Louis Mazza et James Walsh) de l’Université de Binghamton pour la conception, la fabrication et les tests de la boîte d’enceinte de microscope. Nous remercions Scott Hancock, Olga Petrova et Fabiola Moreno Olivas de l’Université de Binghamton pour leurs discussions utiles. Cette recherche a été soutenue par les National Institutes of Health sous le numéro d’attribution R15GM140444.

1. Construire l’enceinte environnementale du microscope
REMARQUE : Cette grande enceinte environnementale de microscope est utilisée pour contrôler la température du corps du microscope et de l’environnement d’imagerie à stabiliser à 37 °C (Figure 1A).
<ol><li>Marquez l’emplacement des pieds du cadre du microscope SRS et de la platine motorisée à l’aide d’un marqueur sur la table optique. Montez deux diaphragmes d’iris devant le scanner Gal...

<ol>
	<li>Mertz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Introduction to Optical Microscopy. , (2019).</li><li>Ettinger, A., Wittmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+live+cell+imaging.">Fluorescence live cell imaging.</a> Methods in Cell Biology. 123, 77-94 (2014).</li><li>Park, Y., Depeursinge, C., Popescu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+phase+imaging+in+biomedicine.">Quantitative phase imaging in biomedicine.</a> Nature Photonics. 12 (10), 578-589 (2018).</li><li>Hu, C. D., Kerppola, T. 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La microscopie SRS à cellules vivantes en accéléré est une technique d’imagerie alternative pour le suivi des molécules de manière sans marquage. Par rapport au marquage par fluorescence, l’imagerie SRS est exempte de photoblanchiment, ce qui permet une surveillance à long terme des molécules. Cependant, à ce jour, le système d’imagerie de cellules vivantes sur une microscopie SRS verticale n’est pas disponible dans le commerce. Dans ce travail, un système d’imagerie de cellules vivantes avec une bo?...

La microscopie optique est utilisée pour observer les microstructures des échantillons. L’imagerie optique est rapide, moins invasive et moins destructrice que les autres technologies1. L’imagerie de cellules vivantes avec microscopie optique est développée pour capturer la dynamique des cellules vivantes cultivées sur une longue période2. Différents types de contrastes optiques fournissent des informations distinctes sur les échantillons biologiques. Par exemple, la microscopie optique en phase montre la différence subtile dans les indices de réfraction à travers l’échantillon3. La microscopie à fluorescence est largement utilisée pour imager des biomolécules spécifiques ou des organites cellulaires. Cependant, les spectres d’excitation et d’émission à large bande de fluorescence entraînent généralement un chevauchement spectral lorsque l’imagerie multicolore est réalisée4. Les molécules fluorescentes sont sensibles à la lumière et peuvent être blanchies après une exposition périodique à long terme à la lumière. De plus, le marquage par fluorescence peut modifier la biodistribution des molécules dans les cellules5. La microscopie SRS est une technologie d’imagerie chimique sans marquage6. Le contraste du SRS repose sur la transition vibratoire de liaisons chimiques spécifiques. La fréquence vibratoire d’une liaison chimique présente souvent une bande passante spectrale étroite, ce qui permet d’imager plusieurs bandes Raman dans les mêmes échantillons7. La microscopie SRS est un outil unique pour l’imagerie de cellules vivantes, fournissant de multiples contrastes chimiques d’une manière sans marquage8.
Alors que l’imagerie SRS de cellules non colorées a été utilisée pour de nombreuses études, l’imagerie SRS à long terme de cellules vivantes n’a pas été largement adoptée. L’une des raisons est que les chambres ouvertes commerciales ne peuvent pas être utilisées directement pour l’imagerie SRS en raison de leur grande épaisseur 9,10,11,12. Ces chambres avec un couvercle en verre sont principalement conçues pour l’imagerie en fond clair ou en fluorescence utilisant un seul objectif à haute NA avec un schéma de détection arrière. Cependant, l’imagerie SRS préfère la détection transmise utilisant à la fois un objectif NA élevé et un condenseur NA élevé, ce qui ne laisse qu’un très court espace (généralement quelques millimètres) entre l’objectif et le condensateur. Pour surmonter ce problème, nous avons conçu une chambre flexible utilisant un matériau souple pour permettre l’imagerie SRS en accéléré des cellules vivantes à l’aide d’un cadre de microscope vertical. Dans cette conception, l’objectif de trempage d’eau a été enfermé dans la chambre souple et peut se déplacer librement en trois dimensions à des fins de mise au point et d’imagerie.
La température optimale pour la culture de la plupart des cellules de mammifères est de 37 °C, tandis que la température ambiante est toujours inférieure de 10 °C. Une température supérieure ou inférieure à 37 °C a un effet dramatique sur le taux de croissance cellulaire13. Par conséquent, le contrôle de la température de l’environnement de culture cellulaire est nécessaire dans un système d’imagerie de cellules vivantes. On sait que l’instabilité de la température entraînera des problèmes de défocalisation lors de l’imagerie à long terme14. Pour obtenir un environnement stable à 37 °C, nous avons construit une grande chambre d’enceinte pour couvrir l’ensemble du cadre du microscope, y compris une couche d’isolation thermique sous le microscope (Figure 1). Dans la grande chambre de régulation de la température, la petite chambre flexible aide à maintenir avec précision l’humidité physiologique et le pH via le débit d’air régulé complété par 5% de CO 2 (Figure 2). La température et l’humidité des chambres ont été mesurées pour confirmer que la conception à double chambre fournissait les conditions de culture cellulaire optimales pour la croissance cellulaire sous imagerie SRS périodique à long terme (Figure 3). Nous avons ensuite démontré l’application du système pour l’imagerie accélérée et le suivi des gouttelettes lipidiques (LD) dans les cellules cancéreuses SKOV3 (Figure 4, Figure 5 et Figure 6).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>A lab-built SRS microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>https://rdcu.be/cP6ve</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HF2LI 50 MHz lock-in amplifer</td>
			<td>Zurich Instruments</td>
			<td>HF2LI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris diaphragm</td>
			<td>Thorlabs Inc</td>
			<td>SM1D12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kinematic mirror mount</td>
			<td>Thorlabs Inc</td>
			<td>KM100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope frame</td>
			<td>Nikon Inc</td>
			<td>FN-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Motorized microscopy stage</td>
			<td>Prior Scientific</td>
			<td>Z-Deck</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil-immersion condenser (C-AA Achromat/Aplanat, NA 1.4)</td>
			<td>Nikon Inc</td>
			<td>MBL71405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water-immersion objective (CFI75 Apo 25XC W 1300)</td>
			<td>Nikon Inc</td>
			<td>MRD77225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials and parts for the microscope enclosure (31&#39;&#39; x 29&#39;&#39; x 28&#39;&#39; L x W x H)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airtherm heater module</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>AIRTHERM-SAT-1W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airtherm heater controller, CO2 and humidity monitor</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>AIRTHERM-SMT-1W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air/CO2 mixer module</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>ECU-HOC-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexible duct hose (2-1/2&#39;&#39; ID, 2-3/4&#39;&#39; OD)</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>56675K71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-temperature glass-mica ceramic, easy-to-machine (6&#39;&#39; x 6&#39;&#39;, 1/4&#39;&#39; thickness)</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>8489K62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polycarbonate sheets (thickness 0.25&#39;&#39;)</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>8574K286</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone rubber sheets (36&#39;&#39; x 36&#39;&#39;, thickness 1/8&#39;&#39;)</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>5827T43</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials and parts for the Flexible chamber</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>31745K11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-purity inline filter, 1/4 NPT</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>6645T18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hole saw (cutting diameter 1-7/8 inch)</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>4066A34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hole saw (cutting diameter 50 mm)</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>4556A19</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-temperature silicone rubber tubing, soft, 2 mm ID, 5 mm OD</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>5054K313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inline filter (1/4 NPT, 40 micron)</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>98385K843</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multipurpose 6061 Aluminum round tube (1/8&#39;&#39; wall thickness, 4&#39;&#39; OD)</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>9056K42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multipurpose 6061 Aluminum round tube (3/4&#39;&#39; wall thickness, 3-3/4&#39;&#39; OD)</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>9056K47</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multipurpose 6061 Aluminum bar (12&#39;&#39; x 12&#39;&#39;, thickness 1/4&#39;&#39;)</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>8975K142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multipurpose 6061 Aluminum bar (8&#39;&#39; x 8&#39;&#39;, thickness 3/8&#39;&#39;)</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>9246K21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective nosepiece (single)</td>
			<td>Nikon Inc</td>
			<td>FN-MN-H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sample holder (modified)</td>
			<td>Prior Scientific</td>
			<td>HZ202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-thin natural rubber film (thickness 0.01&#39;&#39;)</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>8611K13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum-sealable glass jar</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>3231T44</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB</td>
			<td>MathWorks</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ (Fiji)</td>
			<td></td>
			<td>imagej.net</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ScanImage</td>
			<td>Vidrio Technologies, LLC</td>
			<td></td>
			<td>SRS imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials for live-cell imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass bottom sterile culture dishes (Dia.x H, 50 x 7 mm)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences (EMS)</td>
			<td>70674-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM cell culture medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11965092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>26140079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LysoSensor fluorescent dye DND-189</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>L7535 (Invitrogen)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oleic acid</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>364525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SKOV3 cell line</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-77</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a flexible chamber for time-lapse live-cell imaging with stimulated raman scattering microscopy

La microscopie à diffusion Raman stimulée (SRS) est une technologie d’imagerie chimique sans marquage. L’imagerie de cellules vivantes avec SRS a été démontrée pour de nombreuses applications biologiques et biomédicales. Cependant, l’imagerie SRS à long terme de cellules vivantes n’a pas été largement adoptée. La microscopie SRS utilise souvent un objectif d’immersion dans l’eau à grande ouverture numérique (NA) et un condenseur à immersion d’huile à haute NA pour obtenir une imagerie à haute résolution. Dans ce cas, l’écart entre l’objectif et le condensateur n’est que de quelques millimètres. Par conséquent, la plupart des chambres environnementales commerciales ne peuvent pas être utilisées pour l’imagerie SRS en raison de leur grande épaisseur avec un couvercle en verre rigide. Cet article décrit la conception et la fabrication d’une chambre flexible pouvant être utilisée pour l’imagerie de cellules vivantes en accéléré avec détection de signal SRS transmis sur un cadre de microscope vertical. La flexibilité de la chambre est obtenue en utilisant un matériau souple - un film mince de caoutchouc naturel. La nouvelle conception du boîtier et de la chambre peut être facilement ajoutée à une installation d’imagerie SRS existante. Les tests et les résultats préliminaires démontrent que le système de chambre flexible permet une imagerie SRS stable, à long terme et accélérée de cellules vivantes, qui peut être utilisée pour diverses applications de bioimagerie à l’avenir.

Nous avons fabriqué et assemblé le système de chambre flexible pour l’imagerie SRS time-lapse (Figure 1 et Figure 2), puis évalué les performances du système. La température à l’intérieur de l’enceinte environnementale du microscope a atteint les 37 °C attendus en 1 h, ce qui n’a pas affecté de manière significative la température ambiante (figure 3A). La température dans la chambre flexible a atteint 37 °C en...

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A Flexible Chamber for Time-Lapse Live-Cell Imaging with Stimulated Raman Scattering Microscopy

Nous rapportons une chambre environnementale flexible au sommet de l’étage pour l’imagerie accélérée de cellules vivantes à l’aide de la microscopie à diffusion Raman stimulée verticalement avec détection de signal transmis. Des gouttelettes lipidiques ont été imagées dans des cellules SKOV3 traitées à l’acide oléique pendant 24 heures avec un intervalle de temps de 3 minutes.

Une chambre flexible pour l’imagerie de cellules vivantes en accéléré avec microscopie à diffusion Raman stimulée

Stimulated Raman scattering (SRS) microscopy is a label-free chemical imaging technology. Live-cell imaging with SRS has been demonstrated for many ...

La technique flexible de la chambre environnementale permet l’imagerie en accéléré en tant que SRS avec détection de signal transmis sur un cadre de microscope opératoire. La microscopie SRS utilisait un objectif à grande ouverture numérique et un condensateur haut de gamme, ne laissant que quelques millimètres d’espace là où une chambre conventionnelle ne peut pas s’adapter. Une chambre flexible résout ce problème.Les chercheurs utilisant la microscopie SRS peuvent facilement adopter cette technique. La chambre flexible peut également être utilisée sur un microscope à dissection ou stérile pour maintenir l’échantillon dans des conditions physiologiques optimales. Pour commencer, marquez l’emplacement des pieds du cadre du microscope SRS et de la platine motorisée à l’aide d’un marqueur sur la table optique.Après avoir retiré le cadre et la scène du microscope de la table optique, posez la feuille de caoutchouc de silicone sur la table. Couper le caoutchouc de silicone le long des marques à l’aide d’un couteau. Retirez les petits morceaux de caoutchouc et placez les feuilles carrées de céramique de mica aux mêmes endroits.Déplacez ensuite le cadre du microscope et la platine vers la table optique et alignez soigneusement les pieds sur les feuilles de céramique de mica le long des lignes de marqueur. Après avoir réaligné le chemin optique SRS, assemblez l’enceinte environnementale au-dessus de la fondation d’isolation thermique pour couvrir l’ensemble du cadre du microscope, en utilisant cinq morceaux de grandes feuilles de polycarbonate. Scellez les bords et les interfaces de la boîte à l’aide de ruban adhésif en aluminium.Connectez le tuyau flexible du conduit aux orifices d’entrée et de sortie de la boîte de boîtier pour permettre un flux d’air chaud circulant pompé et contrôlé par le module de chauffage. Montez la pièce cylindrique creuse usinée 1 sur la pièce avant de l’objectif à l’aide de trois vis de jeu. Ensuite, montez la pièce d’aluminium cylindrique creuse usinée 2 sur le porte-échantillon à l’aide de quatre vis.Installez le porte-échantillon avec la pièce en aluminium 2 sur la platine motorisée et montez-le à l’aide de vis. Placez le manchon du film de caoutchouc naturel entre les deux pièces d’aluminium usinées et montez-le à l’aide d’élastiques à chaque extrémité. Connectez la bouteille de CO2 comprimée au module mélangeur de gaz à l’aide de tubes et de connecteurs appropriés.Réglez la pression d’entrée de CO2 à 20 à 25 psi. Utilisez le capteur de CO2 intégré et un contrôleur pour vous assurer que le module mélangeur d’air peut réguler et mélanger 5% de CO2 dans le flux d’air. Utilisez des filtres en ligne pour nettoyer le flux d’air.À l’aide de tubes et de connecteurs appropriés, guidez l’air mélangé vers la bouteille d’eau préstérilisée placée sur la plaque chauffante, puis guidez l’air humidifié vers la chambre flexible. Réglez la plaque chauffante à 37 degrés Celsius. Faites des bulles sur le flux d’air dans l’eau chaude pour augmenter l’humidité du flux d’air.Déconnectez la pièce d’aluminium 2 de la machine du porte-échantillon en retirant les vis. Essuyez toutes les parties de la chambre flexible avec de l’éthanol à 70 %, y compris l’embout nasal, le porte-échantillon et l’objectif de trempage dans l’eau. Décontaminez l’ensemble du système d’enceinte à l’aide d’une lampe UV placée dans l’enceinte pendant 20 à 30 minutes.Ensuite, chargez la boîte de culture cellulaire. Retirez le couvercle du plat et immobilisez-le à l’aide des pinces. Abaissez l’objectif dans le milieu de culture cellulaire pour une focalisation grossière.Abaissez la pièce d’aluminium 2 pour enfermer la chambre flexible et montez-la sur le porte-échantillon à l’aide de vis. Insérez ensuite le capteur. Réglez l’alimentation en air avec 5% CO2 et 19% O2 pour une culture cellulaire normale avec un débit d’air de 200 centimètres cubes par minute et une température de 37 degrés Celsius.Réglez la longueur d’onde du laser à 805 nanomètres pour cibler le décalage Raman inverse de 2 854 centimètres, attribué à la vibration des liaisons chimiques CH2. Utilisez une faible puissance laser pour réduire les dommages causés par la photo aux cellules. Ajustez et concentrez l’objectif pour obtenir une bonne imagerie SRS des cellules à l’aide du bouton de mise au point situé sur le panneau de commande principal du logiciel.Pour effectuer une mise au point rapide, définissez le nombre de pixels sur 512 x 512 pixels avec un temps d’attente de pixels de 4,8 microsecondes sur le panneau de configuration. Après avoir obtenu une bonne mise au point, définissez la résolution d’imagerie sur 2048 par 2048 pixels pour un champ de vision carré de 175 micromètres pour l’acquisition d’images de haute qualité. Vérifiez la fonction d’enregistrement sur le panneau de commande principal et vérifiez le canal SRS sur le panneau des canaux.Définissez l’intervalle de temps entre deux images sur 180 secondes sur le canal de contrôle principal. Définissez le nombre d’acquisition sur 480 pour l’imagerie accélérée sur 24 heures. Démarrez l’acquisition automatisée d’images à l’aide de la fonction de boucle sur le panneau de commande principal.La performance du système de chambre flexible pour l’imagerie SRS en accéléré a été évaluée. La température à l’intérieur de l’enceinte environnementale du microscope a atteint les 37 degrés Celsius attendus et n’a pas affecté de manière significative la température ambiante. La température dans la chambre flexible a atteint 37 degrés Celsius en 1,5 heure et a été maintenue de manière stable pendant au moins 24 heures.L’humidité relative dans la chambre flexible a atteint 85% en une heure et a pu être maintenue pendant au moins 24 heures. L’imagerie SRS en accéléré de cellules SKOV3 vivantes a montré le mouvement rapide et actif des gouttelettes lipidiques intracellulaires avec une résolution temporelle de trois minutes. À la fin de la séance d’imagerie de 24 heures, les cellules présentaient toujours une morphologie et une densité normales, indiquant que les cellules étaient saines.Ensuite, les cellules SKOV3 traitées avec de l’acide oléique ont été imagées et l’accumulation de gouttelettes lipidiques a été suivie pendant 10 heures. Les quantités de gouttelettes lipidiques ont été quantifiées à l’aide du rapport entre les gouttelettes lipidiques et la surface corporelle cellulaire et de l’intensité totale du SRS des gouttelettes lipidiques. Les résultats indiquent que la quantité de gouttelettes lipidiques a continué d’augmenter pendant 10 heures.L’imagerie SRS directe simultanée de gouttelettes lipidiques et l’imagerie par fluorescence à deux photons en arrière de lysosomes marqués avec un colorant de fluorescence DND-189 ont également été démontrées. Un très faible degré de colocalisation des gouttelettes lipidiques et des lysosomes a été observé. Lorsque vous essayez ce protocole, gardez à l’esprit que la dérive focale est un problème courant dans l’imagerie de cellules vivantes.La refocalisation peut être nécessaire après environ deux heures d’imagerie accélérée. Après son développement, l’imagerie SRS time-lapse a été utilisée pour diverses études afin de suivre des molécules sans marquage ou des molécules marquées avec du texte Raman dans des cellules vivantes.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Specimen Preparation, Imaging, and Analysis Protocols for Knife-edge Scanning Microscopy

Protocoles de préparation des échantillons, d&#39;imagerie et d&#39;analyse pour la microscopie à balayage en lame de couteau

Major advances in high-throughput, high-resolution, 3D microscopy techniques have enabled the acquisition of large volumes of neuroanatomical data at ...

Recherche

Bio-ingénierie

Time-lapse Fluorescence Imaging of Arabidopsis Root Growth with Rapid Manipulation of The Root Environment Using The RootChip

Time-lapse d&#39;imagerie par fluorescence de la croissance racinaire d&#39;Arabidopsis avec la manipulation rapide de l&#39;environnement root en utilisant le RootChip

The root functions as the physical anchor of the plant and is the organ responsible for uptake of water and mineral nutrients such as nitrogen, ...

Creating Adhesive and Soluble Gradients for Imaging Cell Migration with Fluorescence Microscopy

Création de dégradés et adhésifs solubles pour la migration des cellules d&#39;imagerie par microscopie à fluorescence

Cells can sense and migrate towards higher concentrations of adhesive cues such as the glycoproteins of the extracellular matrix and soluble cues such as ...

Sample Drift Correction Following 4D Confocal Time-lapse Imaging

Exemple de correction de la dérive Après 4D confocale imagerie time-lapse

The generation of four-dimensional (4D) confocal datasets; consisting of 3D image sequences over time; provides an excellent methodology to capture ...

From Fast Fluorescence Imaging to Molecular Diffusion Law on Live Cell Membranes in a Commercial Microscope

De Fluorescence Imaging rapide à moléculaire loi Diffusion sur les membranes cellulaires en direct dans un microscope commercial

It has become increasingly evident that the spatial distribution and the motion of membrane components like lipids and proteins are key factors in the ...

Fluorescence-quenching of a Liposomal-encapsulated Near-infrared Fluorophore as a Tool for In Vivo Optical Imaging

Fluorescence-quenching of a Liposomal-encapsulated Near-infrared Fluorophore as a Tool for In Vivo Optical Imaging

Fluorescence-trempe d&#39;un proche infrarouge fluorophore encapsulée dans des liposomes comme outil de<em&gt; In Vivo</em&gt; Imagerie optique

Optical imaging offers a wide range of diagnostic modalities and has attracted a lot of interest as a tool for biomedical imaging. Despite the enormous ...

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Imagerie sur cellule vivante pendant stretch mécanique

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Rapid Subtractive Patterning of Live Cell Layers with a Microfluidic Probe

Modélisation soustractive rapide des couches de cellules vivantes avec une sonde microfluidique

The microfluidic probe (MFP) facilitates performing local chemistry on biological substrates by confining nanoliter volumes of liquids. Using one ...

Visualizing Adhesion Formation in Cells by Means of Advanced Spinning Disk-Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

Visualiser la Formation d’adhérences dans les cellules par le biais de pointe tourne disque-Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

In living cells, processes such as adhesion formation involve extensive structural changes in the plasma membrane and the cell interior. In order to ...

Continuous Measurement of Biological Noise in Escherichia Coli Using Time-lapse Microscopy

Continuous Measurement of Biological Noise in Escherichia Coli Using Time-lapse Microscopy

Mesure continue du bruit biologique chez Escherichia Coli à l’aide d’une microscopie en accéléré

The protocol developed here offers a tool to enable computer tracking of Escherichia coli division and fluorescent levels over several hours. The process ...