Name: microengineering 3d collagen hydrogels with long-range fiber alignment
Uploaded: 2022-09-07T14:45:00
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इस काम को पुरस्कार संख्या R21GM143658 के तहत राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान और अनुदान संख्या 2150798 के तहत राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया था। सामग्री पूरी तरह से लेखकों की जिम्मेदारी है और जरूरी नहीं कि फंडिंग एजेंसियों के आधिकारिक विचारों का प्रतिनिधित्व करती है।

1. दो-टुकड़ा चैनल और मॉड्यूलर प्लेटफ़ॉर्म बेस का निर्माण
नोट: माइक्रोफ्लुइडिक चैनल का निर्माण दो भागों का उपयोग करके किया जाता है - माइक्रोफ्लुइडिक चैनल "कटआउट", जो परिभाषित मोटाई की पॉल?...

संरेखित तंतुओं के साथ COL1 मैट्रिसेस उत्पन्न करने के प्रोटोकॉल को चुंबकीय विधियों, यांत्रिक तनाव के प्रत्यक्ष अनुप्रयोग और माइक्रोफ्लुइडिकतकनीकों का उपयोग करके वर्णित किया गया है। माइक्रोफ?...

कोशिकाएं एक जटिल 3 डी रेशेदार नेटवर्क में रहती हैं जिसे बाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम) कहा जाता है, जिसका बड़ा हिस्सा संरचनात्मक प्रोटीन कोलेजन प्रकार I (COL1)1,2 से बना होता है। ईसीएम के बायोफिज़िकल गुण कोशिकाओं को मार्गदर्शन संकेत प्रदान करते हैं, और जवाब में, कोशिकाएं ईसीएम माइक्रोआर्किटेक्चर 3,4,5 को फिर से तैयार करती हैं। ये पारस्परिक सेल-मैट्रिक्स इंटरैक्शन संरेखित सीओएल 1 फाइबर डोमेन6 को जन्म दे सकते हैं जो ट्यूमर वातावरण 7,8,9 में एंजियोजेनेसिस और सेल आक्रमण को बढ़ावा देते हैं और सेल आकृति विज्ञान10,11,12, ध्रुवीकरण13 और भेदभाव 14 को प्रभावित करते हैं। संरेखित कोलेजन फाइबर घाव भरने को भी बढ़ावा देते हैं15, ऊतक विकास16 में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं, और लंबी दूरी के सेल संचार17,18 में योगदान करते हैं। इसलिए, इन विट्रो में देशी COL1 फाइबर माइक्रोआर्किटेक्चर की प्रतिकृति बनाना संरेखित माइक्रोएन्वायरमेंट के लिए सेल प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए संरचित मॉडल विकसित करने की दिशा में एक महत्वपूर्ण कदम है।
 माइक्रोफिज़ियोलॉजिकल सिस्टम (एमपीएस) 19,20,21,22,23 विकसित करने के लिए माइक्रोफ्लुइडिक सेल कल्चर सिस्टम को एक पसंदीदा तकनीक के रूप में स्थापित किया गया है। अनुकूल माइक्रोस्केल स्केलिंग प्रभावों का लाभ उठाते हुए, ये प्रणालियां द्रव प्रवाह पर सटीक नियंत्रण प्रदान करती हैं, यांत्रिक बलों के नियंत्रित परिचय का समर्थन करती हैं, और माइक्रोचैनल21,24,25,26,27 के भीतर जैव रासायनिक माइक्रोएन्वायरमेंट को परिभाषित करती हैं। एमपीएस प्लेटफार्मों का उपयोग ऊतक-विशिष्ट माइक्रोएन्वायरमेंट को मॉडल करने और बहु-अंग इंटरैक्शन का अध्ययन करनेके लिए किया गया है। इसके साथ ही, विवो29,30 में देखे गए ईसीएम के 3 डी यांत्रिकी और जैविक प्रभाव को पुन: उत्पन्न करने के लिए हाइड्रोगेल का व्यापक रूप से पता लगाया गया है। माइक्रोफ्लुइडिक प्लेटफार्मों के साथ 3 डी संस्कृति को एकीकृत करने पर बढ़ते जोर के साथ, कई दृष्टिकोण माइक्रोफ्लुइडिक उपकरणों31,32,33 में सीओएल 1 हाइड्रोगेल को जोड़ सकते हैं। हालांकि, माइक्रोफ्लुइडिक चैनलों में COL1 हाइड्रोगेल को संरेखित करने के तरीके <1 मिमी चौड़े चैनलों में पतले 2D "मैट" (<40 μm मोटाई) तक सीमित हैं, जो संरेखित 3D माइक्रोएन्वायरमेंट 31,34,35,36 में मॉडल सेल प्रतिक्रियाओं की सीमित क्षमता प्रदान करते हैं।
माइक्रोफ्लुइडिक सिस्टम में संरेखित 3 डी सीओएल 1 हाइड्रोगेल प्राप्त करने के लिए, यह दिखाया गया है कि, जब एक स्व-संयोजन सीओएल 1 समाधान स्थानीय विस्तार प्रवाह (धारावार दिशा के साथ वेग परिवर्तन) के संपर्क में आता है, तो परिणामस्वरूप सीओएल 1 हाइड्रोगेल फाइबर संरेखण की एक डिग्री प्रदर्शित करते हैं जो सीधेविस्तारक तनाव दर के परिमाण के आनुपातिक होता है जो वे अनुभव करते हैं। 38. इस प्रोटोकॉल में माइक्रोचैनल डिजाइन दो मायनों में अद्वितीय है; सबसे पहले, खंडित डिजाइन COL1 समाधान के लिए स्थानीय विस्तारात्मक तनाव का परिचय देता है, और दूसरा, इसका "दो-टुकड़ा" निर्माण उपयोगकर्ता को COL1 फाइबर को संरेखित करने की अनुमति देता है और फिर एक खुले प्रारूप में सीधे संरेखित फाइबर तक पहुंचने के लिए चैनल को अलग करता है। इस दृष्टिकोण को मॉड्यूलर माइक्रोफ्लुइडिक प्लेटफार्मों को विकसित करने के लिए अपनाया जा सकता है जो आदेशित सीओएल 1 मैट्रिसेस के साथ माइक्रोफिजियोलॉजिकल सिस्टम विकसित करते हैं। निम्नलिखित प्रोटोकॉल खंडित माइक्रोचैनलबनाने की प्रक्रिया का वर्णन करता है और गोजातीय एटेलो सीओएल 1 को संरेखित करने के लिए चैनलों के उपयोग का विवरण देता है। यह प्रोटोकॉल एक खुले कुएं प्रारूप में COL1 पर कोशिकाओं की खेती के लिए निर्देश भी प्रदान करता है और मॉड्यूलर, चुंबकीय आधार परत का उपयोग करके प्लेटफ़ॉर्म में कार्यक्षमता जोड़ने पर चर्चा करता है।

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	<tbody>
		<tr>
			<td>(3-Aminopropyl)triethoxysilane, 99% (APTES)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>440140-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 Gauge IT Series Angled Dispensing Tip</td>
			<td>Jensen Global</td>
			<td>JG-20-1.0-90</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/16&#34; dia. x 1/16&#34; thick Nickel Plated Magnet</td>
			<td>KJ Magnetics</td>
			<td>D31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3M (TC) 12X12-6-467MP</td>
			<td>DigiKey</td>
			<td>3M9726-ND</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACETONE ACS REAGENT &#8805;99.5%</td>
			<td>Signa Aldrich</td>
			<td>179124-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD-20AC LABORATORY CORONA TREATER</td>
			<td>Electro-Technic Products</td>
			<td>12051A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA), Fraction V, 98%, Reagent Grade, Alfa Aesar</td>
			<td>VWR</td>
			<td>AAJ64100-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear cast acrylic sheet</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>8560K181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 100 mL Trypsin 10x, 2.5% Trypsin in HBSS [-] calcium, magnesium, phenol red, Porcine Parvovirus Tested</td>
			<td>VWR</td>
			<td>45000-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess II Automated Cell Counter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AMQAX1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CT-FIRE software</td>
			<td>LOCI - University of Wisconsin</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGM-2 Endothelial Cell Growth Medium-2 BulletKit, (CC-3156 &#38; CC-4176), Lonza CC-3162, 500 mL</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde 50% in aqueous solution, Reagent Grade, Packaging=HDPE Bottle, Size=100 mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRV0875-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphtec CELITE-50</td>
			<td>Graphtec</td>
			<td>CE LITE-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1 M)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15-630-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-Purity Silicone Rubber .010&#34; Thick, 6&#34; X 8&#34; Sheet, 55A Durometer</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>87315K62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Umbilical Vein Endothelial cells</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C0035C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen&#160;Trypan Blue Stain (0.4%)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>T10282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A4154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser cutter</td>
			<td>Full Spectrum</td>
			<td>20x12 H-series</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfluidics Syringe pump</td>
			<td>New Era Syringe Pumps</td>
			<td>NE-1002X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microman E Single Channel Pipettor, Gilson, Model M1000E</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>FD10006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Probes Alexa Fluor 488 Phalloidin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A12379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Probes Hoechst 33342, Trihydrochloride, Trihydrate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>H3570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nutragen Bovine Atelo Collagen</td>
			<td>Advanced BioMatrix</td>
			<td>5010-50ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pbs (10x), pH 7.4</td>
			<td>VWR</td>
			<td>70011044.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS pH 7.4</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10010049.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS, 10x), with Triton X-100</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>J63521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Replacement carrier sheet for graphtec craft ROBO CC330L-20</td>
			<td>USCUTTER</td>
			<td>GRPCARSHTN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Restek Norm-Ject Plastic Syringe 1 mL Luer Slip</td>
			<td>Restek</td>
			<td>22766.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon wafer</td>
			<td>University wafer</td>
			<td>452</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide, ACS, Packaging=Poly Bottle, Size=500 g</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH9292-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184</td>
			<td>VWR</td>
			<td>102092-312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific&#160;Pierce 20x PBS Tween 20</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>28352.00</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microengineering 3d collagen hydrogels with long-range fiber alignment

संरेखित कोलेजन I (COL1) फाइबर ट्यूमर सेल गतिशीलता का मार्गदर्शन करते हैं, एंडोथेलियल सेल आकृति विज्ञान को प्रभावित करते हैं, स्टेम सेल भेदभाव को नियंत्रित करते हैं, और हृदय और मस्कुलोस्केलेटल ऊतकों की एक पहचान हैं। विट्रो में संरेखित माइक्रोएन्वायरमेंट के लिए सेल प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए, चुंबकीय, यांत्रिक, सेल-आधारित और माइक्रोफ्लुइडिक विधियों सहित परिभाषित फाइबर संरेखण के साथ सीओएल 1 मैट्रिसेस उत्पन्न करने के लिए कई प्रोटोकॉल विकसित किए गए हैं। इनमें से, माइक्रोफ्लुइडिक दृष्टिकोण उन्नत क्षमताओं की पेशकश करते हैं जैसे द्रव प्रवाह और सेलुलर माइक्रोएन्वायरमेंट पर सटीक नियंत्रण। हालांकि, उन्नत इन विट्रो कल्चर प्लेटफार्मों के लिए संरेखित सीओएल 1 मैट्रिसेस उत्पन्न करने के लिए माइक्रोफ्लुइडिक दृष्टिकोण सीओएल 1 फाइबर के पतले "मैट" (<40 μm मोटाई) तक सीमित हैं जो 500 μm से कम दूरी तक फैले हुए हैं और 3 डी सेल कल्चर अनुप्रयोगों के लिए अनुकूल नहीं हैं। यहां, हम एक माइक्रोफ्लुइडिक डिवाइस में परिभाषित फाइबर संरेखण के मिलीमीटर-स्केल क्षेत्रों के साथ 3 डी सीओएल 1 मैट्रिसेस (मोटाई में 130-250 μm) बनाने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। यह मंच सेल संस्कृति के लिए माइक्रो-इंजीनियर मैट्रिक्स तक सीधी पहुंच प्रदान करके संरचित ऊतक माइक्रोएन्वायरमेंट को मॉडल करने के लिए उन्नत सेल कल्चर क्षमताएं प्रदान करता है।

जब एक स्व-संयोजन COL1 समाधान घटते क्रॉस-अनुभागीय क्षेत्र के साथ एक चैनल के माध्यम से बहता है, तो COL1 समाधान का धारावार वेग (vx) स्थानीय रूप से एक परिमाण, ∂vx, दो खंडों (∂x) के बीच कसना की लंबाई के साथ बढ़ता है...

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Microengineering 3D Collagen Hydrogels with Long-Range Fiber Alignment

यह प्रोटोकॉल 3 डी कोलेजन हाइड्रोगेल (मोटाई में <250 μm) में फाइबर को संरेखित करने के लिए विस्तारात्मक तनाव (स्ट्रेचिंग) उत्पन्न करने के लिए द्रव प्रवाह दिशा के साथ ज्यामिति को बदलने के साथ एक माइक्रोफ्लुइडिक चैनल के उपयोग को प्रदर्शित करता है। परिणामी संरेखण कई मिलीमीटर में फैला हुआ है और विस्तारात्मक तनाव दर से प्रभावित होता है।

लंबी दूरी के फाइबर संरेखण के साथ माइक्रोइंजीनियरिंग 3 डी कोलेजन हाइड्रोगेल

Aligned collagen I (COL1) fibers guide tumor cell motility, influence endothelial cell morphology, control stem cell differentiation, and are a hallmark ...

यह विधि हमें शरीर में स्वस्थ और रोगग्रस्त ऊतक में पाए जाने वाले मॉडल वातावरण के लिए फाइबर संरेखण के नियंत्रित स्तर के साथ 3 डी कोलेजन हाइड्रोगेल को इंजीनियर करने की अनुमति देती है। यह तकनीक कोलेजन हाइड्रोगेल को इंजीनियर करने, कोशिकाओं को पेश करने और स्थलाकृतिक रूप से परिभाषित 3 डी वातावरण में कोशिकाओं के व्यवहार को निर्धारित करने के लिए एक सरल माइक्रोफ्लुइडिक दृष्टिकोण प्रदान करती है। प्रक्रिया का प्रदर्शन मेरी प्रयोगशाला के लिए नील जोशी, मेहरान मंसूरी, एन बायरली और जस्टिन विदस करेंगे।शुरू करने के लिए, प्लास्टिक वाहक पर 250-माइक्रोमीटर मोटी पीडीएमएस शीट माउंट करें और रेजर ने 0.5 मिलीमीटर की ब्लेड गहराई, एक सेंटीमीटर प्रति सेकंड की गति और उच्च बल पर क्राफ्ट कटर का उपयोग करके माइक्रोफ्लुइडिक डिजाइन को काट दिया। अल्ट्रासोनिक स्नान का उपयोग करके, माइक्रोफ्लुइडिक चैनल कटआउट को पांच मिनट के लिए साफ करें। आयनित पानी में सोनिकेटेड चैनलों को धोएं और उन्हें पांच मिनट के लिए 100 डिग्री सेल्सियस पर गर्म प्लेट पर सुखाएं।उपयोग होने तक चैनलों को एक साफ, कवर किए गए पेट्री डिश में स्टोर करें। पीडीएमएस कवर परत को बनाने और भविष्य के संशोधन के लिए सतह को कार्यात्मक बनाने के लिए, 49 मिलीलीटर एसीटोन में एक मिलीलीटर एमिनोप्रोपिल ट्राइथोक्सीसिलेन जोड़कर ग्लास बीकर में 2% एमिनोप्रोपिल ट्राइथोक्सीसिलेन समाधान तैयार करें। इसके बाद, 25% ग्लूटारल्डिहाइड घोल को विआयनीकृत पानी में 5% तक पतला करें।प्रत्येक 24 मिलीमीटर के लिए दो मिलीलीटर घोल बनाकर 50 मिलीमीटर कवर स्लिप करें। आईपीए का उपयोग करके पांच मिनट के लिए स्नान सोनिकेटर में कवर स्लिप को साफ करें। आयनित पानी का उपयोग करके कवर स्लिप से आईपीए को धो लें।कवर स्लिप पर पानी की एक चिकनी फिल्म इंगित करती है कि आईपीए पूरी तरह से धोया गया है। कवर स्लिप को 100 डिग्री सेल्सियस पर पांच मिनट के लिए गर्म प्लेट पर सुखाएं। सूखे कवर स्लिप को साफ पेट्री व्यंजनों में रखें, यह सुनिश्चित करते हुए कि वे ओवरलैप न हों।कोरोना डिस्चार्ज वैंड का उपयोग करके, कवर स्लिप को एक मिनट के लिए कोरोना डिस्चार्ज के संपर्क में रखें। कोरोना एक्सपोजर के पांच मिनट के भीतर कवर स्लिप को हटा दें और प्रत्येक कवर स्लिप को 10 सेकंड के लिए एमिनोप्रोपिल ट्राइथोक्सीसिलेन घोल में डुबोएं, यह सुनिश्चित करते हुए कि कवर स्लिप जलमग्न है, फिर, एमिनोप्रोपिल ट्राइथोक्सीसिलेन समाधान से कवर स्लिप को हटा दें, उन्हें 10 सेकंड के लिए एसीटोन में डुबोएं, और उन्हें संपीड़ित हवा से सुखाएं। सूखे कवर स्लिप को पेट्री डिश में वापस रखें, उपचारित पक्ष का सामना करें।प्रत्येक कवर स्लिप की सतह पर एक मिलीलीटर ग्लूटारल्डिहाइड घोल का पिपेट करें। समाधान को कवर स्लिप के किनारे पर फैलने की अनुमति दिए बिना जितना संभव हो उतना सतह कवर करें। कवर स्लिप को 30 मिनट के लिए घोल के संपर्क में बैठने दें और फिर 20 सेकंड के लिए विआयनीकृत पानी से कुल्ला करें।संपीड़ित हवा का उपयोग करके कवर स्लिप को सुखाएं और उन्हें पेट्री व्यंजनों में वापस रखें, प्लाज्मा-उपचारित पक्ष मॉड्यूलर चुंबकीय आधार को लेजर काटने के लिए, उचित लेजर सेटिंग्स का उपयोग करके पीएमएमए परत से डिजाइन काट दें, जैसे कि पास और शक्ति की संख्या। लेजर सेटिंग्स को समायोजित किया जाना चाहिए ताकि मैग्नेट को पीएमएमए परत में प्रेस-फिट किया जा सके। लेजर काटने की प्रक्रिया से मलबे को हटाने के लिए साबुन और पानी का उपयोग करके लेजर-कट भाग को धोएं।सॉल्वैंट्स का उपयोग न करें, क्योंकि वे लेजर-कट किनारों में सूक्ष्म दरारें फैला सकते हैं। प्लेटफ़ॉर्म को इकट्ठा करने के लिए, लेजर-कट बेस में हाथ से मैग्नेट को धक्का दें। मैग्नेट की मोटाई पीएमएमए आधार की मोटाई से कम होनी चाहिए ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि मैग्नेट बेस की सतह के साथ फ्लश हैं।दबाव-संवेदनशील चिपकने वाला, या पीएसए शीट से बैकिंग को छील लें, और आधार को ग्लूटार्ल्डिहाइड-उपचारित कवर स्लिप से संलग्न करें, जिसमें कार्यात्मक पक्ष ऊपर की ओर हो। धीरे से पीडीएमएस चैनल कटआउट को फ्रेम द्वारा परिभाषित गुहा में रखें। हवा के बुलबुले को हटाने और अनुरूप संपर्क सुनिश्चित करने के लिए वाइड-टिप ट्वीज़र्स के साथ नीचे दबाएं।बीएसए साइड के साथ चैनल कटआउट के शीर्ष पर बोवाइन सीरम एल्ब्यूमिन, या बीएसए-उपचारित चैनल कवर रखें। सुनिश्चित करें कि द्रव इनलेट और आउटलेट पोर्ट चैनल के साथ संरेखित हैं। डिवाइस कोलेजन I इंजेक्शन के लिए तैयार है।एक सिरिंज पंप, एक ठंडा बाँझ सिरिंज, ठंडा बेअसर कोलेजन I समाधान, और एक बाँझ 20-गेज 90 डिग्री कोण-टिप ल्यूर लॉक सुई को जैव सुरक्षा कैबिनेट में रखें। बुलबुले से बचते हुए कोलेजन आई समाधान को सिरिंज में लोड करें। सुई की नोक को सिरिंज से जोड़ें, सिरिंज पंप में सिरिंज लोड करें, सुई को नीचे की ओर रखें, और सुई को कोलेजन आई समाधान के साथ प्राइम करें।सिरिंज पंप को 50 से 2,000 माइक्रोलीटर प्रति मिनट के बीच आवश्यक प्रवाह दर पर सेट करें। तैयार पीडीएमएस चैनलों को एक लैब जैक पर रखें और सुई के साथ स्तर रखें। सुई को पीडीएमएस चैनल के इनलेट पोर्ट में डालें।चैनल को तब तक इंजेक्ट करें जब तक कि कोलेजन की 30-माइक्रोलीटर बूंद मैं आउटलेट साइड पर इकट्ठा न हो जाए। लैब जैक को नीचे करें और धीरे से सुई को नए भरे हुए चैनल से अलग करें। तब तक दोहराएं जब तक कि सभी चैनल कोलेजन I समाधान से भर न जाएं।नवगठित कोलेजन आई जेल के निर्जलीकरण को रोकने के लिए विआयनीकृत पानी से संतृप्त एक साफ, लिंट-मुक्त पोंछे के साथ पेट्री व्यंजनों में भरे हुए चैनलों को लोड करें। पेट्री डिश को कवर करें और पील-ऑफ चरण से पहले दो घंटे के लिए इनक्यूबेटर में लोड किए गए चैनलों को रखें। छील-बंद और मीडिया संतुलन के लिए, पॉलीमराइज्ड कोलेजन आई जेल को उजागर करने के लिए चिमटी का उपयोग करके पीडीएमएस कवर को उठाकर शुरू करें।कुएं में एंडोथेलियल ग्रोथ मीडिया के 650 माइक्रोलीटर जोड़ें। वैकल्पिक रूप से, एक अतिरिक्त कोलेजन परत पेश करने या मीडिया छिड़काव क्षमताओं को प्रदान करने के लिए एक और मॉड्यूल संलग्न करें। जेल और मीडिया को बराबर करने के लिए उपकरणों को इनक्यूबेटर में कम से कम चार घंटे के लिए छोड़ दें।कोशिकाओं के साथ बीज बोने से पहले मीडिया को बदलें। ग्लास कवर स्लिप सक्षम चैनल लिफ्टऑफ को कार्यात्मक बनाने और बीएसए के साथ पीडीएमएस कवर को कार्यात्मक बनाने से कोलेजन आई लगाव को रोका गया। कवर को उठाने के बाद कोलेजन आई फाइबर संरेखण अप्रभावित रहा।मैट्रिक्स के संरेखित खंड पर संवर्धित एचयूवीईसी की छवियों ने यादृच्छिक फाइबर वाले खंड पर एचयूवीईसी की तुलना में एक्टिन फाइबर संरेखण में वृद्धि दिखाई। हमारा दृष्टिकोण हमें ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट को मॉडल करने और यह निर्धारित करने की अनुमति देता है कि विभिन्न सेल प्रकार कैसे प्रतिक्रिया देते हैं। हम दीर्घकालिक प्रयोगों का समर्थन करने के लिए प्रवाह चैनल भी पेश कर सकते हैं।

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Electrospun Nanofiber Scaffolds with Gradations in Fiber Organization

फाइबर संगठन में gradations के साथ Electrospun nanofiber Scaffolds

The goal of this protocol is to report a simple method for generating nanofiber scaffolds with gradations in fiber organization and test their possible ...

Engineering 3D Cellularized Collagen Gels for Vascular Tissue Regeneration

संवहनी ऊतक उत्थान के लिए इंजीनियरिंग 3 डी Cellularized कोलेजन जैल

Synthetic materials are known to initiate clinical complications such as inflammation, stenosis, and infections when implanted as vascular substitutes. ...

Planar Gradient Diffusion System to Investigate Chemotaxis in a 3D Collagen Matrix

प्लानर ढाल प्रसार प्रणाली एक 3 डी कोलेजन मैट्रिक्स में कीमोटैक्सिस जांच

The importance of cell migration can be seen through the development of human life. When cells migrate, they generate forces and transfer these forces to ...

Engineered 3D Silk-collagen-based Model of Polarized Neural Tissue

फूट डालना तंत्रिका ऊतक के इंजीनियर 3 डी सिल्क कोलेजन आधारित मॉडल

Despite huge efforts to decipher the anatomy, composition and function of the brain, it remains the least understood organ of the human body. To gain a ...

Three-dimensional Biomimetic Technology: Novel Biorubber Creates Defined Micro- and Macro-scale Architectures in Collagen Hydrogels

तीन आयामी Biomimetic प्रौद्योगिकी: उपन्यास Biorubber कोलेजन hydrogels में निर्धारित सूक्ष्म और स्थूल पैमाने आर्किटेक्चर बनाता है

Tissue scaffolds play a crucial role in the tissue regeneration process. The ideal scaffold must fulfill several requirements such as having proper ...

Preparation of 3D Collagen Gels and Microchannels for the Study of 3D Interactions In Vivo

Preparation of 3D Collagen Gels and Microchannels for the Study of 3D Interactions In Vivo

3 डी बातचीत का अध्ययन के लिए 3 डी कोलेजन जैल और microchannels की तैयारी<em&gt; Vivo</em

Historically, most cellular processes have been studied in only 2 dimensions.  While these studies have been informative about general cell signaling ...

Tunable Hydrogels from Pulmonary Extracellular Matrix for 3D Cell Culture

3 डी सेल संस्कृति के लिए पल्मोनरी बाह्य मैट्रिक्स से Tunable Hydrogels

Here we present a method for establishing multiple component cell culture hydrogels for in vitro lung cell culture. Beginning with healthy en bloc lung ...

Synthesis of Hydrogels with Antifouling Properties As Membranes for Water Purification

जल शोधन के लिए Antifouling गुण झिल्लियों के रूप में साथ Hydrogels का संश्लेषण

Hydrogels have been widely utilized to enhance the surface hydrophilicity of membranes for water purification, increasing the antifouling properties and ...

Production of Elastin-like Protein Hydrogels for Encapsulation and Immunostaining of Cells in 3D

3 डी में Elastin और कोशिकाओं के Immunostaining के लिए प्रोटीन Hydrogels की तरह उत्पादन

Two-dimensional (2D) tissue culture techniques have been essential for our understanding of fundamental cell biology. However, traditional 2D tissue ...

Measuring Global Cellular Matrix Metalloproteinase and Metabolic Activity in 3D Hydrogels

3d Hydrogels में वैश्विक सेलुलर मैट्रिक्स Metalloproteinase और चयापचय गतिविधि को मापने

Three-dimensional (3D) cell culture systems often more closely recapitulate in vivo cellular responses and functions than traditional two-dimensional (2D) ...