Name: a mouse model of ankle-subtalar complex joint instability
Uploaded: 2022-10-28T14:40:00
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Este estudio contó con el apoyo del programa de becas del gobierno provincial de Jiangsu y el Desarrollo del Programa Académico Prioritario de las Instituciones de Educación Superior de Jiangsu (PAPD).

Todos los estudios en animales se realizaron de acuerdo con las Directrices para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio y fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Soochow.
1. Procedimientos quirúrgicos
<ol><li>Divida 21 ratones machos C57BL/6 de 6 semanas de edad en tres grupos: el ligamento cervical transverso y el grupo del ligamento talofibular anterior, el grupo del ligamento cervical transverso y el ligamento ...

<ol>
	<li>Waterman, B. R., Belmont, P. J., Cameron, K. L., Deberardino, T. M., Owens, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+ankle+sprain+at+the+United+States+Military+Academy.">Epidemiology of ankle sprain at the United States Military Academy.</a> American Journal of Sports Medicine. 38 (4), 797-803 (2010).</li><li>Fong, D. T., Chan, Y. Y., Mok, K. M., Yung, P. S., Chan, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+acute+ankle+ligamentous+sprain+injury+in+sports.">Understanding acute ankle ligamentous sprain injury in sports.</a> Sports Medicine Arthroscopy Rehabilitation Therapy &amp; Technology. 1 (1), 14 (2009).</li><li>Herzog, M. M., Kerr, Z. Y., Marshall, S. W., Wikstrom, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+ankle+sprains+and+chronic+ankle+instability.">Epidemiology of ankle sprains and chronic ankle instability.</a> Journal of Athletic Training. 54 (6), 603-610 (2019).</li><li>Medina McKeon, J. M., Hoch, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ankle-joint+complex:+A+kinesiologic+approach+to+lateral+ankle+sprains.">The ankle-joint complex: A kinesiologic approach to lateral ankle sprains.</a> Journal of Athletic Training. 54 (6), 589-602 (2019).</li><li>Jones, M. H., Amendola, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+treatment+of+inversion+ankle+sprains:+immobilization+versus+functional+treatment.">Acute treatment of inversion ankle sprains: immobilization versus functional treatment.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 455 (463), 169-172 (2007).</li><li>Anandacoomarasamy, A., Barnsley, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term+outcomes+of+inversion+ankle+injuries.">Long term outcomes of inversion ankle injuries.</a> British Association of Sport and Medicine. 39 (3), 14 (2005).</li><li>Ringleb, S. I., Dhakal, A., Anderson, C. D., Bawab, S., Paranjape, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+lateral+ligament+sectioning+on+the+stability+of+the+ankle+and+subtalar+joint.">Effects of lateral ligament sectioning on the stability of the ankle and subtalar joint.</a> Journal of Orthopaedic Research. 29 (10), 1459-1464 (2011).</li><li>Mittlmeier, T., Wichelhaus, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subtalar+joint+instability.">Subtalar joint instability.</a> European Journal of Trauma and Emergency Surgery. 41 (6), 623-629 (2015).</li><li>Barg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subtalar+instability:+Diagnosis+and+treatment.">Subtalar instability: Diagnosis and treatment.</a> Foot &amp; Ankle International. 33 (02), 151-160 (2012).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+ankle-subtalar+joint+complex+instability+induced+post-traumatic+osteoarthritis.">A mouse model of ankle-subtalar joint complex instability induced post-traumatic osteoarthritis.</a> Journal of Orthopaedic Surgery and Research. 16 (1), 541 (2021).</li><li>Lui, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+arthroscopic+Brostrom+procedure+with+bone+tunnels.">Modified arthroscopic Brostrom procedure with bone tunnels.</a> Arthroscopy Techniques. 5 (4), 775-780 (2016).</li><li>Wang, W., Xu, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allograft+tendon+reconstruction+of+the+anterior+talofibular+ligament+and+calcaneofibular+Ligament+in+the+treatment+of+chronic+ankle+instability.">Allograft tendon reconstruction of the anterior talofibular ligament and calcaneofibular Ligament in the treatment of chronic ankle instability.</a> BMC Musculoskeletal Disorders. 18 (1), 150 (2017).</li><li>Yang, N., Waddington, G., Adams, R., Han, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+changes+in+proprioception+of+the+ankle+complex+across+the+lifespan.">Age-related changes in proprioception of the ankle complex across the lifespan.</a> Journal of Sport and Health Science. 8 (6), 548-554 (2019).</li><li>Michels, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Searching+for+consensus+in+the+approach+to+patients+with+chronic+lateral+ankle+instability:+Ask+the+expert.">Searching for consensus in the approach to patients with chronic lateral ankle instability: Ask the expert.</a> Knee Surgery Sports Traumatology Arthroscopy. 26 (7), 2095-2102 (2017).</li><li>Kamada, K., Watanabe, S., Yamamoto, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+subtalar+instability+due+to+insufficiency+of+the+calcaneofibular+ligament:+A+case+report.">Chronic subtalar instability due to insufficiency of the calcaneofibular ligament: A case report.</a> Foot &amp; Ankle International. 23 (12), 1135-1137 (2002).</li><li>Kato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diagnosis+and+treatment+of+instability+of+the+subtalar+joint.">The diagnosis and treatment of instability of the subtalar joint.</a> The Journal of Bone and Joint Surgery. 77 (3), 400-406 (1995).</li><li>Meyer, J. M., Garcia, J., Hoffmeyer, P., Fritschy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+subtalar+sprain.+A+roentgenographic+study.">The subtalar sprain. A roentgenographic study.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. (226), 169-173 (1988).</li><li>Mittlmeier, T., Rammelt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+subtalar+joint+instability.">Update on subtalar joint instability.</a> Foot and Ankle Clinics. 23 (3), 397-413 (2018).</li><li>Chang, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+mouse+and+human+ankles+and+establishment+of+mouse+ankle+osteoarthritis+models+by+surgically-induced+instability.">Comparison of mouse and human ankles and establishment of mouse ankle osteoarthritis models by surgically-induced instability.</a> Osteoarthritis &amp; Cartilage. 24 (4), 688-697 (2016).</li><li>Naito, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+effect+of+glucosamine+on+an+experimental+rat+osteoarthritis+model.">Evaluation of the effect of glucosamine on an experimental rat osteoarthritis model.</a> Life Sciences. 86 (13-14), 538-543 (2010).</li><li>Pritzker, K. P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoarthritis+cartilage+histopathology:+Grading+and+staging.">Osteoarthritis cartilage histopathology: Grading and staging.</a> Osteoarthritis Cartilage. 14 (1), 13-29 (2006).</li><li>Glasson, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+OARSI+histopathology+initiative+-+Recommendations+for+histological+assessments+of+osteoarthritis+in+the+mouse.">The OARSI histopathology initiative - Recommendations for histological assessments of osteoarthritis in the mouse.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 18, 17-23 (2010).</li><li>Hubbard-Turner, T., Wikstrom, E. A., Guderian, S., Turner, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+ankle+sprain+in+a+mouse+model.">Acute ankle sprain in a mouse model.</a> Medicine &amp; Science in Sports &amp; Exercise. 45 (8), 1623-1628 (2013).</li><li>Wikstrom, E. A., Hubbard-Turner, T., Guderian, S., Turner, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lateral+ankle+sprain+in+a+mouse+model:+Lifelong+sensorimotor+dysfunction.">Lateral ankle sprain in a mouse model: Lifelong sensorimotor dysfunction.</a> Journal of Athletic Training. 53 (3), 249-254 (2018).</li><li>Bell-Krotoski, J. A., Fess, E. E., Figarola, J. H., Hiltz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Threshold+detection+and+Semmes-Weinstein+monofilaments.">Threshold detection and Semmes-Weinstein monofilaments.</a> Journal of Hand Therapy. 8 (2), 155-162 (1995).</li><li>Wieland, H. A., Michaelis, M., Kirschbaum, B. J., Rudolphi, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoarthritis+-+An+untreatable+disease.">Osteoarthritis - An untreatable disease.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 4 (4), 331-344 (2005).</li></ol>

En este estudio, se construyeron con éxito dos modelos de ratón de inestabilidad ASCJ mediante transección de CL + ATFL o CL + DL. El tiempo de los ratones para pasar a través de la barra de equilibrio aumentó significativamente a las 8 semanas y a las 12 semanas después de la cirugía, lo que es similar a los resultados obtenidos por el equipo de Hubbard-Turner al cortar el ligamento lateral de la articulación del tobillo23,24. En la prueba de deslizamien...

Los esguinces de tobillo son una de las lesiones deportivas más comunes en todo el mundo. Se estima que 10.000 personas se lesionan diariamente en los Estados Unidos1, de las cuales las lesiones relacionadas con el deporte representan entre el 15% y el 45%2. Los costos médicos asociados con el tratamiento de los esguinces de tobillo en los Estados Unidos ascienden a $4.2 mil millones anuales 3,4,5. La inestabilidad crónica del pie es un problema común después de los esguinces de tobillo y ocurre en aproximadamente el 74% de los esguinces de tobillo6, incluida la inestabilidad del tobillo o subastragalina. Sin embargo, debido a los síntomas y signos clínicos similares, es difícil para el personal médico distinguir si la inestabilidad crónica del tobillo también se acompaña de inestabilidad crónica de la articulación subastragalina en la clínica y, como resultado, la inestabilidad subastragalina crónica puede pasarse por alto fácilmente. Por lo tanto, la incidencia real de inestabilidad crónica de la articulación del complejo tobillo-subastragalina (ASCJ) (un tipo específico de inestabilidad crónica del pie que incluye tanto la inestabilidad crónica del tobillo como la inestabilidad subastragalina crónica) puede ser mayor que la reportada 7,8,9. Si no se trata, la inestabilidad crónica de la articulación del complejo tobillo-subastragalina puede causar esguinces de tobillo repetidos, lo que lleva a un círculo vicioso de esguinces de tobillo e inestabilidad crónica del complejo tobillo-subastragalina. La inestabilidad crónica a largo plazo del complejo tobillo-subastragalina puede conducir a la degeneración de la ATCC y a la artrosis postraumática, que puede afectar a las articulaciones adyacentes en casos graves10. Para estas enfermedades, el tratamiento clínico actual es principalmente conservador, además de los métodos de tratamiento quirúrgico como la reparación y reconstrucción de ligamentos11,12.
ASCJ es la estructura central del pie y mantiene el equilibrio del cuerpo durante el movimiento13. Se han realizado extensas investigaciones sobre la estructura de la articulación del tobillo y la articulación subastragalina por separado14,15,16,17. Sin embargo, la investigación sobre toda la articulación tobillo-subastragalina es escasa. Alrededor de una cuarta parte de los casos de lesión de tobillo están asociados con lesión de la articulación subastragalina18. Debido al complejo mecanismo de lesión de la inestabilidad de la ASCJ, no existe consenso sobre su diagnóstico y tratamiento en el ámbito clínico. Teniendo en cuenta la situación actual de las lesiones de tobillo en la clínica, se necesita un método más científico para estudiar el tobillo y la articulación subastragalina en su conjunto, proporcionando así una nueva comprensión para el estudio de las enfermedades del pie.
Dado que la estructura anatómica del retropié del ratón a nivel musculoesquelético es comparable a la del pie humano 19, en varios estudios ya se han implementado modelos de ratón para la investigación del pie/tobillo10,19. Chang et al.19 desarrollaron con éxito tres modelos murinos diferentes de artrosis de tobillo. Inspirados por el exitoso establecimiento de la inestabilidad del tobillo en el modelo de ratón, establecimos un modelo de ratón para la inestabilidad del complejo tobillo-subastragalina, planteando la hipótesis de que la transección de los ligamentos parciales en el retropié del ratón daría lugar a la inestabilidad mecánica de la ASCJ, lo que conduciría a la osteoartritis postraumática (PTOA) de la ASCJ. El modelo animal de inestabilidad ASCJ podría utilizarse para el tratamiento tanto de la inestabilidad del tobillo como de la inestabilidad subastragalina, lo que está más en línea con la situación clínica real que el modelo de inestabilidad simple del tobillo utilizado actualmente 7,8,9,19. Para probar esta hipótesis, se diseñaron dos modelos murinos de inestabilidad inducida por transección ligamentosa de la ASCJ. Los resultados de la función sensorio-motora (la prueba de la barra de equilibrio, el análisis de la huella y la evaluación de la nocicepción térmica) se utilizaron para evaluar la viabilidad del modelo, y la microtomografía computarizada (TC) y la tinción histológica se utilizaron para evaluar el daño y la degeneración del cartílago articular del ratón. El establecimiento exitoso de un modelo de ratón de inestabilidad de ASCJ no solo proporciona una nueva comprensión para el estudio de las enfermedades del pie, sino que también proporciona una referencia valiosa para la investigación clínica sobre los mecanismos relacionados con las lesiones, proporciona mejores opciones de tratamiento para los esguinces de tobillo y es útil para futuros estudios sobre la enfermedad.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5-0 Surgical Nylon Suture</td>
			<td>Ningbo Medical Needle Co., Ltd.</td>
			<td>191104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acidic ethanol differentiation solution (1%)</td>
			<td>Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>R20778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive slides</td>
			<td>Jiangsu Shitai Company</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonia solution (1%)</td>
			<td>Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>R20788</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anhydrous ethanol</td>
			<td>Shanghai Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aqueous acetic acid (1%)</td>
			<td>Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>R20773</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black cube cassette</td>
			<td>Shanghai Yizhe Instrument Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube 15ml</td>
			<td>Beijing Soleibo Technology Co., Ltd.</td>
			<td>YA0476</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube 50ml</td>
			<td>Beijing Soleibo Technology Co., Ltd.</td>
			<td>YA0472</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass</td>
			<td>Jiangsu Shitai Company</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CTAn software</td>
			<td>Blue scientific</td>
			<td></td>
			<td>micro-CT analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dataview software</td>
			<td>AEMC instruments</td>
			<td></td>
			<td>commercial data analysing software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium ethylenediaminetetraacetate (EDTA-2Na)</td>
			<td>Beijing Soleibo Technology Co., Ltd.</td>
			<td>E8490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric incubator</td>
			<td>Suzhou Huamei Equipment Factory</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding paraffin</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td>39001006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin staining solution (alcohol soluble, 1%)</td>
			<td>Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>R30117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast green staining solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td>F7275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gait paper</td>
			<td>Baoding Huarong Paper Factory</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 8.0</td>
			<td>Graphpad software</td>
			<td></td>
			<td>online statistical analysis tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophor cotton balls</td>
			<td>Qingdao Hainuo Bioengineering Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica 818 blade</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-CT</td>
			<td>Skyscan, Belgium</td>
			<td>SkyScan 1176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulation microscope</td>
			<td>Suzhou Omet Optoelectronics Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mimics software</td>
			<td>Materialise&#160;</td>
			<td></td>
			<td>3D medical image processing software&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified Harris Hematoxylin Stain</td>
			<td>Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>R20566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-mouse type II collagen</td>
			<td>American Abcam Company</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Shanghai Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-butanol</td>
			<td>Shanghai Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral formalin fixative (10%)</td>
			<td>Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral resin</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nrecon reconstrcution software&#160;</td>
			<td>Micro Photonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oaks hair clipper</td>
			<td>Oaks Group Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding Machine</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PH meter</td>
			<td>Shanghai Leitz Company</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>American Biosharp</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological saline (for mammals, sterile)</td>
			<td>Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>R22172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safranin O-staining solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td>HT90432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline (0.9%)</td>
			<td>Shanghai Baxter Medical Drug Co., Ltd.</td>
			<td>309107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker</td>
			<td>Haimen Qilin Bell Instrument Manufacturing Co., Ltd.</td>
			<td>2008779</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPSS 23</td>
			<td>IBM</td>
			<td></td>
			<td>online statistical analysis tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tablet machine</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue slicer</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ugo Basile</td>
			<td>Ugo Basile Biological Research Company</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upright fluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss Axiovert, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U-shaped plastic channel</td>
			<td>Shanghai Yizhe Instrument Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary eye ointment</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Shanghai Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>YLS-10B Wheel Fatigue Tester</td>
			<td>Jinan Yiyan Technology Development Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model of ankle-subtalar complex joint instability

Los esguinces de tobillo son quizás las lesiones deportivas más comunes en la vida diaria, que a menudo resultan en inestabilidad de la articulación del complejo tobillo-subastragalina (ASCJ) y, finalmente, pueden conducir a la osteoartritis postraumática (PTOA) a largo plazo. Sin embargo, debido a la complejidad del mecanismo de lesión y a las manifestaciones clínicas, como equimosis, hematoma o dolor a la palpación en la parte lateral del pie, no existe consenso clínico sobre el diagnóstico y tratamiento de la inestabilidad de la ACJ. Dado que la estructura musculoesquelética de los huesos y ligamentos de la pata trasera del ratón es comparable a la de los humanos, se estableció un modelo animal de inestabilidad de la ASCJ en ratones mediante la transección de ligamentos alrededor de la ASCJ. El modelo fue bien validado a través de una serie de pruebas de comportamiento y análisis histológicos, incluyendo una prueba de barra de equilibrio, un análisis de la huella (una evaluación del nivel de ejercicio y la capacidad de equilibrio en ratones), una evaluación de la nocicepción térmica (una evaluación de la función sensorial del pie en ratones), una microtomografía computarizada (TC) y una tinción de sección del cartílago articular (una evaluación del daño y la degeneración del cartílago articular en ratones). El establecimiento exitoso de un modelo murino de inestabilidad de ASCJ proporcionará una referencia valiosa para la investigación clínica sobre el mecanismo de la lesión y dará como resultado mejores opciones de tratamiento para el esguince de tobillo.

El análisis estadístico de los datos de correlación se realizó utilizando herramientas de análisis estadístico en línea. Los datos que cumplieron con las dos pruebas de distribución normal y homogeneidad de varianza se utilizaron para un análisis estadístico posterior mediante análisis de varianza de una vía. Si los datos no cumplían con las dos pruebas, se utilizó la prueba de Kruskal-Wallis para el análisis estadístico. Los datos se expresan como media ± desviación estándar (DE), y p < 0,05 ...

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A Mouse Model of Ankle-Subtalar Complex Joint Instability

La articulación del complejo tobillo-subastragalina (ASCJ) es el núcleo del pie y desempeña un papel clave en el control del equilibrio en las actividades diarias. Las lesiones deportivas a menudo conducen a la inestabilidad en esta articulación. Aquí, describimos un modelo de ratón de inestabilidad inducida por transección de ligamentos de la ASCJ.

Un modelo de ratón de inestabilidad articular del complejo tobillo-subastragalina

Ankle sprains are perhaps the most common sports injuries in daily life, often resulting in instability of the ankle-subtalar complex joint (ASCJ), and ...

El establecimiento exitoso del modelo de ratón con discapacidad de ASCJ amplía un modelo animal simple de incapacidad de tobillo y proporciona nuevos conceptos para el estudio de las enfermedades clínicas del pie. Hemos establecido un modelo animal más acorde con la situación clínica real, que puede utilizarse para futuras investigaciones sobre el diagnóstico y el tratamiento de las enfermedades del pie. Una semana antes del experimento, somete a los ratones a un entrenamiento de barra de equilibrio y marcha, yendo de un extremo de una barra de equilibrio o tubo en forma de U al otro, sin parar.Después de anestesiar y eliminar el vello de la articulación del tobillo de las extremidades traseras derechas del ratón, desinfecte la piel expuesta con un hisopo de yodo. Transfiera el ratón al quirófano de animales de microcirugía con una almohadilla quirúrgica estéril. Para los grupos de ligamento cervical transverso y talofibular anterior, haga una incisión longitudinal oblicua hacia abajo de siete milímetros con un bisturí en la piel por encima de la articulación del tobillo derecho.Y sondea con pinzas rectas microscópicas en la parte delantera de la articulación del tobillo. Asegurando la exposición del ligamento talofibular anterior en el borde inferior del astrágalo y el peroné, córtelo suavemente con un bisturí. Separe los tendones largos y cortos del peroné, y los tendones extensores largos de los dedos.Expone el ligamento cervical y córtalo con un bisturí. Para el grupo del ligamento cervical transverso más el ligamento deltoides, haga una incisión vertical de ocho milímetros en la piel medial de la articulación del tobillo derecho y separe sin rodeos el DL del maléolo medial para cortarlo. A continuación, corte el ligamento cervical como se demostró anteriormente.Para el grupo simulado, realice una cirugía simulada en la articulación del tobillo derecho. Después de enjuagar la incisión con solución salina normal estéril, suturarla con hilo de nailon quirúrgico 5-0, seguido de desinfectar la incisión suturada con un hisopo de yodo. Una vez que la hinchazón de la articulación angular se haya reducido dos semanas después de la cirugía, ejercite a los ratones en la máquina rotativa de fatiga del ratón durante una hora todos los días.Para la prueba de la barra de equilibrio, sujete una viga de madera circular inclinada a 15 grados en un extremo con un clip de trípode fotográfico y coloque el otro extremo sobre una superficie de trabajo conectada a un casete cerrado. Realice el entrenamiento con barra de equilibrio una semana antes de la cirugía para asegurarse de que los ratones se muevan suavemente de un extremo a otro de la viga. Considere que un ratón ha pasado la prueba cuando pasa a través del haz dos veces en 60 segundos sin pausa.Después de cada prueba, rocíe la barra de equilibrio con alcohol al 75% para presentar el olor residual del ratón anterior para que no afecte al siguiente ratón. Realice la prueba de la barra de equilibrio y registre el tiempo promedio de cada mouse que pasa por la barra de equilibrio dos veces seguidas. Y el número de veces que el pie trasero derecho se sale de la viga, como variables dependientes.Para el análisis de la huella, coloque un canal de plástico en forma de U en la mesa experimental y conecte un extremo del canal de plástico a un casete cerrado. Coloque un papel de pigmento liso plano en el canal. Luego sostenga el mouse con ambas manos y pinte las patas delanteras y traseras de manera uniforme con pigmento rojo y verde no tóxico.Ahora, coloque el mouse pintado en un extremo del canal y deje que se mueva al otro extremo del casete. Toma el papel pigmentado con las huellas, márcalo y déjalo secar en un espacio ventilado y sombreado. Rocíe el canal de plástico en forma de U con alcohol al 75% después de que haya pasado cada ratón, para evitar que el olor residual del ratón anterior afecte al siguiente.Seleccione tres huellas de ratón transparentes consecutivas en cada papel. Con una regla, mida la longitud del paso de la huella del pie derecho del ratón, con el ancho del paso entre las huellas izquierda y derecha. Use pinzas microscópicas y tijeras para eliminar el exceso de tejido blando alrededor de los especímenes de tobillo.Y luego, coloque las muestras en un tubo de centrífuga que contenga una solución de descalcificación de EDTA al 10% y marque los diferentes grupos. A continuación, coloque el tubo de centrífuga en una mesa vibratoria para su descalcificación. Cambie la solución de descalcificación una vez al día y determine la descalcificación de las muestras.Después de un mes de descalcificación, deshidrate las muestras con alcohol de gradiente y luego use N-butanol durante ocho horas para limpiarlas. Finalmente, sumerja las muestras aclaradas en parafina en una posición coronal para su inclusión. Antes de seccionar, transfiera las muestras del refrigerador de cuatro grados centígrados a un congelador de menos 20 grados centígrados durante unos 10 minutos, para facilitar el corte completo de los planos.Fije las muestras en el micrótomo y córtelas en un grosor de seis micrómetros. Al mismo tiempo, use un microscopio para observar si las muestras se han cortado al nivel esperado para facilitar la penetración de una aguja de jeringa en el tejido óseo. Después de cortar dos o tres secciones completas de parafina seguidas, transfiéralas a la máquina de tabletas, ajustada a 40 grados centígrados, para una expansión completa.A continuación, retire las secciones de parafina con un portaobjetos de vidrio. Por último, marca las diapositivas con grupos y números. Observar la estructura intacta de la articulación ASCJ bajo un microscopio.Coloque las secciones en una incubadora a 60 grados centígrados durante 40 a 50 minutos. A continuación, desparafinar las secciones con xileno tres veces, como se describe en el manuscrito. Coloque las secciones desparafinadas en etanol al 100% dos veces durante tres minutos, seguidas de etanol al 90% y al 80% durante cinco minutos cada una.A continuación, lave las secciones con agua bidestilada durante cinco minutos. Después de remojar en hematoxilina durante un minuto, lave las secciones con agua bidestilada hasta que se vuelvan incoloras. Remoje las secciones en una solución de diferenciación de etanol ácido al 1% durante 30 segundos y lávelas con agua bidestilada.Una vez que las secciones se tiñen con una solución de amoníaco al 1% y se lavan con agua bidestilada, tiña las muestras con una solución de tinción de eosina durante un minuto. Y luego ponerlos en etanol al 95% y al 100% sucesivamente durante un minuto cada uno. Por último, trata las secciones con xileno cuatro durante un minuto.Secar al aire las secciones y cubrirlas con un cubreobjetos, después de pegar una gota de resina neutra sobre las muestras en los portaobjetos. A continuación, tome imágenes con un microscopio de fluorescencia vertical en campo claro a cinco y 20X. Remoje las secciones teñidas de hematoxilina y amoníaco en verde rápido al 0,05 % durante dos minutos.A continuación, remojar las secciones en una solución de ácido acético al 1% durante 30 segundos y safranina al 0,1% durante cinco minutos. A continuación, procese los portaobjetos con etanol y xileno como se demostró anteriormente. Tome imágenes con un microscopio de fluorescencia vertical en campo claro a 5X y 20X.Después de tres días, ocho semanas y 12 semanas de cirugía, los grupos de ligamentos cortados tardaron significativamente más en pasar a través de la barra de equilibrio que el grupo simulado. Antes de la cirugía, la longitud del paso del pie trasero derecho era comparable entre los tres grupos de ratones. Sin embargo, 12 semanas después de la cirugía, la longitud del paso fue más corta en el grupo de corte de ligamentos que en el grupo simulado.Antes de la cirugía, el tiempo de respuesta de la nocicepción térmica de las patas de los ratones durante la actividad es similar entre los tres grupos de ratones. Después de la cirugía, los ratones en el grupo de corte de ligamentos mostraron tiempos de respuesta más largos en comparación con el grupo simulado. La ASCJ del pie trasero derecho en los grupos de ligamentos cortados mostró superficies rugosas, acumulación de osteofitos, cambios degenerativos.Y una fracción de volumen óseo significativamente mayor que el grupo simulado. La capa de cartílago de la ASCJ en el grupo de corte de ligamentos mostró discontinuidad y disminución del número de condrocitos. Además, las puntuaciones de Malkin y la Sociedad Internacional de Investigación de la Osteoartritis de los ratones con amputación de ligamentos fueron significativamente más altas que las del grupo simulado.El colágeno tipo dos en la capa de cartílago articular ASCJ del grupo simulado del pie trasero derecho fue más uniforme y más alto que el de los dos grupos de ratones con ligamentos cortados. Este estudio puede ser utilizado para el diagnóstico y los tratamientos de la inestabilidad del tobillo, y proporcionar una referencia experimental para los tratamientos clínicos de esta enfermedad.

Research

JoVE Journal

Biology

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