Name: isolation method for long-term and short-term hematopoietic stem cells
Uploaded: 2023-05-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation Method for Long-Term and Short-Term Hematopoietic Stem Cells at JoVE.com

हम जानवरों की देखभाल के लिए और रिकेन बीडीआर में प्राप्तकर्ता चूहों के साथ-साथ कोबे विश्वविद्यालय में प्रयोगशाला प्रबंधन के लिए हितोमी ओगा, कायोको नागासाका और मासाकी मियाहाशी प्रदान करने के लिए कृतज्ञतापूर्वक स्वीकार करते हैं। लेखक भी इस काम के लिए चल रहे समर्थन की बहुत सराहना करते हैं। मसानोरी मियानिशी को जापान सोसाइटी फॉर द प्रमोशन ऑफ साइंस (जेएसपीएस) काकेन्ही ग्रांट नंबर जेपी 17के07407 और जेपी 20एच03268, मोचिदा मेमोरियल फाउंडेशन फॉर मेडिकल एंड फार्मास्यूटिकल रिसर्च, द लाइफ साइंस फाउंडेशन ऑफ जापान, द टाकेडा साइंस फाउंडेशन, द एस्टेलस फाउंडेशन फॉर रिसर्च ऑन मेटाबोलिक डिसऑर्डर, और एएमईडी-प्राइम, एएमईडी द्वारा अनुदान संख्या जेपी 18 जीएम 6110020 के तहत समर्थित किया गया था। तारो साकमकी JSPS KAKENHI अनुदान संख्या JP21K20669 और JP22K16334 द्वारा समर्थित है और द्वारा समर्थित था जेएसपीएस कोर-टू-कोर प्रोग्राम और रिकेन जूनियर रिसर्च एसोसिएट प्रोग्राम। कात्सुयुकी निशि को जेएसपीएस ग्रांट नंबर काकेन्ही जेपी 18 जे 13408 द्वारा समर्थित किया गया था।

वर्णित सभी पशु प्रयोगों को रिकेन सेंटर फॉर बायोसिस्टम्स डायनामिक्स रिसर्च द्वारा अनुमोदित किया गया था।
1. प्राप्तकर्ता चूहों की पूर्व शर्त।
<ol><li>प्राप्तकर्ता चूहों के रूप में 8-10 सप्त?...

<ol>
	<li>Weissman, I. L., Shizuru, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origins+of+the+identification+and+isolation+of+hematopoietic+stem+cells,+and+their+capability+to+induce+donor-specific+transplantation+tolerance+and+treat+autoimmune+diseases.">The origins of the identification and isolation of hematopoietic stem cells, and their capability to induce donor-specific transplantation tolerance and treat autoimmune diseases.</a> Blood. 112 (9), 3543-3553 (2008).</li><li>Majeti, R., Park, C. Y., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+hierarchy+of+multipotent+hematopoietic+progenitors+in+human+cord+blood.">Identification of a hierarchy of multipotent hematopoietic progenitors in human cord blood.</a> Cell Stem Cell. 1 (6), 635-645 (2007).</li><li>Spangrude, G. J., Heimfeld, S., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+characterization+of+mouse+hematopoietic+stem+cells.">Purification and characterization of mouse hematopoietic stem cells.</a> Science. 241 (4861), 58-62 (1988).</li><li>Ogawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+and+function+of+c-kit+in+hemopoietic+progenitor+cells.">Expression and function of c-kit in hemopoietic progenitor cells.</a> Journal of Experimental Medicine. 174 (1), 63-71 (1991).</li><li>Ikuta, K., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+that+hematopoietic+stem+cells+express+mouse+c-kit+but+do+not+depend+on+steel+factor+for+their+generation.">Evidence that hematopoietic stem cells express mouse c-kit but do not depend on steel factor for their generation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 89 (4), 1502-1506 (1992).</li><li>Osawa, M., Hanada, K., Hamada, H., Nakauchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+lymphohematopoietic+reconstitution+by+a+single+CD34-low/negative+hematopoietic+stem+cell.">Long-term lymphohematopoietic reconstitution by a single CD34-low/negative hematopoietic stem cell.</a> Science. 273 (5272), 242-245 (1996).</li><li>Christensen, J. L., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flk-2+is+a+marker+in+hematopoietic+stem+cell+differentiation:+A+simple+method+to+isolate+long-term+stem+cells.">Flk-2 is a marker in hematopoietic stem cell differentiation: A simple method to isolate long-term stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98 (25), 14541-14546 (2001).</li><li>Kiel, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SLAM+family+receptors+distinguish+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+and+reveal+endothelial+niches+for+stem+cells.">SLAM family receptors distinguish hematopoietic stem and progenitor cells and reveal endothelial niches for stem cells.</a> Cell. 121 (7), 1109-1121 (2005).</li><li>Morrison, S. J., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+long-term+repopulating+subset+of+hematopoietic+stem+cells+is+deterministic+and+isolatable+by+phenotype.">The long-term repopulating subset of hematopoietic stem cells is deterministic and isolatable by phenotype.</a> Immunity. 1 (8), 661-673 (1994).</li><li>Spangrude, G. J., Brooks, D. M., Tumas, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+repopulation+of+irradiated+mice+with+limiting+numbers+of+purified+hematopoietic+stem+cells:+In+vivo+expansion+of+stem+cell+phenotype+but+not+function.">Long-term repopulation of irradiated mice with limiting numbers of purified hematopoietic stem cells: In vivo expansion of stem cell phenotype but not function.</a> Blood. 85 (4), 1006-1016 (1995).</li><li>Dykstra, B., Olthof, S., Schreuder, J., Ritsema, M., de Haan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+analysis+reveals+multiple+functional+defects+of+aged+murine+hematopoietic+stem+cells.">Clonal analysis reveals multiple functional defects of aged murine hematopoietic stem cells.</a> Journal of Experimental Medicine. 208 (13), 2691-2703 (2011).</li><li>Grover, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+reveals+molecular+and+functional+platelet+bias+of+aged+haematopoietic+stem+cells.">Single-cell RNA sequencing reveals molecular and functional platelet bias of aged haematopoietic stem cells.</a> Nature Communications. 7, 11075 (2016).</li><li>Kataoka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evi1+is+essential+for+hematopoietic+stem+cell+self-renewal,+and+its+expression+marks+hematopoietic+cells+with+long-term+multilineage+repopulating+activity.">Evi1 is essential for hematopoietic stem cell self-renewal, and its expression marks hematopoietic cells with long-term multilineage repopulating activity.</a> Journal of Experimental Medicine. 208 (12), 2403-2416 (2011).</li><li>Gazit, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fgd5+identifies+hematopoietic+stem+cells+in+the+murine+bone+marrow.">Fgd5 identifies hematopoietic stem cells in the murine bone marrow.</a> Journal of Experimental Medicine. 211 (7), 1315-1331 (2014).</li><li>Acar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+imaging+of+bone+marrow+shows+non-dividing+stem+cells+are+mainly+perisinusoidal.">Deep imaging of bone marrow shows non-dividing stem cells are mainly perisinusoidal.</a> Nature. 526 (7571), 126-130 (2015).</li><li>Chen, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hoxb5+marks+long-term+haematopoietic+stem+cells+and+reveals+a+homogenous+perivascular+niche.">Hoxb5 marks long-term haematopoietic stem cells and reveals a homogenous perivascular niche.</a> Nature. 530 (7589), 223-227 (2016).</li><li>Ema, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+self-renewal+capacity+in+single+hematopoietic+stem+cells+from+normal+and+Lnk-deficient+mice.">Quantification of self-renewal capacity in single hematopoietic stem cells from normal and Lnk-deficient mice.</a> Developmental Cell. 8 (6), 907-914 (2005).</li><li>Morita, Y., Ema, H., Nakauchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+and+hierarchy+within+the+most+primitive+hematopoietic+stem+cell+compartment.">Heterogeneity and hierarchy within the most primitive hematopoietic stem cell compartment.</a> Journal of Experimental Medicine. 207 (6), 1173-1182 (2010).</li><li>Yamamoto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+analysis+unveils+self-renewing+lineage-restricted+progenitors+generated+directly+from+hematopoietic+stem+cells.">Clonal analysis unveils self-renewing lineage-restricted progenitors generated directly from hematopoietic stem cells.</a> Cell. 154 (5), 1112-1126 (2013).</li><li>Fathman, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+CD11A+on+hematopoietic+stem+cells+denotes+the+loss+of+long-term+reconstitution+potential.">Upregulation of CD11A on hematopoietic stem cells denotes the loss of long-term reconstitution potential.</a> Stem Cell Reports. 3 (5), 707-715 (2014).</li><li>Oguro, H., Ding, L., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SLAM+family+markers+resolve+functionally+distinct+subpopulations+of+hematopoietic+stem+cells+and+multipotent+progenitors.">SLAM family markers resolve functionally distinct subpopulations of hematopoietic stem cells and multipotent progenitors.</a> Cell Stem Cell. 13 (1), 102-116 (2013).</li><li>Haas, S., Trumpp, A., Milsom, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Causes+and+consequences+of+hematopoietic+stem+cell+heterogeneity.">Causes and consequences of hematopoietic stem cell heterogeneity.</a> Cell Stem Cell. 22 (5), 627-638 (2018).</li><li>Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell+heterogeneity:+Subtypes,+not+unpredictable+behavior.">Hematopoietic stem cell heterogeneity: Subtypes, not unpredictable behavior.</a> Cell Stem Cell. 6 (3), 203-207 (2010).</li><li>Muller-Sieburg, C. E., Sieburg, H. B., Bernitz, J. M., Cattarossi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+heterogeneity:+Implications+for+aging+and+regenerative+medicine.">Stem cell heterogeneity: Implications for aging and regenerative medicine.</a> Blood. 119 (17), 3900-3907 (2012).</li><li>Duran-Struuck, R., Dysko, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+bone+marrow+transplantation+(BMT):+Providing+optimal+veterinary+and+husbandry+care+to+irradiated+mice+in+BMT+studies.">Principles of bone marrow transplantation (BMT): Providing optimal veterinary and husbandry care to irradiated mice in BMT studies.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 48 (1), 11-22 (2009).</li><li>Nishi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+minimum+requirements+for+successful+haematopoietic+stem+cell+transplantation.">Identification of the minimum requirements for successful haematopoietic stem cell transplantation.</a> British Journal of Haematology. 196 (3), 711-723 (2022).</li><li>Sakamaki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hoxb5+defines+the+heterogeneity+of+self-renewal+capacity+in+the+hematopoietic+stem+cell+compartment.">Hoxb5 defines the heterogeneity of self-renewal capacity in the hematopoietic stem cell compartment.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 539, 34-41 (2021).</li></ol>

परंपरागत रूप से, सेल सतह मार्कर-परिभाषित एचएससी को एचएससी के कार्यों का अध्ययन करने के लिए तैयार किया गया है, जैसे कि आत्म-नवीकरण क्षमता और बहु-शक्ति 19,20,21। हालांकि, इम्...

हेमटोपोइएटिक स्टेम सेल (एचएससी), जिनके पास आत्म-नवीकरण क्षमता और बहुशक्ति है, हेमटोपोइएटिक पदानुक्रम 1,2 के शीर्ष पर रहते हैं। 1988 में, वीसमैन और सहयोगियों ने पहली बार प्रदर्शित किया कि फ्लो साइटोमेट्री3 का उपयोग करके माउस एचएससी का अलगाव हासिल किया जा सकता है। इसके बाद, सेल सतह मार्करों के संयोजन द्वारा परिभाषित एक अंश, वंश-सी-किट + एससीए -1 + सीडी 150 + सीडी 34 −/ लोएफएलके 2−, चूहों में सभी एचएससी 4,5,6,7,8 होने की सूचना दी गई थी।
इम्यूनोफेनोटाइपिक रूप से परिभाषित (वंश-सी-किट + एससीए -1 + सीडी 150 + सीडी 34−/ लोएफएलके 2−) एचएससी (इसके बाद, पीएचएससी) को पहले कार्यात्मक रूप से सजातीय माना जाता था। हालांकि, हाल ही में एकल-सेल विश्लेषण से पता चला है कि पीएचएससी अभी भी अपनी आत्म-नवीकरण क्षमता 9,10 और बहुशक्ति11,12 के संबंध में विषमता प्रदर्शित करते हैं। विशेष रूप से, उनकी आत्म-नवीकरण क्षमता के संबंध में पीएचएससी अंश में दो आबादी मौजूद प्रतीत होती है: दीर्घकालिक हेमटोपोइएटिक स्टेम सेल (एलटी-एचएससी), जिनमें निरंतर आत्म-नवीकरण क्षमता होती है, और अल्पकालिक हेमटोपोइएटिक स्टेम सेल (एसटी-एचएससी), जिनमें क्षणिक आत्म-नवीकरण क्षमता 9,10 होती है।
आज तक, एलटी-एचएससी और एसटी-एचएससी को अलग करने वाले आत्म-नवीकरण क्षमता के आणविक तंत्र को खराब तरीके से समझा जाता है। दोनों सेल आबादी को उनकी आत्म-नवीकरण क्षमताओं के आधार पर अलग करना और अंतर्निहित आणविक तंत्र की खोज करना महत्वपूर्ण है। एलटी-एचएससी13,14,15 को शुद्ध करने के लिए कई रिपोर्टर सिस्टम भी पेश किए गए हैं; हालांकि, प्रत्येक रिपोर्टर सिस्टम द्वारा परिभाषित एलटी-एचएससी शुद्धता परिवर्तनशील है, और अनन्य एलटी-एचएससी शुद्धिकरण आज तक हासिल नहीं किया गया है।
इसलिए, एलटी-एचएससी और एसटी-एचएससी के लिए एक अलगाव प्रणाली विकसित करने से पीएचएससी अंश में आत्म-नवीकरण क्षमता के बारे में अनुसंधान में तेजी आएगी। एलटी-एचएससी और एसटी-एचएससी के अलगाव में, बहु-चरण, निष्पक्ष स्क्रीनिंग का उपयोग करके एक अध्ययन ने एक एकल जीन, होक्सबी 5 की पहचान की, जो पीएचएससी अंश16 में विषम रूप से व्यक्त किया गया है। इसके अतिरिक्त, होक्सबी 5 रिपोर्टर चूहों के अस्थि मज्जा विश्लेषण से पता चला है कि पीएचएससी अंश के लगभग 20% -25% में होक्सबी 5 पीओएस कोशिकाएं होती हैं। होक्सबी 5पॉस पीएचएससी और होक्सबी 5 नेग पीएचएससी का उपयोग करके एक प्रतिस्पर्धी प्रत्यारोपण परख से पता चला है कि केवल होक्सबी 5पॉस पीएचएससी में दीर्घकालिक आत्म-नवीकरण क्षमता होती है, जबकि होक्सबी 5नेग पीएचएससी एक छोटी अवधि के भीतर अपनी आत्म-नवीकरण क्षमता खो देते हैं, यह दर्शाता है कि होक्सबी 5 पीएचएससी अंश16 में एलटी-एचएससी की पहचान करता है।
यहां, हम होक्सबी 5 रिपोर्टर सिस्टम का उपयोग करके एलटी-एचएससी और एसटी-एचएससी को अलग करने के लिए एक चरण-दर-चरण प्रोटोकॉल प्रदर्शित करते हैं। इसके अलावा, हम Hoxb5pos / neg pHSCs की आत्म-नवीकरण क्षमता का आकलन करने के लिए एक प्रतिस्पर्धी प्रत्यारोपण परख प्रस्तुत करते हैं (चित्रा 1)। यह होक्सबी 5 रिपोर्टर सिस्टम हमें एलटी-एचएससी और एसटी-एचएससी को भावी प्रभाव से अलग करने की अनुमति देता है और एलटी-एचएससी-विशिष्ट विशेषताओं की समझ में योगदान देता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 mL Strip of 8 Tubes, Dome Cap</td>
			<td>SSIbio</td>
			<td>3230-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5M EDTA pH 8.0</td>
			<td>Iinvtrogen</td>
			<td>AM9260G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G insulin syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>326668</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Round Bottom Polystyrene Test Tube, with Cell Strainer Snap Cap</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-AAD Viability Staining Solution</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>420404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well U-Bottom</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>351177</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-APC-MicroBeads</td>
			<td>Milteny biotec</td>
			<td>130-090-855</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator with trap flask</td>
			<td>Biosan</td>
			<td>FTA-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B220-Alexa Fluor 700 (RA3-6B2)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>103232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B220-Biotin (RA3-6B2)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>103204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B220-BV786 (RA3-6B2)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>563894</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6.CD45.1 congenic mice&#160;</td>
			<td>Sankyo Labo Service</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baytril 10%</td>
			<td>BAYER</td>
			<td>341106546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACS Aria II special order system&#160;</td>
			<td>BD</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant stain buffer</td>
			<td>BD</td>
			<td>566349</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b-Alexa Fluor 700 (M1/70)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>101222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b-Biotin (M1/70)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>101204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b-BUV395 (M1/70)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>563553</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b-BV711 (M1/70)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>563168</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD127-Alexa Fluor 700 (A7R34)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>56-1271-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD150-BV421 (TC15-12F12.2)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>115943</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD16/CD32-Alexa Fluor 700 (93)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>56-0161-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34-Alexa Fluor 647 (RAM34)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34-FITC (RAM34)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11034185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3-Alexa Fluor 700 (17A2)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3&#949; -Biotin (145-2C11)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3&#949; -BV421 (145-2C11)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45.1/CD45.2 congenic mice</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Bred in our Laboratory</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45.1-FITC (A20)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45.2-PE (104)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560695</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD4-Alexa Fluor 700 (GK1.5)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD4-Biotin (GK1.5)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD8a-Alexa Fluor 700 (53-6.7)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD8a-Biotin (53-6.7)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100704</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Tube 15ml</td>
			<td>NICHIRYO</td>
			<td>00-ETS-CT-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Tube 50ml</td>
			<td>NICHIRYO</td>
			<td>00-ETS-CT-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>c-Kit-APC-eFluor780 (2B8)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>47117182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-PBS (-) without Ca and Mg, liquid&#160;</td>
			<td>Nacalai</td>
			<td>14249-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10270106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flk2-PerCP-eFluor710 (A2F10)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>46135182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo version 10</td>
			<td>BD Biosciences&#160;</td>
			<td>https://www.flowjo.com/solutions/flowjo</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gmmacell 40 Exactor</td>
			<td>Best theratronics</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gr-1-Alexa Fluor 700 (RB6-8C5)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>108422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gr-1-Biotin (RB6-8C5)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>108404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoxb5-tri-mCherry mice (C57BL/6J background)&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Bred in our Laboratory</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG from rat serum, technical grade, &#62;=80% (SDS-PAGE), buffered aqueous solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I8015-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>4987-114-13340-3&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes S200</td>
			<td>NIPPON PAPER CRECIA&#160;</td>
			<td>6-6689-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS Columns</td>
			<td>Milteny biotec</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysis buffer&#160;</td>
			<td>BD</td>
			<td>555899</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS&#160; MultiStand</td>
			<td>Milteny biotec</td>
			<td>130-042-303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate for Tissue Culture (For Adhesion Cell) 6Well</td>
			<td>IWAKI</td>
			<td>3810-006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MidiMACS Separator</td>
			<td>Milteny biotec</td>
			<td>130-042-302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Pie Cages</td>
			<td>Natsume Seisakusho</td>
			<td>KN-331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multipurpose refrigerated Centrifuge</td>
			<td>TOMY</td>
			<td>EX-125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NARCOBIT-E (II)</td>
			<td>Natsume Seisakusho</td>
			<td>KN-1071-I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NK-1.1-PerCP-Cy5.5 (PK136)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>108728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin Mixed Solution</td>
			<td>nacalai</td>
			<td>26253-84</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Porcelain Mortar &#966;120mm with Pestle</td>
			<td>Asone</td>
			<td>6-549-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein LoBind Tube 1.5 mL&#160;</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22431081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sca-I-BUV395 (D7)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>563990</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel scalpel blade</td>
			<td>FastGene</td>
			<td>FG-B2010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin-BUV737</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>612775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYTOX-red</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>S34859</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tailveiner Restrainer for Mice standard</td>
			<td>Braintree</td>
			<td>TV-150 STD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCRb-BV421 (H57-597)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>109230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ter-119-Alexa Fluor 700 (TER-119)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>116220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ter-119-Biotin (TER-119)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>116204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terumo 5ml Concentric Luer-Slip Syringe</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SS-05LZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terumo Hypodermic Needle 23G x 1</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>NN-2325-R</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation method for long-term and short-term hematopoietic stem cells

स्व-नवीकरण क्षमता और बहु-वंश भेदभाव क्षमता को आमतौर पर हेमटोपोइएटिक स्टेम सेल (एचएससी) की परिभाषित विशेषताओं के रूप में माना जाता है। हालांकि, कई अध्ययनों ने सुझाव दिया है कि एचएससी डिब्बे में कार्यात्मक विषमता मौजूद है। हाल के एकल-सेल विश्लेषणों ने एचएससी डिब्बे के भीतर विभिन्न सेल भाग्य के साथ एचएससी क्लोन की सूचना दी है, जिन्हें पक्षपाती एचएससी क्लोन के रूप में जाना जाता है। विषम या खराब प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणामों के अंतर्निहित तंत्र को बहुत कम समझा जाता है, विशेष रूप से आत्म-नवीकरण की लंबाई के बारे में जब शुद्ध एचएससी अंशों को पारंपरिक इम्यूनोस्टेनिंग द्वारा प्रत्यारोपित किया जाता है। इसलिए, दीर्घकालिक एचएससी (एलटी-एचएससी) और अल्पकालिक एचएससी (एसटी-एचएससी) के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य अलगाव विधि स्थापित करना, उनके आत्म-नवीकरण की लंबाई से परिभाषित, इस मुद्दे पर काबू पाने के लिए महत्वपूर्ण है। निष्पक्ष बहु-चरण स्क्रीनिंग का उपयोग करते हुए, हमने एक प्रतिलेखन कारक, होक्सबी 5 की पहचान की, जो माउस हेमटोपोइएटिक सिस्टम में एलटी-एचएससी का एक विशेष मार्कर हो सकता है। इस खोज के आधार पर, हमने एक होक्सबी 5 रिपोर्टर माउस लाइन स्थापित की और सफलतापूर्वक एलटी-एचएससी और एसटी-एचएससी को अलग किया। यहां हम होक्सबी 5 रिपोर्टर सिस्टम का उपयोग करके एलटी-एचएससी और एसटी-एचएससी के अलगाव के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं। यह अलगाव विधि शोधकर्ताओं को एचएससी डिब्बे में इस तरह की विषमता के लिए आत्म-नवीकरण और जैविक आधार के तंत्र को बेहतर ढंग से समझने में मदद करेगी।

इससे पहले, प्रतिस्पर्धी प्रत्यारोपण परख ों का उपयोग करके आत्म-नवीकरण क्षमता को मापा गया है, जिसमें दाता एचएससी को अपनी आत्म-नवीकरण क्षमता को बनाए रखने के लिए माना जाता है यदि प्राप्तकर्ता परिधीय रक्त ?...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation Method for Long-Term and Short-Term Hematopoietic Stem Cells at JoVE.com 

Isolation Method for Long-Term and Short-Term Hematopoietic Stem Cells (Video) | JoVE 

हम होक्सबी 5 रिपोर्टर सिस्टम का उपयोग करके दीर्घकालिक हेमटोपोइएटिक स्टेम सेल (एलटी-एचएससी) और अल्पकालिक एचएससी (एसटी-एचएससी) के अलगाव के लिए एक चरण-दर-चरण प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं।

दीर्घकालिक और अल्पकालिक हेमटोपोइएटिक स्टेम सेल के लिए अलगाव विधि

Self-renewal capacity and multi-lineage differentiation potential are generally regarded as the defining characteristics of hematopoietic stem cells ...

दीर्घकालिक और अल्पकालिक हेमटोपोइएटिक स्टेम सेल या एचएससी अलगाव विधि शोधकर्ताओं को एचएससी डिब्बे में विषमता के सेल नवीकरण तंत्र और जैविक आधार को बेहतर ढंग से समझने में मदद करेगी। एक प्रतिलेखन कारक, Hoxb5, जो दीर्घकालिक एचएससी का एक विशेष मार्कर हो सकता है, की पहचान की गई थी। इसके आधार पर, एक होक्सबी 5-रिपोर्टर चूहों की लाइन स्थापित की गई थी और दीर्घकालिक और अल्पकालिक एचएससी को सफलतापूर्वक अलग किया गया था।दाता अस्थि मज्जा कोशिकाओं का संग्रह शुरू करने के लिए, 70% इथेनॉल के साथ एक मोर्टार और मूसल को निष्फल करें और उन्हें पूरी तरह से सूखने दें। कैल्शियम और मैग्नीशियम मुक्त पीबीएस युक्त पूरक से युक्त सेल-स्टेनिंग बफर वाले लोगों को बराबर करें। दाता पुरुष होक्सबी 5-ट्राई-एमचेरी माउस से अलग हड्डियों को मोर्टार में डालें और सेल-स्टेनिंग बफर के तीन मिलीलीटर जोड़ें।मूसल के साथ खुली हड्डियों को ब्रश करें, फिर कोमल पाइपिंग द्वारा सेल क्लंप को अलग करें और सेल निलंबन को 100-माइक्रोन सेल स्ट्रेनर के माध्यम से 50-मिलीलीटर ट्यूब में स्थानांतरित करें। ताजा सेल-धुंधला बफर के साथ प्रक्रिया को दोहराएं जब तक कि समाधान स्पष्ट न हो जाए। आमतौर पर, तीन बार दोहराना एक स्पष्ट समाधान देने के लिए पर्याप्त है।सीडी 45.1.2 कॉन्जेनिक माउस से फीमर और टिबिया को अलग करने के बाद, हड्डियों के दोनों सिरों को तेज बाँझ कैंची से काट लें। बर्फ-कोल्ड सेल सस्पेंशन बफर से भरी पांच मिलीलीटर सिरिंज के साथ फिट 23-गेज सुई का उपयोग करके, अस्थि मज्जा को सेल सस्पेंशन बफर युक्त बाँझ सेल कल्चर डिश में फ्लश करें। कोमल पाइपिंग द्वारा सेल क्लंप को अलग करें, फिर पी 1000 पिपेट का उपयोग करके 40-माइक्रोन सेल छन्नी के माध्यम से सेल निलंबन को फ़िल्टर करें।गेटिंग सेटअप के लिए, पाठ में दिए गए निर्देशों का पालन करते हुए नमूना तैयार करें, और इसके 400 माइक्रोलीटर को 35-माइक्रोन सेल स्ट्रेनर स्नैप कैप के साथ एक गोल नीचे पॉलीस्टाइनिन टेस्ट ट्यूब में स्थानांतरित करें। निर्माता के निर्देशों का पालन करते हुए, विश्लेषण से पहले नमूने में मृत सेल-तनाव अभिकर्मक तैयार करें और जोड़ें। फिर, फ्लो साइटोमीटर चालू करें और निर्माता के निर्देशों का पालन करते हुए विश्लेषण सॉफ्टवेयर लॉन्च करें।उसके बाद, डेटा प्राप्त करना प्रारंभ करने के लिए लोड दबाएँ। डबल्स, मृत कोशिकाओं और वंश-सकारात्मक कोशिकाओं को छोड़कर, वंश-नकारात्मक, सी-किट-पॉजिटिव, एससीए -1-सकारात्मक अंश को गेट करें। इसके बाद, Flk2-सकारात्मक अंश को गेट करें।फिर सीडी 150-पॉजिटिव, सीडी 34-निगेटिव या कम अंश में होक्सबी 5-पॉजिटिव या होक्सबी 5-नेगेटिव पीएचएससी को गेट करें। इसके बाद, 600 माइक्रोलीटर कैल्शियम और मैग्नीशियम-मुक्त पीबीएस के साथ 1.5-मिलीमीटर कम-प्रोटीन बाइंडिंग ट्यूब तैयार करें, जो 10% गर्मी-निष्क्रिय एफबीएस के साथ पूरक है। होक्सबी 5-पॉजिटिव या होक्सबी 5-नकारात्मक पीएचएससी सॉर्टिंग करने के लिए, तैयार 1.5-मिलीलीटर कम-प्रोटीन बाइंडिंग ट्यूब को एक सॉर्ट कलेक्शन डिवाइस पर सेट करें और पहले उल्लिखित गेटिंग रणनीति का उपयोग करके होक्सबी 5-पॉजिटिव या होक्सबी 5-नेगेटिव पीएचएससी को ट्यूब में सॉर्ट करें।पहली छंटाई में, सॉर्टिंग सटीक मोड से उपज का उपयोग करें। स्वचालित सेल जमाव इकाई चरण पर पहले से तैयार सहायक कोशिकाओं के साथ 96-वेल प्लेट सेट करें। फिर, प्रवाह साइटोमीटर के लोडिंग पोर्ट पर 1.5-मिलीलीटर कम-प्रोटीन बाइंडिंग ट्यूब सेट करें।पहले उल्लिखित गेटिंग रणनीति का उपयोग करके सहायक कोशिकाओं के साथ 96-वेल प्लेट में होक्सबी 5-पॉजिटिव या होक्सबी 5-नकारात्मक पीएचएससी को क्रमबद्ध करें। अपनी आत्म-नवीकरण क्षमताओं का परीक्षण करने के लिए 10 होक्सबी 5-पॉजिटिव या होक्सबी 5-नकारात्मक पीएचएससी को क्रमबद्ध करें। दाता होक्सबी 5-ट्राई-एमचेरी चूहों के अस्थि मज्जा विश्लेषण के फ्लो साइटोमेट्री भूखंडों से पता चला कि वंश-नकारात्मक, सी-किट-पॉजिटिव, एससीए-1-पॉजिटिव, सीडी 150-पॉजिटिव, सीडी 34-नकारात्मक, या कम, एफएलके 2-नकारात्मक द्वारा परिभाषित पीएचएससी अंश में लगभग 20 से 25% कोशिकाएं होक्सबी 5-पॉजिटिव पीएचएससी थीं।यहां दिखाए गए प्राप्तकर्ता चूहों के परिधीय रक्त विश्लेषण के प्रतिनिधि प्रवाह साइटोमेट्री प्लॉट हैं। इसके अलावा, प्राथमिक प्रत्यारोपण के बाद प्राप्तकर्ता चूहों के परिधीय रक्त विश्लेषण से पता चला कि हालांकि होक्सबी 5-पॉजिटिव और होक्सबी 5-नकारात्मक पीएचएससी ने प्रत्यारोपण के चार सप्ताह बाद समान दाता चिमेरिज्म प्रस्तुत किया, लेकिन केवल होक्सबी 5-पॉजिटिव पीएचएससी प्राप्तकर्ताओं में निरंतर हेमटोपोइजिस देखा गया। होक्सबी 5-नकारात्मक एचएससी ने प्रत्यारोपण के आठ सप्ताह बाद हेमटोपोइएटिक कोशिकाओं का उत्पादन करने की क्षमता खोना शुरू कर दिया।द्वितीयक प्रत्यारोपण विश्लेषण में, केवल होक्सबी 5-पॉजिटिव पीएचएससी प्राप्तकर्ताओं ने मजबूत हेमटोपोइजिस प्रस्तुत किया। इसके विपरीत, होक्सबी 5-नकारात्मक पीएचएससी प्राप्तकर्ता चूहों में दाता कोशिकाओं को शायद ही देखा गया था, जिससे पता चलता है कि प्राथमिक प्रत्यारोपण के 16 सप्ताह के भीतर होक्सबी 5-नकारात्मक पीएचएससी ने आत्म-नवीकरण क्षमता खो दी थी। इस प्रोटोकॉल में आमतौर पर नौ से 12 घंटे लगते हैं, इसलिए सेल व्यवहार्यता बनाए रखने के लिए प्रक्रियाओं के दौरान नमूने को चार डिग्री सेल्सियस पर रखना महत्वपूर्ण है।

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation Method for Long-Term and Short-Term Hematopoietic Stem Cells

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy (Video) | JoVE 

लंबी अवधि के इमेजिंग स्तनधारी वाइड फील्ड माइक्रोस्कोपी का उपयोग कक्ष

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs)

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs) (Video) | JoVE 

अलगाव और hematopoietic स्टेम सेल का प्रत्यारोपण (HSCs)

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells (Video) | JoVE 

Murine भ्रूण स्टेम कोशिकाओं से hematopoietic स्टेम सेल की व्युत्पत्ति

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta (Video) | JoVE 

अलगाव और अपरा से hematopoietic स्टेम सेल का विश्लेषण

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

Isolation of Early Hematopoietic Stem Cells from Murine Yolk Sac and AGM

Isolation of Early Hematopoietic Stem Cells from Murine Yolk Sac and AGM (Video) | JoVE 

प्रारंभिक murine जर्दी Sac और एजीएम से hematopoietic स्टेम सेल का अलगाव

In the mouse embryo, early hematopoiesis occurs simultaneously in multiple organs, which includes the yolk sac and aorta-gonad-mesonephros region. These ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells (Video) | JoVE 

Lentiviral - मध्यस्थता नॉकडाउन के दौरान पूर्व vivo</emमानव hematopoietic स्टेम सेल के> erythropoiesis

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors

Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors (Video) | JoVE 

प्ररूपी और murine hematopoietic स्टेम सेल और वंश प्रतिबद्ध progenitors के विश्लेषण से अलगाव

The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana (Video) | JoVE 

Crustacean साथ लंबी अवधि के घातक विषाक्तता टेस्ट Artemia franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells (SSCs) in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells (SSCs) in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines (Video) | JoVE 

Spermatogonial स्टेम और पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के सीरियल संवर्धन (SSCs) लंबी अवधि वयस्क माउस एसएससी लाइन्स की व्युत्पत्ति के लिए संस्कृति में

Spermatogonial stem and progenitor cells (SSCs) of the testis represent a classic example of adult mammalian stem cells and preserve fertility for nearly ...