Name: idg-sw3 cell culture in a three-dimensional extracellular matrix
Uploaded: 2023-11-13T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about IDG-SW3 Cell Culture in a Three-Dimensional Extracellular Matrix at JoVE.com

Vi tackar Dr. Lynda F. Bonewald för gåvan av IDG-SW3-cellinjen. Detta arbete stöddes av National Natural Science Foundation of China (82070902, 82100935 och 81700778) och Shanghai "Science and Technology Innovation" Sailing Project (21YF1442000).

Detta protokoll är lämpligt för odling av celler i fyra brunnar med 24-brunnars plattor. Om flera prover eller plattor bereds bör mängden reagenser ökas i enlighet med detta.
1. Beredning av kollagen I-blandningen
OBS: Kollagen I och basalmembranmatrisgel snabbt vid rumstemperatur. Därför bör kollagen hanteras på is (2 °C till 8 °C). Alla munstycken och tuber som används skall förkylas om inte annat anges. Alla procedurer ska utföras i ...

<ol>
	<li>Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+amazing+osteocyte.">The amazing osteocyte.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 26 (2), 229-238 (2011).</li><li>Dallas, S. L., Prideaux, M., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+osteocyte:+An+endocrine+cell+...+and+more.">The osteocyte: An endocrine cell ... and more.</a> Endocrine Reviews. 34 (5), 658-690 (2013).</li><li>Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+osteocyte+in+bone+and+nonbone+disease.">The role of the osteocyte in bone and nonbone disease.</a> Endocrinology and Metabolism Clinics of North America. 46 (1), 1-18 (2017).</li><li>Woo, S. M., Rosser, J., Dusevich, V., Kalajzic, I., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+line+IDG-SW3+replicates+osteoblast-to-late-osteocyte+differentiation+in+vitro+and+accelerates+bone+formation+in+vivo.">Cell line IDG-SW3 replicates osteoblast-to-late-osteocyte differentiation in vitro and accelerates bone formation in vivo.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 26 (11), 2634-2646 (2011).</li><li>Wang, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+osteocyte+dendrite+formation+by+Sp7+and+its+target+gene+osteocrin.">Control of osteocyte dendrite formation by Sp7 and its target gene osteocrin.</a> Nature Communications. 12 (1), 6271 (2021).</li><li>Chicatun, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoid-mimicking+dense+collagen/chitosan+hybrid+gels.">Osteoid-mimicking dense collagen/chitosan hybrid gels.</a> Biomacromolecules. 12 (8), 2946-2956 (2011).</li><li>Kawasaki, K., Buchanan, A. V., Weiss, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomineralization+in+humans:+making+the+hard+choices+in+life.">Biomineralization in humans: making the hard choices in life.</a> Annual Review of Genetics. 43, 119-142 (2009).</li><li>Bosman, F. T., Stamenkovic, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+structure+and+composition+of+the+extracellular+matrix.">Functional structure and composition of the extracellular matrix.</a> Journal of Pathology. 200 (4), 423-428 (2003).</li><li>Papadopoulos, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+fluorescence+assay+for+the+determination+of+lymphocyte-mediated+cytotoxicity+using+flow+cytometry.">An improved fluorescence assay for the determination of lymphocyte-mediated cytotoxicity using flow cytometry.</a> Journal of Immunological Methods. 177 (1-2), 101-111 (1994).</li><li>Staines, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypomorphic+conditional+deletion+of+E11/Podoplanin+reveals+a+role+in+osteocyte+dendrite+elongation.">Hypomorphic conditional deletion of E11/Podoplanin reveals a role in osteocyte dendrite elongation.</a> Journal of Cellular Physiology. 232 (11), 3006-3019 (2017).</li><li>Feng, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+DMP1+causes+rickets+and+osteomalacia+and+identifies+a+role+for+osteocytes+in+mineral+metabolism.">Loss of DMP1 causes rickets and osteomalacia and identifies a role for osteocytes in mineral metabolism.</a> Nature Genetics. 38 (11), 1310-1315 (2006).</li><li>Winkler, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteocyte+control+of+bone+formation+via+sclerostin,+a+novel+BMP+antagonist.">Osteocyte control of bone formation via sclerostin, a novel BMP antagonist.</a> EMBO Journal. 22 (23), 6267-6276 (2003).</li><li>Riminucci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FGF-23+in+fibrous+dysplasia+of+bone+and+its+relationship+to+renal+phosphate+wasting.">FGF-23 in fibrous dysplasia of bone and its relationship to renal phosphate wasting.</a> Journal of Clinical Investigation. 112 (5), 683-692 (2003).</li><li>Dallas, S. L., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+the+transition+from+osteoblast+to+osteocyte.">Dynamics of the transition from osteoblast to osteocyte.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1192, 437-443 (2010).</li><li>Robin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+3D+osteoblast+migration+and+bone+apatite+during+in+vitro+early+osteocytogenesis.">Involvement of 3D osteoblast migration and bone apatite during in vitro early osteocytogenesis.</a> Bone. 88, 146-156 (2016).</li><li>Chen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+mineralization+capacity+of+IDG-SW3+cells+in+3D+collagen+hydrogel+for+bone+healing+in+estrogen-deficient+mice.">High mineralization capacity of IDG-SW3 cells in 3D collagen hydrogel for bone healing in estrogen-deficient mice.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, 864 (2020).</li></ol>

En kritisk punkt i detta protokoll är att steg 1 och steg 2 måste utföras på is för att förhindra spontan koagulation. I denna metod var den slutliga koncentrationen av kollagen I 1,2 mg/ml. Således bör en optimal ddH2O-volym beräknas för att matcha de olika kollagenerna från olika tillverkare.
In vivo involverar osteocytogenes en polär rörelse av osteoblaster från ytan till det inre av trabekulärt ben14. Detta protokoll befriar celler...

Osteocyter är terminalt differentierade celler som härrör från osteoblaster 1,2. När osteoblasten är begravd av osteoiden genomgår den osteocytogenes och uttrycker Pdpn-genen för att bilda preosteocyter, Dmp1-genen för att mineralisera osteoiden och Sost- och Fgf23-generna för att fungera som en mogen osteocyt i benvävnad3. Här introduceras ett 3D-odlingssystem för att identifiera dendritförlängning och markörgenuttryck i osteocytogenesprocessen.
IDG-SW3-celler är en odödliggjord primär cellinje som härrör från transgena möss och kan expandera eller replikera osteoblast till sen osteocytdifferentiering när de odlas iolika medier. Jämfört med MLO-A5, MLO-Y4 och andra cellinjer är uttrycksprofilen för funktionella proteiner, förmågan att utföra kalciumsaltavsättning och svaren på olika hormoner i IDG-SW3-celler mer benägna att vara desamma som för primära osteocyter i benvävnaden4.
Jämfört med 2D-system är 3D-odlingssystem mer kapabla att efterlikna den cellulära tillväxtmiljön in vivo, inklusive näringsgradienten, låg mekanisk styvhet och omgivande mekaniskt område (tabell 1). De flesta av de tidigare metoderna för att odla osteoblastiska celler i ett 3D-system använde kollagen I som den unika komponenten i formuleringar 4,5,6, eftersom kollagen I-fibrer fungerar som platsen för kalcium- och fosforavsättning. En oumbärlig beståndsdel i osteoiden, den extracellulära matrisen, innehåller dock en stor grupp cellulära faktorer som främjar cellulär tillväxt, vidhäftning och migration 7,8 och är transparent och bekväm för avbildningsobservation. Således använder detta protokoll Matrigel (hädanefter kallad basalmembranmatris) som en sekundär komponent för osteocytogenesstudien.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.25% Trypsin-ethylenediaminetetraacetic acid</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30042.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Corning, NY, USA</td>
			<td>430791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7.5% (w/v) Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich, MO, USA</td>
			<td>S8761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ascorbic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich, MO, USA</td>
			<td>A4544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen I</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A10483-01&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal bovine serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10099141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>homogenizer</td>
			<td>BiHeng&#160; Biotechnology, Shanghai, China</td>
			<td>SKSI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>laser confocal fluorescence microscopy</td>
			<td>Carl&#160;Zeiss, Oberkochen, Germany</td>
			<td>LSM 800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live/Dead Cell Imaging kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>R37601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel matrix</td>
			<td>Corning, NY, USA</td>
			<td>356234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM (10X), no glutamine</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>21430079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich, MO, USA</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphate buffered saline</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30256.FS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stereo microscope</td>
			<td>Carl&#160;Zeiss, Oberkochen, Germany</td>
			<td>Zeiss Axio ZOOM.V16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizol</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15596026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray fluorescence</td>
			<td>EDAX, USA</td>
			<td>EAGLE III</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-glycerophosphate</td>
			<td>Sigma-Aldrich, MO, USA</td>
			<td>G9422</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

idg-sw3 cell culture in a three-dimensional extracellular matrix

Osteocyter anses vara icke-proliferativa celler som är terminalt differentierade från osteoblaster. Osteoblaster inbäddade i benets extracellulära matris (osteoid) uttrycker Pdpn-genen för att bilda cellulära dendriter och omvandlas till preosteocyter. Senare uttrycker preosteocyter Dmp1-genen för att främja matrismineralisering och därigenom omvandlas till mogna osteocyter. Denna process kallas osteocytogenes. IDG-SW3 är en välkänd cellinje för in vitro-studier av osteocytogenes. Många tidigare metoder har använt kollagen I som huvudsaklig eller enda komponent i odlingsmatrisen. Men förutom kollagen I innehåller osteoiden också ett grundämne, som är en viktig komponent för att främja celltillväxt, vidhäftning och migration. Dessutom är matrissubstansen transparent, vilket ökar transparensen hos den kollagen I-bildade gelen och därmed hjälper till att utforska dendritbildning genom avbildningstekniker. Således beskriver denna artikel ett protokoll för att etablera en 3D-gel med hjälp av en extracellulär matris tillsammans med kollagen I för IDG-SW3-överlevnad. I detta arbete analyserades dendritbildning och genuttryck under osteocytogenesen. Efter 7 dagars osteogen odling observerades ett omfattande dendritnätverk tydligt under ett fluorescenskonfokalmikroskop. Realtids-PCR visade att mRNA-nivåerna av Pdpn och Dmp1 kontinuerligt ökade under 3 veckor. Vid vecka 4 avslöjade stereomikroskopet en ogenomskinlig gel fylld med mineralpartiklar, i överensstämmelse med röntgenfluorescensanalysen (XRF). Dessa resultat indikerar att denna odlingsmatris framgångsrikt underlättar övergången från osteoblaster till mogna osteocyter.

Efter färgning av levande/döda celler visualiserades cellerna med hjälp av ett konfokalt lasermikroskop. Alla celler var calcein AM-positiva (grön färg), och det fanns nästan inga EthD-1-positiva celler (röd färg) i fältet, vilket indikerar att gelsystemet tillverkat med denna metod är mycket lämpligt för osteocytogenes (Figur 1A, vänster). För att bättre bestämma den rumsliga fördelningen av cellerna valdes en pseudofärgbild för att visa cellens dendriter på olika djup a...

Watch this Scientific Journal Video about IDG-SW3 Cell Culture in a Three-Dimensional Extracellular Matrix at JoVE.com

IDG-SW3 Cell Culture in a Three-Dimensional Extracellular Matrix

Här presenterar vi ett protokoll för odling av IDG-SW3-celler i en tredimensionell (3D) extracellulär matrix.

IDG-SW3 cellodling i en tredimensionell extracellulär matris

Osteocytes are considered to be nonproliferative cells that are terminally differentiated from osteoblasts. Osteoblasts embedded in the bone extracellular ...

Vi beskrev ett protokoll för att etablera ett 3D-system med hjälp av ett extracellulärt mått tillsammans med kollagen för att analysera bildning och genuttryck genom osteogenes. Extracellulära mätvärden kan öka transparensen hos kollagengelen i en form och den är lämplig för att utforska dendritbildningen för avbildningstekniker. Börja långsamt med att pipettera 0,9 milliliter basalmembranmatris i ett nytt 15 milliliters centrifugrör på is och håll det åt sidan.Ta sedan bort en T25-tandtråd av IDG SW3-odlade celler i fyra milliliter komplett medium kompletterat med interferon gamma från inkubatorn. Efter att odlingsmediet avlägsnats, tvätta cellerna med PBS pH 7,4 med en pipett. Trypsanisera sedan cellerna med 0,5 milliliter 0,25% trypsin EDTA vid 37 grader Celsius i 30 sekunder.Inaktivera trypsin genom att tillsätta 3,5 ml helmedium. Överför fyra milliliter Celsius-pensionen till ett 15 milliliters centrifugrör. Centrifugera cellsuspensionen vid 300 G i fem minuter vid fyra grader Celsius.Efter att ha kasserat supernatanten, återsuspendera cellpaletten i en milliliter av det fullständiga mediet på is. Räkna cellerna med hjälp av en hemocytometer och justera den slutliga celltätheten med det kompletta mediet till fyra gånger 10 till de femte cellerna per milliliter. Tillsätt 0,1 ml av den beredda cellsuspensionen till de 0,9 ml av den extracellulära matrisen som förvaras på is.Blanda väl genom att försiktigt pipettera upp och ner. Blanda försiktigt en milliliter av cellmatrisblandningen och en milliliter av det tidigare beredda kollagenet genom att pipettera upp och ner på isen. Pipettera 0,5 ml av den slutliga blandningen i varje brunn på en 24-hålsplatta och inkubera vid 37 grader Celsius i en timme för att bilda en cellgelblandning.Efter inkubation, tillsätt 0,5 milliliter osteogent medium till cellgelblandningen i varje brunn. För att starta den osteogena differentieringen vid 37 grader Celsius, betrakta detta som dag noll. Varannan dag, byt ut halva mediet mot färskt osteogent medium och fortsätt odlingen i 35 dagar.Ta ut stamlösningarna kalcium AM och etidium ett från frysen och låt dem värmas upp till rumstemperatur. Tillsätt fyra mikroliter av den två millimolära etidiumlösningen och fem mikroliter av den fyra millimolära stamlösningen av kalcium AM till två milliliter DPBS och blanda väl för att få två mikromolara kalcium AM och fyra mikromolära etidium en som arbetslösning. För att utföra cellfärgning på dag ett och dag sju av odlingen, pipettera 0.5 milliliter av arbetslösningen i brunnarna på 24-brunnsplattan och inkubera i 30 till 45 minuter vid rumstemperatur för att färga cellgelmatrisen.Tillsätt cirka 0.5 ml färsk DPBS till en ny 35 millimeters odlingsskål med glasbotten och täck skålen för att förhindra kontaminering eller torkning av proverna. Använd en armbågstippad pincett och överför försiktigt den färgade cellgelmatrisen till DPBS-odlingsskålen utan att skada eller klippa cellgelmatrisen. View de märkta cellerna under ett laserkonfokalfluorescensmikroskop.Placera odlingsskålen som innehåller den färgade cellgelmatrisen på mikroskopetage. Välj de områden i cellgelmatrisen som ska skannas genom okularet med ett 10x-objektiv. För att ställa in mikroskopskanningen, välj de optiska filtren.Se kalcium som grönt med ett standardfluorescerande bandpassfilter och etidium som rött med filter för propidiumjodid eller Texas rött färgämne. Välj linjeläge för skanning och klicka sedan på exponeringsläget för att ställa in de luftiga enheterna på en au. Välj 8-bitars datadjup och en bildupplösning på 1024 x 1024 bildpunkter.Välj sedan linjesteget och ställ in skanningshastigheten till fem. För att samla in Z-stapeln med bilder, definiera de övre och nedre positionerna för cellgelmatrisen som ska skannas genom att fokusera genom sample medan du kontinuerligt skannar enligt den gröna kanalsignalen. När toppen och botten av provet har angetts väljer du önskad skanningsram och börjar skanna.Exemplet skannas uppifrån och ned med de valda inställningarna som genererar ett galleri med bilder. Om du vill identifiera de livskraftiga cellerna markerar du ett bildsegment. De gröna och röda kanalerna indikerar levande respektive döda celler.För att identifiera cellens dendrit, välj den enda gröna kanalen för att generera 3D-rekonstruktioner med bildinsamlingsprogrammet, en serie regnbågspseudofärgbilder indikerar djupinformationen. Dendriterna längst ner visas i rött, medan de högst upp visas i blått. På olika odlingsdagar, ta bort odlingsmediet och tvätta gelerna i plattan två gånger med DPBS.Tillsätt 0,5 milliliter eller 4 % paraformaldehyd i DPBS i brunnen för att fixera cellgelmatrisen i plattan i 10 minuter vid rumstemperatur. Ta bort paraformaldehyden i brunnen och tvätta cellgelmatrisen ytterligare två gånger med DPBS i plattan som visats tidigare, och lämna 0,5 milliliter DPBS i varje brunn för avbildning. Placera plattan på stereomikroskopet stage och välj den optimala positionen genom okularet med ett 0.5x objektiv.Bild, hela fältet view av cellgelmatrisen i plattan individuellt med hjälp av automatisk exponering under det ljusa fältet. På dag 35 av odlingen, kontrollera nivåerna av flytande kväve och starta XRF-systemet. Öppna provrummet och överför gelerna med armbågsspetsad pincett från plattan till mitten av sample stage av instrumentet.Stäng sample rummet och vänta i 30 minuter så att instrumentet svalnar före användning. Ställ in exponeringstiden på 35 millisekunder. Spektrumområdet från noll till 40 kiloelektronvolt och den elektriska strömmen till 770 mikroampere för förvärvsinställning.När du flyttar provsteget väljer du tre till fem skanningsplatser för analys. Välj grundämnena kalcium och fosfor. Starta identifieringen och exportera resultatet.På olika dagar av kultivering. Tvätta den borttagna cellgelmatrisen med odlingsmedium två gånger med iskall DPBS som visats tidigare. Extrahera det totala RNA:t från cellgelmatrisen med hjälp av fenolkloroformisoamylalkoholmetoden.Transkribera sedan två mikrogram totalt RNA till CDNA med slumpmässiga hexamerprimers. Placera röret på en termocykler och utför PCR-amplifiering. Efter PCR-analys förändras veckförändringarna med två delta CT-metoden.Färgningen av levande döda celler som visualiserades under ett konfokalt lasermikroskop visade att alla celler var kalcium-AM-positiva och nästan inga etidium ett-positiva celler, vilket indikerar att gelsystemet är mycket lämpligt för osteocytogenes. De cellulära dendriterna utvidgades gradvis till ett nätverk i det osteogena mediet vid dag sju. En pseudofärgbild av dag sju-kulturen visar cellandroiderna på olika djup i botten och i toppen av gelen.Fullfältsbilder av gelen med celler och gel utan celler i en 24-hålsplatta vid de angivna tidpunkterna avbildas. Genomskinligheten i gelmatrisen fortsatte att minska tills den blev ogenomskinlig på dag 35 till skillnad från den cellfria gelmatrisen. XRF-spektrumet för den ogenomskinliga gelen på dag 35 indikerade att gelen var helt fylld med kalcium- och fosforavlagringar.Uttrycket av flera markörgener som analyserades med realtids-PCR visade att mRNA-nivåerna av podoplanin och dentinmatrixprotein ett kontinuerligt ökade från dag ett till dag 21 och att mRNA-nivån minskade efter dag 21. mRNA-nivåerna av fibroblasttillväxtfaktor 23 och sklerostin ökade kontinuerligt under alla stadier. Kollagen ett och basalmembranet gelar snabbt och rumstemperatur.Därför måste alla spetsar och tuber som används vara förkylda om inte annat anges. Man kan observera alla intressanta händelser under osteogenes med hjälp av avbildningstekniker. Det är lättare att lokalisera molekylens verkan under bildandet och förlängningen av dendriter.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Three-dimensional Optical-resolution Photoacoustic Microscopy

Tredimensionell optisk upplösning photoacoustic Mikroskopi

Optical microscopy, providing valuable insights at the cellular and organelle levels, has been widely recognized as an enabling biomedical technology. As ...

Live-cell Imaging of Migrating Cells Expressing Fluorescently-tagged Proteins in a Three-dimensional Matrix

Live-cell imaging att migrera celler som uttrycker fluorescerande-taggade proteiner i en tredimensionell matris

Traditionally, cell migration has been studied on two-dimensional, stiff plastic surfaces. However, during important biological processes such as wound ...

Three-dimensional Cell Culture Model for Measuring the Effects of Interstitial Fluid Flow on Tumor Cell Invasion

Tredimensionell cellkulturmodell för mätning av effekterna av interstitialvätska Flow på Tumörcellinvasion

The growth and progression of most solid tumors depend on the initial transformation of the cancer cells and their response to stroma-associated signaling ...

Analysis of Cell Migration within a Three-dimensional Collagen Matrix

Analys av Cell Migration inom en tredimensionell kollagenmatris

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

Generering av ett tredimensionellt Full Tjocklek hudekvivalent och automatiserade sårar

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Epithelial Cell Repopulation and Preparation of Rodent Extracellular Matrix Scaffolds for Renal Tissue Development

Epitelceller Återplantering och framställning av gnagare Extracellular Matrix Byggnadsställningar för njurvävnad utveckling

This protocol details the generation of acellular, yet biofunctional, renal extracellular matrix (ECM) scaffolds that are useful as small-scale model ...

Engineering Three-dimensional Epithelial Tissues Embedded within Extracellular Matrix

Engineering Tredimensionella epitelvävnader Embedded inom extracellulär matrix

The architecture of branched organs such as the lungs, kidneys, and mammary glands arises through the developmental process of branching morphogenesis, ...

Tunable Hydrogels from Pulmonary Extracellular Matrix for 3D Cell Culture

Avstämbar Hydrogeler från Lung Extracellulär Matrix för 3D Cell Culture

Here we present a method for establishing multiple component cell culture hydrogels for in vitro lung cell culture. Beginning with healthy en bloc lung ...

Fabrication of Extracellular Matrix-derived Foams and Microcarriers as Tissue-specific Cell Culture and Delivery Platforms

Tillverkning av extracellulär matrix-härledda Skum och Mikrobärare som Vävnadsspecifik Cellodling och Delivery Platforms

Cell function is mediated by interactions with the extracellular matrix (ECM), which has complex tissue-specific composition and architecture. The focus ...

Fabricating a Kidney Cortex Extracellular Matrix-Derived Hydrogel

Fabricera en njure Cortex extracellulära Matrix-Derived Hydrogel

Extracellular matrix (ECM) provides important biophysical and biochemical cues to maintain tissue homeostasis. Current synthetic hydrogels offer robust ...