Name: live-cell imaging of intact ex vivo globes using a novel 3d printed holder
Uploaded: 2022-10-06T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder at JoVE.com

We willen de NIH bedanken voor de volgende subsidiesteun: RO1EY032079 (VTR), R21EY029097-01 (VTR), 1F30EY033647-01 (KS) en 5T32GM008541-24 (KS). We willen ook het Massachusetts Lions Eye Research Fund en het New England Corneal Transplant Fund erkennen.

De procedures met betrekking tot dierlijke proefpersonen werden goedgekeurd door de Association for Research in Vision and Ophthalmology for the Use of Animals in Ophthalmic Care and Vision Research en het Boston University IACUC-protocol (201800302).
1. Ontwerpen van de 3D-geprinte houders en cover bar
<ol><li>Ontwerp de 3D-geprinte houders en de afdekbalk rekening houdend met de gemiddelde diameter van muisbollen en 3D-print het ontwerp (figuur 1A</str...

<ol>
	<li>Kneer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+fat+diet+induces+pre-type+2+diabetes+with+regional+changes+in+corneal+sensory+nerves+and+altered+P2X7+expression+and+localization.">High fat diet induces pre-type 2 diabetes with regional changes in corneal sensory nerves and altered P2X7 expression and localization.</a> Experimental Eye Research. 175, 44-55 (2018).</li><li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+Ca2++mobilizations:+A+quantitative+approach+to+predict+their+importance+in+cell-cell+communication+and+wound+healing.">Sustained Ca2+ mobilizations: A quantitative approach to predict their importance in cell-cell communication and wound healing.</a> PLoS One. 14 (4), 0213422 (2019).</li><li>Stepp, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wounding+the+cornea+to+learn+how+it+heals.">Wounding the cornea to learn how it heals.</a> Experimental Eye Research. 121, 178-193 (2014).</li><li>Klepeis, V. S., Cornell-Bell, A., Trinkaus-Randal, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factors+but+not+gap+junctions+play+a+role+in+injury-induced+Ca2++waves+in+epithelial+cells.">Growth factors but not gap junctions play a role in injury-induced Ca2+ waves in epithelial cells.</a> Journal of Cell Science. 114 (23), 4185-4195 (2001).</li><li>Lee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-induced+changes+in+Ca(2+)+mobilization+and+protein+phosphorylation+implicated+in+impaired+wound+healing.">Hypoxia-induced changes in Ca(2+) mobilization and protein phosphorylation implicated in impaired wound healing.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 306 (10), 972-985 (2014).</li><li>Boucher, I., Rich, C., Lee, A., Marcincin, A., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+P2Y2+receptor+mediates+the+epithelial+injury+response+and+cell+migration.">The P2Y2 receptor mediates the epithelial injury response and cell migration.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 299 (2), 411-421 (2010).</li><li>Awal, M. R., Wirak, G. S., Gabel, C. V., Connor, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collapse+of+global+neuronal+states+in+Caenorhabditis+elegans+under+isoflurane+anesthesia.">Collapse of global neuronal states in Caenorhabditis elegans under isoflurane anesthesia.</a> Anesthesiology. 133 (1), 133-144 (2020).</li><li>Burnett, K., Edsinger, E., Albrecht, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+gentle+hydrogel+encapsulation+of+living+organisms+enables+long-term+microscopy+over+multiple+hours.">Rapid and gentle hydrogel encapsulation of living organisms enables long-term microscopy over multiple hours.</a> Communications Biology. 1, 73 (2018).</li><li>Rhodes, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pannexin1:+Role+as+a+sensor+to+injury+is+attenuated+in+pretype+2+corneal+diabetic+epithelium.">Pannexin1: Role as a sensor to injury is attenuated in pretype 2 corneal diabetic epithelium.</a> Analytical Cellular Pathology. 2021, 4793338 (2021).</li><li>Segars, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age+dependent+changes+in+corneal+epithelial+cell+signaling.">Age dependent changes in corneal epithelial cell signaling.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 10, 886721 (2022).</li><li>Xu, P., Londregan, A., Rich, C., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+epithelial+and+stromal+corneal+stiffness+occur+with+age+and+obesity.">Changes in epithelial and stromal corneal stiffness occur with age and obesity.</a> Bioengineering. 7 (1), 14 (2020).</li><li>Minns, M. S., Teicher, G., Rich, C. B., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinoreceptor+P2X7+regulation+of+Ca(2+)+mobilization+and+cytoskeletal+rearrangement+is+required+for+corneal+reepithelialization+after+injury.">Purinoreceptor P2X7 regulation of Ca(2+) mobilization and cytoskeletal rearrangement is required for corneal reepithelialization after injury.</a> The American Journal of Pathology. 186 (2), 285-296 (2016).</li><li>Tadvalkar, G., Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+euthanasia+and+enucleation+on+mouse+corneal+epithelial+axon+density+and+nerve+terminal+morphology.">The impact of euthanasia and enucleation on mouse corneal epithelial axon density and nerve terminal morphology.</a> The Ocular Surface. 18 (4), 821-828 (2020).</li></ol>

Dit protocol beschrijft een live cell imaging-techniek die een 3D-geprinte houder gebruikt om intacte dierenogen te stabiliseren en te immobiliseren. Het is ontworpen om verschillende belangrijke nadelen te omzeilen die worden erkend met eerdere live cell imaging-protocollen van ex vivo hoornvliesweefsel. Dit protocol biedt veel voordelen voor de live cell imaging van intacte globes. Het vermindert aanzienlijk onnodige weefselschade die de wondgenezingsreactie op experimenteel geïnduceerde kraswonden zou kunnen...

Hoornvlies Het hoornvlies is een heldere, avasculaire structuur die het voorste oppervlak van het oog bedekt en die licht breekt om het zicht mogelijk te maken en het binnenste van het oog beschermt tegen schade. Omdat het hoornvlies wordt blootgesteld aan de omgeving, is het gevoelig voor schade door zowel mechanische oorzaken (krabben) als door infectie. Een hoornvliesletsel bij een verder gezonde patiënt geneest meestal binnen 1-3 dagen. Bij patiënten met onderliggende aandoeningen, waaronder limbale stamceldeficiëntie en diabetes type II, kan het genezingsproces van de hoornvlieswond echter sterk worden verlengd1. Omdat het hoornvlies sterk geïnnerveerd is, zijn deze niet-genezende hoornvlieszweren en terugkerende cornea-erosies zeer pijnlijk en verminderen ze de kwaliteit van leven van patiënten die ze ervarensterk 1.
Cel signalering Wanneer een verder gezond hoornvlies gewond raakt, gaan calciumsignaleringsgebeurtenissen in de cellen naast de wond vooraf aan en leiden cellulaire migratie naar het wondbed, waar ze het letsel sluiten zonder het risico op littekens 2,3. Deze signaleringsgebeurtenissen zijn goed gekarakteriseerd in cornea-epitheelcelkweekmodellen met behulp van live cell imaging2. Voorlopige experimenten tonen significant meer calciumsignalering na verwonding in niet-diabetische cellen in vergelijking met diabetische cellen. De karakterisering van de celsignaleringsgebeurtenissen in ex vivo globes is echter een technische uitdaging gebleken.
Live cel beeldvorming Eerdere studies hebben met succes calciumsignaleringsgebeurtenissen geregistreerd uit in vitro celkweekmodellen van corneawondgenezing 4,5,6. Het ontwikkelen van een methodologie om beelden van hoge kwaliteit te produceren van deze signaleringsgebeurtenissen in ex vivo weefsel is van groot belang omdat het de studie van deze gebeurtenissen in een complexer en levensecht systeem mogelijk zou maken. Eerdere benaderingen betroffen dissectie van het hoornvlies gevolgd door immobilisatie in een UV-geïnduceerde PEG-gel 7,8,9. Immobilisatie is een essentiële maar uitdagende stap bij het werken met levend weefsel, omdat het levensvatbaar en gehydrateerd moet blijven in de loop van het experiment. Bovendien mag immobilisatie het weefsel niet beschadigen. Hoewel de PEG-oplossing het weefsel immobiliseerde, waren de resolutie en kwaliteit van de geproduceerde beelden niet consistent. Daarom zijn 3D-geprinte houders ontwikkeld om intacte bollen te immobiliseren om beelden van hogere kwaliteit te produceren met minder risico op weefselschade.
De aanpak Een unieke 3D-geprinte houder werd ontwikkeld om intacte ex vivo globes te immobiliseren voor live cell imaging. Deze houder voorkomt schade door twee belangrijke bronnen: het maakt beeldvorming van een enucleated bol mogelijk zonder de noodzaak om het hoornvlies te ontleden, en het elimineert blootstelling aan UV-licht. Zonder deze bronnen van schade gaven de verkregen beelden nauwkeuriger de reactie weer op de krasblessures die experimenteel werden gemaakt. Bovendien werd de 3D-geprinte houder gekalibreerd op de precieze afmetingen van het muizenoog. Dit zorgde voor een veel betere pasvorm dan immobilisatie in peg-oplossing, wat leidde tot een beeld van hogere kwaliteit bij lagere vermogens als gevolg van verminderde weefselbeweging. Een afdekbalk die aan de bovenkant van de houder is bevestigd, zorgt ervoor dat de wereldbol gedurende de hele duur van het experiment onbeweeglijk blijft en dat er geen verplaatsing van de aardbol plaatsvindt wanneer groeimedia worden aangebracht om de hydratatie en levensvatbaarheid te behouden. De mogelijkheid om de houder op precieze afmetingen te printen, stelt ons ook in staat om een optimale pasvorm te genereren voor muizenogen van verschillende groottes vanwege de leeftijd of ziektestatus. Deze technologie kan breder worden toegepast om houders voor de ogen van verschillende soorten te ontwikkelen op basis van hun afmetingen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.75 blue polylactic acid (PLA) plastic</td>
			<td>Creality (Shenzen, China)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Material for holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm Dish, No. 1.5 Coverslip, 14 mm glass diameter, Poly-D-Lysine Coated</td>
			<td>MatTek Corporation (Ashland, MA)</td>
			<td>P35GC-1.5-14-C</td>
			<td>Well for imaging.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autodesk Fusion 360 software</td>
			<td>Autodesk (San Rafael, CA).</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Software used for printing the holders.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 25 G 7/8 sterile needles single use 100 needles/box</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA)</td>
			<td>305124</td>
			<td>For experimentally-induced wounds to the globes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellMask DeepRed</td>
			<td>Invitrogen (Carlsbad, CA)</td>
			<td>C10046</td>
			<td>Cell membrane counterstain. Calcium indicator. 1:10,000 concentration with a final concentration of 1%(v/v) DMSO and 0.1% (w/v) pluronic acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Home Super Glue</td>
			<td>Walgreens (Deerfield, IL)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For attaching the holder to the imaging well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ender 3 Pro 3D printer&#160;</td>
			<td>Creality (Shenzen, China)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For printing the holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI/ImageJ</td>
			<td>ImageJ (Bethesda, MD)</td>
			<td>License Number: GPL2</td>
			<td>Softwareused for confirming consistency of wound depth and diameter between independent globes using Region of Interest analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo-4</td>
			<td>Invitrogen (Carlsbad, CA)</td>
			<td>F14201</td>
			<td>Calcium indicator. 1:100 concentration with a final concentration of 1%(v/v) DMSO and 0.1% (w/v) pluronic acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Keratinocyte Serum-Free Medium</td>
			<td>Gibco (Waltham, MA)</td>
			<td>17005042</td>
			<td>25 mg/mL bovine pituitary extract, 0.02 nM EGF, 0.3 mM CaCl2, and penicillin-streptomycin (100 units/mL, 100 &#181;g/mL, respectively) added to medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phophate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Corning, Medlabtech (Manassas, VA)</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td>Used to wash excess stain off of corneas before imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Confocal 880 Microscope with AiryScan</td>
			<td>Zeiss (Thornwood, NY)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>20x magnification objective was used</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of intact ex vivo globes using a novel 3d printed holder

Cornea-epitheliale wondgenezing is een migratieproces dat wordt geïnitieerd door de activering van purinerge receptoren die tot expressie komen op epitheelcellen. Deze activering resulteert in calciummobilisatiegebeurtenissen die zich van cel naar cel voortplanten, die essentieel zijn voor het initiëren van cellulaire beweeglijkheid in het wondbed, waardoor efficiënte wondgenezing wordt bevorderd. Het Trinkaus-Randall-lab heeft een methodologie ontwikkeld voor het in beeld brengen van de genezingsrespons van de hoornvlieswond in ex vivo muizenbollen in realtime. Deze aanpak omvat het enucleren van een intacte wereldbol van een muis die volgens vastgestelde protocollen is geëuthanaseerd en onmiddellijk de wereld incuberen met een calciumindicatorkleurstof. Een counterstain die andere kenmerken van de cel kleurt, kan in dit stadium worden toegepast om te helpen bij beeldvorming en cellulaire oriëntatiepunten te tonen. Het protocol werkte goed met verschillende levende celkleurstoffen die worden gebruikt voor counterstaining, waaronder SiR-actine om actine te kleuren en dieprode plasmamembraanvlek om het celmembraan te kleuren. Om de reactie op een wond te onderzoeken, wordt het hoornvliesepitheel verwond met behulp van een naald van 25 G en worden de bollen in een 3D-geprinte houder geplaatst. De afmetingen van de 3D-geprinte houder zijn gekalibreerd om immobilisatie van de wereldbol gedurende de duur van het experiment te garanderen en kunnen worden aangepast aan ogen van verschillende groottes. Live cell imaging van de wondrespons wordt continu uitgevoerd op verschillende diepten in het weefsel in de loop van de tijd met behulp van confocale microscopie. Dit protocol stelt ons in staat om beelden van hoge resolutie, publicatiekwaliteit te genereren met behulp van een 20x luchtdoel op een confocale microscoop. Voor dit protocol kunnen ook andere doelstellingen worden gebruikt. Het vertegenwoordigt een aanzienlijke verbetering van de kwaliteit van live cell imaging in ex vivo muizenbollen en maakt de identificatie van zenuwen en epitheel mogelijk.

Dit protocol is gebruikt om consistent gegevens en afbeeldingen van publicatiekwaliteit te produceren10. De verkregen beelden vertegenwoordigen een aanzienlijke verbetering in vergelijking met eerdere benaderingen (figuur 2). Met behulp van de 3D-geprinte houder kunnen beelden worden vastgelegd in de lagen van het hoornvlies en kan calciummobilisatie in verschillende z-vlakken worden waargenomen (figuur 3). Deze benadering is gebruikt om ...

Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder at JoVE.com

Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder

Het huidige werk beschrijft een nieuw experimenteel protocol dat een 3D-geprinte houder gebruikt om live cell imaging met hoge resolutie van enucleated globes mogelijk te maken. Via dit protocol kan de cellulaire calciumsignaleringsactiviteit in gewond hoornvliesepitheel van ex vivo globes in realtime worden waargenomen.

Live-cell beeldvorming van intacte Ex Vivo Globes met behulp van een nieuwe 3D-geprinte houder

Corneal epithelial wound healing is a migratory process initiated by the activation of purinergic receptors expressed on epithelial cells. This activation ...

De 3D-geprinte houder die in dit protocol wordt gebruikt, stelt ons in staat om op korte termijn celsignalering en cellulaire migratiegebeurtenissen op lange termijn in gewonde hoornvliezen in realtime te volgen. Door de wereldbol intact, levensvatbaar en onbeweeglijk te houden, produceert dit protocol live beelden van hoge kwaliteit van hoornvliescellen, inclusief het epitheel en de zenuwen. De 3D-geprinte houder kan eenvoudig worden aangepast voor globes van verschillende groottes en soorten.We kunnen de ogen ook anders oriënteren om andere regio's in beeld te brengen of nano-indentie-experimenten uit te voeren. Om te beginnen, na het verwijderen van de kop van een geëuthanaseerde muis, plaats het onmiddellijk op ijs om de levensvatbaarheid van het weefsel te behouden. Enucleateer vervolgens de bollen door propdozeren, met behulp van een pincet.En knip de oogzenuw met een dissectieschaar net onder de plek waar deze door het pincet wordt vastgehouden. Incubeer de bollen in twee milliliter van het medium in een P-35 celkweekschaal, inclusief een calciumindicator en / of celmembraanvlek gedurende een uur in een incubator bij 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide bij weinig licht, zodat de bollen worden ondergedompeld in het vlekmedium voor uniforme kleuring. Om de houders aan een schone glazen bodemafdekking te bevestigen, wast u de houder in 70% ethanol en plaatst u lijm op de houder.Bevestig de houder vervolgens aan de glazen bodemafdekkingslip, zodat er geen lijm in het binnenste gedeelte van de houder zit, omdat lijm kan fluoresceren, wat de beeldvorming bemoeilijkt. Nadat de lijm is stolt, controleert u of de houder veilig is tegen de afdekslip. Verwijder de bollen uit de kleuringsoplossing met behulp van de steriele pipet en zorg ervoor dat weefselschade aan het betreffende gebied wordt voorkomen.Was de bollen gedurende vijf minuten op kamertemperatuur, gebruik steriele fosfaat gebufferde zoutoplossing om overtollige vlekken te verwijderen en plaats de bollen in het medium voor transport naar de microscoop. Om de bollen te verwonden met een steriele naald van 25 gauge in het interessante gebied, pakt u de bol op en houdt u deze vast vanaf de achterkant van het oog, met behulp van een steriele pipet om de wereldbol stabiel te houden en te voorkomen dat deze rolt. Voor een krabwond, beweeg voorzichtig een steriele naald van 25 gauge over het blootgestelde hoornvlies of druk de naald voorzichtig rechtstreeks in het centrale hoornvlies voor een prikwond, zodat de wond het hoornvlieskeldermembraan niet doorboort.Plaats het hoornvlies of limbale gebied op de afdekslip in het binnenste gedeelte van de houder, terwijl u bevestigt dat de bol correct is gepositioneerd en dat de interessante plaats in contact staat met de glazen afdekslip. Stabiliseer met behulp van de 3D-geprinte hoes die aan de houder is bevestigd, met behulp van lijm. En probeer de bol niet te verwijderen, omdat dit weefselschade kan veroorzaken.Zet de microscoop aan en zet de omgevingskamer op 35 graden Celsius en 5% koolstofdioxide en controleer de bevochtigde kamer. Plaats de cover slip holder en gestabiliseerde bol op het microscoopstadium in de omgevingskamer en het beeld, met behulp van live cell imaging-technieken. Door extra groeimedia op de afdekslip te controleren om uitdroging te voorkomen en de levensvatbaarheid van het weefsel te behouden, zodat er voldoende medium in de put is om de bol in de houder te bedekken.Begin met experimenten met live cell imaging-technieken, terwijl u laserinstellingen met een laag vermogen gebruikt om het weefsel te behouden en weefselschade en geschikte doelstellingen voor langdurige experimenten te voorkomen. Record en sla gegevens op in het gewenste bestandsformaat van CZI-bestanden voor gegevensregistratie. Hoogwaardige beeldvormingsgegevens van meerlaagse structuur werden verkregen voor X vivo hoornvlies, gestabiliseerd met een 3D-geprinte houder, die calciumsignaleringsgebeurtenissen in de apicale, basale en stromale lagen van het hoornvlies demonstreerde.Z-stack beelden van een hoornvlies, geïmmobiliseerd in de 3D-geprinte houder, bij een kraswond werden verkregen om de celmembranen en calciumsignalering in de lagen van het hoornvlies en calciummobilisatie in verschillende Z-vlakken te visualiseren. Een tijdreeksexperiment van een hoornvlies werd uitgevoerd om de cellulaire migratie naar het wondbed tijdens de genezingsreactie te bestuderen, waarbij weinig beweging van de aardbol in de X-, Y- of Z-richtingen werd onthuld. Er werd waargenomen dat door de bol in de houder te plaatsen, verschillende gebieden van het hoornvlies, zowel in het centrale als in het corneale limbale gebied, kunnen worden gevisualiseerd.Dit protocol stelt ons in staat om ogen af te beelden van ziektemodellen die verschillen vertonen in wondgenezing. We kunnen aberraties karakteriseren in celsignalering en beweeglijkheid in levend weefsel.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder

High-throughput Screening of Carbohydrate-degrading Enzymes Using Novel Insoluble Chromogenic Substrate Assay Kits

High-throughput screening van Carbohydrate-afbrekende enzymen via innovatieve Onoplosbare chromogeen substraat Assay Kits

Carbohydrates active enzymes (CAZymes) have multiple roles in vivo and are widely used for industrial processing in the biofuel, textile, detergent, paper ...

Single-molecule Super-resolution Imaging of Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate in the Plasma Membrane with Novel Fluorescent Probes

Single-molecule Super-resolutie beeldvorming van fosfatidylinositol 4,5-bisfosfaat in het plasmamembraan met Novel Fluorescerende Probes

Phosphoinositides in the cell membrane are signaling lipids with multiple cellular functions. Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (PI(4,5)P2) is a ...

Identification of Small Molecule-binding Proteins in a Native Cellular Environment by Live-cell Photoaffinity Labeling

Identificatie van kleine synthetische molecules bindende eiwitten in een Inheemse cellulaire omgeving door live-cell fotoaffiniteitslabeling

Identifying the molecular target(s) of small molecules is a challenging but necessary step towards understanding their mechanism of action. While several ...

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Breinmembraanfractie: An<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Aanpak om de subsynaptische eiwit lokalisatie te beoordelen

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Glycoproteomics of the Extracellular Matrix: A Method for Intact Glycopeptide Analysis Using Mass Spectrometry

Glycoproteoomanalyses van de extracellulaire matrix: Een methode voor Intact Glycopeptide analyse met behulp van massaspectrometrie

Fibrosis is a hallmark of many cardiovascular diseases and is associated with the exacerbated secretion and deposition of the extracellular matrix (ECM). ...

Fluorescence Live-cell Imaging of the Complete Vegetative Cell Cycle of the Slow-growing Social Bacterium Myxococcus xanthus

Fluorescence Live-cell Imaging of the Complete Vegetative Cell Cycle of the Slow-growing Social Bacterium Myxococcus xanthus

Fluorescentie Live-cel beeldvorming van de Complete vegetatieve celcyclus van de langzaam groeiende sociale bacterie Myxococcus xanthus

Fluorescence live-cell imaging of bacterial cells is a key method in the analysis of the spatial and temporal dynamics of proteins and chromosomes ...

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Kalibratie-gratis In Vitro kwantificering van eiwit Homo-oligomerisatie met behulp van commerciële instrumentatie en Software van de analyse van de helderheid van gratis, Open Source

Number and brightness is a calibration-free fluorescence fluctuation spectroscopy (FFS) technique for detecting protein homo-oligomerization. It can be ...

Identification of Novel CK2 Kinase Substrates Using a Versatile Biochemical Approach

Identificatie van nieuwe CK2 Kinase substraten met behulp van een veelzijdige benadering van de biochemische

The study of kinase-substrate relationships is essential to gain a complete understanding of the functions of these enzymes and their downstream targets ...

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

In vivo calcium beeldvorming in C. elegans lichaam muur spieren

The model organism C. elegans provides an excellent system to perform in vivo calcium imaging. Its transparent body and genetic manipulability allow for ...

An All-in-one Sample Holder for Macromolecular X-ray Crystallography with Minimal Background Scattering

Een alles-in-een monsterhouder voor macromoleculaire X-Ray kristallografie met minimale achtergrond verstrooiing

Macromolecular X-ray crystallography (MX) is the most prominent method to obtain high-resolution three-dimensional knowledge of biological macromolecules. ...