Name: live-cell imaging of intact ex vivo globes using a novel 3d printed holder
Uploaded: 2022-10-06T14:15:00
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RO1EY032079 (VTR)、R21EY029097-01 (VTR)、1F30EY033647-01 (KS)、および 5T32GM008541-24 (KS) の無償資金協力に感謝いたします。また、マサチューセッツ・ライオンズ眼科研究基金とニューイングランド角膜移植基金にも感謝します。

動物被験者を含む手順は、眼科ケアおよび視覚研究における動物の使用のための視覚眼科学研究協会およびボストン大学IACUCプロトコル(201800302)によって承認されました。
1. 3Dプリントされたホルダーとカバーバーの設計
<ol><li>マウスグローブの平均直径を考慮して3Dプリントされたホルダーとカバーバーを設計し、デザインを3Dプリントします(<strong class="xf...

<ol>
	<li>Kneer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+fat+diet+induces+pre-type+2+diabetes+with+regional+changes+in+corneal+sensory+nerves+and+altered+P2X7+expression+and+localization.">High fat diet induces pre-type 2 diabetes with regional changes in corneal sensory nerves and altered P2X7 expression and localization.</a> Experimental Eye Research. 175, 44-55 (2018).</li><li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+Ca2++mobilizations:+A+quantitative+approach+to+predict+their+importance+in+cell-cell+communication+and+wound+healing.">Sustained Ca2+ mobilizations: A quantitative approach to predict their importance in cell-cell communication and wound healing.</a> PLoS One. 14 (4), 0213422 (2019).</li><li>Stepp, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wounding+the+cornea+to+learn+how+it+heals.">Wounding the cornea to learn how it heals.</a> Experimental Eye Research. 121, 178-193 (2014).</li><li>Klepeis, V. S., Cornell-Bell, A., Trinkaus-Randal, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factors+but+not+gap+junctions+play+a+role+in+injury-induced+Ca2++waves+in+epithelial+cells.">Growth factors but not gap junctions play a role in injury-induced Ca2+ waves in epithelial cells.</a> Journal of Cell Science. 114 (23), 4185-4195 (2001).</li><li>Lee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-induced+changes+in+Ca(2+)+mobilization+and+protein+phosphorylation+implicated+in+impaired+wound+healing.">Hypoxia-induced changes in Ca(2+) mobilization and protein phosphorylation implicated in impaired wound healing.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 306 (10), 972-985 (2014).</li><li>Boucher, I., Rich, C., Lee, A., Marcincin, A., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+P2Y2+receptor+mediates+the+epithelial+injury+response+and+cell+migration.">The P2Y2 receptor mediates the epithelial injury response and cell migration.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 299 (2), 411-421 (2010).</li><li>Awal, M. R., Wirak, G. S., Gabel, C. V., Connor, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collapse+of+global+neuronal+states+in+Caenorhabditis+elegans+under+isoflurane+anesthesia.">Collapse of global neuronal states in Caenorhabditis elegans under isoflurane anesthesia.</a> Anesthesiology. 133 (1), 133-144 (2020).</li><li>Burnett, K., Edsinger, E., Albrecht, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+gentle+hydrogel+encapsulation+of+living+organisms+enables+long-term+microscopy+over+multiple+hours.">Rapid and gentle hydrogel encapsulation of living organisms enables long-term microscopy over multiple hours.</a> Communications Biology. 1, 73 (2018).</li><li>Rhodes, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pannexin1:+Role+as+a+sensor+to+injury+is+attenuated+in+pretype+2+corneal+diabetic+epithelium.">Pannexin1: Role as a sensor to injury is attenuated in pretype 2 corneal diabetic epithelium.</a> Analytical Cellular Pathology. 2021, 4793338 (2021).</li><li>Segars, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age+dependent+changes+in+corneal+epithelial+cell+signaling.">Age dependent changes in corneal epithelial cell signaling.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 10, 886721 (2022).</li><li>Xu, P., Londregan, A., Rich, C., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+epithelial+and+stromal+corneal+stiffness+occur+with+age+and+obesity.">Changes in epithelial and stromal corneal stiffness occur with age and obesity.</a> Bioengineering. 7 (1), 14 (2020).</li><li>Minns, M. S., Teicher, G., Rich, C. B., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinoreceptor+P2X7+regulation+of+Ca(2+)+mobilization+and+cytoskeletal+rearrangement+is+required+for+corneal+reepithelialization+after+injury.">Purinoreceptor P2X7 regulation of Ca(2+) mobilization and cytoskeletal rearrangement is required for corneal reepithelialization after injury.</a> The American Journal of Pathology. 186 (2), 285-296 (2016).</li><li>Tadvalkar, G., Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+euthanasia+and+enucleation+on+mouse+corneal+epithelial+axon+density+and+nerve+terminal+morphology.">The impact of euthanasia and enucleation on mouse corneal epithelial axon density and nerve terminal morphology.</a> The Ocular Surface. 18 (4), 821-828 (2020).</li></ol>

このプロトコルは、3Dプリントされたホルダーを使用して無傷の動物の目を安定させ、固定化する生細胞イメージング技術について説明しています。これは、 ex vivo 角膜組織の以前の生細胞イメージングプロトコルで認識されたいくつかの重大な欠点を回避するように設計されています。このプロトコルは、インタクトグローブのライブセルイメージングに多くの利点を提供します。?...

角膜 角膜は、目の前面を覆う透明な無血管構造であり、光を屈折させて視力を可能にし、目の内部を損傷から保護します。角膜は環境にさらされているため、機械的原因(引っかき傷)と感染の両方による損傷を受けやすくなります。他の点では健康な患者の角膜損傷は、通常1〜3日以内に治癒します。しかし、辺縁系幹細胞欠損症やII型糖尿病などの基礎疾患のある患者では、角膜創傷治癒プロセスを大幅に延長することができます1。角膜は高度に神経支配されているため、これらの非治癒性の角膜潰瘍と再発性角膜びらんは非常に痛みを伴い、それらを経験している患者の生活の質を大幅に低下させます1。
細胞シグナル伝達 他の点では健康な角膜が損傷すると、創傷に隣接する細胞内のカルシウムシグナル伝達イベントが先行し、創傷床への細胞移動を促し、そこで瘢痕化のリスクなしに損傷を閉じます2,3。これらのシグナル伝達イベントは、ライブセルイメージングを用いた角膜上皮細胞培養モデルで十分に特徴付けられています2。予備実験は、糖尿病細胞と比較して、非糖尿病細胞における傷害後の有意に多くのカルシウムシグナル伝達を実証する。しかしながら、ex vivoグローブにおける細胞シグナル伝達事象の特性評価は、技術的な課題であることが証明されている。
ライブセルイメージング 以前の研究では、角膜創傷治癒のin vitro細胞培養モデルからのカルシウムシグナル伝達イベントを記録することに成功しています4、5、6。ex vivo組織におけるこれらのシグナル伝達事象の高品質の画像を生成する方法論を開発することは、より複雑で現実的なシステムでこれらの事象の研究を可能にするため、非常に興味深いものである。以前のアプローチは、角膜の解剖とそれに続くUV誘発PEGゲルへの固定化を含んでいた7、8、9。固定化は、実験の過程を通して生存可能で水和されたままでなければならないため、生きた組織を扱う際に不可欠でありながら困難なステップです。さらに、固定化は組織を傷つけてはならない。PEG溶液は組織を固定化しましたが、生成された画像の解像度と品質は一貫していませんでした。そのため、3Dプリントホルダーは、無傷の地球儀を固定して、組織の損傷のリスクが少なく高品質の画像を生成するために開発されました。
アプローチ 生細胞イメージングのために無傷の ex vivo グローブを固定化するために、独自の3Dプリントホルダーが開発されました。このホルダーは、角膜を解剖することなく除核球体のイメージングを可能にし、紫外線への曝露を排除するという2つの主要な光源からの損傷を防ぎます。これらの損傷源がなければ、得られた画像は、実験的に行われた引っかき傷に対する反応をより正確に表した。さらに、3Dプリントされたホルダーは、マウスアイの正確な寸法に合わせてキャリブレーションされました。これにより、PEG溶液での固定よりもはるかに優れたフィット感が得られ、組織の動きが減少するため、低出力の対物レンズでより高品質の画像が得られます。ホルダーの上部に取り付けられたカバーバーは、実験期間中、グローブが動かないままであり、水分補給と生存能力を維持するために成長培地が適用されたときにグローブが変位しないようにします。ホルダーを正確な寸法に印刷する機能により、年齢や病気の状態に応じてさまざまなサイズのマウスの目に最適なフィット感を生成することもできます。この技術は、寸法に基づいて異なる種の目のホルダーを開発するために、より広く適用することができます。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.75 blue polylactic acid (PLA) plastic</td>
			<td>Creality (Shenzen, China)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Material for holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm Dish, No. 1.5 Coverslip, 14 mm glass diameter, Poly-D-Lysine Coated</td>
			<td>MatTek Corporation (Ashland, MA)</td>
			<td>P35GC-1.5-14-C</td>
			<td>Well for imaging.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autodesk Fusion 360 software</td>
			<td>Autodesk (San Rafael, CA).</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Software used for printing the holders.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 25 G 7/8 sterile needles single use 100 needles/box</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA)</td>
			<td>305124</td>
			<td>For experimentally-induced wounds to the globes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellMask DeepRed</td>
			<td>Invitrogen (Carlsbad, CA)</td>
			<td>C10046</td>
			<td>Cell membrane counterstain. Calcium indicator. 1:10,000 concentration with a final concentration of 1%(v/v) DMSO and 0.1% (w/v) pluronic acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Home Super Glue</td>
			<td>Walgreens (Deerfield, IL)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For attaching the holder to the imaging well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ender 3 Pro 3D printer&#160;</td>
			<td>Creality (Shenzen, China)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For printing the holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI/ImageJ</td>
			<td>ImageJ (Bethesda, MD)</td>
			<td>License Number: GPL2</td>
			<td>Softwareused for confirming consistency of wound depth and diameter between independent globes using Region of Interest analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo-4</td>
			<td>Invitrogen (Carlsbad, CA)</td>
			<td>F14201</td>
			<td>Calcium indicator. 1:100 concentration with a final concentration of 1%(v/v) DMSO and 0.1% (w/v) pluronic acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Keratinocyte Serum-Free Medium</td>
			<td>Gibco (Waltham, MA)</td>
			<td>17005042</td>
			<td>25 mg/mL bovine pituitary extract, 0.02 nM EGF, 0.3 mM CaCl2, and penicillin-streptomycin (100 units/mL, 100 &#181;g/mL, respectively) added to medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phophate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Corning, Medlabtech (Manassas, VA)</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td>Used to wash excess stain off of corneas before imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Confocal 880 Microscope with AiryScan</td>
			<td>Zeiss (Thornwood, NY)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>20x magnification objective was used</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of intact ex vivo globes using a novel 3d printed holder

角膜上皮創傷治癒は、上皮細胞上に発現するプリン作動性受容体の活性化によって開始される遊走過程である。この活性化は、細胞から細胞へと伝播するカルシウム動員イベントをもたらし、これは創傷床への細胞運動を開始するために不可欠であり、効率的な創傷治癒を促進する。Trinkaus-Randall研究室は、 ex vivo マウスグローブの角膜創傷治癒反応をリアルタイムでイメージングするための方法論を開発しました。このアプローチでは、確立されたプロトコルに従って安楽死させたマウスから無傷のグローブを取り出し、カルシウム指示色素でグローブを直ちにインキュベートします。細胞の他の特徴を染色する対比染色をこの段階で適用して、イメージングを支援し、細胞のランドマークを示すことができます。このプロトコルは、アクチンを染色するSiRアクチンや細胞膜を染色するための深赤色原形質膜染色など、対比染色に使用されるいくつかの異なる生細胞色素でうまく機能しました。創傷への反応を調べるために、25Gの針を使用して角膜上皮を損傷し、グローブを3Dプリントされたホルダーに入れます。3Dプリントされたホルダーの寸法は、実験期間中の地球儀の固定化を確実にするために調整され、さまざまなサイズの目に対応するように変更できます。創傷応答のライブセルイメージングは、共焦点顕微鏡を用いて経時的に組織全体の様々な深さで連続的に行われる。このプロトコルにより、共焦点顕微鏡で20倍の空気対物レンズを使用して、高解像度の出版品質の画像を生成できます。このプロトコルには、他の目的も使用できます。これは、 ex vivo マウスグローブでの生細胞イメージングの品質の大幅な改善を表し、神経と上皮の識別を可能にします。

このプロトコルは、出版品質のデータおよび画像を一貫して生成するために使用されてきた10。得られた画像は、以前のアプローチと比較して大幅な改善を表しています(図2)。3Dプリントされたホルダーを使用すると、角膜の層全体で画像をキャプチャでき、さまざまなz平面でのカルシウム動員を観察できます(図3)。このアプロ?...

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Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder

本研究では、3Dプリントホルダーを利用して、除核球体の高解像度ライブセルイメージングを可能にする新しい実験プロトコルについて説明します。このプロトコルを通じて、 ex vivo グローブからの創傷角膜上皮における細胞カルシウムシグナル伝達活性をリアルタイムで観察することができる。

新しい3Dプリントホルダーを使用した無傷の ex vivo グローブの生細胞イメージング

Corneal epithelial wound healing is a migratory process initiated by the activation of purinergic receptors expressed on epithelial cells. This activation ...

このプロトコルで使用される3Dプリントホルダーにより、損傷した角膜における短期の細胞シグナル伝達と長期的な細胞移動イベントをリアルタイムで監視できます。地球を無傷で、生存可能で、動かないようにすることで、このプロトコルは上皮や神経を含む角膜細胞の高品質のライブ画像を生成します。3Dプリントされたホルダーは、さまざまなサイズや種の地球儀に合わせて簡単に変更できます。また、他の領域を画像化したり、ナノインデント実験を行ったりするために、目の向きを変えることもできます。まず、安楽死させたマウスの頭を取り除いた後、すぐに氷の上に置いて組織の生存率を維持します。次に、ピンセットを使用して、それを居眠りさせることによって地球儀を核出します。そして、ピンセットで保持されている場所のすぐ下で解剖ハサミを使用して視神経をクリップします。P-35細胞培養皿で2ミリリットルの培地で、カルシウムインジケーターおよび/または細胞膜染色を含む2ミリリットルの培地で、摂氏37度、5%二酸化炭素の低照度条件下でインキュベートし、均一な染色のためにグローブを染色培地に沈めます。ホルダーをきれいなガラスボトムカバースリップに取り付けるには、ホルダーを70%エタノールで洗い、接着剤をホルダーに置きます。次に、ホルダーをガラス底カバースリップに接着し、接着剤が蛍光を発してイメージングを複雑にする可能性があるため、ホルダーの内部領域に接着剤がないことを確認します。接着剤が固まったら、ホルダーがカバースリップに対して固定されていることを確認します。滅菌スポイトを使用して染色溶液からグローブを取り除き、関心領域への組織の損傷を防ぐように注意します。滅菌リン酸緩衝生理食塩水を使用して室温で5分間グローブを洗浄し、余分な汚れを取り除き、顕微鏡に輸送するためにグローブを培地に入れます。関心のある領域で滅菌25ゲージの針を使用してグローブを巻き取るには、滅菌スポイトを使用してグローブを目の後ろから持ち上げて保持し、グローブを安定させ、転がらないようにします。引っかき傷の場合は、露出した角膜を横切って滅菌25ゲージの針をそっと動かすか、刺し傷の場合は針を中央角膜に直接そっと押して、傷が角膜基底膜を貫通しないようにします。角膜または辺縁部をホルダーの内側のカバースリップに置き、地球儀が正しく配置されていること、および関心のある部位がガラスカバースリップと接触していることを確認します。接着剤を使用して、ホルダーに接着された3Dプリントカバーを使用して安定させます。そして、これは組織の損傷を引き起こす可能性があるので、地球を取り除こうとしないでください。顕微鏡の電源を入れ、環境チャンバーを摂氏35度、二酸化炭素5%に設定し、加湿チャンバーを確認します。カバースリップホルダーと安定化された地球儀を、ライブセルイメージング技術を使用して、環境チャンバー内の顕微鏡ステージに配置し、画像化します。追加の成長培地をカバースリップに吟味して脱水を防ぎ、組織の生存率を維持し、ホルダー内の地球を覆うのに十分な培地がウェルにあることを確認します。ライブセルイメージング技術を使用して実験を開始し、低出力レーザー設定を使用して組織を保存し、組織の損傷を防ぎ、長期間の実験に適した対物レンズを使用します。データ記録用のCZIファイルの優先ファイル形式でデータを記録および保存します。3Dプリントホルダーで安定化されたX vivo角膜について、多層構造の高品質のイメージングデータが得られ、角膜の頂端層、基底層、および間質層におけるカルシウムシグナル伝達イベントが実証されました。3Dプリントホルダーに固定された角膜のZスタック画像は、引っかき傷で取得され、角膜の層全体の細胞膜とカルシウムシグナル伝達、および異なるZ平面でのカルシウム動員を視覚化しました。治癒応答中の創傷床への細胞移動を研究するために角膜の時系列実験が行われ、X、Y、またはZ方向への地球の動きがほとんどないことが判明しました。地球儀をホルダーに配置することにより、中央および角膜辺縁領域の両方で、角膜の異なる領域を視覚化できることが観察された。このプロトコルにより、創傷治癒に違いを示す疾患モデルから眼を画像化することができます。細胞シグナル伝達の異常と生きた組織の運動性を特徴付けることができます。

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder

High-throughput Screening of Carbohydrate-degrading Enzymes Using Novel Insoluble Chromogenic Substrate Assay Kits

新規不溶性発色基質アッセイキットを使用した炭水化物分解酵素のハイスループットスクリーニング

Carbohydrates active enzymes (CAZymes) have multiple roles in vivo and are widely used for industrial processing in the biofuel, textile, detergent, paper ...

生化学

Single-molecule Super-resolution Imaging of Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate in the Plasma Membrane with Novel Fluorescent Probes

新規蛍光プローブと形質膜におけるホスファチジルイノシトール4,5-ビスリン酸の単分子超解像イメージング

Phosphoinositides in the cell membrane are signaling lipids with multiple cellular functions. Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (PI(4,5)P2) is a ...

Identification of Small Molecule-binding Proteins in a Native Cellular Environment by Live-cell Photoaffinity Labeling

ライブセル光親和性標識によって、ネイティブの細胞環境における小分子結合タンパク質の同定

Identifying the molecular target(s) of small molecules is a challenging but necessary step towards understanding their mechanism of action. While several ...

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

脳膜分画：<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Subsynaptic Protein Localizationを評価するアプローチ

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Glycoproteomics of the Extracellular Matrix: A Method for Intact Glycopeptide Analysis Using Mass Spectrometry

細胞外マトリックスのグライコ：質量分析法を用いて無傷の糖ペプチドの分析のための方法

Fibrosis is a hallmark of many cardiovascular diseases and is associated with the exacerbated secretion and deposition of the extracellular matrix (ECM). ...

Fluorescence Live-cell Imaging of the Complete Vegetative Cell Cycle of the Slow-growing Social Bacterium Myxococcus xanthus

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蛍光住セル完全の栄養細胞周期の遅い成長社会細菌Myxococcus ザンサス

Fluorescence live-cell imaging of bacterial cells is a key method in the analysis of the spatial and temporal dynamics of proteins and chromosomes ...

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

多量ホモ測定器と無料、フリー、オープン ソースの明るさ解析ソフトウェアを使用しての体外校正無料定量化

Number and brightness is a calibration-free fluorescence fluctuation spectroscopy (FFS) technique for detecting protein homo-oligomerization. It can be ...

Identification of Novel CK2 Kinase Substrates Using a Versatile Biochemical Approach

多彩な生化学的アプローチを用いた新規 CK2 キナーゼ基板の識別

The study of kinase-substrate relationships is essential to gain a complete understanding of the functions of these enzymes and their downstream targets ...

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

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C.エレガンス体壁筋肉における生体内カルシウムイメージング

The model organism C. elegans provides an excellent system to perform in vivo calcium imaging. Its transparent body and genetic manipulability allow for ...

An All-in-one Sample Holder for Macromolecular X-ray Crystallography with Minimal Background Scattering

背景散乱を最小限に抑えた高分子X線結晶学用オールインワンサンプルホルダー

Macromolecular X-ray crystallography (MX) is the most prominent method to obtain high-resolution three-dimensional knowledge of biological macromolecules. ...