Name: live-cell imaging of intact ex vivo globes using a novel 3d printed holder
Uploaded: 2022-10-06T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder at JoVE.com

Vi vil gjerne anerkjenne NIH for følgende tilskuddsstøtte: RO1EY032079 (VTR), R21EY029097-01 (VTR), 1F30EY033647-01 (KS) og 5T32GM008541-24 (KS). Vi vil også anerkjenne Massachusetts Lions Eye Research Fund og New England Corneal Transplant Fund.

Prosedyrene som involverer dyrefag ble godkjent av Association for Research in Vision and Ophthalmology for bruk av dyr i oftalmisk omsorg og visjonsforskning og Boston University IACUC-protokollen (201800302).
1. Designe 3D-printede holdere og dekselstang
<ol><li>Design 3D-printede holdere og dekselstang som står for den gjennomsnittlige diameteren på musekuler og 3D-print designet (figur 1A, B).</li>
	<li>Hold diameteren på...

<ol>
	<li>Kneer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+fat+diet+induces+pre-type+2+diabetes+with+regional+changes+in+corneal+sensory+nerves+and+altered+P2X7+expression+and+localization.">High fat diet induces pre-type 2 diabetes with regional changes in corneal sensory nerves and altered P2X7 expression and localization.</a> Experimental Eye Research. 175, 44-55 (2018).</li><li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+Ca2++mobilizations:+A+quantitative+approach+to+predict+their+importance+in+cell-cell+communication+and+wound+healing.">Sustained Ca2+ mobilizations: A quantitative approach to predict their importance in cell-cell communication and wound healing.</a> PLoS One. 14 (4), 0213422 (2019).</li><li>Stepp, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wounding+the+cornea+to+learn+how+it+heals.">Wounding the cornea to learn how it heals.</a> Experimental Eye Research. 121, 178-193 (2014).</li><li>Klepeis, V. S., Cornell-Bell, A., Trinkaus-Randal, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factors+but+not+gap+junctions+play+a+role+in+injury-induced+Ca2++waves+in+epithelial+cells.">Growth factors but not gap junctions play a role in injury-induced Ca2+ waves in epithelial cells.</a> Journal of Cell Science. 114 (23), 4185-4195 (2001).</li><li>Lee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-induced+changes+in+Ca(2+)+mobilization+and+protein+phosphorylation+implicated+in+impaired+wound+healing.">Hypoxia-induced changes in Ca(2+) mobilization and protein phosphorylation implicated in impaired wound healing.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 306 (10), 972-985 (2014).</li><li>Boucher, I., Rich, C., Lee, A., Marcincin, A., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+P2Y2+receptor+mediates+the+epithelial+injury+response+and+cell+migration.">The P2Y2 receptor mediates the epithelial injury response and cell migration.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 299 (2), 411-421 (2010).</li><li>Awal, M. R., Wirak, G. S., Gabel, C. V., Connor, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collapse+of+global+neuronal+states+in+Caenorhabditis+elegans+under+isoflurane+anesthesia.">Collapse of global neuronal states in Caenorhabditis elegans under isoflurane anesthesia.</a> Anesthesiology. 133 (1), 133-144 (2020).</li><li>Burnett, K., Edsinger, E., Albrecht, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+gentle+hydrogel+encapsulation+of+living+organisms+enables+long-term+microscopy+over+multiple+hours.">Rapid and gentle hydrogel encapsulation of living organisms enables long-term microscopy over multiple hours.</a> Communications Biology. 1, 73 (2018).</li><li>Rhodes, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pannexin1:+Role+as+a+sensor+to+injury+is+attenuated+in+pretype+2+corneal+diabetic+epithelium.">Pannexin1: Role as a sensor to injury is attenuated in pretype 2 corneal diabetic epithelium.</a> Analytical Cellular Pathology. 2021, 4793338 (2021).</li><li>Segars, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age+dependent+changes+in+corneal+epithelial+cell+signaling.">Age dependent changes in corneal epithelial cell signaling.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 10, 886721 (2022).</li><li>Xu, P., Londregan, A., Rich, C., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+epithelial+and+stromal+corneal+stiffness+occur+with+age+and+obesity.">Changes in epithelial and stromal corneal stiffness occur with age and obesity.</a> Bioengineering. 7 (1), 14 (2020).</li><li>Minns, M. S., Teicher, G., Rich, C. B., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinoreceptor+P2X7+regulation+of+Ca(2+)+mobilization+and+cytoskeletal+rearrangement+is+required+for+corneal+reepithelialization+after+injury.">Purinoreceptor P2X7 regulation of Ca(2+) mobilization and cytoskeletal rearrangement is required for corneal reepithelialization after injury.</a> The American Journal of Pathology. 186 (2), 285-296 (2016).</li><li>Tadvalkar, G., Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+euthanasia+and+enucleation+on+mouse+corneal+epithelial+axon+density+and+nerve+terminal+morphology.">The impact of euthanasia and enucleation on mouse corneal epithelial axon density and nerve terminal morphology.</a> The Ocular Surface. 18 (4), 821-828 (2020).</li></ol>

Denne protokollen beskriver en levende celleavbildningsteknikk som bruker en 3D-trykt holder for å stabilisere og immobilisere intakte dyreøyne. Den er designet for å omgå flere betydelige ulemper anerkjent med tidligere levende celleavbildningsprotokoller av ex vivo hornhinnevev. Denne protokollen gir mange fordeler for levende celleavbildning av intakte globuser. Det reduserer unødvendig vevskader betydelig som kan forstyrre sårhelingsresponsen på eksperimentelt induserte ripesår. Dette inkluderer skad...

Hornhinne Hornhinnen er en klar, avaskulær struktur som dekker øyets fremre overflate som bryter lys for å muliggjøre syn og beskytter øyets indre mot skade. Siden hornhinnen er utsatt for miljøet, er den utsatt for skade fra både mekaniske årsaker (riper) og fra infeksjon. En hornhinneskade hos en ellers sunn pasient helbreder vanligvis innen 1-3 dager. Hos pasienter med underliggende tilstander, inkludert limbal stamcellemangel og type II diabetes, kan imidlertid hornhinnens sårheling forlenges kraftig1. Siden hornhinnen er svært innervert, er disse ikke-helbredende hornhinnenesårene og tilbakevendende hornhinde erosjoner svært smertefulle og reduserer livskvaliteten til pasienter som opplever dem1.
Cell signalering Når en ellers sunn hornhinne er skadet, går kalsiumsignalhendelser i cellene ved siden av såret foran og ber om cellulær migrasjon i sårsengen, hvor de lukker skaden uten risiko for arrdannelse 2,3. Disse signalhendelsene har blitt godt karakterisert i hornhinneepitelcellekulturmodeller ved bruk av levende celleavbildning2. Foreløpige eksperimenter viser betydelig mer kalsiumsignalering etter skade i ikke-diabetiske celler sammenlignet med diabetiske celler. Karakterisering av cellesignaleringshendelsene i ex vivo-globuser har imidlertid vist seg å være en teknisk utfordring.
Bildebehandling av levende celler Tidligere studier har vellykket registrert kalsiumsignaleringshendelser fra in vitro cellekulturmodeller av hornhinnens sårheling 4,5,6. Å utvikle en metodikk for å produsere bilder av høy kvalitet av disse signalhendelsene i ex vivo-vev er av stor interesse fordi det ville tillate studiet av disse hendelsene i et mer komplekst og naturtro system. Tidligere tilnærminger har involvert disseksjon av hornhinnen etterfulgt av immobilisering i en UV-indusert PEG-gel 7,8,9. Immobilisering er et viktig, men utfordrende skritt når du arbeider med levende vev, da det må forbli levedyktig og hydrert i løpet av forsøket. Videre må immobilisering ikke skade vevet. Mens PEG-løsningen immobiliserte vevet, var oppløsningen og kvaliteten på de produserte bildene ikke konsistente. Derfor ble 3D-printede holdere utviklet for å immobilisere intakte globuser for å produsere bilder av høyere kvalitet med mindre risiko for vevskader.
Tilnærmingen En unik 3D-printet holder ble utviklet for å immobilisere intakte ex vivo globuser for levende cellebilder. Denne holderen forhindrer skade fra to hovedkilder: det tillater avbildning av en enukleert klode uten behov for å dissekere hornhinnen, og det eliminerer eksponering for UV-lys. Uten disse kildene til skade representerte bildene som ble oppnådd mer nøyaktig responsen på ripeskadene som ble gjort eksperimentelt. Videre ble den 3D-printede holderen kalibrert til de nøyaktige dimensjonene til murine eye. Dette ga en mye bedre passform enn immobilisering i PEG-løsning, noe som førte til et bilde av høyere kvalitet ved lavere drevne mål på grunn av redusert vevsbevegelse. En dekselstang festet til toppen av holderen sikrer at kloden forblir immobil gjennom hele eksperimentets varighet, og at det ikke er noen forskyvning av kloden når vekstmedier påføres for å opprettholde hydrering og levedyktighet. Muligheten til å skrive ut holderen til presise dimensjoner gjør det også mulig for oss å generere en optimal passform for murine øyne i forskjellige størrelser på grunn av alder eller sykdomsstatus. Denne teknologien kan brukes bredere for å utvikle holdere for øynene til forskjellige arter basert på deres dimensjoner.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.75 blue polylactic acid (PLA) plastic</td>
			<td>Creality (Shenzen, China)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Material for holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm Dish, No. 1.5 Coverslip, 14 mm glass diameter, Poly-D-Lysine Coated</td>
			<td>MatTek Corporation (Ashland, MA)</td>
			<td>P35GC-1.5-14-C</td>
			<td>Well for imaging.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autodesk Fusion 360 software</td>
			<td>Autodesk (San Rafael, CA).</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Software used for printing the holders.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 25 G 7/8 sterile needles single use 100 needles/box</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA)</td>
			<td>305124</td>
			<td>For experimentally-induced wounds to the globes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellMask DeepRed</td>
			<td>Invitrogen (Carlsbad, CA)</td>
			<td>C10046</td>
			<td>Cell membrane counterstain. Calcium indicator. 1:10,000 concentration with a final concentration of 1%(v/v) DMSO and 0.1% (w/v) pluronic acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Home Super Glue</td>
			<td>Walgreens (Deerfield, IL)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For attaching the holder to the imaging well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ender 3 Pro 3D printer&#160;</td>
			<td>Creality (Shenzen, China)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For printing the holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI/ImageJ</td>
			<td>ImageJ (Bethesda, MD)</td>
			<td>License Number: GPL2</td>
			<td>Softwareused for confirming consistency of wound depth and diameter between independent globes using Region of Interest analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo-4</td>
			<td>Invitrogen (Carlsbad, CA)</td>
			<td>F14201</td>
			<td>Calcium indicator. 1:100 concentration with a final concentration of 1%(v/v) DMSO and 0.1% (w/v) pluronic acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Keratinocyte Serum-Free Medium</td>
			<td>Gibco (Waltham, MA)</td>
			<td>17005042</td>
			<td>25 mg/mL bovine pituitary extract, 0.02 nM EGF, 0.3 mM CaCl2, and penicillin-streptomycin (100 units/mL, 100 &#181;g/mL, respectively) added to medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phophate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Corning, Medlabtech (Manassas, VA)</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td>Used to wash excess stain off of corneas before imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Confocal 880 Microscope with AiryScan</td>
			<td>Zeiss (Thornwood, NY)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>20x magnification objective was used</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of intact ex vivo globes using a novel 3d printed holder

Kornealepitelial sårheling er en migrerende prosess initiert ved aktivering av purinerge reseptorer uttrykt på epitelceller. Denne aktiveringen resulterer i kalsiummobiliseringshendelser som forplanter seg fra celle til celle, som er avgjørende for å initiere cellulær motilitet i sårsengen, og fremmer effektiv sårheling. Trinkaus-Randall-laboratoriet har utviklet en metodikk for å avbilde hornhinnens sårhelingsrespons i ex vivo murine globuser i sanntid. Denne tilnærmingen innebærer å enukleere en intakt klode fra en mus som har blitt avlivet i henhold til etablerte protokoller og umiddelbart inkubere kloden med et kalsiumindikatorfargestoff. En motbeis som flekker andre funksjoner i cellen, kan brukes på dette stadiet for å hjelpe til med avbildning og vise cellulære landemerker. Protokollen fungerte bra med flere forskjellige levende cellefarger som ble brukt til motfarging, inkludert SiR-aktin for å farge aktin og dyprød plasmamembranflekk for å farge cellemembranen. For å undersøke responsen på et sår, er hornhinneepitelet skadet ved hjelp av en 25 G nål, og globusene er plassert i en 3D-trykt holder. Dimensjonene til den 3D-printede holderen er kalibrert for å sikre immobilisering av kloden gjennom hele eksperimentets varighet og kan endres for å imøtekomme øyne av forskjellige størrelser. Levende celleavbildning av sårresponsen utføres kontinuerlig på ulike dybder i vevet over tid ved hjelp av konfokalmikroskopi. Denne protokollen lar oss generere bilder med høy oppløsning i publikasjonskvalitet ved hjelp av et 20x luftmål på et konfokalmikroskop. Andre mål kan også brukes til denne protokollen. Det representerer en betydelig forbedring i kvaliteten på levende cellebilder i ex vivo murine globuser og tillater identifisering av nerver og epitel.

Denne protokollen har blitt brukt til konsekvent å produsere data og bilder av publiseringskvalitet10. Bildene som er oppnådd, representerer en betydelig forbedring sammenlignet med tidligere tilnærminger (figur 2). Ved hjelp av den 3D-printede holderen kan bilder tas gjennom lagene i hornhinnen, og kalsiummobilisering i forskjellige z-plan kan observeres (figur 3). Denne tilnærmingen har blitt brukt til å sammenligne celle-celle sig...

Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder at JoVE.com

Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder

Det nåværende arbeidet beskriver en ny eksperimentell protokoll som bruker en 3D-trykt holder for å muliggjøre høyoppløselig levende celleavbildning av enukleerte glober. Gjennom denne protokollen kan den cellulære kalsiumsignalaktiviteten i såret hornhinneepitel fra ex vivo-globuser observeres i sanntid.

Live-Cell Imaging av intakt Ex Vivo Globes Bruke en roman 3D-trykt holder

Corneal epithelial wound healing is a migratory process initiated by the activation of purinergic receptors expressed on epithelial cells. This activation ...

Den 3D-printede holderen som brukes i denne protokollen lar oss overvåke kortsiktig cellesignalering og langsiktige cellulære migrasjonshendelser i sårede hornhinner i sanntid. Ved å holde kloden intakt, levedyktig og immobile, produserer denne protokollen levende bilder av hornhinnen av høy kvalitet, inkludert epitel og nerver. Den 3D-printede holderen kan enkelt modifiseres for globuser av forskjellige størrelser og arter.Vi kan også orientere øynene annerledes for å avbilde andre regioner eller utføre nano indention eksperimenter. For å begynne, etter å ha fjernet hodet på en avlivet mus, legg den umiddelbart på is for å bevare vevets levedyktighet. Deretter enukleate globusene ved å prop dozing det, ved hjelp av pinsett.Og klipp optisk nerve ved hjelp av disseksjonssaks like under der den holdes av pinsetten. Inkuber globusene i to milliliter av mediet i en P-35 cellekulturskål, inkludert en kalsiumindikator og / eller cellemembranflekk i en time i en inkubator ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid med svake lysforhold, slik at kulene er nedsenket i flekkmediet for jevn farging. For å feste holderne til en ren glassbunndeksel, vask holderen i 70% etanol og legg lim på holderen.Fest deretter holderen til glassbunndekselet, slik at det ikke er lim innenfor det indre området av holderen, da lim kan fluoresceres, noe som kompliserer bildebehandling. Etter at limet stivner, må du bekrefte at holderen er festet mot dekselet. Fjern globusene fra fargeløsningen ved hjelp av de sterile pipetterne, og pass på å forhindre vevskader på interesseområdet.Vask kulene i fem minutter ved romtemperatur, bruk steril fosfatbufret saltvann for å fjerne overflødig flekk og plasser globusene i mediet for transport til mikroskopet. For å vikle globusene ved hjelp av en steril 25-gauge nål i interesseområdet, plukk opp og hold kloden fra baksiden av øyet, ved hjelp av en steril pipette for å holde kloden stabil og forhindre at den ruller. For et skrapesår, flytt forsiktig en steril 25 gauge nål over den eksponerte hornhinnen eller trykk nålen forsiktig direkte inn i den sentrale hornhinnen for et punkteringssår, slik at såret ikke gjennomsyrer hornhinnen kjellermembranen.Plasser hornhinnen eller limbalområdet på dekselet i det indre området av holderen, mens du bekrefter at kloden er plassert riktig og at stedet av interesse er i kontakt med glassdekselet. Stabiliser ved hjelp av det 3D-printede dekselet som er festet til holderen, ved hjelp av lim. Og ikke prøv å fjerne kloden, da dette kan forårsake vevskader.Slå på mikroskopet og sett miljøkammeret til 35 grader Celsius og 5% karbondioksid og kontroller det fuktede kammeret. Plasser dekselholderen og den stabiliserte globusen på mikroskopstadiet i miljøkammeret og bildet, ved hjelp av levende celleavbildningsteknikker. Ved veterinær ytterligere vekstmedier på dekselet slip for å forhindre dehydrering og opprettholde vev levedyktighet, slik at det er nok medium i brønnen til å dekke kloden i holderen.Begynn eksperimenter ved hjelp av levende celleavbildningsteknikker, mens du bruker laserinnstillinger med lav effekt for å bevare vevet og forhindre vevskader og passende mål for langvarige eksperimenter. Ta opp og lagre data i det foretrukne filformatet til CZI-filer for dataopptak. Høykvalitets bildedata av flerlagsstruktur ble oppnådd for X vivo hornhinnen, stabilisert med en 3D-trykt holder, som demonstrerte kalsiumsignaleringshendelser i de apikale, basale og stromale lagene i hornhinnen.Z-stack-bilder av en hornhinne, immobilisert i den 3D-printede holderen, ved et skrapesår ble oppnådd for å visualisere cellemembranene og kalsiumsignalering gjennom lagene i hornhinnen og kalsiummobilisering i forskjellige Z-plan. Et tidsserieeksperiment av en hornhinne ble utført for å studere den cellulære migrasjonen inn i sårsengen under helbredelsesresponsen, og avslørte liten bevegelse av kloden i X-, Y- eller Z-retningene. Det ble observert at ved å plassere kloden i holderen, kan forskjellige regioner av hornhinnen, både i sentrum og i hornhinnen limbalområdet, visualiseres.Denne protokollen lar oss avbilde øyne fra sykdomsmodeller som viser forskjeller i sårheling. Vi kan karakterisere avvik i cellesignalering og motilitet i levende vev.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder

High-throughput Screening of Carbohydrate-degrading Enzymes Using Novel Insoluble Chromogenic Substrate Assay Kits

Høy throughput screening av karbohydrat-nedbrytende enzymer Bruke Novel Uløselig kromogen substratmetode Kits

Carbohydrates active enzymes (CAZymes) have multiple roles in vivo and are widely used for industrial processing in the biofuel, textile, detergent, paper ...

Single-molecule Super-resolution Imaging of Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate in the Plasma Membrane with Novel Fluorescent Probes

Single-molekyl Super-Resolution Imaging of phosphatidylinositol 4,5-bisfosfat i plasmamembranen med Novel fluorescerende prober

Phosphoinositides in the cell membrane are signaling lipids with multiple cellular functions. Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (PI(4,5)P2) is a ...

Identification of Small Molecule-binding Proteins in a Native Cellular Environment by Live-cell Photoaffinity Labeling

Identifisering av lite molekyl bindende proteiner i en Native Cellular Miljø via Live-celle Photoaffinity Merking

Identifying the molecular target(s) of small molecules is a challenging but necessary step towards understanding their mechanism of action. While several ...

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Hjernemembran Fraksjonering: An<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Tilnærming til vurdering av subsynaptisk protein lokalisering

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Glycoproteomics of the Extracellular Matrix: A Method for Intact Glycopeptide Analysis Using Mass Spectrometry

Glycoproteomics av ​​den ekstracellulære matrise: En metode for Intakt glykopeptidreagens analyse ved hjelp av massespektrometri

Fibrosis is a hallmark of many cardiovascular diseases and is associated with the exacerbated secretion and deposition of the extracellular matrix (ECM). ...

Fluorescence Live-cell Imaging of the Complete Vegetative Cell Cycle of the Slow-growing Social Bacterium Myxococcus xanthus

Fluorescence Live-cell Imaging of the Complete Vegetative Cell Cycle of the Slow-growing Social Bacterium Myxococcus xanthus

Fluorescens Live-celle Imaging av komplett Vegetative cellen syklus av langsom voksende sosial bakterie en cellemembran

Fluorescence live-cell imaging of bacterial cells is a key method in the analysis of the spatial and temporal dynamics of proteins and chromosomes ...

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Kalibrering-fri In Vitro kvantifisering av Protein Homo-oligomerization med kommersielle instrumentering og gratis, åpen kildekode lysstyrke analyseprogramvare

Number and brightness is a calibration-free fluorescence fluctuation spectroscopy (FFS) technique for detecting protein homo-oligomerization. It can be ...

Identification of Novel CK2 Kinase Substrates Using a Versatile Biochemical Approach

Identifikasjon av romanen CK2 Kinase underlag med en allsidig biokjemiske tilnærming

The study of kinase-substrate relationships is essential to gain a complete understanding of the functions of these enzymes and their downstream targets ...

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

Inne vivo kalsium tenkelig inne C. elegans kropp mur muskelen

The model organism C. elegans provides an excellent system to perform in vivo calcium imaging. Its transparent body and genetic manipulability allow for ...

An All-in-one Sample Holder for Macromolecular X-ray Crystallography with Minimal Background Scattering

En alt-i-ett sample holder for makro molekylære X-ray Crystallography med minimal bakgrunn spredning

Macromolecular X-ray crystallography (MX) is the most prominent method to obtain high-resolution three-dimensional knowledge of biological macromolecules. ...