Name: surgical technique for superior cervical ganglionectomy in a murine model
Uploaded: 2022-12-02T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Surgical Technique for Superior Cervical Ganglionectomy in a Murine Model at JoVE.com

V.W. werd ondersteund door NIH T32CA009685. R.J.W. werd gesteund door NIH R01CA219534. De Memorial Sloan Kettering Cancer Center Core Facilities werden ondersteund door NIH P30CA008748.

De hier beschreven dierprocedures zijn goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committee in het Memorial Sloan Kettering Cancer Center. Acht weken oude mannelijke en vrouwelijke NSG-muizen werden hier gebruikt. De dieren werden verkregen uit een commerciële bron (zie tabel met materialen). De instrumenten worden gesteriliseerd, het chirurgische werkoppervlak wordt gedesinfecteerd, het huidoppervlak van het dier wordt gedesinfecteerd en de chirurg draagt steriele handschoenen tijdens de pro...

<ol>
	<li>Magnon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autonomic+nerve+development+contributes+to+prostate+cancer+progression.">Autonomic nerve development contributes to prostate cancer progression.</a> Science. 341 (6142), 1236361 (2013).</li><li>Zhao, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Denervation+suppresses+gastric+tumorigenesis.">Denervation suppresses gastric tumorigenesis.</a> Science Translational Medicine. 6 (250), 115 (2014).</li><li>Zahalka, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenergic+nerves+activate+an+angio-metabolic+switch+in+prostate+cancer.">Adrenergic nerves activate an angio-metabolic switch in prostate cancer.</a> Science. 358 (6361), 321-326 (2017).</li><li>Amit, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+p53+drives+neuron+reprogramming+in+head+and+neck+cancer.">Loss of p53 drives neuron reprogramming in head and neck cancer.</a> Nature. 578 (7795), 449-454 (2020).</li><li>Renz, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+signaling+via+muscarinic+receptors+directly+and+indirectly+suppresses+pancreatic+tumorigenesis+and+cancer+stemness.">Cholinergic signaling via muscarinic receptors directly and indirectly suppresses pancreatic tumorigenesis and cancer stemness.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1458-1473 (2018).</li><li>Lucido, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innervation+of+cervical+carcinoma+is+mediated+by+cancer-derived+exosomes.">Innervation of cervical carcinoma is mediated by cancer-derived exosomes.</a> Gynecologic Oncology. 154 (1), 228-235 (2019).</li><li>Peterson, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basal+cell+carcinoma+preferentially+arises+from+stem+cells+within+hair+follicle+and+mechanosensory+niches.">Basal cell carcinoma preferentially arises from stem cells within hair follicle and mechanosensory niches.</a> Cell Stem Cell. 16 (4), 400-412 (2015).</li><li>Maronde, E., Stehle, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mammalian+pineal+gland:+Known+facts,+unknown+facets.">The mammalian pineal gland: Known facts, unknown facets.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 18 (4), 142-149 (2007).</li><li>Yamazaki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+circadian+organization+in+the+rat.">Ontogeny of circadian organization in the rat.</a> Journal of Biological Rhythms. 24 (1), 55-63 (2009).</li><li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=S100++cells:+A+new+neuro-immune+cross-talkers+in+lymph+organs.">S100+ cells: A new neuro-immune cross-talkers in lymph organs.</a> Scientific Reports. 3 (1), 1114 (2013).</li><li>Dieguez, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melatonin+protects+the+retina+from+experimental+nonexudative+age-related+macular+degeneration+in+mice.">Melatonin protects the retina from experimental nonexudative age-related macular degeneration in mice.</a> Journal of Pineal Research. 68 (4), 12643 (2020).</li><li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bilateral+superior+cervical+ganglionectomy+attenuates+the+progression+of+&#946;-aminopropionitrile-induced+aortic+dissection+in+rats.">Bilateral superior cervical ganglionectomy attenuates the progression of &#946;-aminopropionitrile-induced aortic dissection in rats.</a> Life Sciences. 193, 200-206 (2018).</li><li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+superior+cervical+sympathetic+ganglion+in+ischemia+reperfusion-induced+acute+kidney+injury+in+rats.">The role of the superior cervical sympathetic ganglion in ischemia reperfusion-induced acute kidney injury in rats.</a> Frontiers in Medicine. 9, 792000 (2022).</li><li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superior+cervical+ganglionectomy+alters+gut+microbiota+in+rats.">Superior cervical ganglionectomy alters gut microbiota in rats.</a> American Journal of Translational Research. 14 (3), 2037-2050 (2022).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-Adrenergic+signaling+induces+Notch-mediated+salivary+gland+progenitor+cell+control.">&#946;-Adrenergic signaling induces Notch-mediated salivary gland progenitor cell control.</a> Stem Cell Reports. 16 (11), 2813-2824 (2021).</li><li>Boyd, A., Aragon, I. V., Abou Saleh, L., Southers, D., Richter, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cAMP-phosphodiesterase+4+(PDE4)+controls+&#946;-adrenoceptor-+and+CFTR-dependent+saliva+secretion+in+mice.">The cAMP-phosphodiesterase 4 (PDE4) controls &#946;-adrenoceptor- and CFTR-dependent saliva secretion in mice.</a> Biochemical Journal. 478 (10), 1891-1906 (2021).</li><li>Smith, B., Butler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+long-term+propranolol+on+the+salivary+glands+and+intestinal+serosa+of+the+mouse.">The effects of long-term propranolol on the salivary glands and intestinal serosa of the mouse.</a> The Journal of Pathology. 124 (4), 185-187 (1978).</li><li>Sucharov, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-Adrenergic+receptor+antagonism+in+mice:+A+model+for+pediatric+heart+disease.">&#946;-Adrenergic receptor antagonism in mice: A model for pediatric heart disease.</a> Journal of Applied Physiology. 115 (7), 979-987 (2013).</li><li>Ding, C., Walcott, B., Keyser, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alpha1-+and+beta1-adrenergic+modulation+of+lacrimal+gland+function+in+the+mouse.">The alpha1- and beta1-adrenergic modulation of lacrimal gland function in the mouse.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 48 (4), 1504-1510 (2007).</li><li>Grisanti, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prior+&#946;-blocker+treatment+decreases+leukocyte+responsiveness+to+injury.">Prior &#946;-blocker treatment decreases leukocyte responsiveness to injury.</a> JCI Insight. 5 (9), 99485 (2019).</li><li>Alito, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autonomic+nervous+system+regulation+of+murine+immune+responses+as+assessed+by+local+surgical+sympathetic+and+parasympathetic+denervation.">Autonomic nervous system regulation of murine immune responses as assessed by local surgical sympathetic and parasympathetic denervation.</a> Acta Physiologica, Pharmacologica et Therapeutica Latinoamericana. 37 (3), 305-319 (1987).</li><li>Yun, H., Lathrop, K. L., Hendricks, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+central+role+for+sympathetic+nerves+in+herpes+stromal+keratitis+in+mice.">A central role for sympathetic nerves in herpes stromal keratitis in mice.</a> Ophthalmology &amp; Visual Science. 57 (4), 1749-1756 (2016).</li><li>Haug, S. R., Heyeraas, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+sympathectomy+on+experimentally+induced+pulpal+inflammation+and+periapical+lesions+in+rats.">Effects of sympathectomy on experimentally induced pulpal inflammation and periapical lesions in rats.</a> Neuroscience. 120 (3), 827-836 (2003).</li><li>Savastano, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+standardized+surgical+technique+for+rat+superior+cervical+ganglionectomy.">A standardized surgical technique for rat superior cervical ganglionectomy.</a> Journal of Neuroscience Methods. 192 (1), 22-33 (2010).</li><li>Garcia, J. B., Romeo, H. E., Basabe, J. C., Cardinali, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+superior+cervical+ganglionectomy+on+insulin+release+by+murine+pancreas+slices.">Effect of superior cervical ganglionectomy on insulin release by murine pancreas slices.</a> Journal of the Autonomic Nervous System. 22 (2), 159-165 (1988).</li><li>Ziegler, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+sympathetic+denervation+attenuates+myocardial+inflammation+and+improves+cardiac+function+after+myocardial+infarction+in+mice.">Local sympathetic denervation attenuates myocardial inflammation and improves cardiac function after myocardial infarction in mice.</a> Cardiovascular Research. 114 (2), 291-299 (2017).</li><li>Getsy, P. M., Coffee, G. A., Hsieh, Y. H., Lewis, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+superior+cervical+ganglia+modulate+ventilatory+responses+to+hypoxia+independently+of+preganglionic+drive+from+the+cervical+sympathetic+chain.">The superior cervical ganglia modulate ventilatory responses to hypoxia independently of preganglionic drive from the cervical sympathetic chain.</a> Journal of Applied Physiology. 131 (2), 836-857 (2021).</li><li>Dieguez, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superior+cervical+gangliectomy+induces+non-exudative+age-related+macular+degeneration+in+mice.">Superior cervical gangliectomy induces non-exudative age-related macular degeneration in mice.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 11 (2), 031641 (2018).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperactivation+of+sympathetic+nerves+drives+depletion+of+melanocyte+stem+cells.">Hyperactivation of sympathetic nerves drives depletion of melanocyte stem cells.</a> Nature. 577 (7792), 676-681 (2020).</li><li>Pirzgalska, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sympathetic+neuron-associated+macrophages+contribute+to+obesity+by+importing+and+metabolizing+norepinephrine.">Sympathetic neuron-associated macrophages contribute to obesity by importing and metabolizing norepinephrine.</a> Nature Medicine. 23 (11), 1309-1318 (2017).</li><li>Kajimura, D., Paone, R., Mann, J. J., Karsenty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxo1+regulates+Dbh+expression+and+the+activity+of+the+sympathetic+nervous+system+in+vivo.">Foxo1 regulates Dbh expression and the activity of the sympathetic nervous system in vivo.</a> Molecular Metabolism. 3 (7), 770-777 (2014).</li></ol>

Dit protocol beschrijft een muismodel voor de chirurgische unilaterale ablatie van SCG-input. Deze techniek maakt het mogelijk om de effecten van adrenerge innervatie in verschillende omgevingen te bestuderen. Daarnaast kan het gereseceerde sympathische ganglion ook in 3D-matrigelcultuur worden gekweekt voor in vitro experimenten30.
Studies met SCGx zijn meestal uitgevoerd bij ratten, omdat hun grotere anatomie gemakkelijker anatomische visualisatie en dissecti...

Meerdere studies hebben gemeld dat de zenuwen in de micro-omgeving van de tumor een actieve rol spelen bij het ondersteunen van tumorprogressie. Van de ablatie van adrenerge sympathische zenuwen is aangetoond dat het de ontwikkeling en verspreiding van tumoren bij prostaat- en maagkanker in vivo 1,2,3 schaadt, terwijl de farmacologische blokkade van adrenerge receptoren de tumorgroei bij hoofd-halskanker remt4. Sympathische neurale betrokkenheid is ook beschreven in pancreas-, cervicale en basale celcarcinoomprogressie 5,6,7.
Binnen het sympathische zenuwstelsel is het superieure cervicale ganglion (SCG) het enige ganglion van de sympathische romp dat het hoofd innerveert. De SCG reguleert verschillende fysiologische functies, zoals speekselsecretie en circadiaans ritme, en innerveert direct de cervicale lymfeklieren 8,9,10. De SCG is ook betrokken bij pathologische processen zoals maculaire degeneratie11 en de progressie van aortadissectie12. Bovendien is gemeld dat resectie van de SCG ischemie reperfusie-geïnduceerde acute nierschadeverergert 13 en ook de darmmicrobiota bij rattenverandert 14.
De volledige ablatie van de SCG in een muismodel zou een waardevolle experimentele techniek zijn om onderzoek naar kanker en het autonome zenuwstelsel mogelijk te maken. Hoewel veel studies farmacologische adrenerge receptorblokkade hebben gebruikt als een adrenerge ablatie 15,16,17,18,19,20, zorgt chirurgische resectie voor volledige, unilaterale adrenerge ablatie terwijl de noodzaak van herhaalde farmacologische interventie en de bijbehorende bijwerkingen wordt vermeden 21,22,23.
Chirurgische resectie van de SCG is beschreven bij ratten24, en de meeste rapporten die het effect van superieure cervicale ganglionectomie (SCGx) bestuderen, hebben het rattenmodel gebruikt. In vergelijking met het rattenmodel is SCGx technisch uitdagender bij muizen vanwege de kleine omvang van de SCG. Muizen zijn echter relatief gemakkelijker te hanteren, kosteneffectiever en vatbaarder voor genetische manipulatie. Garcia et al. waren een van de eersten die SCGx bij muizen rapporteerden en het bleek de insulineafgifte te beïnvloeden25. Meer recent beschreven Ziegler et al. SCGx bij muizen op basis van de gepubliceerde techniek beschreven voor ratten24,26. Deze en andere artikelen beschrijven een methode waarbij de gemeenschappelijke halsslagader (CCA) eerst wordt geïdentificeerd en ontleed, en de SCG vervolgens wordt verwijderd uit de bifurcatie van de CCA21,22,27,28. In dit artikel wordt een minder invasieve en veiligere techniek beschreven bij muizen die de dissectie van de CCA vermijdt, waardoor de ernstigste complicatie van deze procedure - bloeden door een verwonding aan de CCA - wordt geminimaliseerd.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti-Tyrosine Hydroxylase Antibody</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial Tears Lubricant Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>59399-162-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curity 2 x 2 Inch Gauze Sponge 8 Ply, Sterile</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>1806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Derf Needle Holder</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>1177K00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5/45 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7b Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11270-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ETHILON Nylon Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>698H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypoallergenic Surgical Tape</td>
			<td>3M Blenderm</td>
			<td>70200419342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Induction Chamber, 2 Liter</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>941444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>1001936060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair</td>
			<td>Church &#38; Dwight Co., Inc</td>
			<td>40002957</td>
			<td>chemical hair removing agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NORADRENALINE RESEARCH ELISA</td>
			<td>Labor Diagnostika Nord (Rocky Mountain Diagnostics)</td>
			<td>BA E-5200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSG Mouse</td>
			<td>Jackson Laboratory</td>
			<td>JAX:005557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-Iodine Swabstick</td>
			<td>PDI</td>
			<td>S41350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Webcol Alcohol Preps</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>5110</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

surgical technique for superior cervical ganglionectomy in a murine model

Groeiend bewijs suggereert dat het sympathische zenuwstelsel een belangrijke rol speelt bij de progressie van kanker. Adrenerge innervatie reguleert de speekselkliersecretie, circadiaans ritme, maculaire degeneratie, immuunfunctie en hartfysiologie. Murine chirurgische sympathectomie is een methode voor het bestuderen van de effecten van adrenerge innervatie door volledige, unilaterale adrenerge ablatie mogelijk te maken, terwijl de noodzaak van herhaalde farmacologische interventie en de bijbehorende bijwerkingen wordt vermeden. Chirurgische sympathectomie bij muizen is echter technisch uitdagend vanwege de kleine omvang van het superieure cervicale ganglion. Deze studie beschrijft een chirurgische techniek voor het betrouwbaar identificeren en reseceren van het superieure cervicale ganglion om het sympathische zenuwstelsel te aborteren. De succesvolle identificatie en verwijdering van het ganglion worden gevalideerd door de fluorescerende sympathische ganglia in beeld te brengen met behulp van een transgene muis, het syndroom van Horner na resectie te identificeren, kleuring voor adrenerge markers in de gereseceerde ganglia en waargenomen verminderde adrenerge immunofluorescentie in de doelorganen na sympathectomie. Dit model maakt toekomstige studies van kankerprogressie mogelijk, evenals andere fysiologische processen die worden gereguleerd door het sympathische zenuwstelsel.

Dit protocol beschrijft de chirurgische verwijdering van de SCG in een muismodel. Figuur 2 illustreert de anatomische oriëntatiepunten, waaronder het CCA, de voorste halsader en de SCG. Bij dissectie (figuur 2A) is de rechter voorste halsader te zien langs de zijrand van de luchtpijp. Omdat het zich dieper bevindt dan de voorste halsader, worden de linker CCA en de bifurcatie ervan in de interne halsslagader (ICA) en externe halsslagader (ECA) slechts vaag late...

Watch this Scientific Journal Video about Surgical Technique for Superior Cervical Ganglionectomy in a Murine Model at JoVE.com

Surgical Technique for Superior Cervical Ganglionectomy in a Murine Model

Het huidige protocol beschrijft een muismodel van de ablatie van adrenerge innervatie door het superieure cervicale ganglion te identificeren en te reseceren.

Chirurgische techniek voor superieure cervicale ganglionectomie in een muizenmodel

Growing evidence suggests that the sympathetic nervous system plays an important role in cancer progression. Adrenergic innervation regulates salivary ...

Het sympathische zenuwstelsel speelt een belangrijke rol bij de progressie van kanker en andere ziekten. Chirurgische sympathectomie is een waardevolle methode om deze processen te bestuderen door volledige unilaterale adrenerge ablatie te induceren. Deze techniek vermijdt de bijwerkingen geassocieerd met farmacologische remming van het sympathische zenuwstelsel.Bovendien is het minder invasief dan eerder beschreven methoden omdat het dissectie van de halsslagader voorkomt. Bij het uitvoeren van deze techniek kan het moeilijk zijn om de juiste ruimte te betreden waar het ganglion zich bevindt en het te onderscheiden van het vet. Het identificeren van het oriëntatiepunt en de praktijk is daarom essentieel.De anatomie ziet er iets anders uit wanneer deze in beweging en onontleed is, dus visuele demonstratie biedt een betere gids voor het identificeren van het anatomische oriëntatiepunt dat de sleutel is voor deze techniek. Begin met het aanbrengen van actuele oftalmische zalf op de verdoofde muis om oogletsel en droogheid te voorkomen. Plaats de muis onder een ontleedmicroscoop aan de dorsale kant en handhaaf de inhalatie-anesthesie met behulp van een precisieverdamper en neuskegel.Beveilig beide voorpoten met hypoallergene tape. Reinig het geschoren ventrale aspect van de nek met povidonjodium en veeg vervolgens af met 70% alcohol. Nadat u het reinigingsproces nog twee keer hebt herhaald, plaatst u een steriel gordijn over de operatieplaats.Gebruik vervolgens een kleine schaar en maak een 1,5 centimeter middellijn huidincisie op het ventrale aspect van de nek van ongeveer twee millimeter onder de kin tot twee millimeter boven de sternale inkeping. Scheid de huid van de onderliggende fascia door aan elke kant een puntige schaar onder de huid in te brengen en te verspreiden. Trek vervolgens de randen van de huid zijdelings in met een tang om de onderliggende fascia en submandibulaire speekselklieren bloot te leggen.Trek de submandibulaire klieren caudaal met een tang om de onderliggende spieren te onthullen. Zoek vervolgens de kruising van de achterste buik van de digastrische spier en de omohyoïde spier. Steek de punt van een schuine tang van 45 graden op deze kruising zijdelings naar de voorste halsader om een opening in de bovenliggende diepe cervicale fascia te doorboren en te spreiden.Houd dit raam open met de 45 graden schuine tang en breid deze opening breder uit door spreidmanoeuvres uit te voeren met een paar gebogen tangen in de andere hand. Lokaliseer het superieure cervicale ganglion of SCG op de zijwand van de onthulde ruimte. Terwijl u de opening met de tang met de andere hand handhaaft, pakt u de SCG voorzichtig vast met een tang en trekt u deze uit de opening om deze beter in beeld te brengen.Zodra de SCG in beeld is, grijpt u de laterale basis van de SCG waar deze nog steeds aan de omliggende weefsels is bevestigd. Trek met de andere hand de SCG langzaam en voorzichtig meerdere keren in ventrale en caudale richting in om het ganglion beetje bij beetje geleidelijk te avulseren. Houd het ganglion intact tijdens deze manoeuvre om ervoor te zorgen dat er geen resterende ganglionresten achterblijven.Laat langzaam de basis van het ganglion los en controleer op bloedingen door te zoeken naar bloedpooling. Als u klaar bent, verplaatst u de speekselklieren terug naar hun normale anatomische posities. Benader en sluit de huid met behulp van eenvoudige onderbroken 5-0 nylon hechtingen.Tijdens de dissectie liep de rechter voorste halsader langs de laterale grens van de luchtpijp. Toen P0 tdTomato transgene muis met rode fluorescerende neuronen onder een fluorescerende microscoop werd onderzocht, werd de fluorescerende nervus vagus lateraal naar de gemeenschappelijke halsslagader waargenomen en werd de fluorescerende SCG waargenomen bij de bifurcatie van de gemeenschappelijke halsslagader lateraal aan de voorste halsslagader. De gereseceerde SCG in een transgene muis werd bevestigd door zijn rode fluorescentie in vergelijking met de niet-fluorescerende SCG-controle.De immunofluorescente kleuring bevestigde een tyrosinehydroxylase, een marker voor adrenerge zenuwen. Na superieure cervicale ganglionectomie werd ptosis, dat wil zeggen het hangen van het ooglid, waargenomen, wat een teken is van het Horner-syndroom. Immunofluorescentiekleuring voor een tyrosinehydroxylase op de rechter submandibulaire speekselklier na rechter superieure cervicale ganglionectomie bevestigde de succesvolle ablatie van de adrenerge signalering met afwezige tyrosinehydroxylase zenuwkleuring.Daarentegen behield de linker controle submandibulaire klier zijn adrenerge input en intact een tyrosine hydroxylase zenuwkleuring die ook werd bevestigd door kwantificering. ELISA-kwantificering van noradrenaline in de speekselklier bevestigde een significante vermindering van noradrenaline-expressie in de submandibulaire klier aan de kant van superieure cervicale ganglionectomie in tegenstelling tot de controle-schijnchirurgiezijde. Wees geduldig en voorzichtig bij het verwijderen van de SCG.Avulse het langzaam op een fragmentarische manier. Anders kan de halsslagader die verbonden is met de SCG gemakkelijk gewond raken, wat resulteert in bloedingen.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Detailed Protocol for Characterizing the Murine C1498 Cell Line and its Associated Leukemia Mouse Model

Een gedetailleerd protocol voor het karakteriseren van het Muizen C1498 Cell Line en de bijbehorende Leukemie muismodel

The intravenous injection of C1498 cells into syngeneic or congenic mice has been performed since 1941. These injections result in the development of ...

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

De<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Disc Tumor Model: visualisatie en kwantificering van genexpressie en Tumor Invasiviteit met behulp van genetische Mozaïeken

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

Chirurgische Procedures en Methodologie voor een Preklinisch Murine Model van<em&gt; De Novo</em&gt; Maagkanker Metastase

A rate-limiting aspect of transgenic mouse models of mammary adenocarcinoma is that primary tumor burden in mammary tissue typically defines study ...

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

Een muizen orthotope Blaas Tumor Model en Tumor Detection System

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Een muismodel van vermoeidheid geïnduceerd door Peripheral Bestraling

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

Een In Vivo lymfkliertest Ischiaszenuw Model van Perineural invasie

Cancer cells invade nerves through a process termed perineural invasion (PNI), in which cancer cells proliferate and migrate in the nerve ...

The Application of 1% Methylene Blue Dye As a Single Technique in Breast Cancer Sentinel Node Biopsy

De toepassing van 1% methyleenblauw kleurstof als een enkele techniek in borstkanker Sentinel knooppunt biopsie

In this study, we injected 1% methylene blue dye (MBD) into the subareolar or peritumoral space of the breast. In the case of breast conserving surgery ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Een bioluminescente en fluorescerende Orthotopic Syngeneic lymfkliertest Model van androgeen-afhankelijke en castratie-resistente prostaatkanker

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer

Een orthotopisch resectiemuismodel van alvleesklierkanker

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer ...

A Murine Ommaya Xenograft Model to Study Direct-Targeted Therapy of Leptomeningeal Disease

Een Murine Ommaya Xenograft-model om direct-gerichte therapie van leptomeningeale ziekte te bestuderen

Leptomeningeal disease (LMD) is an uncommon type of central nervous system (CNS) metastasis to the cerebral spinal fluid (CSF). The most common cancers ...