Name: surgical technique for superior cervical ganglionectomy in a murine model
Uploaded: 2022-12-02T13:30:00
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Q. W.はNIH T32CA009685の支援を受けました。R. J. W. は NIH R01CA219534 の支援を受けました。メモリアルスローンケタリングがんセンターのコア施設は、NIH P30CA008748によってサポートされました。

ここに記載されている動物の手順は、メモリアルスローンケタリングがんセンターの施設動物管理および使用委員会によって承認されました。ここでは、8週齢の雄および雌のNSGマウスを使用した。動物は商業的な供給源から入手した( 材料表を参照)。器具は滅菌され、外科作業面は消毒され、動物の皮膚表面は消毒され、外科医は処置中ずっと滅菌手袋を着用します。
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<ol>
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W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+signaling+via+muscarinic+receptors+directly+and+indirectly+suppresses+pancreatic+tumorigenesis+and+cancer+stemness.">Cholinergic signaling via muscarinic receptors directly and indirectly suppresses pancreatic tumorigenesis and cancer stemness.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1458-1473 (2018).</li><li>Lucido, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innervation+of+cervical+carcinoma+is+mediated+by+cancer-derived+exosomes.">Innervation of cervical carcinoma is mediated by cancer-derived exosomes.</a> Gynecologic Oncology. 154 (1), 228-235 (2019).</li><li>Peterson, S. 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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+standardized+surgical+technique+for+rat+superior+cervical+ganglionectomy.">A standardized surgical technique for rat superior cervical ganglionectomy.</a> Journal of Neuroscience Methods. 192 (1), 22-33 (2010).</li><li>Garcia, J. B., Romeo, H. E., Basabe, J. C., Cardinali, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+superior+cervical+ganglionectomy+on+insulin+release+by+murine+pancreas+slices.">Effect of superior cervical ganglionectomy on insulin release by murine pancreas slices.</a> Journal of the Autonomic Nervous System. 22 (2), 159-165 (1988).</li><li>Ziegler, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+sympathetic+denervation+attenuates+myocardial+inflammation+and+improves+cardiac+function+after+myocardial+infarction+in+mice.">Local sympathetic denervation attenuates myocardial inflammation and improves cardiac function after myocardial infarction in mice.</a> Cardiovascular Research. 114 (2), 291-299 (2017).</li><li>Getsy, P. M., Coffee, G. A., Hsieh, Y. H., Lewis, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+superior+cervical+ganglia+modulate+ventilatory+responses+to+hypoxia+independently+of+preganglionic+drive+from+the+cervical+sympathetic+chain.">The superior cervical ganglia modulate ventilatory responses to hypoxia independently of preganglionic drive from the cervical sympathetic chain.</a> Journal of Applied Physiology. 131 (2), 836-857 (2021).</li><li>Dieguez, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superior+cervical+gangliectomy+induces+non-exudative+age-related+macular+degeneration+in+mice.">Superior cervical gangliectomy induces non-exudative age-related macular degeneration in mice.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 11 (2), 031641 (2018).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperactivation+of+sympathetic+nerves+drives+depletion+of+melanocyte+stem+cells.">Hyperactivation of sympathetic nerves drives depletion of melanocyte stem cells.</a> Nature. 577 (7792), 676-681 (2020).</li><li>Pirzgalska, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sympathetic+neuron-associated+macrophages+contribute+to+obesity+by+importing+and+metabolizing+norepinephrine.">Sympathetic neuron-associated macrophages contribute to obesity by importing and metabolizing norepinephrine.</a> Nature Medicine. 23 (11), 1309-1318 (2017).</li><li>Kajimura, D., Paone, R., Mann, J. J., Karsenty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxo1+regulates+Dbh+expression+and+the+activity+of+the+sympathetic+nervous+system+in+vivo.">Foxo1 regulates Dbh expression and the activity of the sympathetic nervous system in vivo.</a> Molecular Metabolism. 3 (7), 770-777 (2014).</li></ol>

このプロトコルは、SCG入力の外科的片側アブレーションのためのマウスモデルを記述する。この技術は、様々な設定におけるアドレナリン作動性神経支配の効果を研究することを可能にする。さらに、切除された交感神経節は、 in vitro 実験30用の3Dマトリゲル培養で増殖させることもできる。
SCGxを含む研究は、解剖学的構造が大きいため、解剖?...

複数の研究により、腫瘍微小環境の神経が腫瘍の進行をサポートする上で積極的な役割を果たすことが報告されています。アドレナリン作動性交感神経のアブレーションは、in vivoで前立腺がんおよび胃がんの腫瘍の発生と播種を損なうことが示されています1,2,3一方、アドレナリン受容体の薬理学的遮断は頭頸部がんの腫瘍増殖を阻害します4。交感神経の関与は、膵臓癌、子宮頸癌、および基底細胞癌の進行においても説明されています5,6,7。
交感神経系内では、上頸部神経節(SCG)が頭を神経支配する交感神経幹の唯一の神経節です。SCGは、唾液分泌や概日リズムなどの様々な生理機能を調節し、頸部リンパ節を直接神経支配する8,9,10。SCGはまた、黄斑変性症11および大動脈解離12の進行などの病理学的プロセスにも関与している。さらに、SCGの切除は、虚血再灌流誘発性急性腎障害を悪化させ13、ラットの腸内細菌叢を変化させることが報告されています14。
マウスモデルにおけるSCGの完全なアブレーションは、癌と自律神経系の研究を可能にする貴重な実験技術を表すでしょう。多くの研究がアドレナリン作動性アブレーションとして薬理学的アドレナリン作動性受容体遮断を利用しているが15,16,17,18,19,20、外科的切除は、反復的な薬理学的介入の必要性および関連する副作用を回避しながら、完全な片側アドレナリン作動性アブレーションを可能にする21,22,23。
SCGの外科的切除はラット24で記載されており、上頸部神経節切除術(SCGx)の効果を研究しているほとんどの報告はラットモデルを採用しています。ラットモデルと比較して、SCGxは、SCGのサイズが小さいため、マウスでは技術的により困難です。ただし、マウスは比較的取り扱いが簡単で、費用効果が高く、遺伝子操作に適しています。Garciaらは、マウスでSCGxを最初に報告した人の1人であり、インスリン放出に影響を与えることが判明しました25。より最近になって、Zieglerらは、ラットについて記載された公表された技術に基づいてマウスにおけるSCGxを記載した24、26。この記事および他の記事は、総頸動脈(CCA)が最初に同定され解剖され、続いてSCGがCCA21、22、27、28の分岐部から除去される方法を説明する。この記事では、CCAの解剖を回避し、それによってこの手順の最も深刻な合併症であるCCAの損傷による出血を最小限に抑える、より侵襲的で安全な技術をマウスで説明します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti-Tyrosine Hydroxylase Antibody</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial Tears Lubricant Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>59399-162-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curity 2 x 2 Inch Gauze Sponge 8 Ply, Sterile</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>1806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Derf Needle Holder</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>1177K00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5/45 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7b Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11270-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ETHILON Nylon Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>698H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypoallergenic Surgical Tape</td>
			<td>3M Blenderm</td>
			<td>70200419342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Induction Chamber, 2 Liter</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>941444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>1001936060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair</td>
			<td>Church &#38; Dwight Co., Inc</td>
			<td>40002957</td>
			<td>chemical hair removing agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NORADRENALINE RESEARCH ELISA</td>
			<td>Labor Diagnostika Nord (Rocky Mountain Diagnostics)</td>
			<td>BA E-5200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSG Mouse</td>
			<td>Jackson Laboratory</td>
			<td>JAX:005557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-Iodine Swabstick</td>
			<td>PDI</td>
			<td>S41350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Webcol Alcohol Preps</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>5110</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

surgical technique for superior cervical ganglionectomy in a murine model

交感神経系が癌の進行に重要な役割を果たすことを示唆する証拠が増えています。アドレナリン作動性神経支配は、唾液腺分泌、概日リズム、黄斑変性症、免疫機能、および心臓生理学を調節します。マウス外科的交感神経切除術は、反復的な薬理学的介入の必要性と関連する副作用を回避しながら、完全な片側アドレナリン作動性アブレーションを可能にすることにより、アドレナリン作動性神経支配の効果を研究する方法です。しかし、マウスの外科的交感神経切除術は、上頸部神経節のサイズが小さいため、技術的に困難です。本研究では,上頸部神経節を確実に同定・切除し,交感神経系を切除するための術法について述べる.神経節の同定と除去の成功は、トランスジェニックマウスを使用して蛍光交感神経節を画像化し、切除後のホーナー症候群を特定し、切除された神経節のアドレナリン作動性マーカーを染色し、交感神経切除後の標的臓器におけるアドレナリン作動性免疫蛍光の低下を観察することによって検証されます。このモデルは、交感神経系によって調節される他の生理学的プロセスと同様に、癌の進行の将来の研究を可能にします。

このプロトコルは、マウスモデルにおけるSCGの外科的除去を記述する。 図2 は、CCA、前頸静脈、およびSCGを含む解剖学的ランドマークを示しています。解剖(図2A)では、右前頸静脈が気管の外側境界に沿って流れているのを見ることができます。前頸静脈よりも深い位置にあるため、左CCAとその内頸動脈(ICA)および外頸動脈(ECA)への分岐部は、静脈?...

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Surgical Technique for Superior Cervical Ganglionectomy in a Murine Model

本プロトコルは、上頸部神経節を同定および切除することによるアドレナリン作動性神経支配のアブレーションのマウスモデルを記載する。

マウスモデルにおける上頚部神経節摘出術の手術手技

Growing evidence suggests that the sympathetic nervous system plays an important role in cancer progression. Adrenergic innervation regulates salivary ...

交感神経系は、がんの進行やその他の病気に重要な役割を果たしています。外科的交感神経切除術は、完全な片側アドレナリン作動性アブレーションを誘発することによってこれらのプロセスを研究するための貴重な方法です。この技術は、交感神経系の薬理学的阻害に関連する副作用を回避する。さらに、頸動脈の解離を回避するため、前述の方法よりも侵襲性が低い。このテクニックを実行するとき、神経節が存在する適切なスペースに入り、それを脂肪と区別するのは難しいかもしれません。したがって、ランドマークと実践を特定することが不可欠です。解剖学的構造は、動いているときと解剖されていないときはわずかに異なって見えるため、視覚的なデモンストレーションは、この技術の鍵となる解剖学的ランドマークを特定する方法に関するより良いガイドを提供します。眼の損傷や乾燥を防ぐために、麻酔をかけたマウスに局所眼科用軟膏を塗布することから始めます。マウスを背側の解剖顕微鏡の下に置き、精密気化器とノーズコーンを使用して吸入麻酔を維持します。低刺激性テープで両前肢を固定します。首の剃った腹側をポビドンヨードできれいにしてから、70%アルコールで拭きます。洗浄プロセスをさらに2回繰り返した後、手術部位の上に滅菌ドレープを置きます。次に、小さなハサミを使用して、あごの下約2ミリメートルから胸骨のノッチの2ミリメートル上まで、首の腹側に1.5センチメートルの正中線の皮膚切開を行います。両側の皮膚の下に先のとがったハサミを挿入して広げることにより、下にある筋膜から皮膚を分離します。次に、鉗子で皮膚の縁を横方向に引っ込めて、下にある筋膜と顎下唾液腺を露出させます。鉗子で顎下腺を尾側に引っ張って、下にある筋肉を明らかにします。次に、顎二腹筋と舌骨筋の後腹の接合部を見つけます。前頸静脈の外側のこの接合部に45度の角度の鉗子の先端を挿入して、上にある深い頸部筋膜に開口部を突き刺して広げます。45度の角度の鉗子でこの窓を開いたままにし、もう一方の手で湾曲した鉗子のペアで広げ操作を実行して、この開口部を広げます。明らかにされた空間の側壁に上頸部神経節またはSCGを見つけます。もう一方の手で鉗子で開口部を維持しながら、鉗子でSCGをそっとつかみ、開口部から引き出して見やすくします。SCGが見えたら、周囲の組織に付着したままのSCGの外側基部をつかみます。一方、SCGを腹側と尾方向にゆっくりとゆっくりと複数回引っ込め、神経節を少しずつ徐々に剥離させます。この操作中は神経節を無傷に保ち、残りの神経節の残骸が残らないようにします。神経節の基部をゆっくりと解放し、血液の溜まりを探して出血をチェックします。完了したら、唾液腺を通常の解剖学的位置に戻します。単純な中断された5-0ナイロン縫合糸を使用して皮膚を近似して閉じます。解剖中、右前頸静脈は気管の外側境界に沿ってコースをたどりました。赤色蛍光ニューロンを有するP0 tdTomatoトランスジェニックマウスを蛍光顕微鏡で調べたところ、総頸動脈に横方向に流れる蛍光迷走神経が、前頸静脈外側の総頸動脈の分岐部に蛍光SCGが観察された。トランスジェニックマウスにおいて切除されたSCGは、非蛍光SCG対照と比較したその赤色蛍光によって確認された。免疫蛍光染色により、アドレナリン作動性神経のマーカーであるチロシンヒドロキシラーゼが確認された。上頸部神経節郭清術後、眼瞼下垂である眼瞼下垂が認められ、これはホーネル症候群の徴候です。右上頚部神経節摘出術後の右顎下唾液腺のチロシン水酸化酵素の免疫蛍光染色で,チロシン水酸化酵素神経染色を欠いたアドレナリン作動性シグナルのアブレーションが成功したことを確認した.対照的に、左対照顎下腺はアドレナリン作動性入力を維持し、チロシンヒドロキシラーゼ神経染色を無傷で維持し、これも定量によって確認された。唾液腺におけるノルエピネフリンのELISA定量は、対照偽手術側とは対照的に、上頸部神経節摘出術側の顎下腺におけるノルエピネフリン発現の有意な減少を確認した。SCGを取り外すときは、辛抱強く穏やかにしてください。少しずつゆっくりとそれを悶えます。そうしないと、SCGに接続された頸動脈が簡単に損傷し、出血する可能性があります。

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The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

ザ<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;成虫盤腫瘍モデル：遺伝的モザイクを用いた遺伝子発現と腫瘍侵襲性の可視化と定量化

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

前臨床マウスモデルのための外科手術手順および方法論<em&gt;デ・ノヴォ</em&gt;乳がん転移

A rate-limiting aspect of transgenic mouse models of mammary adenocarcinoma is that primary tumor burden in mammary tissue typically defines study ...

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

マウス同所性膀胱腫瘍モデルおよび腫瘍検出システム

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

周辺照射による疲労のマウスモデル

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

神経周囲浸潤のIn Vivoマウスの坐骨神経モデル

Cancer cells invade nerves through a process termed perineural invasion (PNI), in which cancer cells proliferate and migrate in the nerve ...

The Application of 1% Methylene Blue Dye As a Single Technique in Breast Cancer Sentinel Node Biopsy

乳癌センチネルノード生検における単一の技術としての1%メチレン色素の応用

In this study, we injected 1% methylene blue dye (MBD) into the subareolar or peritumoral space of the breast. In the case of breast conserving surgery ...

A 3D Spheroid Model for Glioblastoma

神経膠芽腫の3次元スフェロイドモデル

Two-dimensional (2D) cell cultures do not mimic in vivo tumor growth satisfactorily. Therefore, three-dimensional (3D) culture spheroid models were ...

An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer

膵臓癌の正交性切除マウスモデル

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer ...

A Murine Ommaya Xenograft Model to Study Direct-Targeted Therapy of Leptomeningeal Disease

レプトメニンゲレス病の直接標的療法を研究するマウス・オンマヤ異種移植片モデル

Leptomeningeal disease (LMD) is an uncommon type of central nervous system (CNS) metastasis to the cerebral spinal fluid (CSF). The most common cancers ...