Name: tick artificial membrane feeding for ixodes scapularis
Uploaded: 2022-11-30T14:00:00
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1. 진드기 막 챔버 준비
<ol><li>유리 평면 또는 암 스탠드의 세라믹 코팅 금속베이스와 같은 평평하고 비 다공성 인 표면을 70 % 에탄올로 닦아서 준비한 다음 플라스틱 랩의 단일 층으로 덮어 플라스틱 랩이 평평하고 기포 나 주름이 없는지 확인하십시오 ( 그림 1A 참조).</li>
	<li>준비된 표면에 100% 레이온 렌즈 청소지를 테이프로 붙입니다. 용지의 네 면 모두에 테...

<ol>
	<li>Rosenberg, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+signs:+trends+in+reported+vectorborne+disease+cases+-+United+States+and+territories,+2004-2016.">Vital signs: trends in reported vectorborne disease cases - United States and territories, 2004-2016.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 67 (17), 496-501 (2018).</li><li>Busch, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Widespread+movement+of+invasive+cattle+fever+ticks+(Rhipicephalus+microplus)+in+southern+Texas+leads+to+shared+local+infestations+on+cattle+and+deer.">Widespread movement of invasive cattle fever ticks (Rhipicephalus microplus) in southern Texas leads to shared local infestations on cattle and deer.</a> Parasites &amp; Vectors. 7, 188 (2014).</li><li>S&#252;ss, J., Klaus, C., Gerstengarbe, F. W., Werner, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+makes+ticks+tick?+Climate+change,+ticks,+and+tick-borne+diseases.">What makes ticks tick? Climate change, ticks, and tick-borne diseases.</a> Journal of Travel Medicine. 15 (1), 39-45 (2008).</li><li>Gray, J. S., Dautel, H., Estrada-Pe&#241;a, A., Kahl, O., Lindgren, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+climate+change+on+ticks+and+tick-borne+diseases+in+Europe.">Effects of climate change on ticks and tick-borne diseases in Europe.</a> Interdisciplinary Perspectives on Infectious Diseases. 2009, 593232 (2009).</li><li>Sonenshine, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of Ticks. , (1991).</li><li>Schwan, T. G., Piesman, J., Golde, W. T., Dolan, M. C., Rosa, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+an+outer+surface+protein+on+Borrelia+burgdorferi+during+tick+feeding.">Induction of an outer surface protein on Borrelia burgdorferi during tick feeding.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 92 (7), 2909-2913 (1995).</li><li>Massung, R. F., Priestley, R. A., Miller, N. J., Mather, T. N., Levin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inability+of+a+variant+strain+of+Anaplasma+phagocytophilum+to+infect+mice.">Inability of a variant strain of Anaplasma phagocytophilum to infect mice.</a> The Journal of Infectious Diseases. 188 (11), 1757-1763 (2003).</li><li>Koci, J., Bernard, Q., Yang, X., Pal, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Borrelia+burgdorferi+surface+protein+Lmp1+facilitates+pathogen+dissemination+through+ticks+as+studied+by+an+artificial+membrane+feeding+system.">Borrelia burgdorferi surface protein Lmp1 facilitates pathogen dissemination through ticks as studied by an artificial membrane feeding system.</a> Scientific Reports. 8 (1), 1910 (2018).</li><li>Levin, M. L., Schumacher, L. B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+for+maintenance+of+multi-host+ixodid+ticks+in+the+laboratory.">Manual for maintenance of multi-host ixodid ticks in the laboratory.</a> Experimental and Applied Acarology. 70 (3), 343-367 (2016).</li><li>Hart, T., Yang, X., Pal, U., Lin, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Lyme+borreliae+proteins+promoting+vertebrate+host+blood-specific+spirochete+survival+in+Ixodes+scapularis+nymphs+using+artificial+feeding+chambers.">Identification of Lyme borreliae proteins promoting vertebrate host blood-specific spirochete survival in Ixodes scapularis nymphs using artificial feeding chambers.</a> Ticks and Tick-Borne Diseases. 9 (5), 1057-1063 (2018).</li><li>Hart, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+tropism+determination+by+convergent+evolution+of+immunological+evasion+in+the+Lyme+disease+system.">Host tropism determination by convergent evolution of immunological evasion in the Lyme disease system.</a> PLoS Pathogens. 17 (7), (2021).</li><li>Bernard, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+in+early+immune+evasion+strategies+of+a+bacterial+pathogen.">Plasticity in early immune evasion strategies of a bacterial pathogen.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (16), 3788-3797 (2018).</li><li>Pierce, A. E., Pierce, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+note+on+the+cultivation+of+Boophilus+microplus+(Canestrini,+1887)+(Ixodidae:+Acarina)+on+the+embyonated+hen+egg.">A note on the cultivation of Boophilus microplus (Canestrini, 1887) (Ixodidae: Acarina) on the embyonated hen egg.</a> Australian Veterinary Journal. 32 (6), 144-146 (1956).</li><li>Doube, B. M., Kemp, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+temperature,+relative+humidity+and+host+factors+on+the+attachment+and+survival+of+Boophilus+microplus+(Canestrini)+larvae+to+skin+slices.">The influence of temperature, relative humidity and host factors on the attachment and survival of Boophilus microplus (Canestrini) larvae to skin slices.</a> International Journal for Parasitology. 9 (5), 449-454 (1979).</li><li>Kr&#246;ber, T., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+feeding+assay+to+test+acaricides+for+control+of+hard+ticks.">An in vitro feeding assay to test acaricides for control of hard ticks.</a> Pest Management Science. 63 (1), 17-22 (2007).</li><li>Kuhnert, F., Diehl, P. A., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+life-cycle+of+the+bont+tick+Amblyomma+hebraeum+in+vitro.">The life-cycle of the bont tick Amblyomma hebraeum in vitro.</a> International Journal for Parasitology. 25 (8), 887-896 (1995).</li><li>Kr&#246;ber, T., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+feeding+assays+for+hard+ticks.">In vitro feeding assays for hard ticks.</a> Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).</li><li>Andrade, J. J., Xu, G., Rich, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+silicone+membrane+for+in+vitro+feeding+of+Ixodes+scapularis+(Ixodida:+Ixodidae).">A silicone membrane for in vitro feeding of Ixodes scapularis (Ixodida: Ixodidae).</a> Journal of Medical Entomology. 51 (4), 878-879 (2014).</li><li>Oliver, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+of+immature+Ixodes+scapularis+(Acari:+Ixodidae)+by+membrane+feeding.">Infection of immature Ixodes scapularis (Acari: Ixodidae) by membrane feeding.</a> Journal of Medical Entomology. 53 (2), 409-415 (2016).</li><li>Oliver, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+dynamics+and+antibiotic+elimination+of+symbiotic+Rickettsia+buchneri+in+the+tick+Ixodes+scapularis+(Acari:+Ixodidae).">Growth dynamics and antibiotic elimination of symbiotic Rickettsia buchneri in the tick Ixodes scapularis (Acari: Ixodidae).</a> Applied and Environmental Microbiology. 87 (3), (2021).</li><li>Graham, E. E., Poland, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+Fluon+conditioning+for+capturing+cerambycid+beetles+in+different+trap+designs+and+persistence+on+panel+traps+over+time.">Efficacy of Fluon conditioning for capturing cerambycid beetles in different trap designs and persistence on panel traps over time.</a> Journal of Economic Entomology. 105 (2), 395-401 (2012).</li><li>Munderloh, U. G., Liu, Y., Wang, M., Chen, C., Kurtti, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment,+maintenance+and+description+of+cell+lines+from+the+tick+Ixodes+scapularis.">Establishment, maintenance and description of cell lines from the tick Ixodes scapularis.</a> Journal of Parasitology. 80 (4), 533-543 (1994).</li><li>Lehane, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+single+and+coinfections+of+human+pathogens+in+Ixodes+ticks+from+five+geographical+regions+in+the+United+States,+2013-2019.">Prevalence of single and coinfections of human pathogens in Ixodes ticks from five geographical regions in the United States, 2013-2019.</a> Ticks and Tick-Borne Diseases. 12 (2), (2021).</li><li>Gonz&#225;lez, J., Bickerton, M., Toledo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+artificial+membrane+feeding+for+ixodid+ticks.">Applications of artificial membrane feeding for ixodid ticks.</a> Acta Tropica. 215, (2021).</li><li>Kr&#243;l, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+transmission+paths+for+three+different+Bartonella+spp.+in+Ixodes+ricinus+ticks+using+artificial+feeding.">Evaluating transmission paths for three different Bartonella spp. in Ixodes ricinus ticks using artificial feeding.</a> Microorganisms. 9 (5), 901 (2021).</li><li>Anderson, J. F., Magnarelli, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+ticks.">Biology of ticks.</a> Infectious Disease Clinics of North America. 22 (2), 195-215 (2008).</li></ol>

진드기의 인공 막 공급은 다양한 실험 절차에 유용한 도구를 제공하지만 모든 응용 분야에서 동물 사료를 대체 할 가능성은 없습니다. 동물 먹이없이 모든 생애 단계에서 진드기의 큰 식민지를 유지하는 것은 일반적으로지지 할 수 없습니다. 대신, 인공 사료 공급 시스템은 모델 숙주에 의해 지원되지 않는 병원체로 진드기를 감염시키거나, 단순화 된 사료 공급 환경에서 진드기에 대한 화합물 또...

진드기 매개 질병은 전 세계 인간과 동물의 건강에 큰 영향을 미치며 2004년부터 2016년까지 미국에서 발생한 모든 매개체 관련 질병의 2/3 이상을 차지합니다1. 또한 최근 몇 년 동안 사례 수가 증가하고 있으며 더 많은 사람과 가축이 진드기 및 관련 질병의 영향을 받고 있습니다 2,3. 사례 수의 증가 추세에는 여러 가지 원인이있을 수 있지만 기후 변화는 중요한 요소입니다 3,4. 진드기 매개 질병 사례의 지속적인 증가는 진드기와 진드기가 전염시키는 병원체 간의 관계를 조사하기 위한 새로운 도구를 개발해야 할 필요성을 강조합니다.
진드기는 먹이를 먹는 동안 생리학 및 유전자 발현의 변화를 겪고 이러한 변화가 병원체 전파에 중요한 역할을하는 것으로 알려져 있습니다 5,6. 특히 설치류 모델이 특정 병원체에 감염되기 쉽지 않은 상황에서 동물 모델을 사용하여 병원체 전파 및 획득에 대한 전체 및 부분 섭식의 영향을 조사하는 연구를 수행하는 것은 어려울 수 있습니다. 예를 들어, Anaplasma phagocytophilum Variant-1 균주는 Ixodes scapularis와 사슴 사이에서 자연적으로 전염되지만 마우스를 감염시킬 수 없으므로 실험실7에서 진드기 감염을 복잡하게 만듭니다. 인공 사료 공급 시스템은 또한 전염 또는 감염을 억제하는 유전자 결실을 갖는 형질 전환 돌연변이의 사용을 통해 Borrelia burgdorferi와 같은 병원체를 연구하는 데 도움이 될 수 있습니다8. 인공 수유 시스템을 사용하면 감염이나 전염이 진드기 측에서만 발생하도록함으로써 연구자가 유전자의 역할을 분리하여 그러한 연구를 혼란스럽게 할 수있는 숙주 반응을 분리하는 데 도움이됩니다.
유사하게, 질병 및 동물 전염과 관련된 진드기의 일부 생활 단계는 일반적인 실험실 모델 종을 먹도록 유도되지 않을 수 있습니다. 예를 들어, Ixodes 견갑골 암컷은 더 큰 동물, 일반적으로 토끼9를 먹여야합니다. 실험실 실험을 위해 종종 접근 할 수 있지만, 토끼를 사용하기위한 관리 및 축산 요구 사항은 작은 설치류의 요구 사항을 초과하며 일부 실험실에서는 금지 될 수 있습니다. 다른 진드기 종, 특히 수의학 우려 종은 대부분의 실험실에서 사용하기에 실용적이지 않은 소나 기타 큰 동물에게 먹여야 합니다. 인공 막 공급과 같은 체외 수유 및 감염 방법은 크거나 이국적인 숙주 동물을 사용하는 대안을 제공합니다.
또한 인공 사료 공급 시스템을 사용하면 전통적인 동물 사료 공급 방법으로는 불가능할 수있는 특정 분석이 가능합니다. 그러한 예 중 하나는 혈액 공급원을 공급 메커니즘으로부터 분리함으로써, 상이한 숙주의 혈액이 B. burgdorferi 전달에서 가질 수있는 역할의 검사가 가능해진다10. 숙주 혈액과 숙주 면역 반응이없는 경우 혈액 자체가하는 역할에 대한 이러한 검사는 병원체 전파주기를 이해하는 데 중요한 요소이며 인공 공급 시스템이 답을 도울 수있는 요소입니다11. 또한 숙주에서 전염 성공 및 확립을 조사하는 대신 사료 공급 중 병원체의 정확한 전달 수를 정량화하는 것이 가능해집니다 8,12.
딱딱한 진드기를 위해 만들어진 최초의 인공 먹이 막 중 일부는 1950 년대와 1960 년대에 동물 가죽이나 동물 유래 막으로 만들어졌습니다13,14. 이러한 멤브레인의 생물학적 특성으로 인해 새로운 멤브레인의 생산과 유통 기한에 문제가있었습니다. 1990 년대에는 실리콘 함침15,16으로 그물, 종이 또는 직물의 뒷면을 사용하는 완전 인공 멤브레인이 개발되었습니다. 실리콘은 물리적 특성이 피부의 신축성과 약간의 점착성과 생체 고유의 특성을 모방하기 때문에 이상적이었습니다. 이를 바탕으로 이 기술의 기반이 된 Krober와 Guerin은 I. ricinus17의 인공 공급을 위한 실리콘 함침 레이온 막 공급 기술을 설명했습니다.
밀접하게 관련된 종인 I. scapularis에 대한 방법의 개선은 막 함침에 사용되는 실리콘의 경도, 막 생산을위한 제조법, 챔버의 치수 및 부착 자극제에 현저한 차이를 가져 왔습니다. 이 연구에서보고 된 개선은 I. 견갑골에 사용하기 위해 Krober 및 Guerin을 기반으로 한 실리콘 기반 멤브레인을 개발 한 Andrade et al.이보고 한 것과 유사한 막 특성을 가져 왔지만, 실리콘 함침 단계에는 차이가 있으며, 이는 I. scapularis15의 미성숙 수명 단계에이 프로토콜을 활용할 수있는 유연성을 허용합니다. 18. 이 연구에서는 또한 이 방법의 반복 사용을 기반으로 한 추가 및 기술 변경, 성공적인 피드를 초래하는 모범 사례 및 발생할 수 있는 문제 해결에 대해 설명합니다. 이 방법은 모든 활성 생활 단계를 먹이고, 진드기를 병원성 박테리아로 감염시키고, 진드기를 여러 용량의 항생제19,20에 노출시키는 데 사용되었습니다. 표시된 인공 막 공급 방법은 I. 견갑골,이 방법은 막 두께를 약간 수정하면 다른 진드기 종에 쉽게 적용 할 수 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>00-10 Hardness Silicone</td>
			<td>Smooth-On</td>
			<td>Ecoflex 00-10</td>
			<td>Trial size from Smooth-On Store</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>00-50 Hardness Silicone</td>
			<td>Smooth-On</td>
			<td>Ecoflex 00-50</td>
			<td>Trial size from Smooth-On Store</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 Hardness Silicone</td>
			<td>Smooth-On</td>
			<td>Mold Star 30</td>
			<td>Trial size from Smooth-On Store</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well cell culture plates</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine triphosphate (ATP)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>A1852-1VL</td>
			<td>Used to make an aqueous solution of 3 mM ATP that has been filter sterlized via 0.2 micometer filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine blood</td>
			<td>HemoStat</td>
			<td>DBB500</td>
			<td>Mechanically defibrinated; 500 mL is usually sufficient for one experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clingwrap</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-305654&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Paper</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>09-790-2C</td>
			<td>Autoclave and let cool before using. Can use Fine quality instead of medium too</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluon (aqueous polytetrafluoroethylene)</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>2871</td>
			<td>Available from other sources such as https://canada-ant-colony.com/products/fluon-ptfe-10ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>G8270-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexane</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>139386-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens paper</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>11-995</td>
			<td>100% rayon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nystatin &#160;</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>N-750-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>S37440&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin/fungizone</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-096</td>
			<td>Or equivalent generic with concentration as follows (10,000 units/mL of penicillin, 10,000 &#181;g/mL of streptomycin, and 25 &#181;g/mL of Amphotericin B)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phagostimulant</td>
			<td>Made in House</td>
			<td></td>
			<td>Collected from prior tick feeds</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polycarbonate Pipe</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>8585K204&#160;</td>
			<td>Cut to 45 mm length, 1.25 inch outer diameter, 1 inch inner diameter. Cutting requires a chop saw grinding wheel.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber O-rings</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>9452K38&#160;</td>
			<td>5 mm thick, 1.25 inch inner diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft touch forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470315-238&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super glue</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>cyanoacrylate glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unryu paper&#160;</td>
			<td>Art supply stores</td>
			<td></td>
			<td>mulberry fiber 10 g/m2. Purchased at Wet Paint art supply store, St. Paul, MN, USA</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tick artificial membrane feeding for ixodes scapularis

진드기 및 관련 질병은 공중 보건 및 수의학 부담으로 인해 중요한 연구 주제입니다. 그러나 연구 및 사육 중 진드기의 먹이 요구 사항은 실험 질문이나 실험실에서 진드기 및 관련 병원체를 연구하는 능력을 제한 할 수 있습니다. 인공 막 사료 공급 시스템은 이러한 문제를 줄이고 전통적인 동물 사료 공급 시스템으로는 불가능했을 수있는 새로운 연구 길을 열 수 있습니다. 이 연구는 모든 Ixodes 견갑골 수명 단계에서 공급 및 충혈 성공을 위해 정제 된 인공 막 공급 시스템을 설명합니다. 더욱이, 본 연구에서 기술된 인공 막 공급 시스템은 원하는 막 두께의 간단한 정제를 통해 다른 진드기 종과 함께 사용하도록 변형될 수 있다. 인공 막 공급 시스템의 이점은 시스템의 노동 집약도, 수유 성공에 영향을 미칠 수있는 추가 환경 요인, 진드기의 새로운 종 및 생활 단계에 대한 기술을 개선해야 할 필요성에 의해 상쇄됩니다.

성공적인 수유는 부분 또는 전체 충혈이 필요한지 여부에 달려 있습니다. 성공적으로 공급 I. 견갑골은 성인을위한 건메탈 그레이의 그늘을 바꾸고 막에서 스스로 분리됩니다. 그러나 적어도 완두콩 크기 인 경우 먹이를 마칠 때 막에서 분리 될 수 있습니다. 미성숙 단계의 경우 I. 견갑골, 완전히 충혈 된 진드기의 크기는 다양하며 성인과 달리 색 변화를 나타내지 않기 때문에 진드?...

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Tick Artificial Membrane Feeding for Ixodes scapularis

여기에 제시된 것은 다양한 진드기 수명 단계의 부분적 또는 전체 충혈을 허용하기 위해 인공 막 시스템을 통해 시험관 내에서 진드기를 혈액으로 공급하는 방법입니다.

Ixodes 견갑골에 대한 진드기 인공 막 공급

Ticks and their associated diseases are an important topic of study due to their public health and veterinary burden. However, the feeding requirements of ...

인공 막 공급은 이전에 수행되었지만 우리의 프로토콜은 설정이 더 간단하고 약간의 수정을 통해 다른 진드기 종에 적용 할 수 있습니다. 인공 막 공급의 주요 장점은 동물 사료를 통해 실현 가능하지 않을 수있는 병원체 및 치료법에 노출 될 수 있다는 것입니다. 이 인공 막 공급 시스템은 이상적인 식균 자극제에 대한 테스트와 이상적인 막 두께에 대한 수정을 통해 다른 절지 동물 종에 적용될 수 있습니다.올바른 멤브레인 두께를 생산하려면 약간의 연습이 필요합니다. 마이크로 미터를 사용하여 멤브레인의 여러 위치에서 두께를 측정하십시오. 우리 연구실의 박사후 연구원인 Benjamin Cull이 절차를 시연하는 데 도움을 줄 것입니다.시작하려면 70 % 에탄올로 팔 스탠드의 유리판 또는 세라믹 코팅 금속베이스와 같은 평평하고 비 다공성 표면을 닦은 다음 단일 플라스틱 랩으로 덮으십시오. 플라스틱 랩이 평평하고 기포나 주름이 없는지 확인하십시오. 준비된 표면에 100% 레이온 렌즈 청소지를 테이프로 붙입니다.용지의 네 면 모두에 테이프로 평평하고 약간 팽팽한지 확인합니다. 0010 경도 실리콘 혼합물을 실리콘 키트의 각 부분 5 밀리리터를 측정하여 일회용 용기에 준비합니다. 두 액체를 가볍게 혼합하고 1.5 밀리리터의 헥산을 첨가하십시오.혼합물이 균질하고 완전히 혼합 될 때까지 계속 혼합하십시오. 작은 스퀴지를 사용하여 실리콘 혼합물을 렌즈 용지 위에 분배하고 실리콘이 렌즈 용지에 스며들도록 1분 동안 그대로 두십시오. 꾸준히, 소량의 아래쪽 압력을 사용하여 스퀴지로 여분의 실리콘을 옆으로 긁어냅니다.아래쪽 압력을 가하지 않고 스퀴지로 두 번째 패스를 수행하여 실리콘 라인을 제거하고 매끄러운 층을 생성합니다. 유충의 경우에만 공급 챔버의 상단을 Fluon 불소 중합체 수지에 여러 번 담그고 적용 사이에 건조시켜 일관된 층을 생성합니다. 밀폐된 화학 물질 또는 생물안전 캐비닛과 같은 먼지가 없는 환경에서 최소 24시간 동안 경화되도록 멤브레인을 그대로 두십시오.다음으로, 실리콘 믹스 A와 B를 동일한 부분으로 혼합하여 챔버를 멤브레인에 부착하기 위해 30 경도 실리콘 혼합물을 준비합니다. 폴리카보네이트 챔버를 실리콘 혼합물에 약 1/4인치를 담근 다음 테이프가 겹치지 않도록 주의하면서 멤브레인 시트에 놓습니다. 부착 된 실리콘이 최소 24 시간 동안 경화되도록하십시오.메스를 사용하여 부착 된 각 챔버 주변의 멤브레인을 조심스럽게 자르고 가장자리를 트리밍하여 측면을 많이 긁지 않고 6 웰 플레이트의 우물에 부드럽게 맞을 수 있도록합니다. 멤브레인의 추가를 최대화하기 위해 챔버 외부에 충분한 재료를 허용하십시오. 멤브레인 시트의 각 모서리와 중앙에서 남은 멤브레인의 작은 조각을 자릅니다.각 조각에서 플라스틱 랩을 제거하고 마이크로 미터로 조각을 측정하여 평균 멤브레인 두께를 결정합니다. 챔버당 하나의 O-링과 함께 공급 챔버를 유리 비커에 넣고 섭씨 121도에서 최소 20분 동안 오토클레이브하여 살균합니다. 챔버를 사용하기 전에 식히십시오.미리 준비된 오토클레이브 멤브레인 챔버를 꺼내고 그 주위에 O-링을 배치한 후 멤브레인을 덮을 만큼 충분한 70% 에탄올로 각 챔버를 채웁니다. 6웰 플레이트에 5분 동안 그대로 둔 다음 챔버와 멤브레인 사이 및 멤브레인 자체에 누출이 있는지 확인합니다. 챔버에서 에탄올을 비운 다음 생물 안전 캐비닛 또는 층류 후드 내부에서 자연 건조시킵니다.혈액의 보체를 가열하고 활성화하려면 섭씨 56도에서 40 분 동안 가열하고 기계적으로 제세동 된 소 혈액에 포도당 리터당 2g을 보충하십시오. 멤브레인이 건조되면 약 20 마이크로 리터의 식균 자극제를 챔버 내부에 바르고 챔버를 기울여 표면 주위로 퍼뜨립니다. 식균 자극제가 건조하면 브러시 또는 집게로 진드기를 챔버에 빠르게 추가하십시오.수조의 열로 인해 찢어질 수 있으므로 상단을 파라필름으로 밀봉하십시오. 그런 다음 우물 또는 챔버 당 5 밀리리터의 열과 활성화 된 혈액을 원추형 튜브에 넣고 섭씨 36 도로 설정된 수조에 넣으십시오. 혈액 5 밀리리터 당 3 밀리몰 ATP 5 마이크로 리터와 페니실린 스트렙토 마이신 곰팡이 존 50 마이크로 리터를 튜브에 추가하고 4.5 밀리리터의 혈액을 6 웰 플레이트의 우물로 옮깁니다.챔버를 웰에 부드럽게 넣고 챔버의 O- 링 높이를 조정하여 멤브레인이 혈액에 앉지 만 측면 주변의 혈액 농도가 우물을 넘지 않도록합니다. 그런 다음 혈액과 막 사이에 기포가 형성되지 않도록 우물을 혈액에 비스듬히 놓습니다. 6웰 플레이트의 뚜껑을 공급실 위에 놓습니다.챔버가 있는 6개의 웰 플레이트를 준비된 섭씨 34도의 수조와 뚜껑에 넣습니다. 웰당 5마이크로리터의 3밀리몰 ATP와 50마이크로리터의 100X 페니실린 스트렙토마이신 진균지대를 혈액 튜브에 추가하고 4.5밀리리터의 혈액을 새로운 6웰 플레이트의 웰로 옮깁니다. 수조에서 진드기 챔버가있는 6 개의 웰 플레이트를 꺼내고 우물에서 챔버를 제거합니다.챔버와 멤브레인의 외부를 멸균된 1X PBS 10ml로 헹구어 혈액을 제거합니다. 오토클레이브 여과지를 사용하여 멤브레인과 챔버를 부드럽게 두드려 건조시켜 과도한 PBS를 제거합니다. 챔버 내부에 많은 응결이 있는 경우 새 파라필름으로 밀봉하기 전에 오토클레이브 여과지로 젖은 부분을 두드려 건조시킵니다.그런 다음 챔버 상단의 파라 필름을 교체하십시오. 진드기 챔버를 신선한 혈액이 있는 새 6웰 플레이트에 넣고 필요한 경우 O-링 높이를 조정합니다. 플레이트의 각 챔버에 대해 이 단계를 반복합니다.마지막으로 6웰 플레이트의 뚜껑을 챔버 상단에 놓고 새 6웰 플레이트를 섭씨 34도의 수조로 다시 옮깁니다. 부분적으로 충혈 된 ixodes 견갑골 님프가있는 진행중인 피드가 여기에 표시됩니다. 부착 부위 주변의 검은 색 또는 갈색 점은 식균 자극제를 만들기 위해 사료 공급 중 및 후에 수집 할 수있는 서리입니다.부분적으로 충혈 된 ixodes 견갑골 님프가 막에 부착 된 것으로 보입니다. 충혈 된 유충 곰팡이의 껍질도 여기에서 볼 수 있습니다. 진드기 충혈 수와 계란 질량 무게가이 표에 나와 있습니다.유충 및 님팔 충혈 실험 조건에는 이 기술에 사용된 보충제 외에 사슴 기관 균질액이 혈액에 첨가되었습니다. 여기서 성공적인 충혈은 다음 라이브 스테이지로 성공적으로 탈피 한 충혈 된 진드기 또는 성공적으로 알을 낳은 충혈 된 암컷으로 정의되었습니다. 렌즈 용지에 실리콘을 도포할 때 허용 가능한 두께를 얻으려면 연습이 필요하므로 사용하기 전에 멤브레인의 두께를 측정하는 것이 항상 중요합니다.막 공급은 진드기를 병원균이나 항생제에 노출시킬 수 있습니다. 탈피 성공, 알을 낳고 생존과 같은 진드기 생물학의 측면에 미치는 영향은 사료 공급 후 평가할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biology

Tick Artificial Membrane Feeding for Ixodes scapularis

Testing Nicotine Tolerance in Aphids Using an Artificial Diet Experiment

인공 다이어트 실험을 사용하여 Aphids에 니코틴 공차 테스트

Plants may upregulate the production of many different seconday metabolites in response to insect feeding. One of these metabolites, nicotine, is well ...

연구

생물학

Preparation of Artificial Bilayers for Electrophysiology Experiments

전기 생리학 실험을위한 인공 Bilayers의 준비

Planar lipid bilayers, also called artificial lipid bilayers, allow you to study ion-conducting channels in a well-defined environment. These bilayers can ...

Crystallizing Membrane Proteins for Structure Determination using Lipidic Mesophases

Lipidic Mesophases를 사용하여 구조 결정을위한 막 단백질 Crystallizing

A detailed protocol for crystallizing membrane proteins by using lipidic mesophases is described. This method has variously been referred to as the ...

Use of a Robot for High-throughput Crystallization of Membrane Proteins in Lipidic Mesophases

Lipidic Mesophases의 막 단백질의 높은 처리량을 결정하기위한 로봇의 사용

Structure-function studies of membrane proteins greatly benefit from having available high-resolution 3-D structures of the type provided through ...

Harvesting and Cryo-cooling Crystals of Membrane Proteins Grown in Lipidic Mesophases for Structure Determination by Macromolecular Crystallography

Macromolecular의 결정학에 의해 구조 결정에 대한 Lipidic Mesophases에서 재배 막 단백질의 수확 및 Cryo 냉각 크리스털

An important route to understanding how proteins function at a mechanistic level is to have the structure of the target protein available, ideally at ...

Microperfusion Technique to Investigate Regulation of Microvessel Permeability in Rat Mesentery

Microperfusion 기술은 쥐 장간막에서 미세 혈관 투과성의 규정을 조사하기 위해

Experiments to measure the permeability properties of individually perfused microvessels provide a bridge between investigation of molecular and cellular ...

High-fat Feeding Paradigm for Larval Zebrafish: Feeding, Live Imaging, and Quantification of Food Intake

애벌레 Zebrafish의에 대한 패러다임을 먹이 고 지방 : 수유, 라이브 영상, 식품 섭취의 정량화

Zebrafish are emerging as a model of dietary lipid processing and metabolic disease. This protocol describes how to feed larval zebrafish a lipid-rich ...

Ground State Depletion Super-resolution Imaging in Mammalian Cells

포유류 세포에 있는 바닥 상태 고갈 슈퍼 해상도 영상

Advances in fluorescent microscopy and cell biology are intimately correlated, with the enhanced ability to visualize cellular events often leading to ...