Name: establishing 3-dimensional spheroids from patient-derived tumor samples and evaluating their sensitivity to drugs
Uploaded: 2022-12-16T13:40:00
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La collecte d’échantillons de tumeurs humaines utilisés pour les cultures de cellules tumorales primaires a été effectuée conformément aux protocoles approuvés par le comité d’examen institutionnel (IRB) au Centre médical Rabin avec le consentement éclairé écrit des patients. Les patients admissibles à participer à l’étude comprenaient des patients atteints d’un cancer du sein, du côlon, du foie, du poumon, neuroendocrinien, ovarique ou pancréatique non métastatique, de tout cancer pédiatrique ...

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	<li>Katt, M. E., Placone, A. L., Wong, A. D., Xu, Z. S., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+tumor+models:+Advantages,+disadvantages,+variables,+and+selecting+the+right+platform.">In vitro tumor models: Advantages, disadvantages, variables, and selecting the right platform.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 4, 12 (2016).</li><li>Yoshida, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+patient-derived+tumor+xenograft+models+and+tumor+organoids.">Applications of patient-derived tumor xenograft models and tumor organoids.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 13 (1), 4 (2020).</li><li>Ledur, P. F., Onzi, G. R., Zong, H., Lenz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+conditions+defining+glioblastoma+cells+behavior:+What+is+the+impact+for+novel+discoveries.">Culture conditions defining glioblastoma cells behavior: What is the impact for novel discoveries.</a> Oncotarget. 8 (40), 69185-69197 (2017).</li><li>Richter, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+donor+to+the+lab:+A+fascinating+journey+of+primary+cell+lines.">From donor to the lab: A fascinating journey of primary cell lines.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 711381 (2021).</li><li>Esparza-Lopez, J., Martinez-Aguilar, J. F., Ibarra-Sanchez, M. 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J., Cloos, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+sensitivity+assays:+The+MTT+assay.">Cell sensitivity assays: The MTT assay.</a> Methods in Molecular Biology. 731, 237-245 (2011).</li><li>Walzl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+resazurin+reduction+assay+can+distinguish+cytotoxic+from+cytostatic+compounds+in+spheroid+screening+assays.">The resazurin reduction assay can distinguish cytotoxic from cytostatic compounds in spheroid screening assays.</a> Journal of Biomolecular Screening. 19 (7), 1047-1059 (2014).</li></ol>

Le présent protocole décrit une méthode simple pour générer des cultures cellulaires primaires 3D (sphéroïdes) dérivées d’échantillons de tumeurs humaines. Ces sphéroïdes peuvent être utilisés pour diverses analyses, y compris l’évaluation de candidats médicaments potentiels et de combinaisons de médicaments, l’identification de biomarqueurs potentiels ou de cibles thérapeutiques, et l’étude des mécanismes de réponse et de résistance. Le protocole utilise soit des cellules tumorales primaire...

Les études in vitro et in vivo représentent des approches complémentaires pour le développement de traitements contre le cancer. Les modèles in vitro permettent de contrôler la plupart des variables expérimentales et facilitent les analyses quantitatives. Ils servent souvent de plates-formes de criblage à faible coût et peuvent également être utilisés pour des études mécanistes1. Cependant, leur pertinence biologique est intrinsèquement limitée, car de tels modèles ne reflètent que partiellement le microenvironnement tumoral1. En revanche, les modèles in vivo, tels que les xénogreffes dérivées de patients (PDX), capturent la complexité du microenvironnement tumoral et conviennent mieux aux études translationnelles et à l’individualisation du traitement chez les patients (c’est-à-dire l’étude de la réponse aux médicaments dans un modèle dérivé d’un patient individuel)1. Cependant, les modèles in vivo ne sont pas propices aux approches à haut débit pour le dépistage des médicaments, car les paramètres expérimentaux ne peuvent pas être contrôlés aussi étroitement que les modèles in vitro et parce que leur développement prend du temps, exige beaucoup de main-d’œuvre et coûtecher 1,2.
Les modèles in vitro sont disponibles depuis plus de 100 ans et les lignées cellulaires depuis plus de 70 ans3. Au cours des dernières décennies, cependant, la complexité des modèles in vitro disponibles de tumeurs solides a considérablement augmenté. Cette complexité va des modèles de culture en 2 dimensions (2D) (structures monocouches) qui sont soit des lignées cellulaires établies dérivées de tumeurs, soit des lignées cellulaires primaires aux approches plus récentes impliquant des modèles 3 dimensions (3D)1. Dans les modèles 2D, une distinction clé est entre les lignées cellulaires établies et primaires4. Les lignées cellulaires établies sont immortalisées; Par conséquent, la même lignée cellulaire peut être utilisée à l’échelle mondiale pendant de nombreuses années, ce qui, d’un point de vue historique, facilite la collaboration, l’accumulation de données et le développement de nombreuses stratégies de traitement. Cependant, les aberrations génétiques dans ces lignées cellulaires s’accumulent à chaque passage, compromettant ainsi leur pertinence biologique. De plus, le nombre limité de lignées cellulaires disponibles ne reflète pas l’hétérogénéité des tumeurs chez les patients 4,5. Les lignées cellulaires cancéreuses primaires sont dérivées directement d’échantillons tumoraux réséqués obtenus par biopsies, épanchements pleuraux ou résections. Par conséquent, les lignées cellulaires cancéreuses primaires sont plus pertinentes sur le plan biologique car elles préservent des éléments du microenvironnement tumoral et des caractéristiques tumorales, telles que les comportements intercellulaires (par exemple, la diaphonie entre les cellules saines et cancéreuses) et les phénotypes souches des cellules cancéreuses. Cependant, la capacité de réplication des lignées cellulaires primaires est limitée, ce qui conduit à un temps de culture étroit et limite le nombre de cellules tumorales pouvant être utilisées pour les analyses 4,5.
Les modèles utilisant des cultures 3D sont plus pertinents sur le plan biologique que les modèles de culture 2D puisque les conditions in vivo sont conservées. Ainsi, les modèles de culture 3D préservent la forme et la croissance naturelles des cellules et reproduisent des éléments de l’environnement tumoral, tels que l’hypoxie, la nécrose et l’adhésion cellulaire. Les modèles 3D les plus couramment utilisés dans la recherche sur le cancer comprennent les sphéroïdes multicellulaires, les structures à base d’échafaudages et les cultures matricielles intégrées 4,6,7.
Le présent protocole génère des modèles de culture tumorale 3D (sphéroïdes multicellulaires) à partir de cellules cancéreuses primaires et évalue leur sensibilité aux médicaments à l’aide de deux approches complémentaires : un test de viabilité cellulaire (MTT) et des examens microscopiques. Les résultats représentatifs présentés ici proviennent du cancer du sein et du côlon; Cependant, ce protocole est largement applicable à d’autres types de tumeurs solides (par exemple, le cholangiocarcinome, le cancer gastrique, le cancer du poumon et le cancer du pancréas) et est également rentable, car il peut être effectué dans son intégralité dans un laboratoire typique de recherche sur le cancer / biologie cellulaire sans compter sur un équipement spécialisé. Les sphéroïdes multicellulaires générés à l’aide de cette approche peuvent être utilisés pour évaluer les candidats médicaments potentiels, identifier des biomarqueurs potentiels ou des cibles thérapeutiques, et étudier les mécanismes de réponse et de résistance.
Ce protocole est divisé en trois sections : (1) la génération, la collecte et le comptage des sphéroïdes en vue de leur utilisation comme modèle pour tester l’efficacité des médicaments; (2) dosage MTT pour évaluer l’efficacité du médicament sur les sphéroïdes; et (3) l’évaluation microscopique des changements morphologiques à la suite du traitement des sphéroïdes avec des médicaments comme autre approche pour évaluer l’efficacité des médicaments (Figure 1).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5 Fluorouracil</td>
			<td>TEVA Israel</td>
			<td>lot 16c22NA</td>
			<td>Fluorouracil, Adrucil</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1110501</td>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cisplatin</td>
			<td>TEVA Israel</td>
			<td>20B06LA</td>
			<td>Abiplatin,&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex&#160;</td>
			<td>Trevigen</td>
			<td>3632-010-02</td>
			<td>Basement membrane matrix, type 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO (dimethyl sulfoxide)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2650-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>2391595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flurometer&#160;ELISA reader</td>
			<td>Biotek</td>
			<td>Synergy H1</td>
			<td>Gen5 3.11</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid (HCl)&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>320331</td>
			<td>for stop solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA</td>
			<td>&#160;Version 1.52a</td>
			<td>Open-source software ImageJ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Gadot</td>
			<td>P180008215</td>
			<td>for stop solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1843977</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTT&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M5655-1G</td>
			<td>3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-essential amino acids&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palbociclib&#160;&#160;</td>
			<td>Med Chem Express</td>
			<td>CAS # 571190-30-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190094</td>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline (DPBS)*Without Calcium and Magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin&#8211;streptomycin&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>2119399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol-free RPMI 1640</td>
			<td>Biological industries, Israel</td>
			<td>01-103-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pippeting reservoir</td>
			<td>Alexred</td>
			<td>RED LTT012025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 culture medium&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11530586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sunitinib</td>
			<td>Med Chem Express</td>
			<td>CAS # 341031-54-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trastuzumab</td>
			<td>F. Hoffmann - La Roche Ltd, Basel, Switherland</td>
			<td>10172154 IL</td>
			<td>Herceptin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue 0.5% solution</td>
			<td>Biological industries, Israel</td>
			<td>03-102-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-low attachment 96 well plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>650970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinorelbine</td>
			<td>Ebewe</td>
			<td>11733027-03</td>
			<td>Navelbine</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing 3-dimensional spheroids from patient-derived tumor samples and evaluating their sensitivity to drugs

Malgré des progrès remarquables dans la compréhension de la biologie tumorale, la grande majorité des candidats médicaments oncologiques entrant dans les essais cliniques échouent, souvent en raison d’un manque d’efficacité clinique. Ce taux d’échec élevé met en lumière l’incapacité des modèles précliniques actuels à prédire l’efficacité clinique, principalement en raison de leur incapacité à refléter l’hétérogénéité tumorale et le microenvironnement tumoral. Ces limitations peuvent être résolues avec des modèles de culture (sphéroïdes) en 3 dimensions (3D) établis à partir d’échantillons de tumeurs humaines provenant de patients individuels. Ces cultures 3D représentent mieux la biologie du monde réel que les lignées cellulaires établies qui ne reflètent pas l’hétérogénéité tumorale. De plus, les cultures 3D sont meilleures que les modèles de culture en 2 dimensions (2D) (structures monocouches) car elles reproduisent des éléments de l’environnement tumoral, tels que l’hypoxie, la nécrose et l’adhésion cellulaire, et préservent la forme et la croissance naturelles des cellules. Dans la présente étude, une méthode a été développée pour préparer des cultures primaires de cellules cancéreuses provenant de patients individuels qui sont 3D et se développent dans des sphéroïdes multicellulaires. Les cellules peuvent être dérivées directement de tumeurs de patients ou de xénogreffes dérivées de patients. La méthode est largement applicable aux tumeurs solides (par exemple, le côlon, le sein et le poumon) et est également rentable, car elle peut être réalisée dans son intégralité dans un laboratoire typique de recherche sur le cancer / biologie cellulaire sans compter sur un équipement spécialisé. Ici, un protocole est présenté pour générer des modèles de culture tumorale 3D (sphéroïdes multicellulaires) à partir de cellules cancéreuses primaires et évaluer leur sensibilité aux médicaments en utilisant deux approches complémentaires: un test de viabilité cellulaire (MTT) et des examens microscopiques. Ces sphéroïdes multicellulaires peuvent être utilisés pour évaluer des candidats médicaments potentiels, identifier des biomarqueurs potentiels ou des cibles thérapeutiques, et étudier les mécanismes de réponse et de résistance.

Ce protocole présente des procédures pour générer une culture homogène de sphéroïdes à partir de cellules tumorales primaires, évaluer quantitativement l’efficacité du médicament sur culture sphéroïde (test MTT) et déterminer l’effet des médicaments à l’étude sur la morphologie sphéroïde. Les données des expériences représentatives sur les sphéroïdes générés à partir de cultures de cellules cancéreuses du côlon et du sein sont présentées. Des expériences similaires ont été réalis...

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Establishing 3-Dimensional Spheroids from Patient-Derived Tumor Samples and Evaluating their Sensitivity to Drugs

Le présent protocole décrit la génération de modèles de culture tumorale 3D à partir de cellules cancéreuses primaires et l’évaluation de leur sensibilité aux médicaments à l’aide de tests de viabilité cellulaire et d’examens microscopiques.

Établissement de sphéroïdes en 3 dimensions à partir d’échantillons tumoraux dérivés de patients et évaluation de leur sensibilité aux médicaments

Despite remarkable advances in understanding tumor biology, the vast majority of oncology drug candidates entering clinical trials fail, often due to a ...

Notre protocole est important car il décrit une génération de modèles de culture tumorale 3D à partir de cellules cancéreuses primaires, et ce modèle représente mieux la biologie tumorale du monde réel que les lignées cellulaires. Cette approche est applicable à une variété de tumeurs solides. Il est également rentable car il peut être effectué du début à la fin dans un laboratoire de biologie cellulaire typique.Les modèles tumoraux 3D générés à l’aide de cette approche soutiennent la recherche sur la sensibilité et la résistance des tumeurs aux thérapies anticancéreuses ou à une combinaison de thérapies. Cette approche génère des modèles 3D à partir de cellules cancéreuses primaires. Par conséquent, il pourrait identifier quelle thérapie est susceptible d’être efficace pour un certain patient et ainsi aider à personnaliser son traitement.La démonstration de la procédure sera Ella Itzhaki, une doctorante de mon laboratoire. Pour commencer, prenez une petite fiole T25 avec une culture cellulaire primaire adhérente à une seule cellule et retirez le milieu de culture cellulaire. Lavez les cellules avec du PBS et ajoutez un millilitre de 1x Accutase pendant trois minutes à 37 degrés Celsius pour préparer une suspension unicellulaire de cultures de cellules tumorales primaires adhérentes de 75 à 100% de confluence.Neutraliser la solution d’Accutase en ajoutant cinq millilitres de milieu de culture cellulaire. Aspirez les cellules avec une pipette sérologique de 10 millilitres et déposez-les dans un tube conique de 15 millilitres. Centrifuger le tube à 800g pendant cinq minutes à température ambiante.Retirez le milieu de culture cellulaire et ajoutez huit millilitres de milieu de culture cellulaire frais sur le dessus de la pastille cellulaire, puis mélangez doucement. Pour compter les cellules viables avec un hémocytomètre, prenez une partie aliquote de 50 microlitres de la suspension cellulaire et mélangez-la avec 50 microlitres de bleu de trypan. Ensuite, comptez les cellules vivantes et calculez le nombre total de cellules vivantes dans la suspension.Ensuite, préparez le milieu de culture 3D. Et après avoir calculé le nombre de cellules nécessaires pour le test et le volume total requis, préparez la suspension cellulaire avec le nombre souhaité de cellules dans 200 microlitres du milieu de culture 3D. Mélanger délicatement avec la pipette pour assurer une distribution homogène.Transférez la suspension dans un réservoir de pipetage et ajoutez 200 microlitres de la suspension cellulaire à chaque puits d’une plaque de 96 puits à fixation ultra-basse avec une pipette multicanal. Centrifuger la plaque à 300 g pendant 10 minutes à température ambiante pour renforcer le regroupement des cellules, améliorant ainsi l’agrégation cellulaire, et incuber la plaque à 37 degrés Celsius dans un incubateur humidifié à 5% de dioxyde de carbone. Après centrifugation à nouveau à 300g pendant 10 minutes à température ambiante, retirer délicatement et éliminer 50% du milieu, et ajouter 100 microlitres de milieu de culture 3D frais pour remplacer la solution existante.Répétez cette étape et replacez la plaque dans l’incubateur humidifié à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone. Inspectez les cellules au microscope tous les un à deux jours pour surveiller la formation de sphéroïdes. Mesurez le diamètre des sphéroïdes formés à l’aide de l’outil de mise à l’échelle du logiciel d’imagerie.Et une fois que le diamètre du sphéroïde atteint 100 à 200 micromètres, effectuez les expériences d’efficacité du médicament. Pour la collecte des sphéroïdes, utilisez une pipette de 1 000 microlitres pour recueillir les sphéroïdes de chaque puits et déposez-les dans un tube conique de 15 millilitres. Centrifuger le tube conique à 300 g pendant cinq minutes à température ambiante, puis aspirer et jeter soigneusement le surnageant à l’aide d’une pipette.Ajouter 0,5 millilitre du milieu de culture cellulaire et remettre en suspension la pastille bien mais doucement. Pour effectuer le comptage des sphéroïdes, utilisez une plaque de 96 puits et dessinez un signe plus sur la face inférieure d’un puits pour diviser le puits en quadrants. Ajouter 50 microlitres de la suspension au puits.Et avec une lentille d’objectif 10x, comptez les sphéroïdes manuellement au microscope. Comptez les sphéroïdes dans chaque quadrant et calculez le nombre total de sphéroïdes dans le puits. Ensuite, calculez la concentration de sphéroïdes en doublant le nombre de sphéroïdes en comptant le volume, et calculez le nombre total de sphéroïdes dans la suspension.Dans un nouveau tube, préparer la suspension sphéroïde à une concentration de 200 sphéroïdes par 200 microlitres de milieu de culture cellulaire. Pour chaque traitement médicamenteux, préparez le stock de sphéroïdes dans un tube différent. Calculez la quantité totale nécessaire pour chaque médicament par le nombre de puits nécessaires pour les répétitions, et ajoutez le médicament dans le tube à la concentration finale nécessaire.Transférez 200 microlitres de la suspension sphéroïde dans les puits d’une plaque de 96 puits à très faible attachement et incuber la plaque à 37 degrés Celsius dans un incubateur humidifié à 5% de dioxyde de carbone. Après avoir incubé les sphéroïdes avec le médicament à l’étude pendant 24 à 72 heures, centrifuger la plaque à 300 g pendant cinq minutes à température ambiante et retirer délicatement 170 microlitres du milieu de culture cellulaire, en laissant 30 microlitres au fond du puits. Préparez la solution MTT et ajoutez 70 microlitres de la solution à chaque puits pour obtenir un volume final de 100 microlitres par puits.La concentration finale de MTT dans le puits sera de 0,05 milligramme par 100 microlitres. En outre, préparez des puits blancs avec une solution MTT sans cellules. Incuber la plaque à 37 degrés Celsius dans un incubateur humidifié à 5% de dioxyde de carbone pendant trois à quatre heures jusqu’à ce qu’un changement de couleur de la solution dans les puits soit observé.Lorsqu’un changement est observé, ajoutez 100 microlitres de solution Stop à chaque puits et mélangez délicatement le contenu des puits sans créer de bulles. Lire l’absorbance de la plaque dans un lecteur ELISA à paramètre à une longueur d’onde de 570 nanomètres et une longueur d’onde de fond de 630 à 690 nanomètres. Pour calculer la viabilité de la cellule, calculez le signal spécifique pour chaque puits.Calculez ensuite la valeur moyenne des puits blancs et soustrayez cette valeur de chaque puits. Calculer la moyenne des signaux spécifiques dans les puits témoins qui contiennent des cellules qui n’ont pas été traitées avec le médicament à l’étude. Enfin, calculez la viabilité des cellules de chaque puits par rapport aux puits contenant des cellules non traitées.La formation de sphéroïdes à partir d’une culture de cellules cancéreuses du côlon primaire au fil du temps par le nombre de cellules initialement ensemencées est montrée ici. À partir de cette figure, on peut voir que le nombre de sphéroïdes générés dépend du nombre de cellules initialement ensemencées dans chaque puits. Les sphéroïdes des cellules cancéreuses primaires du côlon après 10 jours en culture avec un ensemencement cellulaire initial de 2 000 par puits sont présentés ici.Après une culture prolongée des sphéroïdes du cancer du côlon, ils ont commencé à s’attacher les uns aux autres et ont formé des grappes de sphéroïdes et de structures ressemblant à des raisins qui ont empêché une culture homogène et ont donc interdit l’utilisation des sphéroïdes dans les tests MTT. Les effets du palbociclib, du sunitinib et de leur combinaison sur les sphéroïdes des cellules tumorales primaires, y compris le cancer du côlon et du sein, sont présentés ici. Un test MTT a été effectué sur des sphéroïdes dérivés de cellules cancéreuses du côlon et du sein.Les signaux MTT ont été normalisés aux valeurs des cellules traitées par DMSO. Les valeurs représentent les moyennes de quatre à huit répétitions. Les effets des différents traitements sur la croissance cellulaire ont également été évalués au microscope au jour zéro et après trois jours de traitement des sphéroïdes dérivés du cancer du côlon et des cellules cancéreuses du sein.Les effets du trastuzumab plus vinorelbine et du 5 fluorouracile plus cisplatine sur les sphéroïdes dérivés du cancer du sein au fil du temps sont présentés dans cette figure. La variation du diamètre des sphéroïdes par rapport au jour zéro par la durée du traitement est illustrée ici. Chaque groupe de traitement comprenait quatre à six puits avec un sphéroïde dans chaque puits.La variation moyenne est présentée ici. Les sphéroïdes sont des outils importants pour de nombreuses études au-delà de la réponse au traitement anticancéreux. Ces études abordent, par exemple, l’administration de médicaments et même des questions de biologie fondamentale telles que les interactions cellule-cellule.Il est essentiel de démarrer un processus de génération de sphéroïdes avec une suspension unicellulaire. Il est également essentiel d’utiliser des plaques de fixation ultra-basses avec un support contenant une métrique de membrane de base de 5%.

Research

JoVE Journal

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Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Physiologic Patient Derived 3D Spheroids for Anti-neoplastic Drug Screening to Target Cancer Stem Cells

Patients physiologiques dérivés sphéroïdes 3D pour le dépistage des médicaments anti-néoplastiques pour cibler les cellules souches cancéreuses

In this protocol, we outline the procedure for generation of tumor spheroids within 384-well hanging droplets to allow for high-throughput screening of ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

Établissement et caractérisation des sphéroïdes neuroendocrines de la petite intestin

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Isolation of Stem-like Cells from 3-Dimensional Spheroid Cultures

Isolement des cellules souches des cultures sphéroïdes tridimensionnelles

Despite advances in adult stem cell research, identification and isolation of stem cells from tissue specimens remains a major challenge. While resident ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Dépistage de drogue des xénogreffes dérivées de tumeur de patient primaire dans le poisson-zèbre

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

Test in vitro à haut débit utilisant des organoïdes tumoraux dérivés du patient

Patient-derived tumor organoids (PDOs) are expected to be a preclinical cancer model with better reproducibility of disease than traditional cell culture ...