Name: establishing 3-dimensional spheroids from patient-derived tumor samples and evaluating their sensitivity to drugs
Uploaded: 2022-12-16T13:40:00
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初代腫瘍細胞培養に使用されたヒト腫瘍サンプルの収集は、患者からの書面によるインフォームドコンセントを得て、ラビン医療センターで治験審査委員会(IRB)が承認したプロトコルに従って実施されました。研究への参加対象となる患者には、非転移性乳がん、結腸がん、肝臓がん、肺がん、神経内分泌がん、卵巣がん、膵臓がん、小児がん、または転移がんの男性および女性の成人およ?...

<ol>
	<li>Katt, M. E., Placone, A. L., Wong, A. D., Xu, Z. S., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+tumor+models:+Advantages,+disadvantages,+variables,+and+selecting+the+right+platform.">In vitro tumor models: Advantages, disadvantages, variables, and selecting the right platform.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 4, 12 (2016).</li><li>Yoshida, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+patient-derived+tumor+xenograft+models+and+tumor+organoids.">Applications of patient-derived tumor xenograft models and tumor organoids.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 13 (1), 4 (2020).</li><li>Ledur, P. F., Onzi, G. R., Zong, H., Lenz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+conditions+defining+glioblastoma+cells+behavior:+What+is+the+impact+for+novel+discoveries.">Culture conditions defining glioblastoma cells behavior: What is the impact for novel discoveries.</a> Oncotarget. 8 (40), 69185-69197 (2017).</li><li>Richter, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+donor+to+the+lab:+A+fascinating+journey+of+primary+cell+lines.">From donor to the lab: A fascinating journey of primary cell lines.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 711381 (2021).</li><li>Esparza-Lopez, J., Martinez-Aguilar, J. F., Ibarra-Sanchez, M. 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P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+patient-derived+cancer+cells+and+their+potential+for+personalized+cancer+patient+care.">Primary patient-derived cancer cells and their potential for personalized cancer patient care.</a> Cell Reports. 21 (11), 3298-3309 (2017).</li><li>Moskovits, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Palbociclib+in+combination+with+sunitinib+exerts+a+synergistic+anti-cancer+effect+in+patient-derived+xenograft+models+of+various+human+cancers+types.">Palbociclib in combination with sunitinib exerts a synergistic anti-cancer effect in patient-derived xenograft models of various human cancers types.</a> Cancer Letters. 536, 215665 (2022).</li><li>Ricardo, R., Phelan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counting+and+determining+the+viability+of+cultured+cells.">Counting and determining the viability of cultured cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (16), e752 (2008).</li><li>Braj&#353;a, K., Trzun, M., Zlatar, I., Jeli&#263;, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+cell+cultures+as+a+new+tool+in+drug+discovery.">Three-dimensional cell cultures as a new tool in drug discovery.</a> Periodicum Biologorum. 118 (1), 59-65 (2016).</li><li>Han, S. J., Kwon, S., Kim, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+of+applying+multicellular+tumor+spheroids+in+preclinical+phase.">Challenges of applying multicellular tumor spheroids in preclinical phase.</a> Cancer Cell International. 21 (1), 152 (2021).</li><li>van Meerloo, J., Kaspers, G. J., Cloos, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+sensitivity+assays:+The+MTT+assay.">Cell sensitivity assays: The MTT assay.</a> Methods in Molecular Biology. 731, 237-245 (2011).</li><li>Walzl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+resazurin+reduction+assay+can+distinguish+cytotoxic+from+cytostatic+compounds+in+spheroid+screening+assays.">The resazurin reduction assay can distinguish cytotoxic from cytostatic compounds in spheroid screening assays.</a> Journal of Biomolecular Screening. 19 (7), 1047-1059 (2014).</li></ol>

本プロトコルは、ヒト腫瘍サンプルに由来する3D初代細胞培養物(スフェロイド)を生成するための簡単な方法を記載する。これらのスフェロイドは、潜在的な薬剤候補や薬剤の組み合わせの評価、潜在的なバイオマーカーや治療標的の特定、応答と耐性のメカニズムの調査など、さまざまな分析に使用できます。このプロトコルでは、患者サンプルから直接得られた初代腫瘍細胞、またはPDXモ...

インビトロおよびインビボ研究は、がん治療法を開発するための補完的なアプローチを表しています。in vitroモデルは、ほとんどの実験変数の制御を可能にし、定量分析を容易にします。多くの場合、低コストのスクリーニングプラットフォームとして機能し、機構研究にも使用できます1。ただし、そのようなモデルは腫瘍微小環境を部分的にしか反映していないため、それらの生物学的関連性は本質的に制限されています1。対照的に、患者由来の異種移植片(PDX)などのin vivoモデルは、腫瘍微小環境の複雑さを捉えており、トランスレーショナルスタディや患者の個別化治療(つまり、個々の患者に由来するモデルで薬物に対する反応を調査する)に適しています1。しかし、in vivoモデルは、実験パラメータをin vitroモデルほど厳密に制御できず、その開発に時間がかかり、労働集約的で、コストがかかるため、薬物スクリーニングのためのハイスループットアプローチを助長しません1,2。
in vitroモデルは100年以上前から利用可能であり、細胞株は70年以上前から利用可能です3。しかし、過去数十年の間に、固形腫瘍の利用可能なin vitroモデルの複雑さは劇的に増加しました。この複雑さは、腫瘍由来の確立された細胞株または初代細胞株のいずれかである2次元(2D)培養モデル(単層構造)から、3次元(3D)モデルを含む最近のアプローチまで多岐にわたります1。2Dモデル内では、確立された細胞株と初代細胞株が重要な違いがあります4。確立された細胞株は不死化されています。したがって、同じ細胞株を長年にわたってグローバルに使用することができ、歴史的な観点から、コラボレーション、データの蓄積、および多くの治療戦略の開発が容易になります。しかし、これらの細胞株の遺伝的異常は継代ごとに蓄積するため、生物学的関連性が損なわれます。さらに、利用可能な細胞株の数が限られていることは、患者4,5における腫瘍の不均一性を反映していない。原発がん細胞株は、生検、胸水、または切除によって得られた切除された腫瘍サンプルから直接得られます。したがって、原発がん細胞株は、腫瘍微小環境の要素や、細胞間挙動(健康な細胞とがん細胞の間のクロストークなど)やがん細胞の幹細胞様表現型などの腫瘍特性を保存するため、生物学的により関連性があります。しかし、初代細胞株の複製能力は限られているため、培養時間が短くなり、分析に使用できる腫瘍細胞の数が制限されます4,5。
3D培養を使用するモデルは、in vivo条件が保持されるため、2D培養モデルよりも生物学的に関連性があります。したがって、3D培養モデルは、自然な細胞の形状と成長を維持し、低酸素、壊死、細胞接着などの腫瘍環境の要素を複製します。がん研究で最も一般的に使用される3Dモデルには、多細胞スフェロイド、足場ベースの構造、およびマトリックス埋め込み培養が含まれます4、6、7。
本プロトコルは、初代がん細胞から3D腫瘍培養モデル(多細胞スフェロイド)を生成し、細胞生存率アッセイ(MTT)と顕微鏡検査の2つの補完的なアプローチを使用して薬物に対する感受性を評価します。ここに提示される代表的な結果は、乳がんおよび結腸がんからのものです。ただし、このプロトコルは、他の固形腫瘍タイプ(胆管がん、胃がん、肺がん、膵臓がんなど)にも広く適用でき、特殊な機器に依存せずに一般的ながん研究/細胞生物学ラボで完全に実行できるため、費用対効果も高くなります。このアプローチを使用して生成された多細胞スフェロイドは、潜在的な薬剤候補の評価、潜在的なバイオマーカーまたは治療標的の特定、および応答と耐性のメカニズムの調査に使用できます。
このプロトコルは3つのセクションに分かれています:(1)薬効をテストするためのモデルとして使用するためのスフェロイドの生成、収集、およびカウント。(2)スフェロイドに対する薬効を評価するためのMTTアッセイ;(3)薬物有効性を評価するための別のアプローチとしてのスフェロイドの薬物による治療後の形態学的変化の顕微鏡的評価(図1)。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5 Fluorouracil</td>
			<td>TEVA Israel</td>
			<td>lot 16c22NA</td>
			<td>Fluorouracil, Adrucil</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1110501</td>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cisplatin</td>
			<td>TEVA Israel</td>
			<td>20B06LA</td>
			<td>Abiplatin,&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex&#160;</td>
			<td>Trevigen</td>
			<td>3632-010-02</td>
			<td>Basement membrane matrix, type 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO (dimethyl sulfoxide)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2650-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>2391595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flurometer&#160;ELISA reader</td>
			<td>Biotek</td>
			<td>Synergy H1</td>
			<td>Gen5 3.11</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid (HCl)&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>320331</td>
			<td>for stop solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA</td>
			<td>&#160;Version 1.52a</td>
			<td>Open-source software ImageJ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Gadot</td>
			<td>P180008215</td>
			<td>for stop solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1843977</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTT&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M5655-1G</td>
			<td>3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-essential amino acids&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palbociclib&#160;&#160;</td>
			<td>Med Chem Express</td>
			<td>CAS # 571190-30-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190094</td>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline (DPBS)*Without Calcium and Magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin&#8211;streptomycin&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>2119399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol-free RPMI 1640</td>
			<td>Biological industries, Israel</td>
			<td>01-103-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pippeting reservoir</td>
			<td>Alexred</td>
			<td>RED LTT012025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 culture medium&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11530586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sunitinib</td>
			<td>Med Chem Express</td>
			<td>CAS # 341031-54-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trastuzumab</td>
			<td>F. Hoffmann - La Roche Ltd, Basel, Switherland</td>
			<td>10172154 IL</td>
			<td>Herceptin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue 0.5% solution</td>
			<td>Biological industries, Israel</td>
			<td>03-102-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-low attachment 96 well plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>650970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinorelbine</td>
			<td>Ebewe</td>
			<td>11733027-03</td>
			<td>Navelbine</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing 3-dimensional spheroids from patient-derived tumor samples and evaluating their sensitivity to drugs

腫瘍生物学の理解は目覚ましい進歩を遂げているにもかかわらず、臨床試験に入る腫瘍薬候補の大多数は、多くの場合、臨床効果の欠如が原因で失敗します。この高い失敗率は、主に腫瘍の不均一性と腫瘍の微小環境を反映する上での不十分なために、現在の前臨床モデルが臨床効果を予測できないことを明らかにしています。これらの制限は、個々の患者に由来するヒト腫瘍サンプルから確立された3次元(3D)培養モデル(スフェロイド)で対処できます。これらの3D培養は、腫瘍の不均一性を反映しない確立された細胞株よりも現実世界の生物学をよりよく表しています。さらに、3D培養は、低酸素、壊死、細胞接着などの腫瘍環境の要素を複製し、自然な細胞の形状と成長を維持するため、2次元(2D)培養モデル(単層構造)よりも優れています。本研究では、多細胞スフェロイドで増殖する個々の患者からの癌細胞の初代培養を調製する方法を開発しました。細胞は、患者腫瘍または患者由来の異種移植片から直接誘導することができる。この方法は、固形腫瘍(結腸、乳房、肺など)に広く適用可能であり、特殊な機器に頼らずに典型的な癌研究/細胞生物学ラボで完全に実行できるため、費用対効果も高くなります。ここでは、初代がん細胞から3D腫瘍培養モデル(多細胞スフェロイド)を生成し、細胞生存率アッセイ(MTT)と顕微鏡検査の2つの補完的なアプローチを使用して薬物に対する感受性を評価するためのプロトコルを提示します。これらの多細胞スフェロイドは、潜在的な薬剤候補の評価、潜在的なバイオマーカーまたは治療標的の特定、および応答と耐性のメカニズムの調査に使用できます。

このプロトコルは、原発腫瘍細胞からスフェロイドの均質な培養を生成し、スフェロイド培養に対する薬効を定量的に評価し(MTTアッセイ)、およびスフェロイド形態に対する治験薬の効果を決定するための手順を提示します。結腸および乳癌細胞培養から生成されたスフェロイドにおける代表的な実験からのデータが提示される。同様の実験を、胆管癌、胃癌、肺癌、および膵臓癌を含む他?...

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Establishing 3-Dimensional Spheroids from Patient-Derived Tumor Samples and Evaluating their Sensitivity to Drugs

本プロトコルは、初代がん細胞から3D腫瘍培養モデルを生成し、細胞生存率アッセイおよび顕微鏡検査を使用して薬物に対するそれらの感受性を評価することを記載しています。

患者由来の腫瘍サンプルから3次元スフェロイドを樹立し、薬物に対する感受性を評価

Despite remarkable advances in understanding tumor biology, the vast majority of oncology drug candidates entering clinical trials fail, often due to a ...

私たちのプロトコルは、初代がん細胞からの3D腫瘍培養モデルの生成を記述し、このモデルは細胞株よりも実際の腫瘍生物学をよりよく表しているため、重要です。このアプローチは、さまざまな固形腫瘍に適用できます。また、典型的な細胞生物学ラボで最初から最後まで実行できるため、費用対効果も高くなります。このアプローチを使用して生成された3D腫瘍モデルは、抗がん療法または治療法の組み合わせに対する腫瘍の感受性と耐性に関する研究をサポートします。このアプローチでは、初代がん細胞から3Dモデルを生成します。したがって、どの治療法が特定の患者に効果的である可能性が高いかを特定し、彼または彼女の治療をパーソナライズするのに役立ちます。手順を実演するのは、私の研究室の博士課程の学生であるエラ・イツァキです。まず、シングルセル接着初代細胞培養液を入れた小さなT25フラスコを取り、細胞培養培地を取り除きます。細胞をPBSで洗浄し、1ミリリットルの1xアキュターゼを摂氏37度で3分間添加して、75〜100%コンフルエンスの付着性初代腫瘍細胞培養物の単一細胞懸濁液を調製します。5ミリリットルの細胞培養培地を加えてアキュターゼ溶液を中和します。細胞を10ミリリットルの血清学的ピペットで吸引し、15ミリリットルの円錐形チューブに入れます。チューブを800gで室温で5分間遠心分離します。細胞培養培地を取り出し、細胞ペレットの上に8ミリリットルの新鮮な細胞培養培地を加え、穏やかに混合します。血球計算盤で生細胞をカウントするには、50マイクロリットルの細胞懸濁液のアリコートを取り、それを50マイクロリットルのトリパンブルーと混合します。次いで生細胞をカウントし、懸濁液中の生細胞の総数を計算する。次に、3D培地を調製します。そしてアッセイに必要な細胞数と必要な総量を計算した後、200マイクロリットルの3D培養液に所望の細胞数で細胞懸濁液を調製します。ピペットで穏やかに混合して、均一な分布を確保します。懸濁液をピペッティングリザーバーに移し、マルチチャンネルピペットを備えた超低アタッチメント96ウェルプレートの各ウェルに200マイクロリットルの細胞懸濁液を追加します。プレートを室温で300gで10分間遠心分離して細胞のクラスター化を強化し、それによって細胞凝集を改善し、5%二酸化炭素加湿インキュベーター内でプレートを摂氏37度でインキュベートします。室温で300gで10分間再度遠心分離した後、50%の培地を静かに取り出して廃棄し、100マイクロリットルの新鮮な3D培養培地を加えて既存の溶液を置き換えます。この手順を繰り返し、プレートを摂氏37度、二酸化炭素5%加湿インキュベーターに戻します。顕微鏡で細胞を1〜2日ごとに検査して、スフェロイド形成を監視します。イメージングソフトウェアのスケールツールを使用して形成されたスフェロイドの直径を測定します。そして、スフェロイドの直径が100〜200マイクロメートルに達したら、薬効実験を行います。スフェロイド採取の場合は、1, 000マイクロリットルのピペットを使用して各ウェルからスフェロイドを収集し、それらを15ミリリットルの円錐形チューブに入れます。コニカルチューブを室温で300gで5分間遠心分離し、ピペットを使用して上清を注意深く吸引して廃棄します。0.5ミリリットルの細胞培養培地を加え、ペレットをよく、しかし穏やかに再懸濁します。回転楕円体カウントを実行するには、96ウェルプレートを使用し、ウェルの下側にプラス記号を描画して、ウェルを象限に分割します。50マイクロリットルの懸濁液をウェルに加える。また、10倍の対物レンズを使用して、顕微鏡下で手動でスフェロイドを数えます。各象限のスフェロイドを数え、ウェル内のスフェロイドの総数を計算します。次に、体積をカウントしてスフェロイド数を2倍にしてスフェロイド濃度を計算し、懸濁液中のスフェロイドの総数を計算します。新しいチューブで、細胞培養培地200マイクロリットルあたり200スフェロイドの濃度でスフェロイド懸濁液を調製します。薬物治療ごとに、異なるチューブにスフェロイドのストックを準備します。リピートに必要なウェルの数で各薬剤に必要な総量を計算し、必要な最終濃度まで薬剤をチューブに追加します。200マイクロリットルのスフェロイド懸濁液を超低付着96ウェルプレートのウェルに移し、5%二酸化炭素加湿インキュベーター内でプレートを摂氏37度でインキュベートします。スフェロイドを治験薬と一緒に24〜72時間インキュベートした後、プレートを300gで室温で5分間遠心分離し、170マイクロリットルの細胞培養培地を静かに取り除き、ウェルの底に30マイクロリットルを残します。MTT溶液を調製し、各ウェルに70マイクロリットルの溶液をウェル当たり100マイクロリットルの最終容量まで添加する。ウェル内の最終的なMTT濃度は、100マイクロリットルあたり0.05ミリグラムになります。さらに、細胞を含まないMTT溶液でブランクウェルを調製します。ウェル内の溶液の色の変化が観察されるまで、5%二酸化炭素加湿インキュベーター内でプレートを摂氏37度で3〜4時間インキュベートします。変化が観察されたら、各ウェルに100マイクロリットルのStop溶液を加え、気泡を発生させずにウェルの内容物を穏やかに混合します。パラメータELISAリーダーで、波長570ナノメートルおよび背景波長630〜690ナノメートルでのプレートの吸光度を読み取ります。細胞生存率を計算するには、各ウェルの特異的シグナルを計算します。次に、ブランクウェルの平均値を計算し、各ウェルからこの値を差し引きます。治験薬で処理されなかった細胞を含むコントロールウェルの特異的シグナルの平均を計算します。最後に、未処理の細胞を含むウェルに対する各ウェルの細胞の生存率を計算します。ここでは、初代結腸癌細胞培養物からのスフェロイドの形成を、最初に播種した細胞の数によって経時的に示します。この図から、生成されるスフェロイドの数は、各ウェルに最初に播種された細胞の数に依存することがわかる。1ウェル当たり2, 000の初期細胞播種による培養10日後の初代結腸癌細胞からのスフェロイドをここに示す。結腸癌スフェロイドを長期間培養すると、それらは互いに付着し始め、スフェロイドとブドウ様構造のクラスターを形成し、均質な培養を妨げ、MTTアッセイでのスフェロイドの使用を禁止しました。結腸がんおよび乳がんを含む原発性腫瘍細胞由来のスフェロイドに対するパルボシクリブ、スニチニブ、およびそれらの組み合わせの効果をここに示します。MTTアッセイは、結腸および乳癌細胞に由来するスフェロイドに対して実施されました。MTTシグナルをDMSO処理細胞からの値に正規化した。値は、4回から8回の反復の平均を表します。細胞増殖に対する様々な処理の効果も、結腸癌および乳癌細胞に由来するスフェロイドの0日目および3日間の治療後に顕微鏡で評価された。乳がん由来のスフェロイドに対するトラスツズマブとビノレルビンの併用および5つのフルオロウラシルとシスプラチンの経時的な効果をこの図に示します。治療期間によるゼロ日目に対するスフェロイドの直径の変化をここに示す。各治療群には、各ウェルに1つのスフェロイドを有する4〜6つのウェルが含まれていた。ここでは、平均的な変化を示します。スフェロイドは、抗がん治療への反応を超えた多くの研究にとって重要なツールです。これらの研究は、例えば、薬物送達や、細胞間相互作用などの基本的な生物学の問題にも取り組んでいます。単一細胞懸濁液でスフェロイド生成プロセスを開始することが重要です。また、5%の基本的な膜メトリックを含む培地で超低接着プレートを使用することも重要です。

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

腫瘍の増殖と転移研究のためのトレーサブル記者との乳癌患者由来の異種移植片の標識

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

肉腫患者由来異種移植片からの腫瘍始発細胞の単離と特徴付け

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

High-sensitivity Detection of Micrometastases Generated by GFP Lentivirus-transduced Organoids Cultured from a Patient-derived Colon Tumor

GFP レンチ ウイルス導入オルガノイド培養患者由来大腸腫瘍によって生成される微小の高感度検出

Despite current advances in human colorectal cancer (CRC) treatment, few radical therapies are effective for the late stages of CRC. To overcome this ...

Mimicking and Manipulating Pancreatic Acinar-to-Ductal Metaplasia in 3-dimensional Cell Culture

真似をして 3次元細胞培養の膵腺房の上皮化生を操作します。

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Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

ヒト尿路上皮細胞癌および大腸癌腫瘍増殖および自発性転移に対する患者由来の眼科医異所性Xenograft移植片モデル

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Physiologic Patient Derived 3D Spheroids for Anti-neoplastic Drug Screening to Target Cancer Stem Cells

がん幹細胞を標的とする抗腫瘍性薬物スクリーニングのための生理学的患者由来3Dスフェロイド

In this protocol, we outline the procedure for generation of tumor spheroids within 384-well hanging droplets to allow for high-throughput screening of ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

小腸神経内分泌腫瘍スフェロイドの確立と特徴付け

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

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3次元スフェロイド培養からの幹様細胞の分離

Despite advances in adult stem cell research, identification and isolation of stem cells from tissue specimens remains a major challenge. While resident ...

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ゼブラフィッシュにおける原発性腫瘍異種移植片の薬物スクリーニング

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High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

患者由来腫瘍オルガノイドを用いたイン ビトロ アッセイのハイスループット

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