Name: enrichment of adult mouse dorsal root ganglia neuron cultures by immunopanning
Uploaded: 2023-02-24T14:15:00
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Este trabalho foi apoiado por uma Bolsa de Projeto dos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde (FRN-162434) e uma Bolsa de Descoberta da Sociedade de Esclerose Múltipla do Canadá (EGID-3761). Os autores gostariam de agradecer ao Dr. Sun e ao Cross Cancer Institute pelo treinamento e uso do sistema ImageXpress.

Todos os experimentos com animais foram realizados com aprovação do Comitê de Cuidados e Uso de Animais de Ciências da Saúde da Universidade de Alberta (protocolo 0000274).
1. Preparação dos reagentes
<ol><li>Para o dia 1, preparar os seguintes reagentes: água grau de cultura celular; poli-D-lisina-preparar um estoque reconstituindo todo o frasco em 50 mL de água de grau de cultura para uma concentração de estoque de 100 μg/mL, armazenar a 4 °C e diluir o estoqu...

<ol>
	<li>Haberberger, R. V., Barry, C., Dominguez, N., Matusica, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+dorsal+root+ganglia.">Human dorsal root ganglia.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 13, 271 (2019).</li><li>Perner, C., Sokol, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+dissection+and+culture+of+murine+dorsal+root+ganglia+neurons+to+study+neuropeptide+release.">Protocol for dissection and culture of murine dorsal root ganglia neurons to study neuropeptide release.</a> STAR Protocols. 2 (1), 100333 (2021).</li><li>Lin, Y. T., Chen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsal+root+ganglia+isolation+and+primary+culture+to+study+neurotransmitter+release.">Dorsal root ganglia isolation and primary culture to study neurotransmitter release.</a> Journal of Visualized Experiments:JoVE. (140), e57569 (2018).</li><li>Foo, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+method+for+the+purification+and+culture+of+rodent+astrocytes.">Development of a method for the purification and culture of rodent astrocytes.</a> Neuron. 71 (5), 799-811 (2011).</li><li>Nolle, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+Glial+Cells+From+Human+Post-mortem+Tissue+for+Transcriptome+and+Proteome+Analysis+Using+Immunopanning.">Enrichment of Glial Cells From Human Post-mortem Tissue for Transcriptome and Proteome Analysis Using Immunopanning.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 15, 772011 (2021).</li><li>Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designing+and+troubleshooting+immunopanning+protocols+for+purifying+neural+cells.">Designing and troubleshooting immunopanning protocols for purifying neural cells.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2014 (12), 1342-1347 (2014).</li><li>Zuchero, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+dorsal+root+ganglion+neurons+from+rat+by+immunopanning.">Purification of dorsal root ganglion neurons from rat by immunopanning.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2014 (8), 826-838 (2014).</li><li>Sommer, I., Schachner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies+(O1+to+O4)+to+oligodendrocyte+cell+surfaces:+an+immunocytological+study+in+the+central+nervous+system.">Monoclonal antibodies (O1 to O4) to oligodendrocyte cell surfaces: an immunocytological study in the central nervous system.</a> Developmental Biology. 83 (2), 311-327 (1981).</li><li>Sommer, I., Schachner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+that+are+O4+antigen-positive+and+O1+antigen-negative+differentiate+into+O1+antigen-positive+oligodendrocytes.">Cell that are O4 antigen-positive and O1 antigen-negative differentiate into O1 antigen-positive oligodendrocytes.</a> Neuroscience Letters. 29 (2), 183-188 (1982).</li><li>Hanani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Satellite+glial+cells+in+sensory+ganglia:+from+form+to+function.">Satellite glial cells in sensory ganglia: from form to function.</a> Brain Research. Brain Research Reviews. 48 (3), 457-476 (2005).</li><li>Viveiros, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-cell+labeling+coupled+to+direct+analysis+of+extracellular+vesicles+in+the+conditioned+medium+to+study+extracellular+vesicles+secretion+with+minimum+sample+processing+and+particle+loss.">In-cell labeling coupled to direct analysis of extracellular vesicles in the conditioned medium to study extracellular vesicles secretion with minimum sample processing and particle loss.</a> Cells. 11 (3), 351 (2022).</li></ol>

Este protocolo de immunopanning aumenta a proporção de células neuronais em culturas primárias DRG. Para obter os melhores resultados, as dissecções devem ser feitas em tempo hábil, e os DRGs devem ser cortados do excesso de nervos. A etapa de dissociação deve ser cuidadosamente monitorada, e não deve exceder 1 h, para evitar que as células sofram estresse desnecessário. No que diz respeito especificamente ao immunopanning, cada placa deve ser girada suavemente no ponto médio para permitir que as células te...

Os gânglios da raiz dorsal (DRGs) abrigam os corpos celulares dos neurônios sensoriais que inervam os tecidos periféricos. O estudo desses neurônios nos permite entender os fundamentos mecanicistas da dor e das condições sensoriais. No entanto, os DRGs não são compostos apenas por neurônios, mas também contêm fibroblastos, células de Schwann, macrófagos e outras células imunes1. Apesar da presença desses vários tipos celulares, culturas completas de DRG são frequentemente referidas na literatura comoneuronais2,3. Essas culturas ainda são úteis para investigação neuronal por imagem ou citometria de fluxo, o que permitiria a identificação neuronal por coloração, tamanho celular e/ou morfologia. Entretanto, para ensaios como a reação em cadeia da polimerase (PCR) ou western blotting, em que as culturas são homogeneizadas para coleta de RNA ou proteína, a presença de tipos celulares não neuronais pode interferir nos resultados. Assim, há necessidade de aumentar a proporção de células neuronais em culturas DRG.
O immunopanning é uma técnica usada para purificar uma variedade de tipos celulares, incluindo neurônios corticais, astrócitos, células precursoras de oligodendrócitos e micróglia. Em palavras simples, trata-se da adesão de um anticorpo contra um marcador de superfície celular a uma placa de Petri, destinado a ligar determinadas células (Figura 1), e pode ser usado para selecionar a favor ou contra tipos celulares de interesse4,5,6. DRGs embrionários de ratos imunopanning para selecionar contra células não neuronais foi descrito anteriormente por Zuchero7. No entanto, não conseguimos encontrar um protocolo de immunopanning específico para DRGs de camundongos. Neste protocolo, nos baseamos nos inquilinos básicos do protocolo Zuchero, mas adaptamos a sequência de immunopanning para enriquecer culturas DRG de camundongos adultos (Figura 2). Esta é uma ferramenta poderosa para estudar neurônios sensoriais estabelecidos em cultura. É vantajoso, pois permite o uso de camundongos adultos a partir de modelos genéticos, de doenças e lesões, para que seus neurônios sensoriais possam ser estudados com maior especificidade.
Este protocolo é vantajoso para leitores que procuram aumentar a proporção de neurônios em culturas DRG de camundongos adultos. No entanto, as etapas de immunopanning também podem ser omitidas, e esse protocolo também pode ser usado para culturas de DRG inteiras.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 um Syringe filters</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>723-2520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm petri dishes</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well black glass-bottom plates</td>
			<td>Cellvis</td>
			<td>P24-1.5H-N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 um cell strainer</td>
			<td>Cedarlane</td>
			<td>15-1070-1(BI)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27+ supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A3582801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td>for 15% BSA cushion, and ICC (heat shock fraction &#8805;98%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A4161</td>
			<td>for 4% BSA for immunopanning, and SATO for media (essentially globulin free, suitable for cell culture, &#8805;99%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 antibody</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>550539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11960069</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS002007</td>
			<td>for stemxyme solution and panning buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-PBS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D8662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EBSS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E6267</td>
			<td>for DNAse solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper P8 grade</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>09-795K</td>
			<td>for 8% PFA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat-anti-mouse IgG</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>115-005-020</td>
			<td>for O4 dish&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat-anti-rabbit 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat-anti-rabbit IgG</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>115-005-003</td>
			<td>for PDGFRB dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat-anti-rat IgG</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>115-005-044</td>
			<td>for CD45 dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS -/-</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>14175145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>laminin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>23017-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-acetyl cysteine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A8199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21103049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O4 antibody</td>
			<td>n/a</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Hybridoma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovomucoid trypsin inhibitor</td>
			<td>Cedarlane</td>
			<td>LS003086</td>
			<td>for low ovo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde prills</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>441244</td>
			<td>for 8% PFA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDGFRB antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>AB32570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin/ streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-D-Lysine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P8783</td>
			<td>for SATO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Putrescine dihydrochrloride&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5780</td>
			<td>for SATO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S374-1</td>
			<td>for 0.2 M PB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate monobasic dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>04269</td>
			<td>for 0.2 M PB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Selenite</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5261</td>
			<td>for SATO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stemxyme I</td>
			<td>Cedarlane</td>
			<td>LS004107</td>
			<td>for tissue dissociation; combination collagenase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transferrin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1147</td>
			<td>for SATO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>T5941</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypan blue</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;3-Tubulin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T2200</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

enrichment of adult mouse dorsal root ganglia neuron cultures by immunopanning

Gânglios da raiz dorsal (DRGs) são estruturas periféricas adjacentes ao corno dorsal da medula espinhal, que abrigam os corpos celulares dos neurônios sensoriais, bem como vários outros tipos celulares. Os protocolos de cultura publicados frequentemente se referem a culturas de DRG dissociadas inteiras como sendo neuronais, apesar da presença de fibroblastos, células de Schwann, macrófagos e linfócitos. Embora essas culturas DRG inteiras sejam suficientes para aplicações de imagem onde os neurônios podem ser discernidos com base na morfologia ou coloração, homogeneizados de proteína ou RNA coletados dessas culturas não são primariamente de origem neuronal. Aqui, descrevemos uma sequência de immunopanning para DRGs de camundongos cultivados. O objetivo deste método é enriquecer culturas DRG para neurônios, removendo outros tipos celulares. Immunopanning refere-se a um método de remoção de tipos celulares por adesão de anticorpos a placas de cultura celular. Usando esses pratos, podemos selecionar negativamente e reduzir o número de fibroblastos, células imunes e células de Schwann em cultura. Este método nos permite aumentar a porcentagem de neurônios em culturas.

As células fixas coradas com DAPI e β3-tubulina foram então imageadas com um sistema confocal de triagem de alto conteúdo. As imagens foram analisadas com software comercial adequado para determinar a porcentagem de células DAPI-positivas que co-marcaram com β3-tubulina (Figura 3). Culturas DRG inteiras foram determinadas como tendo coloração de 42,36% ± 6,4% de β3-tubulina, e culturas de DRG imunopanned foram determinadas como tendo coloração de 71,44% ±7,43% de β3-tubulina. I...

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Enrichment of Adult Mouse Dorsal Root Ganglia Neuron Cultures by Immunopanning

Este trabalho descreve um protocolo de immunopanning para gânglios da raiz dorsal de camundongos adultos. Ao aderir anticorpos às placas de cultura, podemos selecionar e remover negativamente as células não neuronais. Mostramos que as culturas são enriquecidas para neurônios usando este protocolo, permitindo um estudo aprofundado das respostas neuronais à manipulação.

Enriquecimento de Culturas de Neurônios de Gânglios da Raiz Dorsal de Camundongos Adultos por Immunopanning

Dorsal root ganglia (DRGs) are peripheral structures adjacent to the dorsal horn of the spinal cord, which house the cell bodies of sensory neurons as ...

Este protocolo permite aumentar o número de neurônios em culturas de gânglios da raiz dorsal de camundongos adultos. Isso pode ajudar a determinar a contribuição das células neuronais para uma dada resposta. Adicionamos uma etapa de imunopanning a um protocolo básico de cultura DRG.A principal vantagem é selecionar contra células não neuronais. Se você é novo nas culturas DRG primárias, é melhor praticar dissecações para obter o maior número possível de DRGs e cortar o máximo possível do nervo. Para começar, aspirar a poli-D-lisina usada para revestir a placa de cultura e lavá-la três vezes com água de cultura de tecido.Incline a tampa e deixe a superfície secar completamente. Aplique laminina suficiente na placa para revestir o fundo de cada poço e coloque-a em uma incubadora a 37 graus Celsius. Lave as placas de movimento panorâmico previamente preparadas de CD45, PDGFR-beta e O4 com D-PBS.Para a placa CD45, adicionar 5 mililitros de BSA 0,2% e 20 microlitros de anticorpo primário CD45. Para a placa PDGFR-beta, adicione 15,2 microlitros de PDGFR-beta aos 5 mililitros de placa contendo 0,2% de BSA. Para o prato de O4, adicione 2 mililitros de hibridoma de O4 a 3 mililitros de BSA 0,2% e mais 100 microlitros de BSA 4%, para garantir que a concentração final de BSA permaneça em 0,2%Em seguida, perfunda o camundongo eutanasiado com 30 mililitros de solução salina gelada a 0,9%.Observe a mudança na cor do fígado para garantir a perfusão. Fixe as patas dianteiras e traseiras em um estágio de isopor e use uma lâmina de barbear limpa para expor a coluna vertebral pelas costas. Realizar uma laminectomia fazendo cortes na metade do caminho profundo em cada lado da coluna dorsal, removendo a metade dorsal da coluna para expor a medula espinhal.Ou suavemente cortar os nervos e remover a medula espinhal, ou empurrar suavemente a medula para o lado, mantendo a integridade nervosa. Sob um microscópio de dissecção, use as raízes nervosas espinhais para encontrar e remover todos os gânglios da raiz dorsal, ou DRGs, de ambos os lados da coluna vertebral. Corte os debris nervosos de cada DRG à medida que ele é removido, uma vez que mais debris nervosos na cultura podem levar a uma baixa sobrevivência.Colete os DRGs em 15 mililitros de HBSS em um tubo cônico sobre gelo e deixe-os se acomodar no fundo. Usando uma pipeta, aspirar a maior parte do HBSS dos DRGs, e deixar aproximadamente 100 microlitros de líquido no tubo, para evitar a perda do tecido. Lave três vezes com 1 mililitro de HBSS e adicione 5 mililitros de solução STEMxyme de trabalho previamente descongelada ao tecido.Cubra a tampa com uma película transparente e flutue o tubo de lado em banho-maria a 37 graus Celsius, por uma hora. Após a incubação com a enzima, adicione 1 mililitro de solução inibidora de ovomucoide baixa ao tubo. Triture as células suavemente com uma pipeta P1000 de 10 a 15 vezes e deixe os pedaços de tecido se acomodarem.Em seguida, transfira os 2 a 3 mililitros superiores da solução contendo células dissociadas para a solução ovomucoide baixa e fresca e repita até que o tecido esteja totalmente dissociado e não restem pedaços visíveis. Centrifugar o tubo durante 10 minutos a 300 x g à temperatura ambiente. Depois de remover o sobrenadante usando uma pipeta, como demonstrado anteriormente, ressuspenda o pellet de célula em 1 mililitro de tampão panorâmico e pipete suavemente para misturar.Pré-molhar um filtro de células de 70 micrômetros com 1 mililitro de tampão panorâmico sobre um tubo cônico de 50 mililitros e, em seguida, filtrar a solução celular através do filtro celular. Lave o tubo com 1 mililitro de tampão panorâmico e passe-o pelo filtro. Para camadas celulares, adicione 2 mililitros de 15% BSA e cubra suavemente as laterais do tubo fechado.Para remover os detritos de mielina, coloque cuidadosamente a suspensão celular um mililitro de cada vez, pipetando contra a lateral do tubo, em cima da almofada BSA. Centrifugar o tubo a 300 x g por 10 minutos à temperatura ambiente, com aceleração e desaceleração lentas. A camada média de mielina apresenta flocos de material branco.Usando uma pipeta P1000, remova o líquido claro por cima, a fase de mielina no meio, e o BSA, um mililitro de cada vez, deixando aproximadamente 100 microlitros para não perturbar o pellet. Para recuperação de antígeno, adicione 5 mililitros de tampão panorâmico e incube o tubo em uma incubadora de 37 graus Celsius e 10% de dióxido de carbono por 30 a 45 minutos. Em seguida, lave a placa CD45 incubada três vezes com D-PBS e despeje o enxágue final.Em seguida, despeje a suspensão de células no prato CD45. Incubar o prato por 20 minutos à temperatura ambiente, girando suavemente em intervalos de 10 minutos para permitir que as células obtenham acesso igual ao anticorpo. Agite suavemente o prato CD45 e apoie-o em um ângulo.Pipetar cuidadosamente 1 mililitro da suspensão celular sobre o prato, para coletar células não ligadas. Em seguida, transfira-o para a placa PDGFR-beta, previamente lavada três vezes com D-PBS, e incube. Transfira as células não ligadas da placa PDGFR-beta para a placa de O4, como demonstrado anteriormente, e incube a placa.Após a incubação, transferir a suspensão celular para um tubo cônico de 15 mililitros e centrifugar a 300 x g por 10 minutos. Ressuspender as células no volume desejado e diluir na proporção de 1:1 com azul de tripano para viabilidade celular. Usando um hemocitômetro, conte as células médias a grandes.Retire a laminina e plaqueie imediatamente as células na densidade desejada, sem deixá-las secar antes de incubar a placa. As culturas DRG fixa, integral e imunopanizada foram coradas com beta3-tubulina para neurônios e DAPI para todos os núcleos. Culturas DRG inteiras foram determinadas como tendo aproximadamente 42,36% de coloração de beta3-tubulina, e culturas de DRG imunopanned foram determinadas para ter aproximadamente 71,44% de coloração de beta3-tubulina, o que revela um aumento significativo no enriquecimento neuronal com immunopanning.Tratar o tecido com cuidado é muito importante. Manusear DRGs suavemente, aparar o excesso de nervo e tomar cuidado para não agitar ou perder tecidos e cultura são cruciais para estar ciente.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Chromatin Immunoprecipitation from Dorsal Root Ganglia Tissue following Axonal Injury

Cromatina imunoprecipitação de Tissue Dorsal Root Gânglios seguintes Lesão Axonal

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after ...

Neurociência

Live Imaging of Dorsal Root Axons after Rhizotomy

Imagens ao vivo de axônios da raiz dorsal após rizotomia

The primary sensory axons injured by spinal root injuries fail to regenerate into the spinal cord, leading to chronic pain and permanent sensory loss. ...

Genetic Study of Axon Regeneration with Cultured Adult Dorsal Root Ganglion Neurons

Estudo genético da regeneração do axônio com cultivadas Adulto neurônios do gânglio da raiz dorsal

It is well known that mature neurons in the central nervous system (CNS) cannot regenerate their axons after injuries due to diminished intrinsic ability ...

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Medindo Spinal pré-sináptica Inibição em Ratos por raiz dorsal Gravação Potencial<em&gt; In Vivo</em

Presynaptic inhibition is one of the most powerful inhibitory mechanisms in the spinal cord. The underlying physiological mechanism is a depolarization of ...

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal Root Ganglia neurônios e células-tronco diferenciadas adiposo-derivados: An<em&gt; In Vitro</em&gt; Co-cultura modelo para estudar a regeneração do nervo periférico

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the ...

Hydraulic Extrusion of the Spinal Cord and Isolation of Dorsal Root Ganglia in Rodents

Extrusão hidráulico da medula espinhal e Isolamento de gânglios das raízes dorsais em roedores

Traditionally, the spinal cord is isolated by laminectomy, i.e. by breaking open the spinal vertebrae one at a time. This is both time consuming and may ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

Dorsal Root Injection gânglio da raiz dorsal e lesão por esmagamento como um modelo para Sensorial Axon Regeneração

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...

Dorsal Root Ganglia Isolation and Primary Culture to Study Neurotransmitter Release

Isolamento de gânglios das raízes dorsais e cultura primária para estudar a liberação de neurotransmissores

Dorsal root ganglia (DRG) contain cell bodies of sensory neurons. This type of neuron is pseudo-unipolar, with two axons that innervate peripheral ...

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Investigação regeneração do axônio mamíferos: In Vivo Electroporation do gânglio de raiz Dorsal do rato adulto

Electroporation is an essential non-viral gene transfection approach to introduce DNA plasmids or small RNA molecules into cells. A sensory neuron in the ...

Rapid Isolation of Dorsal Root Ganglion Macrophages

Isolação rápida de macrófagos dorsal do gânglio da raiz

There are growing interests to study the molecular and cellular interactions among immune cells and sensory neurons in the dorsal root ganglia after ...