Name: enrichment of adult mouse dorsal root ganglia neuron cultures by immunopanning
Uploaded: 2023-02-24T14:15:00
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Este trabajo fue apoyado por una subvención de proyecto de los Institutos Canadienses de Investigación en Salud (FRN-162434) y una subvención de descubrimiento de la Sociedad de EM de Canadá (EGID-3761). Los autores desean agradecer al Dr. Sun y al Cross Cancer Institute por la capacitación y el uso del sistema ImageXpress.

Todos los experimentos con animales se realizaron con la aprobación del Comité de Cuidado y Uso de Animales de Ciencias de la Salud de la Universidad de Alberta (protocolo 0000274).
1. Preparación del reactivo
<ol><li>Para el día 1, prepare los siguientes reactivos: agua de grado de cultivo celular; poli-D-lisina: preparar una cepa reconstituyendo toda la botella en 50 ml de agua de cultivo hasta una concentración madre de 100 μg/ml, almacenar a 4 °C y diluir la cepa ...

<ol>
	<li>Haberberger, R. V., Barry, C., Dominguez, N., Matusica, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+dorsal+root+ganglia.">Human dorsal root ganglia.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 13, 271 (2019).</li><li>Perner, C., Sokol, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+dissection+and+culture+of+murine+dorsal+root+ganglia+neurons+to+study+neuropeptide+release.">Protocol for dissection and culture of murine dorsal root ganglia neurons to study neuropeptide release.</a> STAR Protocols. 2 (1), 100333 (2021).</li><li>Lin, Y. T., Chen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsal+root+ganglia+isolation+and+primary+culture+to+study+neurotransmitter+release.">Dorsal root ganglia isolation and primary culture to study neurotransmitter release.</a> Journal of Visualized Experiments:JoVE. (140), e57569 (2018).</li><li>Foo, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+method+for+the+purification+and+culture+of+rodent+astrocytes.">Development of a method for the purification and culture of rodent astrocytes.</a> Neuron. 71 (5), 799-811 (2011).</li><li>Nolle, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+Glial+Cells+From+Human+Post-mortem+Tissue+for+Transcriptome+and+Proteome+Analysis+Using+Immunopanning.">Enrichment of Glial Cells From Human Post-mortem Tissue for Transcriptome and Proteome Analysis Using Immunopanning.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 15, 772011 (2021).</li><li>Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designing+and+troubleshooting+immunopanning+protocols+for+purifying+neural+cells.">Designing and troubleshooting immunopanning protocols for purifying neural cells.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2014 (12), 1342-1347 (2014).</li><li>Zuchero, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+dorsal+root+ganglion+neurons+from+rat+by+immunopanning.">Purification of dorsal root ganglion neurons from rat by immunopanning.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2014 (8), 826-838 (2014).</li><li>Sommer, I., Schachner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies+(O1+to+O4)+to+oligodendrocyte+cell+surfaces:+an+immunocytological+study+in+the+central+nervous+system.">Monoclonal antibodies (O1 to O4) to oligodendrocyte cell surfaces: an immunocytological study in the central nervous system.</a> Developmental Biology. 83 (2), 311-327 (1981).</li><li>Sommer, I., Schachner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+that+are+O4+antigen-positive+and+O1+antigen-negative+differentiate+into+O1+antigen-positive+oligodendrocytes.">Cell that are O4 antigen-positive and O1 antigen-negative differentiate into O1 antigen-positive oligodendrocytes.</a> Neuroscience Letters. 29 (2), 183-188 (1982).</li><li>Hanani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Satellite+glial+cells+in+sensory+ganglia:+from+form+to+function.">Satellite glial cells in sensory ganglia: from form to function.</a> Brain Research. Brain Research Reviews. 48 (3), 457-476 (2005).</li><li>Viveiros, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-cell+labeling+coupled+to+direct+analysis+of+extracellular+vesicles+in+the+conditioned+medium+to+study+extracellular+vesicles+secretion+with+minimum+sample+processing+and+particle+loss.">In-cell labeling coupled to direct analysis of extracellular vesicles in the conditioned medium to study extracellular vesicles secretion with minimum sample processing and particle loss.</a> Cells. 11 (3), 351 (2022).</li></ol>

Este protocolo de inmunopanización aumenta la proporción de células neuronales en cultivos primarios de DRG. Para obtener los mejores resultados, las disecciones deben hacerse de manera oportuna, y los DRG deben recortarse del exceso de nervios. El paso de disociación debe ser monitoreado cuidadosamente, y no debe exceder 1 h, para evitar que las células sufran un estrés innecesario. Con respecto a la inmunopanorámica específicamente, cada placa debe girarse suavemente en el punto medio para permitir que las cél...

Los ganglios de la raíz dorsal (GRD) albergan los cuerpos celulares de las neuronas sensoriales que inervan los tejidos periféricos. El estudio de estas neuronas nos permite comprender los fundamentos mecanicistas del dolor y las condiciones sensoriales. Sin embargo, los DRG no están compuestos solo por neuronas, sino que también contienen fibroblastos, células de Schwann, macrófagos y otras células inmunes1. A pesar de la presencia de estos diversos tipos de células, los cultivos DRG completos a menudo se denominan neuronales 2,3. Estos cultivos siguen siendo útiles para la investigación neuronal mediante imágenes o citometría de flujo, lo que permitiría la identificación neuronal por tinción, tamaño celular y/o morfología. Sin embargo, para ensayos como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) o el western blotting, donde los cultivos se homogeneizan para la recolección de ARN o proteínas, la presencia de tipos de células no neuronales puede interferir con los resultados. Por lo tanto, existe la necesidad de aumentar la proporción de células neuronales en los cultivos DRG.
El inmunopanning es una técnica utilizada para purificar una variedad de tipos de células, incluidas las neuronas corticales, los astrocitos, las células precursoras de oligodendrocitos y la microglía. En palabras simples, implica adherir un anticuerpo contra un marcador de superficie celular a una placa de Petri, destinado a unir ciertas células (Figura 1), y puede usarse para seleccionar a favor o en contra de los tipos celulares de interés 4,5,6. Zuchero7 ha descrito previamente DRG embrionarios de rata inmunopandeando para seleccionar contra células no neuronales. Sin embargo, no hemos podido encontrar un protocolo de inmunopanopanización específico para los DRG de ratón. En este protocolo, nos basamos en los inquilinos básicos del protocolo Zuchero, pero en su lugar adaptamos la secuencia de inmunopanopanización para enriquecer los cultivos DRG de ratones adultos (Figura 2). Esta es una herramienta poderosa para estudiar neuronas sensoriales establecidas en cultivo. Es ventajoso ya que permite el uso de ratones adultos a partir de modelos genéticos, de enfermedad y lesiones, de modo que sus neuronas sensoriales pueden estudiarse con mayor especificidad.
Este protocolo es ventajoso para los lectores que buscan aumentar la proporción de neuronas en cultivos DRG de ratones adultos. Sin embargo, los pasos de inmunopanización también se pueden omitir, y este protocolo también se puede usar para cultivos DRG completos.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 um Syringe filters</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>723-2520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm petri dishes</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well black glass-bottom plates</td>
			<td>Cellvis</td>
			<td>P24-1.5H-N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 um cell strainer</td>
			<td>Cedarlane</td>
			<td>15-1070-1(BI)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27+ supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A3582801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td>for 15% BSA cushion, and ICC (heat shock fraction &#8805;98%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A4161</td>
			<td>for 4% BSA for immunopanning, and SATO for media (essentially globulin free, suitable for cell culture, &#8805;99%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 antibody</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>550539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11960069</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS002007</td>
			<td>for stemxyme solution and panning buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-PBS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D8662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EBSS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E6267</td>
			<td>for DNAse solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper P8 grade</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>09-795K</td>
			<td>for 8% PFA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat-anti-mouse IgG</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>115-005-020</td>
			<td>for O4 dish&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat-anti-rabbit 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat-anti-rabbit IgG</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>115-005-003</td>
			<td>for PDGFRB dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat-anti-rat IgG</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>115-005-044</td>
			<td>for CD45 dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS -/-</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>14175145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>laminin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>23017-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-acetyl cysteine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A8199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21103049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O4 antibody</td>
			<td>n/a</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Hybridoma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovomucoid trypsin inhibitor</td>
			<td>Cedarlane</td>
			<td>LS003086</td>
			<td>for low ovo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde prills</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>441244</td>
			<td>for 8% PFA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDGFRB antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>AB32570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin/ streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-D-Lysine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P8783</td>
			<td>for SATO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Putrescine dihydrochrloride&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5780</td>
			<td>for SATO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S374-1</td>
			<td>for 0.2 M PB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate monobasic dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>04269</td>
			<td>for 0.2 M PB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Selenite</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5261</td>
			<td>for SATO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stemxyme I</td>
			<td>Cedarlane</td>
			<td>LS004107</td>
			<td>for tissue dissociation; combination collagenase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transferrin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1147</td>
			<td>for SATO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>T5941</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypan blue</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;3-Tubulin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T2200</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

enrichment of adult mouse dorsal root ganglia neuron cultures by immunopanning

Los ganglios de la raíz dorsal (GRD) son estructuras periféricas adyacentes al asta dorsal de la médula espinal, que albergan los cuerpos celulares de las neuronas sensoriales, así como varios otros tipos de células. Los protocolos de cultivo publicados a menudo se refieren a cultivos DRG disociados completos como neuronales, a pesar de la presencia de fibroblastos, células de Schwann, macrófagos y linfocitos. Si bien estos cultivos DRG completos son suficientes para aplicaciones de imágenes donde las neuronas se pueden discernir en función de la morfología o la tinción, los homogeneizados de proteínas o ARN recolectados de estos cultivos no son principalmente de origen neuronal. Aquí, describimos una secuencia de inmunopanopanización para DRG de ratón cultivados. El objetivo de este método es enriquecer los cultivos de DRG para las neuronas mediante la eliminación de otros tipos de células. El inmunopanning se refiere a un método para eliminar tipos de células mediante la adhesión de anticuerpos a placas de cultivo celular. Usando estos platos, podemos seleccionar negativamente y reducir el número de fibroblastos, células inmunes y células de Schwann en cultivo. Este método nos permite aumentar el porcentaje de neuronas en cultivos.

Las células fijas teñidas con DAPI y β3-tubulina se visualizaron con un sistema de detección confocal de alto contenido. Las imágenes se analizaron utilizando un software comercial adecuado para determinar el porcentaje de células DAPI positivas que comarcaron con β3-tubulina (Figura 3). Se determinó que los cultivos DRG completos tenían tinción de 42,36% ± 6,4% de β3-tubulina, y se determinó que los cultivos de DRG inmunopanizados tenían tinción de β3-tubulina al 71,44% ±7,...

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Enrichment of Adult Mouse Dorsal Root Ganglia Neuron Cultures by Immunopanning

Este artículo describe un protocolo de inmunopanopanización para los ganglios de la raíz dorsal del ratón adulto. Al adherir anticuerpos a las placas de cultivo, podemos seleccionar y eliminar negativamente las células no neuronales. Mostramos que los cultivos se enriquecen para las neuronas utilizando este protocolo, lo que permite un estudio en profundidad de las respuestas neuronales a la manipulación.

Enriquecimiento de cultivos de neuronas de ganglios de la raíz dorsal de ratones adultos mediante inmunopanización

Dorsal root ganglia (DRGs) are peripheral structures adjacent to the dorsal horn of the spinal cord, which house the cell bodies of sensory neurons as ...

Este protocolo nos permite mejorar el número de neuronas en cultivos de ganglios de raíces dorsales de ratones adultos. Esto puede ayudar a determinar la contribución de las células neuronales a una respuesta dada. Hemos agregado un paso de inmunopanización a un protocolo básico de cultivo de DRG.La principal ventaja es seleccionar contra células no neuronales. Si eres nuevo en los cultivos primarios de DRG, es mejor practicar disecciones para obtener tantos DRG como sea posible y recortar la mayor cantidad de nervio posible. Para comenzar, aspire la poli-D-lisina utilizada para recubrir la placa de cultivo y lave la placa tres veces con agua de cultivo de tejidos.Incline la tapa y deje que la superficie se seque completamente. Aplique suficiente laminina a la placa para cubrir el fondo de cada pocillo y colóquela en una incubadora a 37 grados centígrados. Lave los platos de barrido previamente preparados de CD45, PDGFR-beta y O4 con D-PBS.Para el plato CD45, agregue 5 mililitros de BSA al 0,2% y 20 microlitros de anticuerpo primario CD45. Para la placa PDGFR-beta, agregue 15.2 microlitros de PDGFR-beta a los 5 mililitros de placa que contiene BSA al 0.2%. Para el plato de O4, agregue 2 mililitros de hibridoma de O4 a 3 mililitros de 0.2% BSA, y 100 microlitros adicionales de 4% BSA, para garantizar que la concentración final de BSA permanezca en 0.2%A continuación, perfunda el ratón sacrificado con 30 mililitros de solución salina helada al 0.9%.Observe el cambio en el color del hígado para asegurar la perfusión. Fije las patas delanteras y traseras a una etapa de espuma de poliestireno y use una cuchilla de afeitar limpia para exponer la columna vertebral desde la parte posterior. Realice una laminectomía haciendo cortes aproximadamente a la mitad de profundidad a cada lado de la columna vertebral dorsal, eliminando la mitad dorsal de la columna para exponer la médula espinal.Corte suavemente los nervios y retire la médula espinal, o empuje suavemente la médula hacia un lado, manteniendo la integridad nerviosa. Bajo un microscopio de disección, use las raíces nerviosas espinales para encontrar y eliminar todos los ganglios de la raíz dorsal, o DRG, de cada lado de la columna vertebral. Recorte los restos nerviosos de cada GRD a medida que se eliminan, ya que más restos nerviosos en el cultivo pueden conducir a una supervivencia deficiente.Recoja los DRG en 15 mililitros de HBSS en un tubo cónico sobre hielo y permita que se asienten en el fondo. Usando una pipeta, aspire la mayor parte del HBSS de los DRG y deje aproximadamente 100 microlitros de líquido en el tubo, para evitar perder el tejido. Lave tres veces con 1 mililitro de HBSS y agregue 5 mililitros de solución STEMxyme de trabajo previamente descongelada al pañuelo.Cubra la tapa con una película transparente y flote el tubo de lado en un baño de agua de 37 grados centígrados, durante una hora. Después de la incubación con la enzima, agregue 1 mililitro de solución inhibidora ovomucoide baja al tubo. Triture las células suavemente con una pipeta P1000 de 10 a 15 veces y deje que los trozos de tejido se asienten.Luego transfiera los 2 a 3 mililitros superiores de la solución que contiene células disociadas a una solución fresca de bajo ovomucoide, y repita hasta que el tejido esté completamente disociado y no queden trozos visibles. Centrifugar el tubo durante 10 minutos a 300 x g a temperatura ambiente. Después de retirar el sobrenadante con una pipeta, como se demostró anteriormente, vuelva a suspender el pellet celular en 1 mililitro de tampón de barrido y pipetear suavemente para mezclar.Humedezca previamente un filtro celular de 70 micrómetros con 1 mililitro de tampón de movimiento sobre un tubo cónico de 50 mililitros y luego filtre la solución celular a través del filtro celular. Lave el tubo con 1 mililitro de tampón de barrido y páselo a través del colador. Para la estratificación celular, agregue 2 mililitros de BSA al 15% y cubra suavemente los lados del tubo cerrado.Para eliminar los restos de mielina, coloque cuidadosamente la suspensión celular un mililitro a la vez pipeteando contra el costado del tubo, encima del cojín BSA. Centrifugar el tubo a 300 x g durante 10 minutos a temperatura ambiente, con aceleración y desaceleración lentas. La capa media de mielina muestra escamas de material blanco.Con una pipeta P1000, retire el líquido transparente en la parte superior, la fase de mielina intermedia y el BSA, un mililitro a la vez, dejando aproximadamente 100 microlitros para no alterar el pellet. Para la recuperación de antígenos, agregue 5 mililitros de tampón de barrido e incube el tubo en una incubadora de 37 grados centígrados y 10% de dióxido de carbono durante 30 a 45 minutos. A continuación, lave el plato CD45 incubado tres veces con D-PBS y vierta el enjuague final.Luego vierta la suspensión celular en el plato CD45. Incubar el plato durante 20 minutos a temperatura ambiente, girando suavemente a intervalos de 10 minutos para permitir que las células obtengan el mismo acceso al anticuerpo. Agite suavemente el plato CD45 y sosténgalo en ángulo.Pipetear cuidadosamente 1 mililitro de la suspensión celular sobre el plato, para recoger las células no unidas. Luego transfiéralo a la placa PDGFR-beta, previamente lavada tres veces con D-PBS, e incube. Transfiera las células no unidas de la placa PDGFR-beta a la placa O4, como se demostró anteriormente, e incube la placa.Después de la incubación, transfiera la suspensión celular a un tubo cónico de 15 mililitros y centrifugar a 300 x g durante 10 minutos. Resuspender las células en el volumen deseado y diluir a una proporción de 1:1 con azul de tripano para la viabilidad celular. Con un hemocitómetro, cuente las células medianas a grandes.Retire la laminina e inmediatamente coloque las células en la densidad deseada, sin dejar que se sequen antes de incubar la placa. Los cultivos DRG fijos, enteros e inmunopanizados se tiñeron con beta3-tubulina para las neuronas y DAPI para todos los núcleos. Se determinó que los cultivos completos de DRG tenían aproximadamente 42,36% de tinción de beta3-tubulina, y se determinó que los cultivos de DRG inmunopanizados tenían aproximadamente 71,44% de tinción de beta3-tubulina, lo que revela un aumento significativo en el enriquecimiento neuronal con inmunopanización.Tratar el tejido con cuidado es muy importante. Manejar los DRG suavemente, recortar el exceso de nervio y tener cuidado de no agitar o perder tejido y cultivo son cruciales a tener en cuenta.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Chromatin Immunoprecipitation from Dorsal Root Ganglia Tissue following Axonal Injury

Inmunoprecipitación de la cromatina de los tejidos ganglios de la raíz dorsal después de una lesión axonal

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after ...

Investigación

Neurociencias

Live Imaging of Dorsal Root Axons after Rhizotomy

Imágenes en vivo de los axones de la raíz dorsal después de rizotomía

The primary sensory axons injured by spinal root injuries fail to regenerate into the spinal cord, leading to chronic pain and permanent sensory loss. ...

Genetic Study of Axon Regeneration with Cultured Adult Dorsal Root Ganglion Neurons

Estudio genético de la regeneración axonal en neuronas cultivadas de Adultos ganglio de la raíz dorsal

It is well known that mature neurons in the central nervous system (CNS) cannot regenerate their axons after injuries due to diminished intrinsic ability ...

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Medición de la columna vertebral presináptica inhibición en ratones mediante la raíz dorsal de grabación Potencial<em&gt; En Vivo</em

Presynaptic inhibition is one of the most powerful inhibitory mechanisms in the spinal cord. The underlying physiological mechanism is a depolarization of ...

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Ganglios de raíz dorsal neuronas y las células madre derivadas de la adiposa diferenciada: Un<em&gt; In Vitro</em&gt; Co-cultivo modelo para estudiar la regeneración de los nervios periféricos

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the ...

Hydraulic Extrusion of the Spinal Cord and Isolation of Dorsal Root Ganglia in Rodents

Extrusión hidráulica de la médula espinal y aislamiento de los ganglios de la raíz dorsal en roedores

Traditionally, the spinal cord is isolated by laminectomy, i.e. by breaking open the spinal vertebrae one at a time. This is both time consuming and may ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

Inyección de raíz dorsal ganglio de raíz dorsal y Lesión por aplastamiento como modelo para la regeneración del axón sensorial

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...

Dorsal Root Ganglia Isolation and Primary Culture to Study Neurotransmitter Release

Aislamiento de los ganglios de raíz dorsal y en cultivo primario para el estudio de liberación de neurotransmisor

Dorsal root ganglia (DRG) contain cell bodies of sensory neurons. This type of neuron is pseudo-unipolar, with two axons that innervate peripheral ...

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Investigadora de axón mamífero de regeneración: En Vivo electroporación de ganglio de raíz Dorsal de ratón adulto

Electroporation is an essential non-viral gene transfection approach to introduce DNA plasmids or small RNA molecules into cells. A sensory neuron in the ...

Rapid Isolation of Dorsal Root Ganglion Macrophages

Aislamiento rápido de macrófagos de ganando de raíz dorsal

There are growing interests to study the molecular and cellular interactions among immune cells and sensory neurons in the dorsal root ganglia after ...