Name: testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors
Uploaded: 2022-12-16T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

نود أن نشكر كلا من مرفق أبحاث الحيوان (OLAR) على رعايتهم للفئران لدينا ، ومورد قياس التدفق الخلوي المشترك المدعوم من منحة دعم مركز السرطان (P30CA046934) في معهدنا لمساعدتهم الهائلة في جميع أعمالنا. كما نعرب عن تقديرنا لكل من غيل إيكهاردت وآنا كاباسو لتعاوننا الافتتاحي في دراسة العلاجات المناعية ل PDXs البشرية في نموذج HIS-BRGS الخاص بنا. تم دعم هذه الدراسة جزئيا من قبل المعاهد الوطنية للصحة P30CA06934 منحة دعم مركز السرطان باستخدام الموارد المشتركة PHISM (نماذج فأر جهاز المناعة البشري قبل السريرية) ، RRID: SCR_021990 ومورد قياس التدفق الخلوي المشترك ، RRID: SCR_022035. تم دعم هذا البحث جزئيا من قبل NIAID التابع للمعاهد الوطنية للصحة بموجب العقد رقم 75N93020C00058.

تم تنفيذ جميع الأعمال الحيوانية بموجب بروتوكولات الحيوانات المعتمدة من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية بجامعة كولورادو دنفر (بروتوكولات IACUC # 00593 و # 00021). تم تنفيذ جميع الأعمال الحيوانية وفقا لمكتب موارد المختبر (OLAR) ، وهو مرفق معتمد من قبل الجمعية الأمريكية لرعاية المختبر ، في ح...

<ol>
	<li>Chulpanova, D. S., Kitaeva, K. V., Rutland, C. S., Rizvanov, A. A., Solovyeva, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+tumor+models+for+advanced+cancer+immunotherapy.">Mouse tumor models for advanced cancer immunotherapy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4118 (2020).</li><li>Olson, B., Li, Y., Lin, Y., Liu, E. T., Patnaik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+cancer+immunotherapy+research.">Mouse models for cancer immunotherapy research.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1358-1365 (2018).</li><li>Marin-Jimenez, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+cancer+immunotherapy+in+a+human+immune+system+mouse+model:+correlating+treatment+responses+to+human+chimerism,+therapeutic+variables+and+immune+cell+phenotypes.">Testing cancer immunotherapy in a human immune system mouse model: correlating treatment responses to human chimerism, therapeutic variables and immune cell phenotypes.</a> Frontiers in Immunology. 12, 607282 (2021).</li><li>Yin, L., Wang, X. J., Chen, D. X., Liu, X. N., Wang, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+model:+a+review+on+preclinical+applications+for+cancer+immunotherapy.">Humanized mouse model: a review on preclinical applications for cancer immunotherapy.</a> American Journal of Cancer Research. 10 (12), 4568-4584 (2020).</li><li>Cogels, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+as+a+valuable+pre-clinical+model+for+cancer+immunotherapy+research.">Humanized mice as a valuable pre-clinical model for cancer immunotherapy research.</a> Frontiers in Oncology. 11, 784947 (2021).</li><li>Jin, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+humanized+mouse+with+patient-derived+xenografts+for+cancer+immunotherapy+studies:+A+comprehensive+review.">Development of humanized mouse with patient-derived xenografts for cancer immunotherapy studies: A comprehensive review.</a> Cancer Science. 112 (7), 2592-2606 (2021).</li><li>Capasso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+immune+responses+to+anti-PD-1+mono+and+combination+immunotherapy+in+hematopoietic+humanized+mice+implanted+with+tumor+xenografts.">Characterization of immune responses to anti-PD-1 mono and combination immunotherapy in hematopoietic humanized mice implanted with tumor xenografts.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 7 (1), 37 (2019).</li><li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+studying+efficacy+and+mechanisms+of+PD-1-targeted+cancer+immunotherapy.">Humanized mice in studying efficacy and mechanisms of PD-1-targeted cancer immunotherapy.</a> The FASEB Journal. 32 (3), 1537-1549 (2018).</li><li>Yong, K. S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+as+a+tool+to+predict+immunotoxicity+of+human+biologics.">Humanized mouse as a tool to predict immunotoxicity of human biologics.</a> Frontiers in Immunology. 11, 553362 (2020).</li><li>Shen, H. W., Jiang, X. L., Gonzalez, F. J., Yu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+transgenic+mouse+models+for+drug+metabolism+and+pharmacokinetic+research.">Humanized transgenic mouse models for drug metabolism and pharmacokinetic research.</a> Current Drug Metabolism. 12 (10), 997-1006 (2011).</li><li>Bosma, G. C., Custer, R. P., Bosma, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+severe+combined+immunodeficiency+mutation+in+the+mouse.">A severe combined immunodeficiency mutation in the mouse.</a> Nature. 301 (5900), 527-530 (1983).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+defects+in+innate+and+adaptive+immunologic+function+in+NOD/LtSz-scid+mice.">Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice.</a> The Journal of Immunology. 154 (1), 180-191 (1995).</li><li>Legrand, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+CD47/signal+regulatory+protein+alpha+(SIRP(alpha))+interaction+is+required+for+optimal+human+T-+and+natural+killer-+(NK)+cell+homeostasis+in+vivo.">Functional CD47/signal regulatory protein alpha (SIRP(alpha)) interaction is required for optimal human T- and natural killer- (NK) cell homeostasis in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (32), 13224-13229 (2011).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> The Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Traggiai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+human+adaptive+immune+system+in+cord+blood+cell-transplanted+mice.">Development of a human adaptive immune system in cord blood cell-transplanted mice.</a> Science. 304 (5667), 104-107 (2004).</li><li>Theocharides, A. P., Rongvaux, A., Fritsch, K., Flavell, R. A., Manz, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+hemato-lymphoid+system+mice.">Humanized hemato-lymphoid system mice.</a> Haematologica. 101 (1), 5-19 (2016).</li><li>Goldman, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+human+cell+engraftment+in+mice+deficient+in+RAG2+and+the+common+cytokine+receptor+gamma+chain.">Enhanced human cell engraftment in mice deficient in RAG2 and the common cytokine receptor gamma chain.</a> British Journal of Haematology. 103 (2), 335-342 (1998).</li><li>Stripecke, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innovations,+challenges,+and+minimal+information+for+standardization+of+humanized+mice.">Innovations, challenges, and minimal information for standardization of humanized mice.</a> EMBO Molecular Medicine. 12 (7), (2020).</li><li>Allen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+immune+system+mouse+models:+progress,+challenges+and+opportunities.">Humanized immune system mouse models: progress, challenges and opportunities.</a> Nature Immunology. 20 (7), 770-774 (2019).</li><li>Gammelgaard, O. L., Terp, M. G., Preiss, B., Ditzel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cancer+evolution+in+the+context+of+a+human+immune+system+in+mice.">Human cancer evolution in the context of a human immune system in mice.</a> Molecular Oncology. 12 (10), 1797-1810 (2018).</li><li>Rios-Doria, J., Stevens, C., Maddage, C., Lasky, K., Koblish, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+cancer+xenografts+in+humanized+mice.">Characterization of human cancer xenografts in humanized mice.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 8 (1), 000416 (2020).</li><li>Gombash Lampe, S. E., Kaspar, B. K., Foust, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+injections+in+neonatal+mice.">Intravenous injections in neonatal mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52037 (2014).</li><li>Lang, J., Weiss, N., Freed, B. M., Torres, R. M., Pelanda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+hematopoietic+humanized+mice+in+the+newborn+BALB/c-Rag2null+Il2r&#947;null+mouse+model:+a+multivariable+optimization+approach.">Generation of hematopoietic humanized mice in the newborn BALB/c-Rag2null Il2r&#947;null mouse model: a multivariable optimization approach.</a> Clinical Immunology. 140 (1), 102-116 (2011).</li><li>Laskowski, T. J., Hazen, A. L., Collazo, R. S., Haviland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rigor+and+reproducibility+of+cytometry+practices+for+immuno-oncology:+a+multifaceted+challenge.">Rigor and reproducibility of cytometry practices for immuno-oncology: a multifaceted challenge.</a> Cytometry Part A. 97 (2), 116-125 (2020).</li><li>Bagby, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+maintenance+of+a+preclinical+patient+derived+tumor+xenograft+model+for+the+investigation+of+novel+anti-cancer+therapies.">Development and maintenance of a preclinical patient derived tumor xenograft model for the investigation of novel anti-cancer therapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54393 (2016).</li><li>Laajala, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+design+and+analysis+of+preclinical+intervention+studies+in+vivo.">Optimized design and analysis of preclinical intervention studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 30723 (2016).</li><li>Na, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+patient-derived+xenografts+from+patients+with+gastrointestinal+stromal+tumors:+analysis+of+clinicopathological+characteristics+related+to+engraftment+success.">Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success.</a> Scientific Reports. 10 (1), 7996 (2020).</li><li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RX-5902,+a+novel+beta-catenin+modulator,+potentiates+the+efficacy+of+immune+checkpoint+inhibitors+in+preclinical+models+of+triple-negative+breast+cancer.">RX-5902, a novel beta-catenin modulator, potentiates the efficacy of immune checkpoint inhibitors in preclinical models of triple-negative breast cancer.</a> BMC Cancer. 20 (1), 1063 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+adrenocortical+cancer+humanized+mouse+model+to+characterize+anti-PD1+effects+on+tumor+microenvironment.">Development of an adrenocortical cancer humanized mouse model to characterize anti-PD1 effects on tumor microenvironment.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 105 (1), 26-42 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+lymphocyte+reconstitution+in+a+humanized+mouse+model+reveal+a+requirement+of+T+cells+for+human+B+cell+maturation.">Studies of lymphocyte reconstitution in a humanized mouse model reveal a requirement of T cells for human B cell maturation.</a> The Journal of Immunology. 190 (5), 2090-2101 (2013).</li><li>Katano, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-Rag2null+IL-2R&#947;null+mice:+an+alternative+to+NOG+mice+for+generation+of+humanized+mice.">NOD-Rag2null IL-2R&#947;null mice: an alternative to NOG mice for generation of humanized mice.</a> Experimental Animalas. 63 (3), 321-330 (2014).</li><li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parameters+for+establishing+humanized+mouse+models+to+study+human+immunity:+analysis+of+human+hematopoietic+stem+cell+engraftment+in+three+immunodeficient+strains+of+mice+bearing+the+IL2r&#947;(null)+mutation.">Parameters for establishing humanized mouse models to study human immunity: analysis of human hematopoietic stem cell engraftment in three immunodeficient strains of mice bearing the IL2r&#947;(null) mutation.</a> Clinical Immunology. 135 (1), 84-98 (2010).</li><li>Hasgur, S., Aryee, K. E., Shultz, L. D., Greiner, D. L., Brehm, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+immunodeficient+mice+bearing+human+immune+systems+by+the+engraftment+of+hematopoietic+stem+cells.">Generation of immunodeficient mice bearing human immune systems by the engraftment of hematopoietic stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1438, 67-78 (2016).</li><li>Andre, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+human+CD34++stem+cell-engrafted+nonobese+diabetic/SCID/IL-2R&#947;null+mice+show+impaired+CD8++T+cell+maintenance+and+a+functional+arrest+of+immature+NK+cells.">Long-term human CD34+ stem cell-engrafted nonobese diabetic/SCID/IL-2R&#947;null mice show impaired CD8+ T cell maintenance and a functional arrest of immature NK cells.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2710-2720 (2010).</li><li>Wunderlich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+multilineage+human+hematopoietic+reconstitution+and+function+in+NSGS+mice.">Improved multilineage human hematopoietic reconstitution and function in NSGS mice.</a> PLoS One. 13 (12), 0209034 (2018).</li><li>Lee, J., Brehm, M. A., Greiner, D., Shultz, L. D., Kornfeld, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engrafted+human+cells+generate+adaptive+immune+responses+to+Mycobacterium+bovis+BCG+infection+in+humanized+mice.">Engrafted human cells generate adaptive immune responses to Mycobacterium bovis BCG infection in humanized mice.</a> BMC Immunology. 14, 53 (2013).</li><li>Masse-Ranson, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+thymopoiesis+and+improved+T-cell+responses+in+HLA-A2/-DR2+transgenic+BRGS-based+human+immune+system+mice.">Accelerated thymopoiesis and improved T-cell responses in HLA-A2/-DR2 transgenic BRGS-based human immune system mice.</a> European Journal of Immunology. 49 (6), 954-965 (2019).</li><li>Oswald, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+infiltration+pattern+in+non-small+cell+lung+cancer+PDX+models+is+a+model+immanent+feature+and+correlates+with+a+distinct+molecular+and+phenotypic+make-up.">Immune cell infiltration pattern in non-small cell lung cancer PDX models is a model immanent feature and correlates with a distinct molecular and phenotypic make-up.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 10 (4), 004412 (2022).</li></ol>

على مدى السنوات ال 6 الماضية ، باستخدام خبرتنا في كل من علم المناعة والفئران الإنسانية ، طور فريق البحث لدينا نموذجا قبل سريريا تشتد الحاجة إليه لاختبار العلاجات المناعية على مجموعة متنوعة من الأورام البشرية3،7،30،31. يؤ?...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated from:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)
to:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Kristina Larsen1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

تعد نماذج سرطان الفئران مهمة لإنشاء آليات أساسية لنمو الورم والهروب المناعي. ومع ذلك ، فقد أسفرت دراسات علاج السرطان في نماذج الفئران عن ترجمة محدودة للعيادة بسبب النماذج الجينية المحدودة والاختلافات الخاصة بالأنواع 1,2. أكد ظهور العلاجات المناعية كنهج مهيمن للسيطرة على الأورام الحاجة إلى نموذج في الجسم الحي مع جهاز مناعة بشري وظيفي. جعلت التطورات في فئران الجهاز المناعي البشري (HIS MICE) على مدى العقد الماضي من الممكن دراسة علم الأورام المناعي في الجسم الحي في مجموعة واسعة من أنواع السرطان وعوامل العلاج المناعي3،4،5،6. تنمو نماذج الأورام البشرية ، بما في ذلك الطعوم الخارجية المشتقة من خط الخلية والمشتقة من المريض (CDX و PDX ، على التوالي) ، بشكل جيد في فئران HIS وفي معظم الحالات تكون متطابقة تقريبا مع نموها في المضيف الذي يعاني من نقص المناعة والذي يفتقر إلى تطعيم المكونة للدمالبشري 7,8. بناء على هذه النتيجة الرئيسية ، يستخدم الباحثون نموذج الماوس HIS لدراسة العلاجات المناعية البشرية ، بما في ذلك العلاجات المركبة المصممة لتغيير البيئة المكروية للورم (TME) لتقليل كبت المناعة وبالتالي تعزيز قتل الورم الموجه للمناعة. تساعد هذه النماذج قبل السريرية في معالجة قضايا عدم تجانس السرطانات البشرية ، ويمكنها أيضا التنبؤ بنجاح العلاج وكذلك مراقبة سمية الأدوية المرتبطة بالمناعة 9,10.
يتطلب إنتاج نموذج فأر مع جهاز المناعة البشري من خلال إدخال الخلايا الجذعية المكونة للدم البشرية فأرا يعاني من نقص المناعة المتلقي الذي لن يرفض الطعم الخارجي. تستمد نماذج الفئران الحالية HIS من سلالات الفئران التي تعاني من نقص المناعة والتي تم الإبلاغ عنها منذ أكثر من 30 عاما. كانت أول سلالة فأر تعاني من نقص المناعة تم وصفها هي فئران SCID التي تفتقر إلى الخلايا التائية والبائية11 ، تليها NOD-SCID الهجين مع تعدد أشكال SIRPα المسؤول عن تحمل بلاعم الفئران للخلايا البشرية ، بسبب زيادة ارتباط أليل NOD SIRPα بجزيء CD47 البشري12,13. في أوائل عام 2000 ، كان حذف سلسلة جاما الشائعة لمستقبلات IL-2 (IL-2Rγc) على كل من سلالات نقص المناعة BALB / c و NOD بمثابة تغيير لقواعد اللعبة لتعزيز النقش البشري ، بسبب الحذف الجيني الذي يمنع تطوير الخلايا القاتلة الطبيعية المضيفة14،15،16،17. النماذج البديلة ، مثل الفئران BRG و NRG ، تحقق نقص الخلايا التائية والبائية من خلال حذف جين Rag1 أو Rag2 ، المطلوب لإعادة ترتيب جين مستقبلات الخلايا التائية والبائية وبالتالي نضوج وبقاء الخلايا الليمفاوية18,19. يجمع فأر BRGS (BALB / c -Rag2nullIl2RγCnullSirpα NOD) المستخدم هنا بين نقص سلسلة IL-2Rγ وأليلNOD SIRPα على خلفية Rag2 / - ، مما يؤدي إلى فأر يعاني من نقص المناعة بدرجة عالية بدون خلايا T أو B أو NK ، ولكن بقوة وصحة كافية للسماح بالتطعيم على المدى الطويل لأكثر من 30 أسبوعا13.
يمكن إنشاء فئران HIS بطرق متعددة ، مع كون حقن PBMC البشري هو الطريقة الأكثر مباشرة15،18،20. ومع ذلك ، فإن هذه الفئران لديها توسع واضح في الخلايا التائية البشرية المنشطة التي تؤدي إلى مرض الكسب غير المشروع مقابل المضيف (GVHD) بحلول 12 أسبوعا من العمر ، مما يمنع الدراسات طويلة الأجل. بدلا من ذلك ، يمكن أيضا استخدام الخلايا الجذعية المكونة للدم البشرية من دم الحبل السري (CB) ونخاع العظام وكبد الجنين لتطعيم وإنتاج جهاز المناعة البشري من جديد. في هذا النظام ، تنتج الخلايا الجذعية المكونة للدم جهازا مناعيا بشريا متعدد السلالات مع توليد الخلايا المناعية T و B والخلايا المناعية الفطرية التي تتحمل مضيف الفأر بشكل مهم ، مقارنة بالفئران PBMC التي تطور في الغالب الخلايا التائية. لذلك ، فإن GVHD غائب أو متأخر بشكل كبير ، ويمكن تمديد الدراسات لتشمل الفئران حتى عمر 10 أشهر. يوفر CB مصدرا سهلا ويمكن الوصول إليه وغير جراحي للخلايا الجذعية المكونة للدم البشرية CD34 + التي تسهل تطعيم العديد من فئران HIS بأجهزة مناعية متطابقة وراثيا17،18،20،21. على مدى السنوات القليلة الماضية ، تم استخدام نماذج الفئران HIS على نطاق واسع لدراسة العلاج المناعي و TME3،4،5،6. على الرغم من تطور أجهزة المناعة المشتقة من الإنسان في هذه الفئران ، تنمو أورام الطعم الأجنبي البشري بمعدلات مماثلة مقارنة بالفئران التي تعاني من نقص المناعة وتسمح بالتفاعل المعقد بين الخلايا السرطانية والخلايا المناعية ، وهو أمر مهم للحفاظ على البيئة المكروية ل PDX3،7،8 . تم استخدام هذا البروتوكول لإجراء أكثر من 50 دراسة لاختبار العلاجات في الفئران HIS-BRGS مع PDXs و CDXs. الاستنتاج المهم هو أن الأورام البشرية في فئران HIS تحافظ على TME الفريد الخاص بها كما هو محدد من خلال التقييم الجزيئي للورم بالنسبة لعينة المريض الأولية وخصائص التسلل المناعي3،22،23. تركز مجموعتنا على التقييم المتعمق ل HIS في كل من الأعضاء المناعية والورم باستخدام قياس التدفق الخلوي متعدد المعلمات. هنا ، نصف بروتوكولا لإضفاء الطابع الإنساني على الفئران BRGS ، وتقييم الخيمرية ، وزرع الأورام البشرية ، وقياسات نمو الورم ، وإدارة علاج السرطان ، وتحليل خلايا HIS عن طريق قياس التدفق الخلوي.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe w/needles</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>1031815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Pro Separator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Golgi Stop Protein Transport Inhibitor with monensin</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Stim Cocktail</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>509305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chill 15 Rack</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-952</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-plugged glass pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-8B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Basement membrane extract</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>363200502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytek Aurora</td>
			<td>Cytek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9003-98-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eBioscience FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Set</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>00-5523-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryonic Stemcell FCS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10439001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tubes; 1.5 mL volume</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>616201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Benchmark</td>
			<td>100-106 500mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll Hypaque</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>45001752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo Software</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - fine</td>
			<td>Roboz Surgical&#160;</td>
			<td>RS5045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps normal</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>RS4919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>F75P1GAL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted Glass Slides</td>
			<td>Corning</td>
			<td>1255310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentlemacs C-Tubes</td>
			<td>Miltenyi&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACS Dissociator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass pipettes</td>
			<td>DWK Life Sciences</td>
			<td>63A53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS w/ Ca &#38; Mg</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>55037C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT25060CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I2511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>401108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMDM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12440053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase DL</td>
			<td>Roche</td>
			<td>5466202001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Blue</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>L23105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>JDC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-unabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>H2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>UHB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-unlabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>SA-DA4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiRad 350</td>
			<td>Precision X-Ray</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-nitrophenyl substrate</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>34045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRISM</td>
			<td>Graphpad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu FLT3L</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>308-FK-005/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu IL6</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>206-IL-010/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu SCF</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>255SC010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-39</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>8047-15-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>862945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipettes 25 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1367811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>567-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile molecular water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7732-18-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeti Cell Analyzer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>12004279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zombie Green</td>
			<td>biolegend</td>
			<td>423112</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors

يعد عكس الطبيعة المثبطة للمناعة للبيئة المكروية للورم أمرا بالغ الأهمية لنجاح علاج السرطانات بأدوية العلاج المناعي. نماذج سرطان الفئران محدودة للغاية في تنوعها وتعاني من ضعف الترجمة إلى العيادة. ليكون بمثابة نموذج ما قبل سريري أكثر فسيولوجية لدراسات العلاج المناعي ، تم تطوير هذا البروتوكول لتقييم علاج الأورام البشرية في الفأر المعاد تشكيله مع جهاز المناعة البشري. يوضح هذا البروتوكول الفريد تطور فئران الجهاز المناعي البشري (HIS ، "الإنسانية") ، يليها زرع ورم بشري ، إما طعم أجنبي مشتق من خط الخلية (CDX) أو طعم أجنبي مشتق من المريض (PDX). يتم إنشاء الفئران HIS عن طريق حقن الخلايا الجذعية المكونة للدم CD34 + البشرية المعزولة من دم الحبل السري في BRGS حديثي الولادة (BALB / c Rag2-/- IL2RγC-/- NODSIRPα) الفئران عالية نقص المناعة القادرة أيضا على قبول ورم غريب المنشأ. يتم التأكيد على أهمية حركية وخصائص تطور جهاز المناعة البشري وزرع الورم. أخيرا ، يتم وصف تقييم متعمق للبيئة المكروية للورم باستخدام قياس التدفق الخلوي. في العديد من الدراسات باستخدام هذا البروتوكول ، وجد أن البيئة المكروية للورم للأورام الفردية يتم تلخيصها في الفئران HIS-PDX. تظهر الأورام "الساخنة" تسلل مناعي كبير بينما لا تظهر الأورام "الباردة". يعمل هذا النموذج كأرض اختبار للعلاجات المناعية المركبة لمجموعة واسعة من الأورام البشرية ويمثل أداة مهمة في البحث عن الطب الشخصي.

باتباع بروتوكول ورم الجناح والجدول الزمني التجريبي (الشكل 1) ، تمت دراسة نمو الورم والاستجابة المناعية للعلاج المستهدف بمثبطات التيروزين كيناز (TKI) والعلاج المركب نيفولوماب في اثنين من PDXs لسرطان القولون والمستقيم البشري (CRC). تمت دراسة أدوية TKI في المضيفين الذين يعانون من نق...

Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

يحدد هذا البروتوكول جيل فئران الجهاز المناعي البشري (HIS) لدراسات الأورام المناعية. يتم تقديم التعليمات والاعتبارات في استخدام هذا النموذج لاختبار العلاجات المناعية البشرية على الأورام البشرية المزروعة في هذا النموذج مع التركيز على توصيف استجابة جهاز المناعة البشري للورم.

اختبار العلاجات المناعية للسرطان في نموذج فأر متوافق مع البشر يحمل أوراما بشرية

Reversing the immunosuppressive nature of the tumor microenvironment is critical for the successful treatment of cancers with immunotherapy drugs. Murine ...

يحدد هذا البروتوكول جيل جهاز المناعة البشري ، أو فئران HIS لدراسات الأورام المناعية قبل السريرية. نماذج سرطان الفئران محدودة في تنوعها وتترجم بشكل سيئ إلى العيادة. تعمل هذه التقنية كنموذج قبل السريري لدراسات العلاج المناعي من خلال تقييم علاج الأورام البشرية في فأر لديه جهاز مناعة بشري.يمكن استخدام نموذج الفأر المتوافق مع البشر لدراسة جوانب متعددة من علم المناعة البشرية ، بما في ذلك الاستجابات للعديد من الإصابات ، أو سرطانات جهاز المناعة البشري. قد يكون الحصول على مصدر موثوق وقوي لدم الحبل السري والحفاظ على صحة مستعمرة الفئران التي تعاني من نقص المناعة أمرا صعبا. الخبرة في قياس التدفق الخلوي والتحليل المناعي ضرورية.ستوضح كريستينا لارسن الإجراء ، وهي متخصصة في خدمات الأبحاث من مختبري. للبدء ، أعد تعليق حبيبات الخلايا الموجبة CD34 المعزولة من دم الحبل السري في 300 ميكرولتر من المخزن المؤقت لفاصل الخلايا المغناطيسية لكل واحد في 10 إلى الخلايا الثامنة. أضف 100 ميكرولتر من كاشف حجب FCR لكل واحد في 10 إلى الخلايا الثامنة ، متبوعا ب 100 ميكرولتر من الخرز المغناطيسي الإيجابي CD34 لكل واحد في 10 إلى الخلايا الثامنة ، واحتضانها عند أربع درجات مئوية لمدة 30 دقيقة.بعد ذلك ، أضف خمسة ملليلترات من المخزن المؤقت لفاصل الخلايا المغناطيسية لكل واحد في 10 إلى الخلايا الثامنة ، وقم بتدويره عند 360 جم لمدة 10 دقائق عند أربع درجات سلزية. كرر خطوة الغسيل وأعد تعليق الحبيبات في 500 ميكرولتر لكل 100 مليون خلية من المخزن المؤقت لفاصل الخلايا المغناطيسية في أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلتر مكتوب عليه غير مجزأ. قم بتسمية أنبوبين آخرين سعة 15 ملليلتر CD34 سلبي و CD34 إيجابي ضع الأنابيب الثلاثة على رف التبريد.افصل الخلايا باستخدام برنامج الاختيار الإيجابي المكون من عمودين على فاصل الخلايا المغناطيسية التلقائي في خزانة السلامة البيولوجية. بعد ذلك ، لتوسيع وتجميد الخلايا الجذعية البشرية الإيجابية CD34 ، قم بإعداد دم الحبل السري ، أو وسط CB كما هو موضح في المخطوطة ، وقم بالمرور عبر مرشح 0.22 ميكرون. أعد تعليق الخلايا الإيجابية CD34 عند 100،000 لكل مليلتر من وسط CB ، واحتضانها عند 37 درجة مئوية.في اليوم الثالث ، أضف حجما متساويا من وسط CB بدون السيتوكينات إلى القارورة. في اليوم الخامس ، احصد الخلايا الإيجابية CD34 الموسعة. ماصة تعليق الخلية صعودا وهبوطا ، وجمع في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر.أضف ما يكفي من وسط CB لتغطية الجزء السفلي من القارورة. باستخدام مكشطة الخلية ، كشط الجزء السفلي بأكمله من القارورة. جمع كل الوسائط في نفس أنبوب 50 ملليلتر ، وأجهزة الطرد المركزي.إعادة تعليق الخلايا في ملليلتر من وسط CB ، وأجهزة الطرد المركزي. نضح الوسط وصولا إلى الحبيبة ، وأعد تعليق الحبيبات في وسط تجميد. بعد ذلك ، ابدأ إعداد الخلايا الإيجابية CD34 بعد ثلاث ساعات من تشعيع الجرو.قم بتسخين 10 ملليلتر من وسائط CB في أنبوب سعة 50 ملليلتر. استرجع قارورة واحدة من الخلايا الإيجابية CD34 الموسعة والمجمدة في المختبر لكل أربعة إلى ستة جراء لحقنها. قم بإذابة الجليد بسرعة عند 50 إلى 55 درجة مئوية حتى تظهر كمية صغيرة من الجليد ، وأضف الخلايا إلى وسط CB الدافئ.استخدم ملليلترا واحدا من الوسط لشطف كل قارورة ، وقم بتدوير الخلايا عند 360 جم لمدة 12 دقيقة عند أربع درجات مئوية. نضح الوسط بعناية. أعد تعليق الحبيبات في ملليلتر من وسائط CB وعد الخلايا.مرة أخرى ، قم بطرد الخلايا ، ونضح الوسط ، وإعادة تعليق الحبيبات في 100 ميكرولتر من PBS المعقم لكل n بالإضافة إلى جرو واحد للحقن ، مما ينتج عنه 250،000 إلى 450،000 خلية إيجابية CD34 لكل فأر. لعزل PBMC من دم الفأر ، امزج الهيبارين الدموي عن طريق السحب برفق لأعلى ولأسفل ، وقم بالتراكب ببطء فوق 500 ميكرولتر من 1.077 جرام لكل تدرج كثافة ملليلتر مع الحرص على عدم إزعاج الواجهة. جهاز طرد مركزي الأنبوب عند 1،220 جم لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة دون فواصل.قم بإزالة أكبر عدد ممكن من الخلايا من معطف بافي باستخدام ماصة 200 ميكرولتر ، وأضفها إلى الأنبوب الجديد سعة 1.5 ملليلتر الذي يحتوي على 750 ميكرولتر من وسط الحصاد. أجهزة الطرد المركزي في 360 غرام لمدة 11 دقيقة. نضح الوسط إلى 50 ميكرولتر ، وأعد تعليق الحبيبات في 750 ميكرولتر من وسط الحصاد.احصل على بيانات 100 ميكرولتر من كل عينة على مقياس التدفق الخلوي. ثم قم باستيراد ملف fcs إلى برنامج تحرير بيانات التدفق ، وقم بتطبيق بوابة مضلعة على مخطط FSC-A مقابل SSC-A. قم بتغيير المحاور إلى FSC-A مقابل FSC-H ، وقم ببوابة الخلايا على القطر الخطي ، باستثناء الثنائيات التي تبرز من الخط.حدد هذه الخلايا وقم بتغيير المحاور إلى hCD45 مقابل mCD45. قم بتطبيق بوابة مضلعة على السكان المصابين ب hCD45 ، وقم بتطبيق اسم الإنسان. قم بتطبيق بوابة مضلع على السكان الموجب mCD45 ، وقم بتطبيق اسم الماوس.إنشاء إحصائية عد للسكان من البشر والفئران. بعد ذلك ، حدد عدد السكان ، وقم بتغيير المحاور إلى CD19 مقابل CD3. ضع بوابة مضلعة على الخلايا الموجبة CD19 ، وقم بتسميتها الخلايا البائية.ضع بوابة مضلعة على المجتمع الإحصائي الإيجابي CD3 ، وقم بتسميته الخلايا التائية. ثم قم بتطبيق بوابة مضلعة على السكان السالبين المزدوجين ، وقم بتسميتها غير السل. حدد محتوى الخلايا التائية وقم بتغيير المحاور إلى CD4 مقابل CD3.ضع بوابة مضلعة على المجتمع الإحصائي الموجب CD4 ، وقم بتسميته CD4 إيجابيا. ضع بوابة مضلعة على المحتوى السالب CD4 ، وقم بتسميته CD8. حدد السكان غير المصابين بالسل ، وقم بتغيير المحاور إلى CD56 مقابل النخاعي.قم بتطبيق بوابة مضلعة على إجمالي السكان الموجب CD56 ، وقم بتسميتها خلايا NK. ثم ضع بوابة مضلعة على السكان السالبين CD56 والإيجابي النقوي ، وقم بتسميتها النخاعية. أنشئ جدولا لإحصائيات النسبة المئوية والعدد لجميع السكان، وقم بتصديره إلى جدول بيانات.احسب النسبة المئوية hCD45 الخيمرية باستخدام الصيغة المشار إليها. بعد نمو الخلايا السرطانية في الفأر وإدارة العلاجات الدوائية ، احصد الأنسجة. ضع الماوس على لوح تشريح رغوي مع دبابيس لتثبيتها في مكانها وتمديد الذراعين والساقين عند 45 درجة.قم بعمل شق في منتصف الجذع يبدأ بالقرب من الحوض ويمتد إلى الذقن. اسحب الجلد إلى الحافة ، وثبته في مكانه باستخدام المسامير. استخراج الغدد الليمفاوية باستخدام ملقط دقيق بالترتيب الإبطي وعنق الرحم والمساريقي والأربي والحجاب الحاجز.ضع الغدد الليمفاوية على جانب واحد من الشريحة الزجاجية المصنفرة في طبق بتري في ثمانية ملليلتر من وسط الحصاد. أمسك الشرائح بزوايا متعامدة مع الحواف المتجمدة إلى الداخل ، واضغط برفق على الأنسجة حتى يتم تحرير المحتويات الخلوية. اشطف الشريحة عدة مرات عن طريق فصلها عن بعضها البعض ومعا لتحرير أكبر عدد ممكن من الخلايا.اجمع الخلايا باستخدام ماصة زجاجية مقاس 5 بوصات ، وقم بترشيحها من خلال ماصة موصولة بالقطن مقاس تسع بوصات في أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلتر. بعد ذلك ، استخرج الورم من الجناح المفتوح عن طريق إمساك الورم بالملقط أثناء القص ببطء عند حواف الورم بمقص التشريح. وزن الورم وإزالة 1/4 من الورم لمعالجة الحمض النووي الريبي والكيمياء المناعية.ضع 3/4 المتبقية من الورم في طبق طوله ستة سنتيمترات ، وقم بفرمه إلى قطع ملليمتر واحد باستخدام شفرة مشرط. نقل قطع الورم إلى أنبوب التفكك. ثم شطف الطبق مع وسيط TIL غير مكتمل ، وإضافته إلى الأنبوب.أضف مستحضر كولاجيناز ، وافصل الأنسجة باستخدام التفكك الميكانيكي عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة إلى ساعة واحدة. مرر التعليق فوق مرشح 100 ميكرون في أنبوب مخروطي سعة 50 ملليلتر واشطف المرشح ب 10 ملليلتر من وسائط TIL الكاملة. أجهزة الطرد المركزي وإعادة تعليق الحبيبات في وسط حصاد كاف باستخدام DNase ، بحيث يمكن لتعليق الخلايا المرور بسهولة عبر طرف ماصة P1000 وتسجيل الحجم لتحليل المصب.في PDX CRC 307P ، أدى العلاج المركب إلى إبطاء نمو الورم ، كما هو محدد من خلال أحجام نمو الورم بمرور الوقت ، وأوزان الورم ، ومعدل النمو المحدد. كان اختبار PDX CRC 307M في مجموعة مختلفة من الفئران أقل تأثرا بنفس العلاج المركب في فئران HIS BRGS. استنادا إلى الخيمرية البشرية الإيجابية hCD45 والإيجابية للخلايا التائية البشرية hCD3 في الدم قبل زرع الورم ، زادت كلتا المعلمتين في جهاز المناعة المحيطي و TIL بالاشتراك مع الفئران الحاملة ل CRC 307P المعالجة ، ولكن ليس نموذج CRC 307M.كشف التحقيق في الخلايا التائية البشرية عن المزيد من الخلايا التائية المنشطة في أورام CRC 307P ، ولكن ليس الليمفاوية من الفئران المعالجة المركبة. أيضا ، كان هناك المزيد من الخلايا التائية الإيجابية CD8 للذاكرة المستجيبة وعدد أقل من الخلايا التائية الإيجابية TIM-3 في تركيبة أورام CRC 307P المعالجة. في المقابل ، لم يلاحظ هذا الاختلاف في نموذج CRC 307M.علاوة على ذلك ، لم تلاحظ أي تغييرات في ترددات مجموعات الخلايا التائية السامة للخلايا بين الفئران المعالجة المركبة ، على الرغم من ملاحظة ارتفاع الخلايا التائية السامة للخلايا في الفئران غير المعالجة. لم يؤثر العلاج المركب على ترددات Tregs في الأعضاء الليمفاوية CRC 307P ، أو الأورام ، على الرغم من أن بيانات CRC 307M أظهرت اتجاها لانخفاض Tregs. تم رفع التغيرات المرتبطة بالمناعة في الخلايا السرطانية باستخدام قياس التدفق الخلوي.لوحظ زيادة التعبير عن MHC من الفئة الأولى والفئة الثانية على الخلايا السرطانية CRC 307P التي تم استئصالها من فئران HIS BRGS المعالجة مجتمعة. في نموذج CRC 307M ، تسبب نفس العلاج الدوائي في تعبير HLA من الدرجة الثانية على الخلايا السرطانية. وبالمثل ، أدى العلاج المركب إلى زيادة تعبير PD-L1 على الخلايا السرطانية CRC 307P الإيجابية ل EpCAM.أخيرا ، تم التحقيق في ارتباطات الاستجابات المناعية مع نمو الورم. أظهرت زيادة الخلايا التائية الإيجابية CD4 ارتباطا كبيرا بنمو الورم الأصغر ، وبشكل أكثر تحديدا الخلايا التائية المنشطة الإيجابية HLA-DR في المجموعة التي عولجت الفئران HIS. تقنية معقمة أثناء عزل الخلايا الإيجابية CD34 ، حيث أن الفئران تعاني من نقص المناعة الشديد.الخيمرية الناتجة متغيرة داخل وبين المتبرعين بدم الحبل السري ، والخلايا التائية لها أكبر اختلاف. يمكن إجراء مجموعات غير محدودة من العلاج المناعي ، بالإضافة إلى الدراسات الحركية للجرعات الميكانيكية والدوائية ، على سبيل المثال ، حذف الخلايا التائية CD8 لتأكيد دورها. الأهم من ذلك ، يمكن أيضا دراسة السمية المتعلقة بالمخدرات.لقد قدم نموذجا قبل سريريا أكثر صلة ويمكن الوصول إليه لاختبار العلاجات المناعية البشرية لترجمتها إلى العيادة. العديد من التجارب السريرية جارية الآن بناء على هذه البيانات.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

فلوري مثلي نموذج الفأر من سرطان البنكرياس

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

في فيفو نموذج لاختبار تأثير نقص الأكسجة على الانبثاث ورم

Hypoxia has been implicated in the metastasis of Ewing sarcoma (ES) by clinical observations and in vitro data, yet direct evidence for its pro-metastatic ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

كولون-26 سرطان الفأر نموذجا لدراسة سرطان دنف الحاملة للورم

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

ورم انجرافتمينت في نموذج الفأر إكسينوجرافت من عباءة البشرية الخلية اللمفاوية

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

وضع نموذج الإكلينيكية البشرية من أوستيوكلاستوجينيسيس من الدم المحيطية وحيدات مثقف يشترك مع خطوط خلايا سرطان الثدي

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

نموذج الأوناوجراف ة الدم المحيطي البشري (PBMC) غير المشروع لأبحاث الأورام المناعية المترجمة (I-O)

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

نموذج مورين من أورام الكبد النقيلي في وضع إصابة نقص تروية التسريب

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

الحصول على خلايا السرطان الجذعية من أورام أمراض النساء وسرطان الثدي

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

سير عمل الفحص السريع لتحديد العلاج المركب المحتمل ل GBM باستخدام الخلايا الجذعية الدبقي المشتقة من المريض

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...

High-Resolution Ultrasonography for the Analysis of Orthotopic ATC Tumors in a Genetically Engineered Mouse Model

التصوير بالموجات فوق الصوتية عالية الدقة لتحليل أورام ATC التقويمية في نموذج فأر مهندس وراثيا

Anaplastic thyroid carcinoma (ATC) is associated with a poor prognosis and short median survival time, but no effective treatment improves the outcomes ...