Name: testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors
Uploaded: 2022-12-16T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

Vi vil gerne takke både Animal Research Facility (OLAR) for deres pleje af vores mus og Flow Cytometry Shared Resource støttet af Cancer Center Support Grant (P30CA046934) på vores institut for deres enorme hjælp i alt vores arbejde. Vi anerkender også både Gail Eckhardt og Anna Capasso for vores indledende samarbejde, der studerer immunterapier til humane PDX'er i vores HIS-BRGS-model. Denne undersøgelse blev delvist støttet af National Institutes of Health P30CA06934 Cancer Center Support Grant med brug af PHISM (Pre-clinical Human Immune System Mouse Models) Shared Resource, RRID: SCR_021990 and Flow Cytometry Shared Resource, RRID: SCR_022035. Denne forskning blev delvist støttet af NIAID fra National Institutes of Health under kontraktnummer 75N93020C00058.

Alt dyrearbejde blev udført under dyreprotokoller godkendt af University of Colorado Denver Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC protokoller #00593 og #00021). Alt dyrearbejde blev udført i overensstemmelse med Office of Laboratory Animal Resources (OLAR), en akkrediteret facilitet af American Association for Laboratory Animal Care ved University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus. Alle humane navlestrengsblodprøver er taget som donationer fra afidentificerede donorer og skal derfor ikke godkende...

<ol>
	<li>Chulpanova, D. S., Kitaeva, K. V., Rutland, C. S., Rizvanov, A. A., Solovyeva, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+tumor+models+for+advanced+cancer+immunotherapy.">Mouse tumor models for advanced cancer immunotherapy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4118 (2020).</li><li>Olson, B., Li, Y., Lin, Y., Liu, E. T., Patnaik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+cancer+immunotherapy+research.">Mouse models for cancer immunotherapy research.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1358-1365 (2018).</li><li>Marin-Jimenez, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+cancer+immunotherapy+in+a+human+immune+system+mouse+model:+correlating+treatment+responses+to+human+chimerism,+therapeutic+variables+and+immune+cell+phenotypes.">Testing cancer immunotherapy in a human immune system mouse model: correlating treatment responses to human chimerism, therapeutic variables and immune cell phenotypes.</a> Frontiers in Immunology. 12, 607282 (2021).</li><li>Yin, L., Wang, X. J., Chen, D. X., Liu, X. N., Wang, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+model:+a+review+on+preclinical+applications+for+cancer+immunotherapy.">Humanized mouse model: a review on preclinical applications for cancer immunotherapy.</a> American Journal of Cancer Research. 10 (12), 4568-4584 (2020).</li><li>Cogels, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+as+a+valuable+pre-clinical+model+for+cancer+immunotherapy+research.">Humanized mice as a valuable pre-clinical model for cancer immunotherapy research.</a> Frontiers in Oncology. 11, 784947 (2021).</li><li>Jin, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+humanized+mouse+with+patient-derived+xenografts+for+cancer+immunotherapy+studies:+A+comprehensive+review.">Development of humanized mouse with patient-derived xenografts for cancer immunotherapy studies: A comprehensive review.</a> Cancer Science. 112 (7), 2592-2606 (2021).</li><li>Capasso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+immune+responses+to+anti-PD-1+mono+and+combination+immunotherapy+in+hematopoietic+humanized+mice+implanted+with+tumor+xenografts.">Characterization of immune responses to anti-PD-1 mono and combination immunotherapy in hematopoietic humanized mice implanted with tumor xenografts.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 7 (1), 37 (2019).</li><li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+studying+efficacy+and+mechanisms+of+PD-1-targeted+cancer+immunotherapy.">Humanized mice in studying efficacy and mechanisms of PD-1-targeted cancer immunotherapy.</a> The FASEB Journal. 32 (3), 1537-1549 (2018).</li><li>Yong, K. S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+as+a+tool+to+predict+immunotoxicity+of+human+biologics.">Humanized mouse as a tool to predict immunotoxicity of human biologics.</a> Frontiers in Immunology. 11, 553362 (2020).</li><li>Shen, H. W., Jiang, X. L., Gonzalez, F. J., Yu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+transgenic+mouse+models+for+drug+metabolism+and+pharmacokinetic+research.">Humanized transgenic mouse models for drug metabolism and pharmacokinetic research.</a> Current Drug Metabolism. 12 (10), 997-1006 (2011).</li><li>Bosma, G. C., Custer, R. P., Bosma, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+severe+combined+immunodeficiency+mutation+in+the+mouse.">A severe combined immunodeficiency mutation in the mouse.</a> Nature. 301 (5900), 527-530 (1983).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+defects+in+innate+and+adaptive+immunologic+function+in+NOD/LtSz-scid+mice.">Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice.</a> The Journal of Immunology. 154 (1), 180-191 (1995).</li><li>Legrand, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+CD47/signal+regulatory+protein+alpha+(SIRP(alpha))+interaction+is+required+for+optimal+human+T-+and+natural+killer-+(NK)+cell+homeostasis+in+vivo.">Functional CD47/signal regulatory protein alpha (SIRP(alpha)) interaction is required for optimal human T- and natural killer- (NK) cell homeostasis in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (32), 13224-13229 (2011).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> The Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Traggiai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+human+adaptive+immune+system+in+cord+blood+cell-transplanted+mice.">Development of a human adaptive immune system in cord blood cell-transplanted mice.</a> Science. 304 (5667), 104-107 (2004).</li><li>Theocharides, A. P., Rongvaux, A., Fritsch, K., Flavell, R. A., Manz, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+hemato-lymphoid+system+mice.">Humanized hemato-lymphoid system mice.</a> Haematologica. 101 (1), 5-19 (2016).</li><li>Goldman, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+human+cell+engraftment+in+mice+deficient+in+RAG2+and+the+common+cytokine+receptor+gamma+chain.">Enhanced human cell engraftment in mice deficient in RAG2 and the common cytokine receptor gamma chain.</a> British Journal of Haematology. 103 (2), 335-342 (1998).</li><li>Stripecke, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innovations,+challenges,+and+minimal+information+for+standardization+of+humanized+mice.">Innovations, challenges, and minimal information for standardization of humanized mice.</a> EMBO Molecular Medicine. 12 (7), (2020).</li><li>Allen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+immune+system+mouse+models:+progress,+challenges+and+opportunities.">Humanized immune system mouse models: progress, challenges and opportunities.</a> Nature Immunology. 20 (7), 770-774 (2019).</li><li>Gammelgaard, O. L., Terp, M. G., Preiss, B., Ditzel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cancer+evolution+in+the+context+of+a+human+immune+system+in+mice.">Human cancer evolution in the context of a human immune system in mice.</a> Molecular Oncology. 12 (10), 1797-1810 (2018).</li><li>Rios-Doria, J., Stevens, C., Maddage, C., Lasky, K., Koblish, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+cancer+xenografts+in+humanized+mice.">Characterization of human cancer xenografts in humanized mice.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 8 (1), 000416 (2020).</li><li>Gombash Lampe, S. E., Kaspar, B. K., Foust, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+injections+in+neonatal+mice.">Intravenous injections in neonatal mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52037 (2014).</li><li>Lang, J., Weiss, N., Freed, B. M., Torres, R. M., Pelanda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+hematopoietic+humanized+mice+in+the+newborn+BALB/c-Rag2null+Il2r&#947;null+mouse+model:+a+multivariable+optimization+approach.">Generation of hematopoietic humanized mice in the newborn BALB/c-Rag2null Il2r&#947;null mouse model: a multivariable optimization approach.</a> Clinical Immunology. 140 (1), 102-116 (2011).</li><li>Laskowski, T. J., Hazen, A. L., Collazo, R. S., Haviland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rigor+and+reproducibility+of+cytometry+practices+for+immuno-oncology:+a+multifaceted+challenge.">Rigor and reproducibility of cytometry practices for immuno-oncology: a multifaceted challenge.</a> Cytometry Part A. 97 (2), 116-125 (2020).</li><li>Bagby, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+maintenance+of+a+preclinical+patient+derived+tumor+xenograft+model+for+the+investigation+of+novel+anti-cancer+therapies.">Development and maintenance of a preclinical patient derived tumor xenograft model for the investigation of novel anti-cancer therapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54393 (2016).</li><li>Laajala, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+design+and+analysis+of+preclinical+intervention+studies+in+vivo.">Optimized design and analysis of preclinical intervention studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 30723 (2016).</li><li>Na, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+patient-derived+xenografts+from+patients+with+gastrointestinal+stromal+tumors:+analysis+of+clinicopathological+characteristics+related+to+engraftment+success.">Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success.</a> Scientific Reports. 10 (1), 7996 (2020).</li><li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RX-5902,+a+novel+beta-catenin+modulator,+potentiates+the+efficacy+of+immune+checkpoint+inhibitors+in+preclinical+models+of+triple-negative+breast+cancer.">RX-5902, a novel beta-catenin modulator, potentiates the efficacy of immune checkpoint inhibitors in preclinical models of triple-negative breast cancer.</a> BMC Cancer. 20 (1), 1063 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+adrenocortical+cancer+humanized+mouse+model+to+characterize+anti-PD1+effects+on+tumor+microenvironment.">Development of an adrenocortical cancer humanized mouse model to characterize anti-PD1 effects on tumor microenvironment.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 105 (1), 26-42 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+lymphocyte+reconstitution+in+a+humanized+mouse+model+reveal+a+requirement+of+T+cells+for+human+B+cell+maturation.">Studies of lymphocyte reconstitution in a humanized mouse model reveal a requirement of T cells for human B cell maturation.</a> The Journal of Immunology. 190 (5), 2090-2101 (2013).</li><li>Katano, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-Rag2null+IL-2R&#947;null+mice:+an+alternative+to+NOG+mice+for+generation+of+humanized+mice.">NOD-Rag2null IL-2R&#947;null mice: an alternative to NOG mice for generation of humanized mice.</a> Experimental Animalas. 63 (3), 321-330 (2014).</li><li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parameters+for+establishing+humanized+mouse+models+to+study+human+immunity:+analysis+of+human+hematopoietic+stem+cell+engraftment+in+three+immunodeficient+strains+of+mice+bearing+the+IL2r&#947;(null)+mutation.">Parameters for establishing humanized mouse models to study human immunity: analysis of human hematopoietic stem cell engraftment in three immunodeficient strains of mice bearing the IL2r&#947;(null) mutation.</a> Clinical Immunology. 135 (1), 84-98 (2010).</li><li>Hasgur, S., Aryee, K. E., Shultz, L. D., Greiner, D. L., Brehm, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+immunodeficient+mice+bearing+human+immune+systems+by+the+engraftment+of+hematopoietic+stem+cells.">Generation of immunodeficient mice bearing human immune systems by the engraftment of hematopoietic stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1438, 67-78 (2016).</li><li>Andre, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+human+CD34++stem+cell-engrafted+nonobese+diabetic/SCID/IL-2R&#947;null+mice+show+impaired+CD8++T+cell+maintenance+and+a+functional+arrest+of+immature+NK+cells.">Long-term human CD34+ stem cell-engrafted nonobese diabetic/SCID/IL-2R&#947;null mice show impaired CD8+ T cell maintenance and a functional arrest of immature NK cells.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2710-2720 (2010).</li><li>Wunderlich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+multilineage+human+hematopoietic+reconstitution+and+function+in+NSGS+mice.">Improved multilineage human hematopoietic reconstitution and function in NSGS mice.</a> PLoS One. 13 (12), 0209034 (2018).</li><li>Lee, J., Brehm, M. A., Greiner, D., Shultz, L. D., Kornfeld, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engrafted+human+cells+generate+adaptive+immune+responses+to+Mycobacterium+bovis+BCG+infection+in+humanized+mice.">Engrafted human cells generate adaptive immune responses to Mycobacterium bovis BCG infection in humanized mice.</a> BMC Immunology. 14, 53 (2013).</li><li>Masse-Ranson, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+thymopoiesis+and+improved+T-cell+responses+in+HLA-A2/-DR2+transgenic+BRGS-based+human+immune+system+mice.">Accelerated thymopoiesis and improved T-cell responses in HLA-A2/-DR2 transgenic BRGS-based human immune system mice.</a> European Journal of Immunology. 49 (6), 954-965 (2019).</li><li>Oswald, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+infiltration+pattern+in+non-small+cell+lung+cancer+PDX+models+is+a+model+immanent+feature+and+correlates+with+a+distinct+molecular+and+phenotypic+make-up.">Immune cell infiltration pattern in non-small cell lung cancer PDX models is a model immanent feature and correlates with a distinct molecular and phenotypic make-up.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 10 (4), 004412 (2022).</li></ol>

I løbet af de sidste 6 år har vores forskerteam ved hjælp af vores ekspertise inden for både immunologi og humaniserede mus udviklet en meget tiltrængt præklinisk model til at teste immunterapier på en række humane tumorer 3,7,30,31. Denne protokol understreger overvejelsen af modellens variabilitet med særlig vægt på de immunterapicentrerede humane T-cellepopulationer. I denne proto...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated from:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)
to:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Kristina Larsen1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Musekræftmodeller er vigtige for at etablere grundlæggende mekanismer for tumorvækst og immunflugt. Imidlertid har kræftbehandlingsstudier i musemodeller givet endelig oversættelse til klinikken på grund af begrænsede syngeneiske modeller og artsspecifikke forskelle 1,2. Fremkomsten af immunterapier som en dominerende tilgang til kontrol af tumorer har gentaget behovet for en in vivo-model med et funktionelt humant immunsystem. Fremskridt inden for humane immunsystemmus (HIS-mus) i løbet af det sidste årti har gjort det muligt at studere immuno-onkologi in vivo i en lang række kræfttyper og immunterapeutiske midler 3,4,5,6. Humane tumormodeller, herunder cellelinjeafledte og patientafledte xenotransplantater (henholdsvis CDX og PDX), vokser godt i HIS-mus og er i de fleste tilfælde næsten identiske med deres vækst i den immundeficiente vært, der mangler human hæmatopoietisk engraftment 7,8. Baseret på dette nøglefund har forskere brugt HIS-musemodellen til at studere humane immunterapier, herunder kombinationsterapier designet til at ændre tumormikromiljøet (TME) for at mindske immunsuppression og dermed forbedre immunrettet tumordrab. Disse prækliniske modeller hjælper med at løse problemerne med heterogenitet af humane kræftformer og kan også forudsige behandlingssucces samt overvåge immunrelaterede lægemiddeltoksiciteter 9,10.
Produktionen af en musemodel med et humant immunsystem gennem introduktion af humane hæmatopoietiske stamceller kræver en modtagende immundefekt mus, der ikke afviser xenotransplantatet. Nuværende HIS-musemodeller er afledt af immundefekte musestammer, der blev rapporteret for over 30 år siden. Den første immundeficiente musestamme, der blev beskrevet, var SCID-mus, der manglede T- og B-celler11, efterfulgt af en hybrid NOD-SCID med en SIRPα-polymorfi, der er ansvarlig for musemakrofagtolerance over for humane celler på grund af øget binding for NOD SIRPα-allelen til det humane CD47-molekyle12,13. I begyndelsen af 2000'erne var sletningen af den fælles gammakæde af IL-2-receptoren (IL-2Rγc) på både BALB / c og NOD immundeficiente stammer en game changer for forbedret menneskelig engraftment på grund af genetiske deletioner, der forbød værts NK-celleudvikling14,15,16,17. Alternative modeller, såsom BRG- og NRG-mus, opnår T- og B-cellemangel gennem deletion af Rag1- eller Rag2-genet, der kræves til T- og B-cellereceptorgenomlejringer og dermed modning og overlevelse af lymfocytter18,19. BRGS-musen (BALB/c -Rag2 nullIl2RγCnullSirpα NOD), der anvendes heri, kombinerer IL-2Rγ-kædemangel ogNOD SIRPα-allelen på Rag2-/- baggrunden, hvilket resulterer i en mus med høj immundefekt mus uden T-, B- eller NK-celler, men alligevel med tilstrækkelig kraft og sundhed til at muliggøre langvarig indkapsling på mere end 30 uger13.
HIS-mus kan genereres på flere måder, hvor human PBMC-injektion er den mest direkte metode15,18,20. Imidlertid har disse mus en markant udvidelse af aktiverede humane T-celler, der resulterer i graft versus host disease (GVHD) ved 12 ugers alderen, hvilket forhindrer langtidsundersøgelser. Alternativt kan humane hæmatopoietiske stamceller fra navlesnorsblod (CB), knoglemarv og føtal lever også bruges til engraftment og produktion af det menneskelige immunsystem de novo. I dette system producerer de hæmatopoietiske stamceller et humant immunsystem med flere afstamninger med generering af T, B og medfødte immunceller, der er vigtige tolerante over for museværten sammenlignet med PBMC-musene, der hovedsagelig udvikler T-celler. Derfor er GVHD fraværende eller stærkt forsinket, og undersøgelser kan udvides til mus op til 10 måneders alderen. CB giver en nem, tilgængelig og ikke-invasiv kilde til CD34+ humane hæmatopoietiske stamceller, der letter indkapsling af flere HIS-mus med genetisk identiske immunsystemer 17,18,20,21. I løbet af de sidste par år er HIS musemodeller blevet brugt i vid udstrækning til at studere immunterapi og TME 3,4,5,6. På trods af udviklingen af humane afledte immunsystemer i disse mus vokser humane xenografttumorer med lignende hastigheder sammenlignet med kontrolimmunodeficiente mus og giver mulighed for det komplekse samspil mellem kræftcellerne og immuncellerne, hvilket er vigtigt for at opretholde mikromiljøet i den indpodede PDX 3,7,8 . Denne protokol er blevet brugt til at udføre over 50 undersøgelser, der tester behandlinger i HIS-BRGS-mus med PDX'er og CDX'er. En vigtig konklusion er, at humane tumorer i HIS-musene opretholder deres unikke TME som defineret ved molekylær evaluering af tumoren i forhold til den oprindelige patientprøve og immuninfiltrategenskaber 3,22,23. Vores gruppe fokuserer på dybdegående evaluering af HIS i både immunorganer og tumoren ved hjælp af multiparameterflowcytometri. Heri beskriver vi en protokol til humanisering af BRGS-mus, evaluering af kimærisme, implantation af humane tumorer, tumorvækstmålinger, kræftbehandlingsadministration og analyse af HIS-cellerne ved flowcytometri.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe w/needles</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>1031815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Pro Separator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Golgi Stop Protein Transport Inhibitor with monensin</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Stim Cocktail</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>509305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chill 15 Rack</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-952</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-plugged glass pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-8B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Basement membrane extract</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>363200502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytek Aurora</td>
			<td>Cytek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9003-98-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eBioscience FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Set</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>00-5523-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryonic Stemcell FCS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10439001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tubes; 1.5 mL volume</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>616201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Benchmark</td>
			<td>100-106 500mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll Hypaque</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>45001752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo Software</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - fine</td>
			<td>Roboz Surgical&#160;</td>
			<td>RS5045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps normal</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>RS4919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>F75P1GAL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted Glass Slides</td>
			<td>Corning</td>
			<td>1255310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentlemacs C-Tubes</td>
			<td>Miltenyi&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACS Dissociator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass pipettes</td>
			<td>DWK Life Sciences</td>
			<td>63A53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS w/ Ca &#38; Mg</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>55037C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT25060CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I2511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>401108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMDM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12440053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase DL</td>
			<td>Roche</td>
			<td>5466202001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Blue</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>L23105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>JDC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-unabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>H2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>UHB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-unlabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>SA-DA4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiRad 350</td>
			<td>Precision X-Ray</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-nitrophenyl substrate</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>34045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRISM</td>
			<td>Graphpad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu FLT3L</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>308-FK-005/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu IL6</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>206-IL-010/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu SCF</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>255SC010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-39</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>8047-15-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>862945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipettes 25 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1367811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>567-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile molecular water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7732-18-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeti Cell Analyzer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>12004279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zombie Green</td>
			<td>biolegend</td>
			<td>423112</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors

At vende den immunsuppressive karakter af tumormikromiljøet er afgørende for en vellykket behandling af kræft med immunterapilægemidler. Murine cancer modeller er ekstremt begrænsede i deres mangfoldighed og lider af dårlig oversættelse til klinikken. For at tjene som en mere fysiologisk præklinisk model for immunterapistudier er denne protokol udviklet til at evaluere behandlingen af humane tumorer i en mus rekonstitueret med et humant immunsystem. Denne unikke protokol demonstrerer udviklingen af humane immunsystem (HIS, "humaniserede") mus, efterfulgt af implantation af en human tumor, enten en cellelinjeafledt xenograft (CDX) eller en patientafledt xenograft (PDX). HIS-mus genereres ved at injicere CD34+ humane hæmatopoietiske stamceller isoleret fra navlesnorsblod i neonatal BRGS (BALB/c Rag2-/- IL2RγC-/- NOD SIRPα) stærkt immundefekte mus, der også er i stand til at acceptere en xenogenisk tumor. Betydningen af kinetikken og egenskaberne ved udvikling af det menneskelige immunsystem og tumorimplantation understreges. Endelig beskrives en dybdegående evaluering af tumormikromiljøet ved hjælp af flowcytometri. I talrige undersøgelser ved hjælp af denne protokol blev det konstateret, at tumormikromiljøet hos individuelle tumorer rekapituleres i HIS-PDX-mus; "Varme" tumorer udviser stor immuninfiltration, mens "kolde" tumorer ikke gør det. Denne model fungerer som testområde for kombinationsimmunterapier til en bred vifte af humane tumorer og repræsenterer et vigtigt redskab i søgen efter personlig medicin.

Efter flanketumorprotokollen og eksperimentel tidslinje (figur 1) blev tumorvækst og immunrespons på en målrettet tyrosinkinasehæmmer (TKI) terapi og nivolumab kombinationsbehandling undersøgt i to forskellige humane kolorektal cancer (CRC) PDX'er. TKI-lægemidlerne er blevet undersøgt i immunodeficiente værter for kun at evaluere tumorvækst29. Denne model muliggjorde undersøgelsen af ændringer i immunresponset af TKI alene, og endnu vigtigere, i kombination...

Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Denne protokol skitserer dannelsen af humane immunsystemmus (HIS) til immuno-onkologiske undersøgelser. Instruktioner og overvejelser i brugen af denne model til test af humane immunotermiske lægemidler på humane tumorer implanteret i denne model præsenteres med vægt på karakterisering af immunsystemets respons på tumoren.

Test af kræftimmunotermiske lægemidler i en humaniseret musemodel, der bærer humane tumorer

Reversing the immunosuppressive nature of the tumor microenvironment is critical for the successful treatment of cancers with immunotherapy drugs. Murine ...

Denne protokol skitserer dannelsen af Human Immune System eller HIS-mus til prækliniske immuno-onkologiske undersøgelser. Musekræftmodeller er begrænsede i deres mangfoldighed og oversætter dårligt til klinikken. Denne teknik tjener som en præklinisk model for immunterapiundersøgelser ved at evaluere behandlingen af humane tumorer i en mus med et humant immunsystem.Den humaniserede musemodel kan bruges til at studere flere aspekter af human immunologi, herunder reaktioner på mange infektioner eller kræft i det menneskelige immunsystem. At erhverve en pålidelig og robust kilde til navlestrengsblod og opretholde sundheden for den immundefekte musekoloni kan være udfordrende. Ekspertise inden for flowcytometri og immunologisk analyse er afgørende.Demonstration af proceduren vil være Kristina Larsen, en forskningsservicemedarbejder fra mit laboratorium. Til at begynde med skal du resuspendere den CD34-positive cellepille isoleret fra navlestrengsblod i 300 mikroliter magnetisk celleseparatorbuffer pr. En gange 10 til den ottende celle. Tilsæt 100 mikroliter FCR-blokerende reagens pr. En gange 10 til de ottende celler, efterfulgt af 100 mikroliter CD34-positive magnetiske perler pr. En gange 10 til de ottende celler, og inkuber ved fire grader Celsius i 30 minutter.Derefter tilsættes fem milliliter magnetisk celleseparatorbuffer pr. En gange 10 til de ottende celler og drej ved 360 g i 10 minutter ved fire grader Celsius. Gentag vasketrinnet og resuspender pelleten i 500 mikroliter pr. 100 millioner celler magnetisk celleseparatorbuffer i et 15 ml konisk rør mærket ufraktioneret. Mærk yderligere to 15 ml rør CD34-negative og CD34-positive Placer de tre rør på et kølestativ.Adskil cellerne ved hjælp af programmet med to kolonner til positiv udvælgelse på en automatisk magnetisk celleseparator i et biosikkerhedsskab. Dernæst skal du forberede navlestrengsblod eller CB-medium som beskrevet i manuskriptet til udvidelse og frysning af CD34-positive humane stamceller og passere gennem et 0,22 mikron filter. Resuspender de CD34-positive celler ved 100.000 pr. Milliliter CB-medium og inkuber ved 37 grader Celsius.På dag tre tilsættes et lige stort volumen CB-medium uden cytokiner til kolben. På dag fem høstes de udvidede CD34-positive celler. Pipetter cellesuspensionen op og ned, og saml i et 50 ml konisk rør.Der tilsættes nok CB-medium til at dække bunden af kolben. Brug en celleskraber til at skrabe hele bunden af kolben. Saml alle medier i det samme 50 ml rør, og centrifuger.Resuspender cellerne i to ml CB-medium og centrifuger. Opsug mediet ned til pelleten, og resuspender pelleten i et frysemedium. Start derefter CD34-positiv celleforberedelse tre timer efter bestråling af hvalpen.Varm 10 ml CB-medier i et 50 ml rør. Hent et hætteglas med in vitro udvidede og frosne CD34-positive celler for hver fire til seks hvalpe, der skal injiceres. Optø hurtigt ved 50 til 55 grader Celsius, indtil kun en lille mængde is er synlig, og tilsæt cellerne til det opvarmede CB-medium.Brug en milliliter medium til at skylle hvert hætteglas, og drej cellerne ved 360 g i 12 minutter ved fire grader Celsius. Opsug mediet forsigtigt. Resuspender pellet i to ml CB-medier og tæl cellerne.Centrifuger igen cellerne, aspirer mediet og resuspender pelleten i 100 mikroliter steril PBS pr. N plus en hvalp til injektion, hvilket resulterer i 250.000 til 450.000 CD34-positive celler pr. Mus. For PBMC-isolering fra museblod blandes blodheparinet ved forsigtigt at pipettere op og ned og langsomt overlejres oven på 500 mikroliter 1.077 gram pr. milliliter densitetsgradient, idet du er forsigtig med ikke at forstyrre grænsefladen. Centrifuger røret ved 1.220 g i 20 minutter ved stuetemperatur uden pauser.Fjern så mange celler som muligt fra buffy-pelsen med en 200 mikroliter pipette, og tilsæt til det nye 1,5 milliliter rør, der indeholder 750 mikroliter høstmedium. Der centrifugeres ved 360 g i 11 minutter. Opsug mediet til 50 mikroliter, og resuspender pelleten i 750 mikroliter høstmedium.Hent dataene for 100 mikroliter af hver prøve på et flowcytometer. Importer derefter fcs-filen til flowdataredigeringssoftwaren, og anvend en polygonport på et FSC-A versus SSC-A-plot. Skift akserne til FSC-A versus FSC-H, og port cellerne på den lineære diagonal, undtagen dubletterne, der stikker ud fra linjen.Vælg disse celler, og skift akserne til hCD45 versus mCD45. Anvend en polygonport på den hCD45-positive population, og anvend navnet menneske. Anvend en polygonport på den mCD45-positive population, og anvend navnet mus.Opret en optællingsstatistik for populationer af mennesker og mus. Vælg derefter den menneskelige befolkning, og skift akserne til CD19 versus CD3. Anvend en polygonport på de CD19-positive celler, og navngiv dem B-celler.Anvend en polygonport på den CD3-positive population, og navngiv den T-celler. Anvend derefter en polygonport på den dobbelte negative population, og navngiv den ikke-TB. Vælg T-cellepopulationen, og skift akserne til CD4 versus CD3.Anvend en polygonport på den CD4-positive population, og navngiv den CD4-positiv. Anvend en polygonport på den CD4-negative population, og navngiv den CD8. Vælg ikke-TB-populationen, og skift akserne til CD56 versus myeloid.Anvend en polygonport på den samlede CD56-positive population, og navngiv den NK-celler. Anvend derefter en polygonport på den CD56-negative og myeloid-positive population, og navngiv den myeloid. Opret en tabel til procent- og tællestatistik for alle populationer, og eksportér den til et regneark.Beregn procent hCD45-kimærisme ved hjælp af den angivne formel. Efter dyrkning af tumorceller i musen og administration af lægemiddelbehandlinger høstes vævene. Placer musen på et skumdissektionsbræt med stifter for at holde dem på plads og arme og ben strakt 45 grader.Lav et snit op midt på torsoen, der starter nær bækkenet og strækker sig til hagen. Træk huden til kanten, og hold den på plads med stifter. Uddrag lymfeknuderne ved hjælp af fine tang i rækkefølgen aksillær, cervikal, mesenterisk, inguinal og hiatal.Placer lymfeknuderne på den ene side af det frostede glasglas i en petriskål i otte ml høstmedium. Hold diasene vinkelret på hinanden med de frostede kanter indad, tryk forsigtigt vævene, indtil det cellulære indhold frigives. Skyl diaset flere gange ved at trække dem fra hinanden og sammen for at frigøre det maksimale antal celler.Saml cellerne med en fem tommer glaspipette, og filtrer dem gennem en ni tommer bomuldstilsluttet pipette i et mærket 15 ml konisk rør. Derefter ekstraheres tumoren fra den åbne flanke ved at holde tumoren med tang, mens du langsomt klipper ved tumormargenerne med dissektionssaks. Væg tumoren og fjern 1/4 af tumoren til RNA og immunhistokemisk behandling.Placer de resterende 3/4 af tumoren i en seks centimeter skål, og hak den i en millimeter stykker ved hjælp af et skalpelblad. Overfør tumorstykkerne til et dissociationsrør. Skyl derefter skålen med ufuldstændigt TIL-medium, og tilsæt det til røret.Tilsæt kollagenasepræparat, og dissocier vævet ved hjælp af mekanisk dissociation ved 37 grader Celsius i 30 minutter til en time. Før suspensionen over et 100 mikron filter i et 50 ml konisk rør og skyl filteret med 10 ml TIL komplette medier. Centrifuger og resuspender pelleten i lige nok høstmedium med DNase, så cellesuspensionen let kan passere gennem en P1000-pipettespids og registrere volumen til nedstrømsanalyse.I PDX CRC 307P bremsede kombinationsbehandlingen væksten af tumoren, som bestemt af tumorvækstvolumener over tid, tumorvægte og den specifikke væksthastighed. PDX CRC 307M testet i en anden kohorte af mus var mindre påvirket af den samme kombinationsbehandling i HIS BRGS-mus. Baseret på den samlede humane hCD45-positive og humane T-celle hCD3-positive kimærisme i blodet før tumorimplantation steg begge parametre i det perifere immunsystem og TIL i kombination med behandlede CRC 307P-bærende mus, men ikke CRC 307M-modellen.Undersøgelse af de humane T-celler afslørede flere aktiverede T-celler i CRC 307P-tumorerne, men ikke lymfen fra kombinationsbehandlede mus. Der var også flere effektorhukommelse CD8-positive T-celler og færre TIM-3-positive T-celler i de kombinationsbehandlede CRC 307P-tumorer. I modsætning hertil blev denne forskel ikke bemærket i CRC 307M-modellen.Endvidere blev der ikke observeret ændringer i frekvensen af cytotoksiske T-cellepopulationer blandt de kombinationsbehandlede mus, selvom højere cytotoksiske T-celler blev observeret hos ubehandlet. Kombinationsbehandling påvirkede ikke frekvenserne af Tregs i hverken CRC 307P lymfeorganer eller tumorer, selvom CRC 307M-dataene viste en tendens til reduceret Tregs. Immunrelaterede ændringer i tumorceller blev forhøjet ved anvendelse af flowcytometri.Øget ekspression af MHC klasse I og klasse II blev observeret på CRC 307P tumorceller udskåret fra kombinationsbehandlede HIS BRGS-mus. I CRC 307M-modellen inducerede den samme lægemiddelbehandling HLA klasse II-ekspression på tumorcellerne. Tilsvarende resulterede kombinationsbehandlingen i øget PD-L1-ekspression på de EpCAM-positive CRC 307P-tumorceller.Endelig blev korrelationer mellem immunresponser og tumorvækst undersøgt. Forhøjede CD4-positive T-celler viste en signifikant sammenhæng med mindre tumorvækst, og mere specifikt de HLA-DR-positive aktiverede T-celler i kombinationen behandlede HIS-mus. Steril teknik under isolering af de CD34-positive celler, da musene er ekstremt immundefekte.Den resulterende kimærisme er variabel inden for og mellem navlestrengsbloddonorer, og T-celler har den største variation. Ubegrænsede immunterapikombinationer kan udføres såvel som mekanistiske og lægemiddeldoseringskinetiske undersøgelser, for eksempel sletning af CD8 T-celler for at bekræfte deres rolle. Det er vigtigt, at narkotikarelaterede toksiciteter også kan undersøges.Det gav en mere relevant og tilgængelig præklinisk model til test af humane immunterapier til oversættelse til klinikken. Flere kliniske forsøg er i gang nu baseret på disse data.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescent ortotopisk Mouse Model af kræft i bugspytkirtlen

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

In vivo-model for prøvetagning Virkning af Hypoxi på tumormetastase

Hypoxia has been implicated in the metastasis of Ewing sarcoma (ES) by clinical observations and in vitro data, yet direct evidence for its pro-metastatic ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

Den Colon-26 Carcinoma Tumor-bærende mus som en model for Studiet af Cancer Kakeksi

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Tumor Engraftment i en Xenograft musemodel af menneskelige Mantle celle lymfom

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

Udvikling af en menneskelig prækliniske Model af Osteoclastogenesis fra perifert blod monocytter Co kulturperler med bryst kræft cellelinjer

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

Et humant perifert blod mononukleære celle (PBMC) Enpodet humaniseret xenograft model for translational immuno-onkologi (I-O) forskning

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

Murine model af metastatisk levertumorer i fastsættelsen af ischemia reperfusion skade

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Opnåelse kræft stamceller kugler fra gynækologiske og brystkræft tumorer

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

En hurtig screeningsarbejdsgang til identifikation af potentiel kombinationsbehandling for GBM ved hjælp af patientafledte gliomstamceller

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...

High-Resolution Ultrasonography for the Analysis of Orthotopic ATC Tumors in a Genetically Engineered Mouse Model

Højopløsnings ultralyd til analyse af ortopiske ATC-tumorer i en genetisk manipuleret musemodel

Anaplastic thyroid carcinoma (ATC) is associated with a poor prognosis and short median survival time, but no effective treatment improves the outcomes ...