Name: testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors
Uploaded: 2022-12-16T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

We willen zowel de Animal Research Facility (OLAR) bedanken voor hun zorg voor onze muizen, als de Flow Cytometry Shared Resource ondersteund door de Cancer Center Support Grant (P30CA046934) op ons instituut voor hun immense hulp bij al ons werk. We erkennen ook zowel Gail Eckhardt als Anna Capasso voor onze inaugurele samenwerkingen met immunotherapieën voor menselijke PDX's in ons HIS-BRGS-model. Deze studie werd gedeeltelijk ondersteund door de National Institutes of Health P30CA06934 Cancer Center Support Grant met behulp van de PHISM (Pre-clinical Human Immune System Mouse Models) Shared Resource, RRID: SCR_021990 and Flow Cytometry Shared Resource, RRID: SCR_022035. Dit onderzoek werd mede mogelijk gemaakt door de NIAID van de National Institutes of Health onder contractnummer 75N93020C00058.

Al het dierenwerk werd uitgevoerd onder dierprotocollen die zijn goedgekeurd door de University of Colorado Denver Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC-protocollen # 00593 en # 00021). Al het dierenwerk werd uitgevoerd in overeenstemming met het Office of Laboratory Animal Resources (OLAR), een geaccrediteerde faciliteit van de American Association for Laboratory Animal Care, aan de University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus. Alle menselijke navelstrengbloedmonsters werden verkregen als donaties ...

<ol>
	<li>Chulpanova, D. S., Kitaeva, K. V., Rutland, C. S., Rizvanov, A. A., Solovyeva, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+tumor+models+for+advanced+cancer+immunotherapy.">Mouse tumor models for advanced cancer immunotherapy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4118 (2020).</li><li>Olson, B., Li, Y., Lin, Y., Liu, E. T., Patnaik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+cancer+immunotherapy+research.">Mouse models for cancer immunotherapy research.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1358-1365 (2018).</li><li>Marin-Jimenez, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+cancer+immunotherapy+in+a+human+immune+system+mouse+model:+correlating+treatment+responses+to+human+chimerism,+therapeutic+variables+and+immune+cell+phenotypes.">Testing cancer immunotherapy in a human immune system mouse model: correlating treatment responses to human chimerism, therapeutic variables and immune cell phenotypes.</a> Frontiers in Immunology. 12, 607282 (2021).</li><li>Yin, L., Wang, X. J., Chen, D. X., Liu, X. N., Wang, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+model:+a+review+on+preclinical+applications+for+cancer+immunotherapy.">Humanized mouse model: a review on preclinical applications for cancer immunotherapy.</a> American Journal of Cancer Research. 10 (12), 4568-4584 (2020).</li><li>Cogels, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+as+a+valuable+pre-clinical+model+for+cancer+immunotherapy+research.">Humanized mice as a valuable pre-clinical model for cancer immunotherapy research.</a> Frontiers in Oncology. 11, 784947 (2021).</li><li>Jin, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+humanized+mouse+with+patient-derived+xenografts+for+cancer+immunotherapy+studies:+A+comprehensive+review.">Development of humanized mouse with patient-derived xenografts for cancer immunotherapy studies: A comprehensive review.</a> Cancer Science. 112 (7), 2592-2606 (2021).</li><li>Capasso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+immune+responses+to+anti-PD-1+mono+and+combination+immunotherapy+in+hematopoietic+humanized+mice+implanted+with+tumor+xenografts.">Characterization of immune responses to anti-PD-1 mono and combination immunotherapy in hematopoietic humanized mice implanted with tumor xenografts.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 7 (1), 37 (2019).</li><li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+studying+efficacy+and+mechanisms+of+PD-1-targeted+cancer+immunotherapy.">Humanized mice in studying efficacy and mechanisms of PD-1-targeted cancer immunotherapy.</a> The FASEB Journal. 32 (3), 1537-1549 (2018).</li><li>Yong, K. S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+as+a+tool+to+predict+immunotoxicity+of+human+biologics.">Humanized mouse as a tool to predict immunotoxicity of human biologics.</a> Frontiers in Immunology. 11, 553362 (2020).</li><li>Shen, H. W., Jiang, X. L., Gonzalez, F. J., Yu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+transgenic+mouse+models+for+drug+metabolism+and+pharmacokinetic+research.">Humanized transgenic mouse models for drug metabolism and pharmacokinetic research.</a> Current Drug Metabolism. 12 (10), 997-1006 (2011).</li><li>Bosma, G. C., Custer, R. P., Bosma, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+severe+combined+immunodeficiency+mutation+in+the+mouse.">A severe combined immunodeficiency mutation in the mouse.</a> Nature. 301 (5900), 527-530 (1983).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+defects+in+innate+and+adaptive+immunologic+function+in+NOD/LtSz-scid+mice.">Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice.</a> The Journal of Immunology. 154 (1), 180-191 (1995).</li><li>Legrand, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+CD47/signal+regulatory+protein+alpha+(SIRP(alpha))+interaction+is+required+for+optimal+human+T-+and+natural+killer-+(NK)+cell+homeostasis+in+vivo.">Functional CD47/signal regulatory protein alpha (SIRP(alpha)) interaction is required for optimal human T- and natural killer- (NK) cell homeostasis in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (32), 13224-13229 (2011).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> The Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Traggiai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+human+adaptive+immune+system+in+cord+blood+cell-transplanted+mice.">Development of a human adaptive immune system in cord blood cell-transplanted mice.</a> Science. 304 (5667), 104-107 (2004).</li><li>Theocharides, A. P., Rongvaux, A., Fritsch, K., Flavell, R. A., Manz, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+hemato-lymphoid+system+mice.">Humanized hemato-lymphoid system mice.</a> Haematologica. 101 (1), 5-19 (2016).</li><li>Goldman, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+human+cell+engraftment+in+mice+deficient+in+RAG2+and+the+common+cytokine+receptor+gamma+chain.">Enhanced human cell engraftment in mice deficient in RAG2 and the common cytokine receptor gamma chain.</a> British Journal of Haematology. 103 (2), 335-342 (1998).</li><li>Stripecke, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innovations,+challenges,+and+minimal+information+for+standardization+of+humanized+mice.">Innovations, challenges, and minimal information for standardization of humanized mice.</a> EMBO Molecular Medicine. 12 (7), (2020).</li><li>Allen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+immune+system+mouse+models:+progress,+challenges+and+opportunities.">Humanized immune system mouse models: progress, challenges and opportunities.</a> Nature Immunology. 20 (7), 770-774 (2019).</li><li>Gammelgaard, O. L., Terp, M. G., Preiss, B., Ditzel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cancer+evolution+in+the+context+of+a+human+immune+system+in+mice.">Human cancer evolution in the context of a human immune system in mice.</a> Molecular Oncology. 12 (10), 1797-1810 (2018).</li><li>Rios-Doria, J., Stevens, C., Maddage, C., Lasky, K., Koblish, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+cancer+xenografts+in+humanized+mice.">Characterization of human cancer xenografts in humanized mice.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 8 (1), 000416 (2020).</li><li>Gombash Lampe, S. E., Kaspar, B. K., Foust, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+injections+in+neonatal+mice.">Intravenous injections in neonatal mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52037 (2014).</li><li>Lang, J., Weiss, N., Freed, B. M., Torres, R. M., Pelanda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+hematopoietic+humanized+mice+in+the+newborn+BALB/c-Rag2null+Il2r&#947;null+mouse+model:+a+multivariable+optimization+approach.">Generation of hematopoietic humanized mice in the newborn BALB/c-Rag2null Il2r&#947;null mouse model: a multivariable optimization approach.</a> Clinical Immunology. 140 (1), 102-116 (2011).</li><li>Laskowski, T. J., Hazen, A. L., Collazo, R. S., Haviland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rigor+and+reproducibility+of+cytometry+practices+for+immuno-oncology:+a+multifaceted+challenge.">Rigor and reproducibility of cytometry practices for immuno-oncology: a multifaceted challenge.</a> Cytometry Part A. 97 (2), 116-125 (2020).</li><li>Bagby, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+maintenance+of+a+preclinical+patient+derived+tumor+xenograft+model+for+the+investigation+of+novel+anti-cancer+therapies.">Development and maintenance of a preclinical patient derived tumor xenograft model for the investigation of novel anti-cancer therapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54393 (2016).</li><li>Laajala, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+design+and+analysis+of+preclinical+intervention+studies+in+vivo.">Optimized design and analysis of preclinical intervention studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 30723 (2016).</li><li>Na, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+patient-derived+xenografts+from+patients+with+gastrointestinal+stromal+tumors:+analysis+of+clinicopathological+characteristics+related+to+engraftment+success.">Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success.</a> Scientific Reports. 10 (1), 7996 (2020).</li><li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RX-5902,+a+novel+beta-catenin+modulator,+potentiates+the+efficacy+of+immune+checkpoint+inhibitors+in+preclinical+models+of+triple-negative+breast+cancer.">RX-5902, a novel beta-catenin modulator, potentiates the efficacy of immune checkpoint inhibitors in preclinical models of triple-negative breast cancer.</a> BMC Cancer. 20 (1), 1063 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+adrenocortical+cancer+humanized+mouse+model+to+characterize+anti-PD1+effects+on+tumor+microenvironment.">Development of an adrenocortical cancer humanized mouse model to characterize anti-PD1 effects on tumor microenvironment.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 105 (1), 26-42 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+lymphocyte+reconstitution+in+a+humanized+mouse+model+reveal+a+requirement+of+T+cells+for+human+B+cell+maturation.">Studies of lymphocyte reconstitution in a humanized mouse model reveal a requirement of T cells for human B cell maturation.</a> The Journal of Immunology. 190 (5), 2090-2101 (2013).</li><li>Katano, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-Rag2null+IL-2R&#947;null+mice:+an+alternative+to+NOG+mice+for+generation+of+humanized+mice.">NOD-Rag2null IL-2R&#947;null mice: an alternative to NOG mice for generation of humanized mice.</a> Experimental Animalas. 63 (3), 321-330 (2014).</li><li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parameters+for+establishing+humanized+mouse+models+to+study+human+immunity:+analysis+of+human+hematopoietic+stem+cell+engraftment+in+three+immunodeficient+strains+of+mice+bearing+the+IL2r&#947;(null)+mutation.">Parameters for establishing humanized mouse models to study human immunity: analysis of human hematopoietic stem cell engraftment in three immunodeficient strains of mice bearing the IL2r&#947;(null) mutation.</a> Clinical Immunology. 135 (1), 84-98 (2010).</li><li>Hasgur, S., Aryee, K. E., Shultz, L. D., Greiner, D. L., Brehm, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+immunodeficient+mice+bearing+human+immune+systems+by+the+engraftment+of+hematopoietic+stem+cells.">Generation of immunodeficient mice bearing human immune systems by the engraftment of hematopoietic stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1438, 67-78 (2016).</li><li>Andre, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+human+CD34++stem+cell-engrafted+nonobese+diabetic/SCID/IL-2R&#947;null+mice+show+impaired+CD8++T+cell+maintenance+and+a+functional+arrest+of+immature+NK+cells.">Long-term human CD34+ stem cell-engrafted nonobese diabetic/SCID/IL-2R&#947;null mice show impaired CD8+ T cell maintenance and a functional arrest of immature NK cells.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2710-2720 (2010).</li><li>Wunderlich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+multilineage+human+hematopoietic+reconstitution+and+function+in+NSGS+mice.">Improved multilineage human hematopoietic reconstitution and function in NSGS mice.</a> PLoS One. 13 (12), 0209034 (2018).</li><li>Lee, J., Brehm, M. A., Greiner, D., Shultz, L. D., Kornfeld, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engrafted+human+cells+generate+adaptive+immune+responses+to+Mycobacterium+bovis+BCG+infection+in+humanized+mice.">Engrafted human cells generate adaptive immune responses to Mycobacterium bovis BCG infection in humanized mice.</a> BMC Immunology. 14, 53 (2013).</li><li>Masse-Ranson, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+thymopoiesis+and+improved+T-cell+responses+in+HLA-A2/-DR2+transgenic+BRGS-based+human+immune+system+mice.">Accelerated thymopoiesis and improved T-cell responses in HLA-A2/-DR2 transgenic BRGS-based human immune system mice.</a> European Journal of Immunology. 49 (6), 954-965 (2019).</li><li>Oswald, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+infiltration+pattern+in+non-small+cell+lung+cancer+PDX+models+is+a+model+immanent+feature+and+correlates+with+a+distinct+molecular+and+phenotypic+make-up.">Immune cell infiltration pattern in non-small cell lung cancer PDX models is a model immanent feature and correlates with a distinct molecular and phenotypic make-up.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 10 (4), 004412 (2022).</li></ol>

In de afgelopen 6 jaar heeft ons onderzoeksteam, gebruikmakend van onze expertise in zowel immunologie als gehumaniseerde muizen, een broodnodig preklinisch model ontwikkeld om immunotherapieën te testen op een verscheidenheid aan menselijke tumoren 3,7,30,31. Dit protocol benadrukt de overweging van de variabiliteit van het model, met speciale aandacht voor de immunotherapie-centrische mensel...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated from:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)
to:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Kristina Larsen1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Muiskankermodellen zijn belangrijk voor het vaststellen van basismechanismen van tumorgroei en immuunvlucht. Kankerbehandelingsstudies in muismodellen hebben echter eindige vertaling naar de kliniek opgeleverd vanwege beperkte syngenetische modellen en soortspecifieke verschillen 1,2. De opkomst van immuuntherapieën als een dominante benadering om tumoren onder controle te houden, heeft de noodzaak van een in vivo model met een functioneel menselijk immuunsysteem herhaald. Vooruitgang in muizen met het menselijk immuunsysteem (HIS-muizen) in het afgelopen decennium heeft het mogelijk gemaakt om immuno-oncologie in vivo te bestuderen in een breed scala aan kankertypen en immunotherapeutische middelen 3,4,5,6. Menselijke tumormodellen, waaronder cellijn-afgeleide en patiënt-afgeleide xenografts (CDX en PDX, respectievelijk), groeien goed in HIS-muizen en zijn in de meeste gevallen bijna identiek aan hun groei in de immunodeficiënte gastheer zonder menselijke hematopoietische engraftment 7,8. Op basis van deze belangrijke bevinding hebben onderzoekers het HIS-muismodel gebruikt om menselijke immunotherapieën te bestuderen, waaronder combinatietherapieën die zijn ontworpen om de tumormicro-omgeving (TME) te veranderen om immunosuppressie te verminderen en zo immuungestuurde tumordoding te verbeteren. Deze preklinische modellen helpen de problemen van heterogeniteit van menselijke kankers aan te pakken en kunnen ook het succes van de behandeling voorspellen en immuungerelateerde geneesmiddeltoxiciteiten monitoren 9,10.
De productie van een muismodel met een menselijk immuunsysteem door de introductie van menselijke hematopoëtische stamcellen vereist een ontvangende immunodeficiënte muis die de xenograft niet zal afstoten. De huidige HIS-muismodellen zijn afgeleid van immunodeficiënte muizenstammen die meer dan 30 jaar geleden werden gerapporteerd. De eerste immunodeficiënte muizenstam die werd beschreven was SCID-muizen zonder T- en B-cellen11, gevolgd door een hybride NOD-SCID met een SIRPα-polymorfisme dat verantwoordelijk is voor muismacrofaagtolerantie voor menselijke cellen, als gevolg van verhoogde binding voor het NOD SIRPα-allel aan het menselijke CD47-molecuul12,13. In de vroege jaren 2000 was de deletie van de gemeenschappelijke gammaketen van de IL-2-receptor (IL-2Rγc) op zowel BALB / c- als NOD-immunodeficiënte stammen een game changer voor verbeterde menselijke transplantatie, vanwege genetische deleties die de ontwikkeling van NK-cellen van de gastheer verbieden14,15,16,17. Alternatieve modellen, zoals BRG- en NRG-muizen, bereiken T- en B-celdeficiëntie door deletie van het Rag1- of Rag2-gen, vereist voor T- en B-celreceptorgenherschikkingen en dus de rijping en overleving van lymfocyten18,19. De BRGS (BALB/c -Rag2 nullIl2RγCnullSirpα NOD) muis die hierin wordt gebruikt, combineert de IL-2Rγ-ketendeficiëntie en hetNOD SIRPα-allel op de Rag2-/- achtergrond, wat resulteert in een zeer immunodeficiënte muis zonder T-, B- of NK-cellen, maar met voldoende kracht en gezondheid om langdurige transplantatie van meer dan 30 weken mogelijk te maken13.
HIS-muizen kunnen op meerdere manieren worden gegenereerd, waarbij menselijke PBMC-injectie de meest directe methode is15,18,20. Deze muizen hebben echter een uitgesproken uitbreiding van geactiveerde menselijke T-cellen die resulteert in graft versus host disease (GVHD) op de leeftijd van 12 weken, waardoor langetermijnstudies worden voorkomen. Als alternatief kunnen menselijke hematopoëtische stamcellen uit navelstrengbloed (CB), beenmerg en foetale lever ook worden gebruikt voor transplantatie en productie van het menselijk immuunsysteem de novo. In dit systeem produceren de hematopoëtische stamcellen een multi-lineage menselijk immuunsysteem met de generatie van T, B en aangeboren immuuncellen die belangrijk tolerant zijn voor de muisgastheer, vergeleken met de PBMC-muizen die voornamelijk T-cellen ontwikkelen. Daarom is GVHD afwezig of sterk vertraagd en kunnen studies worden uitgebreid tot muizen tot 10 maanden oud. CB biedt een eenvoudige, toegankelijke en niet-invasieve bron van CD34+ menselijke hematopoëtische stamcellen die de engraftment van meerdere HIS-muizen met genetisch identieke immuunsystemen vergemakkelijkt 17,18,20,21. In de afgelopen jaren zijn HIS-muismodellen uitgebreid gebruikt om immunotherapie en de TME 3,4,5,6 te bestuderen. Ondanks de ontwikkeling van menselijke afgeleide immuunsystemen bij deze muizen, groeien menselijke xenografttumoren met vergelijkbare snelheden in vergelijking met de controle-immunodeficiënte muizen en maken ze het complexe samenspel tussen de kankercellen en immuuncellen mogelijk, wat belangrijk is voor het behoud van de micro-omgeving van de geënte PDX 3,7,8 . Dit protocol is gebruikt om meer dan 50 studies uit te voeren die behandelingen testen in HIS-BRGS-muizen met PDX's en CDX's. Een belangrijke conclusie is dat menselijke tumoren in de HIS-muizen hun unieke TME behouden zoals gedefinieerd door moleculaire evaluatie van de tumor ten opzichte van het initiële patiëntmonster en immuuninfiltraatkenmerken 3,22,23. Onze groep richt zich op een diepgaande evaluatie van de HIS in zowel immuunorganen als de tumor met behulp van multi-parameter flowcytometrie. Hierin beschrijven we een protocol voor de humanisatie van BRGS-muizen, evaluatie van chimerisme, implantatie van menselijke tumoren, tumorgroeimetingen, toediening van kankerbehandeling en analyse van de HIS-cellen door flowcytometrie.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe w/needles</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>1031815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Pro Separator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Golgi Stop Protein Transport Inhibitor with monensin</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Stim Cocktail</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>509305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chill 15 Rack</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-952</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-plugged glass pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-8B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Basement membrane extract</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>363200502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytek Aurora</td>
			<td>Cytek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9003-98-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eBioscience FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Set</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>00-5523-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryonic Stemcell FCS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10439001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tubes; 1.5 mL volume</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>616201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Benchmark</td>
			<td>100-106 500mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll Hypaque</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>45001752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo Software</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - fine</td>
			<td>Roboz Surgical&#160;</td>
			<td>RS5045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps normal</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>RS4919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>F75P1GAL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted Glass Slides</td>
			<td>Corning</td>
			<td>1255310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentlemacs C-Tubes</td>
			<td>Miltenyi&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACS Dissociator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass pipettes</td>
			<td>DWK Life Sciences</td>
			<td>63A53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS w/ Ca &#38; Mg</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>55037C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT25060CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I2511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>401108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMDM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12440053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase DL</td>
			<td>Roche</td>
			<td>5466202001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Blue</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>L23105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>JDC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-unabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>H2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>UHB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-unlabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>SA-DA4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiRad 350</td>
			<td>Precision X-Ray</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-nitrophenyl substrate</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>34045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRISM</td>
			<td>Graphpad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu FLT3L</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>308-FK-005/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu IL6</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>206-IL-010/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu SCF</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>255SC010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-39</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>8047-15-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>862945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipettes 25 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1367811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>567-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile molecular water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7732-18-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeti Cell Analyzer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>12004279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zombie Green</td>
			<td>biolegend</td>
			<td>423112</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors

Het omkeren van de immunosuppressieve aard van de micro-omgeving van de tumor is van cruciaal belang voor de succesvolle behandeling van kankers met immunotherapiegeneesmiddelen. Murine kankermodellen zijn uiterst beperkt in hun diversiteit en lijden aan een slechte vertaling naar de kliniek. Om te dienen als een meer fysiologisch preklinisch model voor immunotherapiestudies, is dit protocol ontwikkeld om de behandeling van menselijke tumoren te evalueren in een muis gereconstitueerd met een menselijk immuunsysteem. Dit unieke protocol toont de ontwikkeling van muizen van het menselijk immuunsysteem (HIS, "gehumaniseerd"), gevolgd door implantatie van een menselijke tumor, ofwel een cellijn-afgeleide xenograft (CDX) of een patiënt afgeleide xenograft (PDX). HIS-muizen worden gegenereerd door CD34+ menselijke hematopoëtische stamcellen geïsoleerd uit navelstrengbloed te injecteren in neonatale BRGS (BALB/c Rag2-/- IL2RγC-/- NODSIRPα) zeer immunodeficiënte muizen die ook in staat zijn om een xenogene tumor te accepteren. Het belang van de kinetiek en kenmerken van de ontwikkeling van het menselijk immuunsysteem en tumorimplantatie wordt benadrukt. Ten slotte wordt een diepgaande evaluatie van de tumormicro-omgeving met behulp van flowcytometrie beschreven. In talrijke studies met dit protocol werd gevonden dat de tumormicro-omgeving van individuele tumoren wordt gerecapituleerd in HIS-PDX-muizen; "Hete" tumoren vertonen grote immuuninfiltratie, terwijl "koude" tumoren dat niet doen. Dit model dient als proeftuin voor combinatie-immunotherapieën voor een breed scala aan menselijke tumoren en vormt een belangrijk hulpmiddel in de zoektocht naar gepersonaliseerde geneeskunde.

Volgens het flanktumorprotocol en de experimentele tijdlijn (figuur 1) werden de tumorgroei en immuunrespons op een gerichte tyrosinekinaseremmer (TKI) therapie en nivolumab-combinatiebehandeling bestudeerd in twee verschillende humane colorectale kanker (CRC) PDX's. De TKI-geneesmiddelen zijn onderzocht in immunodeficiënte gastheren om tumorgroei slechts29 te evalueren. Dit model maakte het mogelijk om veranderingen in de immuunrespons van het TKI alleen te bestuder...

Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Dit protocol schetst de generatie van muizen van het menselijk immuunsysteem (HIS) voor immuno-oncologische studies. Instructies en overwegingen bij het gebruik van dit model voor het testen van menselijke immunotherapeutica op menselijke tumoren die in dit model zijn geïmplanteerd, worden gepresenteerd met de nadruk op het karakteriseren van de reactie van het menselijk immuunsysteem op de tumor.

Testen van kankerimmunotherapeutica in een gehumaniseerd muismodel met menselijke tumoren

Reversing the immunosuppressive nature of the tumor microenvironment is critical for the successful treatment of cancers with immunotherapy drugs. Murine ...

Dit protocol schetst de generatie van het menselijk immuunsysteem, of HIS-muizen voor preklinische immuno-oncologische studies. Muizenkankermodellen zijn beperkt in hun diversiteit en vertalen zich slecht naar de kliniek. Deze techniek dient als een preklinisch model voor immunotherapiestudies door de behandeling van menselijke tumoren in een muis met een menselijk immuunsysteem te evalueren.Het gehumaniseerde muismodel kan worden gebruikt om meerdere aspecten van de menselijke immunologie te bestuderen, waaronder reacties op vele infecties of kankers van het menselijk immuunsysteem. Het verkrijgen van een betrouwbare en robuuste bron van navelstrengbloed en het handhaven van de gezondheid van de immunodeficiënte muizenkolonie kan een uitdaging zijn. Expertise in flowcytometrie en immunologische analyse is essentieel.Kristina Larsen, een professional op het gebied van onderzoeksdiensten uit mijn laboratorium, zal de procedure demonstreren. Om te beginnen, resuspendeerde de CD34-positieve celpellet geïsoleerd uit navelstrengbloed in 300 microliter magnetische celscheiderbuffer per één keer 10 tot de achtste cellen. Voeg 100 microliter FCR-blokkerend reagens toe per keer 10 tot de achtste cellen, gevolgd door 100 microliter CD34-positieve magnetische kralen per keer 10 tot de achtste cellen, en incuber bij vier graden Celsius gedurende 30 minuten.Voeg vervolgens vijf milliliter magnetische celscheidingsbuffer per keer 10 toe aan de achtste cellen en draai gedurende 10 minuten bij vier graden Celsius op 360 g. Herhaal de wasstap en resuspensie van de pellet in 500 microliter per 100 miljoen cellen magnetische celscheidingsbuffer in een conische buis van 15 milliliter met het label niet-gefractioneerd. Label nog twee buizen van 15 milliliter CD34-negatief en CD34-positief Plaats de drie buizen op een koelrek.Scheid de cellen met behulp van het positieve, tweekolomsselectieprogramma op een automatische magnetische celscheider in een bioveiligheidskast. Vervolgens, voor het uitbreiden en bevriezen van CD34-positieve menselijke stamcellen, bereid navelstrengbloed of CB-medium voor zoals beschreven in het manuscript en passeer een filter van 0,22 micron. Resuspendeer de CD34-positieve cellen bij 100.000 per milliliter CB-medium en incubeer bij 37 graden Celsius.Voeg op dag drie een gelijk volume CB-medium zonder cytokines toe aan de kolf. Oogst op dag vijf de uitgebreide CD34-positieve cellen. Pipetteer de celsuspensie op en neer en verzamel in een conische buis van 50 milliliter.Voeg voldoende CB-medium toe om de bodem van de kolf te bedekken. Schraap met behulp van een celschraper de gehele bodem van de kolf. Verzamel alle media in dezelfde buis van 50 milliliter en centrifugeer.Resuspendeer de cellen in twee milliliter CB-medium en centrifugeer. Zuig het medium aan tot op de pellet en resuspensie de pellet in een vriesmedium. Begin vervolgens met CD34-positieve celvoorbereiding drie uur na de bestraling van de pup.Verwarm 10 milliliter CB-media in een buis van 50 milliliter. Haal één injectieflacon met in vitro geëxpandeerde en bevroren CD34-positieve cellen op voor elke vier tot zes pups om te injecteren. Ontdooi snel bij 50 tot 55 graden Celsius totdat slechts een kleine hoeveelheid ijs zichtbaar is en voeg de cellen toe aan het verwarmde CB-medium.Gebruik een milliliter medium om elke injectieflacon af te spoelen en draai de cellen gedurende 12 minuten op 360 g bij vier graden Celsius. Zuig het medium voorzichtig op. Resuspendeerde de pellet in twee milliliter CB-media en telde de cellen.Nogmaals, centrifugeer de cellen, zuig het medium op en resuspendeer de pellet in 100 microliter steriele PBS per n plus één pups om te injecteren, wat resulteert in 250.000 tot 450.000 CD34-positieve cellen per muis. Voor PBMC-isolatie uit muizenbloed, meng de bloedheparine door zachtjes op en neer te pipetteren en leg langzaam bovenop 500 microliter van 1,077 gram per milliliter dichtheidsgradiënt en zorg ervoor dat de interface niet wordt verstoord. Centrifugeer de buis op 1.220 g gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur zonder onderbrekingen.Verwijder zoveel mogelijk cellen uit de buffy coat met een pipet van 200 microliter en voeg toe aan de nieuwe buis van 1,5 milliliter met 750 microliter oogstmedium. Centrifugeer gedurende 11 minuten op 360 g. Zuig het medium op tot 50 microliter en resuspensie van de pellet in 750 microliter oogstmedium.Verkrijg de gegevens voor 100 microliter van elk monster op een flowcytometer. Importeer vervolgens het fcs-bestand naar de software voor het bewerken van stroomgegevens en pas een polygoonpoort toe op een FSC-A- versus SSC-A-plot. Verander de assen in FSC-A versus FSC-H en ga de cellen op de lineaire diagonaal af, met uitzondering van de doubletten die uit de lijn steken.Selecteer deze cellen en verander de assen in hCD45 versus mCD45. Pas een polygoonpoort toe op de hCD45-positieve populatie en pas de naam mens toe. Pas een polygoonpoort toe op de mCD45-positieve populatie en pas de naammuis toe.Maak een telstatistiek voor mensen- en muizenpopulaties. Selecteer vervolgens de menselijke populatie en verander de assen in CD19 versus CD3. Pas een polygoonpoort toe op de CD19-positieve cellen en geef ze B-cellen.Pas een polygoonpoort toe op de CD3-positieve populatie en noem deze T-cellen. Pas vervolgens een polygoonpoort toe op de dubbele negatieve populatie en noem deze niet-TB. Selecteer de T-celpopulatie en wijzig de assen in CD4 versus CD3.Pas een polygoonpoort toe op de CD4-positieve populatie en noem deze CD4-positief. Pas een polygoonpoort toe op de CD4-negatieve populatie en noem deze CD8. Selecteer de niet-TB-populatie en verander de assen in CD56 versus myeloïde.Pas een polygoonpoort toe op de totale CD56-positieve populatie en geef deze NK-cellen een naam. Pas vervolgens een polygoonpoort toe op de CD56-negatieve en myeloïde-positieve populatie en noem het myeloïde. Maak een tabel voor het percentage en de tellingsstatistieken van alle populaties en exporteer deze naar een spreadsheet.Bereken het percentage hCD45 chimerisme met behulp van de aangegeven formule. Na het kweken van tumorcellen in de muis en het toedienen van medicamenteuze behandelingen, oogst de weefsels. Plaats de muis op een schuimsnijbord met pinnen om ze op hun plaats te houden en de armen en benen gestrekt op 45 graden.Maak een incisie in het midden van de romp, beginnend bij het bekken en zich uitstrekkend tot aan de kin. Trek de huid naar de rand en houd deze op zijn plaats met pinnen. Extraheer de lymfeklieren met behulp van een fijne tang in de volgorde axillair, cervicaal, mesenterisch, inguinaal en hiataal.Plaats de lymfeklieren aan één kant van de matglazen schuif in een petrischaaltje in acht milliliter oogstmedium. Houd de dia's loodrecht met de matranden naar binnen en druk zachtjes op de weefsels totdat de cellulaire inhoud wordt vrijgegeven. Spoel de dia meerdere keren af door ze uit elkaar te trekken en samen om het maximale aantal cellen vrij te maken.Verzamel de cellen met een glazen pipet van vijf inch en filter ze door een negen inch katoenen pipet in een gelabelde conische buis van 15 milliliter. Haal vervolgens de tumor uit de open flank door de tumor met een tang vast te houden terwijl u langzaam met een dissectieschaar aan de tumorranden knipt. Weeg de tumor en verwijder 1/4 van de tumor voor RNA- en immunohistochemieverwerking.Plaats de resterende 3/4 van de tumor in een schaal van zes centimeter en hak het in stukjes van een millimeter met behulp van een scalpelmesje. Breng de tumorstukken over in een dissociatiebuis. Spoel de schaal vervolgens af met onvolledig TIL-medium en voeg deze toe aan de buis.Voeg collagenasepreparaat toe en dissocieer het weefsel met behulp van mechanische dissociatie bij 37 graden Celsius gedurende 30 minuten tot een uur. Laat de suspensie over een 100 micron filter in een 50 milliliter conische buis en spoel het filter af met 10 milliliter TIL complete media. Centrifugeer en resuspendeer de pellet in net genoeg oogstmedium met DNase, zodat de cellen gemakkelijk door een P1000-pipetpunt kunnen gaan en het volume kunnen registreren voor downstream-analyse.In PDX CRC 307P vertraagde de combinatiebehandeling de groei van de tumor, zoals bepaald door tumorgroeivolumes in de loop van de tijd, tumorgewichten en de specifieke groeisnelheid. PDX CRC 307M getest in een ander cohort van muizen werd minder beïnvloed door dezelfde combinatiebehandeling bij HIS BRGS-muizen. Op basis van het totale menselijke hCD45-positieve en humane T-cel hCD3-positieve chimerisme in het bloed vóór tumorimplantatie, namen beide parameters toe in het perifere immuunsysteem en de TIL in combinatie met behandelde CRC 307P-dragende muizen, maar niet het CRC 307M-model.Onderzoek van de menselijke T-cellen onthulde meer geactiveerde T-cellen in de CRC 307P-tumoren, maar niet de lymfe van met combinatie behandelde muizen. Ook waren er meer effectorgeheugen CD8-positieve T-cellen en minder TIM-3-positieve T-cellen in de met combinatie behandelde CRC 307P-tumoren. Dit verschil werd daarentegen niet opgemerkt in het CRC 307M-model.Verder werden geen veranderingen in de frequenties van cytotoxische T-celpopulaties waargenomen bij de met combinatie behandelde muizen, hoewel hogere cytotoxische T-cellen werden waargenomen bij onbehandelde. Combinatiebehandeling had geen invloed op de frequenties van Tregs in CRC 307P-lymfeorganen of tumoren, hoewel de CRC 307M-gegevens een trend van verminderde Tregs lieten zien. Immuungerelateerde veranderingen in tumorcellen waren verhoogd met behulp van flowcytometrie.Verhoogde expressie van MHC klasse I en klasse II werd waargenomen op de CRC 307P tumorcellen die werden weggesneden uit combinatiebehandelde HIS BRGS-muizen. In het CRC 307M-model veroorzaakte dezelfde medicamenteuze behandeling HLA-klasse II-expressie op de tumorcellen. Evenzo resulteerde de combinatiebehandeling in verhoogde PD-L1-expressie op de EpCAM-positieve CRC 307P-tumorcellen.Ten slotte werden correlaties van immuunresponsen met tumorgroei onderzocht. Verhoogde CD4-positieve T-cellen vertoonden een significante correlatie met kleinere tumorgroei, en meer specifiek de HLA-DR-positieve geactiveerde T-cellen in de combinatie behandelde HIS-muizen. Steriele techniek tijdens het isoleren van de CD34-positieve cellen, omdat de muizen extreem immunodeficiënt zijn.Het resulterende chimerisme is variabel binnen en tussen navelstrengbloeddonoren en T-cellen hebben de grootste variatie. Onbeperkte immunotherapiecombinaties kunnen worden uitgevoerd, evenals mechanistische en medicijndoseringskinetische studies, bijvoorbeeld deletie van CD8 T-cellen om hun rol te bevestigen. Belangrijk is dat geneesmiddelgerelateerde toxiciteiten ook kunnen worden bestudeerd.Het bood een relevanter en toegankelijker preklinisch model om menselijke immunotherapieën te testen voor vertaling naar de kliniek. Op basis van deze gegevens zijn nu verschillende klinische onderzoeken aan de gang.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescerende orthotope Muis Model van pancreaskanker

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

In vivo model voor het testen Effect van hypoxie op tumormetastase

Hypoxia has been implicated in the metastasis of Ewing sarcoma (ES) by clinical observations and in vitro data, yet direct evidence for its pro-metastatic ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

De Colon-26 carcinoom Tumor-dragende Mouse als een model voor de studie van kankercachexia

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Engraftment van de tumor in een muismodel van Xenograft van menselijke mantel cel lymfoom

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

Ontwikkeling van een menselijke preklinische Model van Osteoclastogenesis uit perifeer bloed monocyten mede gekweekt met borst kanker cellijnen

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

Een humane perifere bloed mononucleaire cel (PBMC) Engrafted gehumaniseerd xenograft model voor translationele immuno-oncologie (I-O) onderzoek

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

Murine model van gemetastaseerde lever tumoren in de setting van ischemie reperfusie letsel

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Het verkrijgen van kanker stamcelbollen van gynaecologische en borstkankertumoren

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

Een snelle screeningsworkflow om potentiële combinatietherapie voor GBM te identificeren met behulp van patiënt-afgeleide glioomstamcellen

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...

High-Resolution Ultrasonography for the Analysis of Orthotopic ATC Tumors in a Genetically Engineered Mouse Model

Hoge-resolutie echografie voor de analyse van orthotopische ATC-tumoren in een genetisch gemanipuleerd muismodel

Anaplastic thyroid carcinoma (ATC) is associated with a poor prognosis and short median survival time, but no effective treatment improves the outcomes ...