Name: testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors
Uploaded: 2022-12-16T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

Nous tenons à remercier à la fois l’Animal Research Facility (OLAR) pour les soins qu’ils ont prodigués à nos souris et la ressource partagée en cytométrie en flux soutenue par la subvention de soutien au Centre de cancérologie (P30CA046934) de notre institut pour leur immense aide dans tout notre travail. Nous remercions également Gail Eckhardt et Anna Capasso pour nos collaborations inaugurales sur l’étude des immunothérapies aux PDX humains dans notre modèle HIS-BRGS. Cette étude a été financée en partie par la subvention de soutien du centre de cancérologie P30CA06934 des National Institutes of Health avec l’utilisation de la ressource partagée PHISM (Pre-clinical Human Immune System Mouse Models), RRID: ressource partagée de cytométrie SCR_021990 et de flux, RRID: SCR_022035. Cette recherche a été financée en partie par le NIAID des National Institutes of Health sous le numéro de contrat 75N93020C00058.

Tous les travaux sur les animaux ont été effectués conformément aux protocoles sur les animaux approuvés par le comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux de l’Université du Colorado à Denver (protocoles IACUC #00593 et #00021). Tous les travaux sur les animaux ont été effectués conformément à l’Office of Laboratory Animal Resources (OLAR), un établissement accrédité par l’American Association for Laboratory Animal Care, au campus médical Anschutz de l’Université du Colorado à...

<ol>
	<li>Chulpanova, D. S., Kitaeva, K. V., Rutland, C. S., Rizvanov, A. A., Solovyeva, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+tumor+models+for+advanced+cancer+immunotherapy.">Mouse tumor models for advanced cancer immunotherapy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4118 (2020).</li><li>Olson, B., Li, Y., Lin, Y., Liu, E. T., Patnaik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+cancer+immunotherapy+research.">Mouse models for cancer immunotherapy research.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1358-1365 (2018).</li><li>Marin-Jimenez, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+cancer+immunotherapy+in+a+human+immune+system+mouse+model:+correlating+treatment+responses+to+human+chimerism,+therapeutic+variables+and+immune+cell+phenotypes.">Testing cancer immunotherapy in a human immune system mouse model: correlating treatment responses to human chimerism, therapeutic variables and immune cell phenotypes.</a> Frontiers in Immunology. 12, 607282 (2021).</li><li>Yin, L., Wang, X. J., Chen, D. X., Liu, X. N., Wang, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+model:+a+review+on+preclinical+applications+for+cancer+immunotherapy.">Humanized mouse model: a review on preclinical applications for cancer immunotherapy.</a> American Journal of Cancer Research. 10 (12), 4568-4584 (2020).</li><li>Cogels, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+as+a+valuable+pre-clinical+model+for+cancer+immunotherapy+research.">Humanized mice as a valuable pre-clinical model for cancer immunotherapy research.</a> Frontiers in Oncology. 11, 784947 (2021).</li><li>Jin, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+humanized+mouse+with+patient-derived+xenografts+for+cancer+immunotherapy+studies:+A+comprehensive+review.">Development of humanized mouse with patient-derived xenografts for cancer immunotherapy studies: A comprehensive review.</a> Cancer Science. 112 (7), 2592-2606 (2021).</li><li>Capasso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+immune+responses+to+anti-PD-1+mono+and+combination+immunotherapy+in+hematopoietic+humanized+mice+implanted+with+tumor+xenografts.">Characterization of immune responses to anti-PD-1 mono and combination immunotherapy in hematopoietic humanized mice implanted with tumor xenografts.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 7 (1), 37 (2019).</li><li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+studying+efficacy+and+mechanisms+of+PD-1-targeted+cancer+immunotherapy.">Humanized mice in studying efficacy and mechanisms of PD-1-targeted cancer immunotherapy.</a> The FASEB Journal. 32 (3), 1537-1549 (2018).</li><li>Yong, K. S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+as+a+tool+to+predict+immunotoxicity+of+human+biologics.">Humanized mouse as a tool to predict immunotoxicity of human biologics.</a> Frontiers in Immunology. 11, 553362 (2020).</li><li>Shen, H. W., Jiang, X. L., Gonzalez, F. J., Yu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+transgenic+mouse+models+for+drug+metabolism+and+pharmacokinetic+research.">Humanized transgenic mouse models for drug metabolism and pharmacokinetic research.</a> Current Drug Metabolism. 12 (10), 997-1006 (2011).</li><li>Bosma, G. C., Custer, R. P., Bosma, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+severe+combined+immunodeficiency+mutation+in+the+mouse.">A severe combined immunodeficiency mutation in the mouse.</a> Nature. 301 (5900), 527-530 (1983).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+defects+in+innate+and+adaptive+immunologic+function+in+NOD/LtSz-scid+mice.">Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice.</a> The Journal of Immunology. 154 (1), 180-191 (1995).</li><li>Legrand, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+CD47/signal+regulatory+protein+alpha+(SIRP(alpha))+interaction+is+required+for+optimal+human+T-+and+natural+killer-+(NK)+cell+homeostasis+in+vivo.">Functional CD47/signal regulatory protein alpha (SIRP(alpha)) interaction is required for optimal human T- and natural killer- (NK) cell homeostasis in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (32), 13224-13229 (2011).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> The Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Traggiai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+human+adaptive+immune+system+in+cord+blood+cell-transplanted+mice.">Development of a human adaptive immune system in cord blood cell-transplanted mice.</a> Science. 304 (5667), 104-107 (2004).</li><li>Theocharides, A. P., Rongvaux, A., Fritsch, K., Flavell, R. A., Manz, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+hemato-lymphoid+system+mice.">Humanized hemato-lymphoid system mice.</a> Haematologica. 101 (1), 5-19 (2016).</li><li>Goldman, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+human+cell+engraftment+in+mice+deficient+in+RAG2+and+the+common+cytokine+receptor+gamma+chain.">Enhanced human cell engraftment in mice deficient in RAG2 and the common cytokine receptor gamma chain.</a> British Journal of Haematology. 103 (2), 335-342 (1998).</li><li>Stripecke, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innovations,+challenges,+and+minimal+information+for+standardization+of+humanized+mice.">Innovations, challenges, and minimal information for standardization of humanized mice.</a> EMBO Molecular Medicine. 12 (7), (2020).</li><li>Allen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+immune+system+mouse+models:+progress,+challenges+and+opportunities.">Humanized immune system mouse models: progress, challenges and opportunities.</a> Nature Immunology. 20 (7), 770-774 (2019).</li><li>Gammelgaard, O. L., Terp, M. G., Preiss, B., Ditzel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cancer+evolution+in+the+context+of+a+human+immune+system+in+mice.">Human cancer evolution in the context of a human immune system in mice.</a> Molecular Oncology. 12 (10), 1797-1810 (2018).</li><li>Rios-Doria, J., Stevens, C., Maddage, C., Lasky, K., Koblish, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+cancer+xenografts+in+humanized+mice.">Characterization of human cancer xenografts in humanized mice.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 8 (1), 000416 (2020).</li><li>Gombash Lampe, S. E., Kaspar, B. K., Foust, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+injections+in+neonatal+mice.">Intravenous injections in neonatal mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52037 (2014).</li><li>Lang, J., Weiss, N., Freed, B. M., Torres, R. M., Pelanda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+hematopoietic+humanized+mice+in+the+newborn+BALB/c-Rag2null+Il2r&#947;null+mouse+model:+a+multivariable+optimization+approach.">Generation of hematopoietic humanized mice in the newborn BALB/c-Rag2null Il2r&#947;null mouse model: a multivariable optimization approach.</a> Clinical Immunology. 140 (1), 102-116 (2011).</li><li>Laskowski, T. J., Hazen, A. L., Collazo, R. S., Haviland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rigor+and+reproducibility+of+cytometry+practices+for+immuno-oncology:+a+multifaceted+challenge.">Rigor and reproducibility of cytometry practices for immuno-oncology: a multifaceted challenge.</a> Cytometry Part A. 97 (2), 116-125 (2020).</li><li>Bagby, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+maintenance+of+a+preclinical+patient+derived+tumor+xenograft+model+for+the+investigation+of+novel+anti-cancer+therapies.">Development and maintenance of a preclinical patient derived tumor xenograft model for the investigation of novel anti-cancer therapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54393 (2016).</li><li>Laajala, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+design+and+analysis+of+preclinical+intervention+studies+in+vivo.">Optimized design and analysis of preclinical intervention studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 30723 (2016).</li><li>Na, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+patient-derived+xenografts+from+patients+with+gastrointestinal+stromal+tumors:+analysis+of+clinicopathological+characteristics+related+to+engraftment+success.">Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success.</a> Scientific Reports. 10 (1), 7996 (2020).</li><li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RX-5902,+a+novel+beta-catenin+modulator,+potentiates+the+efficacy+of+immune+checkpoint+inhibitors+in+preclinical+models+of+triple-negative+breast+cancer.">RX-5902, a novel beta-catenin modulator, potentiates the efficacy of immune checkpoint inhibitors in preclinical models of triple-negative breast cancer.</a> BMC Cancer. 20 (1), 1063 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+adrenocortical+cancer+humanized+mouse+model+to+characterize+anti-PD1+effects+on+tumor+microenvironment.">Development of an adrenocortical cancer humanized mouse model to characterize anti-PD1 effects on tumor microenvironment.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 105 (1), 26-42 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+lymphocyte+reconstitution+in+a+humanized+mouse+model+reveal+a+requirement+of+T+cells+for+human+B+cell+maturation.">Studies of lymphocyte reconstitution in a humanized mouse model reveal a requirement of T cells for human B cell maturation.</a> The Journal of Immunology. 190 (5), 2090-2101 (2013).</li><li>Katano, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-Rag2null+IL-2R&#947;null+mice:+an+alternative+to+NOG+mice+for+generation+of+humanized+mice.">NOD-Rag2null IL-2R&#947;null mice: an alternative to NOG mice for generation of humanized mice.</a> Experimental Animalas. 63 (3), 321-330 (2014).</li><li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parameters+for+establishing+humanized+mouse+models+to+study+human+immunity:+analysis+of+human+hematopoietic+stem+cell+engraftment+in+three+immunodeficient+strains+of+mice+bearing+the+IL2r&#947;(null)+mutation.">Parameters for establishing humanized mouse models to study human immunity: analysis of human hematopoietic stem cell engraftment in three immunodeficient strains of mice bearing the IL2r&#947;(null) mutation.</a> Clinical Immunology. 135 (1), 84-98 (2010).</li><li>Hasgur, S., Aryee, K. E., Shultz, L. D., Greiner, D. L., Brehm, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+immunodeficient+mice+bearing+human+immune+systems+by+the+engraftment+of+hematopoietic+stem+cells.">Generation of immunodeficient mice bearing human immune systems by the engraftment of hematopoietic stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1438, 67-78 (2016).</li><li>Andre, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+human+CD34++stem+cell-engrafted+nonobese+diabetic/SCID/IL-2R&#947;null+mice+show+impaired+CD8++T+cell+maintenance+and+a+functional+arrest+of+immature+NK+cells.">Long-term human CD34+ stem cell-engrafted nonobese diabetic/SCID/IL-2R&#947;null mice show impaired CD8+ T cell maintenance and a functional arrest of immature NK cells.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2710-2720 (2010).</li><li>Wunderlich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+multilineage+human+hematopoietic+reconstitution+and+function+in+NSGS+mice.">Improved multilineage human hematopoietic reconstitution and function in NSGS mice.</a> PLoS One. 13 (12), 0209034 (2018).</li><li>Lee, J., Brehm, M. A., Greiner, D., Shultz, L. D., Kornfeld, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engrafted+human+cells+generate+adaptive+immune+responses+to+Mycobacterium+bovis+BCG+infection+in+humanized+mice.">Engrafted human cells generate adaptive immune responses to Mycobacterium bovis BCG infection in humanized mice.</a> BMC Immunology. 14, 53 (2013).</li><li>Masse-Ranson, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+thymopoiesis+and+improved+T-cell+responses+in+HLA-A2/-DR2+transgenic+BRGS-based+human+immune+system+mice.">Accelerated thymopoiesis and improved T-cell responses in HLA-A2/-DR2 transgenic BRGS-based human immune system mice.</a> European Journal of Immunology. 49 (6), 954-965 (2019).</li><li>Oswald, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+infiltration+pattern+in+non-small+cell+lung+cancer+PDX+models+is+a+model+immanent+feature+and+correlates+with+a+distinct+molecular+and+phenotypic+make-up.">Immune cell infiltration pattern in non-small cell lung cancer PDX models is a model immanent feature and correlates with a distinct molecular and phenotypic make-up.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 10 (4), 004412 (2022).</li></ol>

Au cours des 6 dernières années, en utilisant notre expertise en immunologie et en souris humanisées, notre équipe de recherche a développé un modèle préclinique indispensable pour tester des immunothérapies sur une variété de tumeurs humaines 3,7,30,31. Ce protocole met l’accent sur la prise en compte de la variabilité du modèle, avec une attention particulière aux populations ...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated from:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)
to:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Kristina Larsen1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Les modèles de cancer de la souris sont importants pour établir les mécanismes de base de la croissance tumorale et de l’évasion immunitaire. Cependant, les études sur le traitement du cancer sur des modèles murins ont donné une traduction finie à la clinique en raison des modèles syngéniques limités et des différences spécifiques à l’espèce 1,2. L’émergence des thérapies immunitaires en tant qu’approche dominante pour contrôler les tumeurs a réitéré la nécessité d’un modèle in vivo avec un système immunitaire humain fonctionnel. Les progrès réalisés chez les souris du système immunitaire humain (souris HIS) au cours de la dernière décennie ont permis d’étudier l’immuno-oncologie in vivo dans une grande variété de types de cancer et d’agents immunothérapeutiques 3,4,5,6. Les modèles tumoraux humains, y compris les xénogreffes dérivées de lignées cellulaires et de patients (CDX et PDX, respectivement), se développent bien chez les souris HIS et, dans la plupart des cas, sont presque identiques à leur croissance chez l’hôte immunodéficient dépourvu de greffe hématopoïétique humaine 7,8. Sur la base de cette découverte clé, les chercheurs ont utilisé le modèle murin HIS pour étudier les immunothérapies humaines, y compris les thérapies combinées conçues pour modifier le microenvironnement tumoral (TME) afin de diminuer l’immunosuppression et ainsi améliorer la destruction tumorale dirigée par le système immunitaire. Ces modèles précliniques aident à résoudre les problèmes d’hétérogénéité des cancers humains et peuvent également prédire le succès du traitement ainsi que surveiller les toxicités médicamenteuses liées au système immunitaire 9,10.
La production d’un modèle murin avec un système immunitaire humain par l’introduction de cellules souches hématopoïétiques humaines nécessite une souris immunodéficiente receveuse qui ne rejettera pas la xénogreffe. Les modèles murins HIS actuels sont dérivés de souches de souris immunodéficientes qui ont été signalées il y a plus de 30 ans. La première souche de souris immunodéficiente décrite était des souris SCID dépourvues de cellules T et B11, suivies d’un hybride NOD-SCID avec un polymorphisme SIRPα responsable de la tolérance des macrophages de souris aux cellules humaines, en raison de la liaison accrue de l’allèle NOD SIRPα à la molécule CD47humaine 12,13. Au début des années 2000, la suppression de la chaîne gamma commune du récepteur IL-2 (IL-2Rγc) sur les souches immunodéficientes BALB/c et NOD a changé la donne pour une greffe humaine améliorée, en raison de délétions génétiques interdisant le développement des cellules NK de l’hôte14,15,16,17. Des modèles alternatifs, tels que les souris BRG et NRG, permettent d’obtenir un déficit en lymphocytes T et B par délétion du gène Rag1 ou Rag2, nécessaire aux réarrangements des gènes des récepteurs des cellules T et B et donc à la maturation et à la survie des lymphocytes18,19. La souris BRGS (BALB/c -Rag2 nullIl2RγCnullSirpαNOD) utilisée ici combine le déficit en chaîne IL-2Rγ et l’allèle NOD SIRPα sur le fond Rag2-/-, résultant en une souris hautement immunodéficiente sans cellules T, B ou NK, mais avec une vigueur et une santé suffisantes pour permettre une greffe à long terme de plus de 30 semaines13.
Les souris HIS peuvent être générées de multiples façons, l’injection humaine de PBMC étant la méthode la plus directe15,18,20. Cependant, ces souris ont une expansion prononcée des cellules T humaines activées qui entraîne la maladie du greffon contre l’hôte (GVH) à l’âge de 12 semaines, empêchant les études à long terme. Alternativement, les cellules souches hématopoïétiques humaines du sang de cordon ombilical (CB), de la moelle osseuse et du foie fœtal peuvent également être utilisées pour la greffe et la production du système immunitaire humain de novo. Dans ce système, les cellules souches hématopoïétiques produisent un système immunitaire humain multi-lignée avec la génération de cellules immunitaires T, B et innées qui sont particulièrement tolérantes envers l’hôte souris, par rapport aux souris PBMC qui développent principalement des cellules T. Par conséquent, la GVH est absente ou considérablement retardée, et les études peuvent être étendues aux souris jusqu’à l’âge de 10 mois. Le CB fournit une source facile, accessible et non invasive de cellules souches hématopoïétiques humaines CD34+ qui facilite la greffe de plusieurs souris HIS ayant un système immunitaire génétiquement identique 17,18,20,21. Au cours des dernières années, les modèles murins HIS ont été largement utilisés pour étudier l’immunothérapie et le TME 3,4,5,6. Malgré le développement de systèmes immunitaires dérivés de l’homme chez ces souris, les tumeurs de xénogreffe humaine se développent à des taux similaires à ceux des souris immunodéficientes témoins et permettent l’interaction complexe entre les cellules cancéreuses et les cellules immunitaires, ce qui est important pour maintenir le microenvironnement du PDX 3,7,8 greffé . Ce protocole a été utilisé pour réaliser plus de 50 études testant des traitements chez des souris HIS-BRGS avec PDX et CDX. Une conclusion importante est que les tumeurs humaines chez les souris HIS maintiennent leur TME unique tel que défini par l’évaluation moléculaire de la tumeur par rapport à l’échantillon initial du patient et aux caractéristiques de l’infiltrat immunitaire 3,22,23. Notre groupe se concentre sur l’évaluation approfondie du HIS dans les organes immunitaires et la tumeur à l’aide de la cytométrie de flux multiparamétrique. Nous décrivons ici un protocole pour l’humanisation des souris BRGS, l’évaluation du chimérisme, l’implantation de tumeurs humaines, les mesures de croissance tumorale, l’administration de traitements contre le cancer et l’analyse des cellules HIS par cytométrie en flux.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe w/needles</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>1031815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Pro Separator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Golgi Stop Protein Transport Inhibitor with monensin</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Stim Cocktail</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>509305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chill 15 Rack</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-952</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-plugged glass pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-8B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Basement membrane extract</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>363200502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytek Aurora</td>
			<td>Cytek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9003-98-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eBioscience FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Set</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>00-5523-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryonic Stemcell FCS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10439001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tubes; 1.5 mL volume</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>616201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Benchmark</td>
			<td>100-106 500mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll Hypaque</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>45001752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo Software</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - fine</td>
			<td>Roboz Surgical&#160;</td>
			<td>RS5045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps normal</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>RS4919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>F75P1GAL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted Glass Slides</td>
			<td>Corning</td>
			<td>1255310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentlemacs C-Tubes</td>
			<td>Miltenyi&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACS Dissociator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass pipettes</td>
			<td>DWK Life Sciences</td>
			<td>63A53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS w/ Ca &#38; Mg</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>55037C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT25060CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I2511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>401108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMDM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12440053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase DL</td>
			<td>Roche</td>
			<td>5466202001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Blue</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>L23105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>JDC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-unabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>H2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>UHB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-unlabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>SA-DA4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiRad 350</td>
			<td>Precision X-Ray</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-nitrophenyl substrate</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>34045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRISM</td>
			<td>Graphpad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu FLT3L</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>308-FK-005/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu IL6</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>206-IL-010/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu SCF</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>255SC010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-39</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>8047-15-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>862945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipettes 25 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1367811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>567-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile molecular water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7732-18-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeti Cell Analyzer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>12004279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zombie Green</td>
			<td>biolegend</td>
			<td>423112</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors

L’inversion de la nature immunosuppressive du microenvironnement tumoral est essentielle au succès du traitement des cancers avec des médicaments d’immunothérapie. Les modèles de cancer murin sont extrêmement limités dans leur diversité et souffrent d’une mauvaise traduction à la clinique. Pour servir de modèle préclinique plus physiologique pour les études d’immunothérapie, ce protocole a été développé pour évaluer le traitement des tumeurs humaines chez une souris reconstituée avec un système immunitaire humain. Ce protocole unique démontre le développement de souris du système immunitaire humain (HIS, « humanisé »), suivi de l’implantation d’une tumeur humaine, soit une xénogreffe dérivée d’une lignée cellulaire (CDX), soit une xénogreffe dérivée du patient (PDX). Les souris HIS sont générées par l’injection de cellules souches hématopoïétiques humaines CD34+ isolées du sang de cordon ombilical dans des souris BRGS néonatales (BALB/c Rag2-/- IL2RγC-/- NODSIRPα) hautement immunodéficientes qui sont également capables d’accepter une tumeur xénogénique. L’importance de la cinétique et des caractéristiques du développement du système immunitaire humain et de l’implantation tumorale est soulignée. Enfin, une évaluation approfondie du microenvironnement tumoral à l’aide de la cytométrie en flux est décrite. Dans de nombreuses études utilisant ce protocole, il a été constaté que le microenvironnement tumoral des tumeurs individuelles est récapitulé chez les souris HIS-PDX; Les tumeurs « chaudes » présentent une infiltration immunitaire importante alors que les tumeurs « froides » ne le font pas. Ce modèle sert de terrain d’essai pour les immunothérapies combinées pour un large éventail de tumeurs humaines et représente un outil important dans la quête de la médecine personnalisée.

Conformément au protocole de tumeur du flanc et à la chronologie expérimentale (Figure 1), la croissance tumorale et la réponse immunitaire à un traitement ciblé par inhibiteur de la tyrosine kinase (ITK) et à un traitement combiné par nivolumab ont été étudiées dans deux PDX distincts de cancer colorectal humain (CCR). Les médicaments TKI ont été étudiés chez des hôtes immunodéficients pour évaluer la croissance tumorale seulement29. Ce modèle a ...

Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Ce protocole décrit la génération de souris du système immunitaire humain (SIH) pour les études d’immuno-oncologie. Les instructions et les considérations relatives à l’utilisation de ce modèle pour tester les immunothérapies humaines sur les tumeurs humaines implantées dans ce modèle sont présentées en mettant l’accent sur la caractérisation de la réponse du système immunitaire humain à la tumeur.

Test d’immunothérapies anticancéreuses dans un modèle murin humanisé portant des tumeurs humaines

Reversing the immunosuppressive nature of the tumor microenvironment is critical for the successful treatment of cancers with immunotherapy drugs. Murine ...

Ce protocole décrit la génération de souris du système immunitaire humain, ou HIS pour les études immuno-oncologiques précliniques. Les modèles de cancer de la souris sont limités dans leur diversité et se traduisent mal à la clinique. Cette technique sert de modèle préclinique pour les études d’immunothérapie en évaluant le traitement des tumeurs humaines chez une souris dotée d’un système immunitaire humain.Le modèle murin humanisé peut être utilisé pour étudier de multiples aspects de l’immunologie humaine, y compris les réponses à de nombreuses infections ou cancers du système immunitaire humain. L’acquisition d’une source fiable et robuste de sang de cordon ombilical et le maintien de la santé de la colonie de souris immunodéficientes peuvent être difficiles. Une expertise en cytométrie de flux et en analyse immunologique est essentielle.Kristina Larsen, une professionnelle des services de recherche de mon laboratoire, fera la démonstration de la procédure. Pour commencer, remettez en suspension la pastille de cellules CD34-positive isolée du sang de cordon dans 300 microlitres de tampon séparateur de cellules magnétiques par une fois 10 à huit cellules. Ajouter 100 microlitres de réactif bloquant le FCR par une fois 10 aux cellules huitièmes, suivies de 100 microlitres de billes magnétiques CD34-positives par une fois 10 aux cellules huitièmes, et incuber à quatre degrés Celsius pendant 30 minutes.Ensuite, ajoutez cinq millilitres de tampon séparateur de cellules magnétiques par une fois 10 aux huitièmes cellules, et faites tourner à 360 g pendant 10 minutes à quatre degrés Celsius. Répétez l’étape de lavage et remettez en suspension la pastille dans 500 microlitres par 100 millions de cellules de tampon séparateur de cellules magnétiques dans un tube conique de 15 millilitres étiqueté non fractionné. Étiquetez deux autres tubes de 15 millilitres CD34-négatif et CD34-positif Placez les trois tubes sur une grille de refroidissement.Séparer les cellules à l’aide du programme de sélection positive à deux colonnes sur un séparateur automatique de cellules magnétiques dans une enceinte de biosécurité. Ensuite, pour l’expansion et la congélation des cellules souches humaines CD34 positives, préparez du sang de cordon ombilical ou un milieu CB comme décrit dans le manuscrit et passez à travers un filtre de 0,22 micron. Resuspendre les cellules CD34-positives à 100 000 par millilitre de milieu CB et incuber à 37 degrés Celsius.Le troisième jour, ajouter un volume égal de milieu CB sans cytokines dans la fiole. Le cinquième jour, récoltez les cellules CD34 positives expansées. Pipeter la suspension cellulaire de haut en bas et recueillir dans un tube conique de 50 millilitres.Ajouter suffisamment de milieu CB pour couvrir le fond de la fiole. À l’aide d’un grattoir à cellules, gratter tout le fond de la fiole. Rassemblez tous les médias dans le même tube de 50 millilitres et centrifugez.Remettez les cellules en suspension dans deux millilitres de milieu CB et centrifugez. Aspirer le milieu jusqu’au granulé et remettre le granulé en suspension dans un milieu de congélation. Ensuite, commencez la préparation des cellules CD34 positives trois heures après l’irradiation des petits.Réchauffez 10 millilitres de média CB dans un tube de 50 millilitres. Récupérer un flacon de cellules CD34 positives expansées et congelées in vitro pour quatre à six petits à injecter. Dégeler rapidement à 50 à 55 degrés Celsius jusqu’à ce qu’une petite quantité de glace soit visible, et ajouter les cellules au milieu CB réchauffé.Utilisez un millilitre de milieu pour rincer chaque flacon et faites tourner les cellules à 360 g pendant 12 minutes à quatre degrés Celsius. Aspirer le milieu avec précaution. Remettez la pastille en suspension dans deux millilitres de milieu CB et comptez les cellules.Encore une fois, centrifugez les cellules, aspirez le milieu et remettez la pastille en suspension dans 100 microlitres de PBS stérile par n plus un chiot à injecter, ce qui donne 250 000 à 450 000 cellules CD34-positives par souris. Pour l’isolement PBMC du sang de souris, mélanger l’héparine sanguine en pipetant doucement de haut en bas, et superposer lentement sur 500 microlitres de 1,077 gramme par millilitre de gradient de densité en prenant soin de ne pas perturber l’interface. Centrifuger le tube à 1 220 g pendant 20 minutes à température ambiante sans interruption.Retirez autant de cellules que possible de la couche leucocytaire avec une pipette de 200 microlitres et ajoutez-les au nouveau tube de 1,5 millilitre contenant 750 microlitres de milieu de récolte. Centrifuger à 360 g pendant 11 minutes. Aspirer le milieu à 50 microlitres et remettre en suspension le granulé dans 750 microlitres de milieu de récolte.Acquérir les données pour 100 microlitres de chaque échantillon sur un cytomètre en flux. Importez ensuite le fichier fcs dans le logiciel d’édition des données de flux et appliquez une porte polygonale à un tracé FSC-A par rapport à SSC-A. Changez les axes en FSC-A par rapport à FSC-H et grillez les cellules sur la diagonale linéaire, à l’exclusion des doublets qui dépassent de la ligne.Sélectionnez ces cellules et changez les axes en hCD45 par rapport à mCD45. Appliquez une porte polygonale à la population hCD45-positive et appliquez le nom humain. Appliquez une porte polygonale à la population mCD45-positive et appliquez le nom souris.Créez une statistique de comptage pour les populations humaines et de souris. Ensuite, sélectionnez la population humaine et changez les axes en CD19 par rapport à CD3. Appliquez une porte polygonale aux cellules CD19 positives et nommez-les cellules B.Appliquez une porte polygonale à la population CD3-positive et nommez-la lymphocytes T. Ensuite, appliquez une porte polygonale à la population doublement négative et nommez-la non-TB. Sélectionnez la population de lymphocytes T et changez les axes en CD4 par rapport à CD3.Appliquez une porte polygonale à la population CD4-positive et nommez-la CD4-positif. Appliquez une porte polygonale à la population CD4 négative et nommez-la CD8. Sélectionnez la population non tuberculeuse et changez les axes en CD56 par rapport à myéloïde.Appliquez une porte polygonale à la population totale CD56-positive et nommez-la cellules NK. Ensuite, appliquez une porte polygonale à la population CD56-négatif et myéloïde-positif, et nommez-la myéloïde. Créez un tableau pour les statistiques de pourcentage et de comptage de toutes les populations et exportez-le dans une feuille de calcul.Calculer le pourcentage de chimérisme hCD45 en utilisant la formule indiquée. Après avoir développé des cellules tumorales chez la souris et administré des traitements médicamenteux, récoltez les tissus. Placez la souris sur un panneau de dissection en mousse avec des broches pour les maintenir en place et les bras et les jambes étendus à 45 degrés.Faites une incision au milieu du torse en commençant près du bassin et en s’étendant jusqu’au menton. Tirez la peau sur le bord et maintenez-la en place avec des épingles. Extraire les ganglions lymphatiques à l’aide de pinces fines dans l’ordre axillaire, cervical, mésentérique, inguinal et hiatal.Placez les ganglions lymphatiques d’un côté de la lame de verre dépoli dans une boîte de Petri dans huit millilitres de milieu de récolte. En tenant les lames à des angles perpendiculaires avec les bords givrés vers l’intérieur, appuyez doucement sur les tissus jusqu’à ce que le contenu cellulaire soit libéré. Rincez la lame plusieurs fois en les écartant et en les assemblant pour libérer le maximum de cellules.Rassemblez les cellules avec une pipette en verre de cinq pouces et filtrez-les à travers une pipette de neuf pouces bouchée en coton dans un tube conique étiqueté de 15 millilitres. Ensuite, extrayez la tumeur du flanc ouvert en tenant la tumeur avec une pince tout en coupant lentement les bords de la tumeur avec des ciseaux de dissection. Peser la tumeur et retirer 1/4 de la tumeur pour le traitement de l’ARN et de l’immunohistochimie.Placez les 3/4 restants de la tumeur dans un plat de six centimètres et hachez-le en morceaux d’un millimètre à l’aide d’une lame de scalpel. Transférer les morceaux tumoraux dans un tube de dissociation. Rincez ensuite le plat avec un milieu TIL incomplet et ajoutez-le au tube.Ajouter la préparation de collagénase et dissocier le tissu en utilisant une dissociation mécanique à 37 degrés Celsius pendant 30 minutes à une heure. Passez la suspension sur un filtre de 100 microns dans un tube conique de 50 millilitres et rincez le filtre avec 10 millilitres de média complet TIL. Centrifuger et remettre en suspension la pastille dans juste assez de milieu de récolte avec DNase, afin que la suspension de cellules puisse facilement passer à travers une pointe de pipette P1000 et enregistrer le volume pour l’analyse en aval.Dans PDX CRC 307P, le traitement combiné a ralenti la croissance de la tumeur, déterminée par les volumes de croissance tumorale au fil du temps, le poids de la tumeur et le taux de croissance spécifique. PDX CRC 307M testé dans une cohorte différente de souris a été moins affecté par le même traitement combiné chez les souris HIS BRGS. Sur la base du chimérisme global hCD45-positif humain et hCD3-positif des cellules T humaines dans le sang avant l’implantation tumorale, les deux paramètres ont augmenté dans le système immunitaire périphérique et le TIL en combinaison avec des souris CRC 307P traitées, mais pas le modèle CRC 307M.L’étude des lymphocytes T humains a révélé plus de lymphocytes T activés dans les tumeurs CRC 307P, mais pas dans la lymphe de souris traitées en combinaison. En outre, il y avait plus de lymphocytes T CD8 positifs à mémoire effectrice et moins de lymphocytes T TIM-3-positifs dans la combinaison de tumeurs CRC 307P traitées. En revanche, cette différence n’a pas été notée dans le modèle CRC 307M.De plus, aucun changement dans la fréquence des populations de lymphocytes T cytotoxiques n’a été observé chez les souris traitées en association, bien que des lymphocytes T cytotoxiques plus élevés aient été observés chez les souris non traitées. Le traitement combiné n’a pas affecté la fréquence des Tregs dans les organes lymphatiques du CRC 307P ou les tumeurs, bien que les données du CRC 307M aient montré une tendance à la réduction des Tregs. Les changements liés au système immunitaire dans les cellules tumorales ont été élevés à l’aide de la cytométrie en flux.Une augmentation de l’expression du CMH de classe I et de classe II a été observée sur les cellules tumorales CRC 307P excisées de souris HIS BRGS traitées en association. Dans le modèle CRC 307M, le même traitement médicamenteux induisait l’expression HLA de classe II sur les cellules tumorales. De même, le traitement combiné a entraîné une augmentation de l’expression de-L1 sur les cellules tumorales CRC 307P positives à EpCAM.Enfin, les corrélations des réponses immunitaires avec la croissance tumorale ont été étudiées. L’augmentation des lymphocytes T CD4-positifs a montré une corrélation significative avec une croissance tumorale plus faible, et plus particulièrement les lymphocytes T activés HLA-DR-positifs dans la combinaison de souris HIS traitées. Technique stérile tout en isolant les cellules CD34-positives, car les souris sont extrêmement immunodéficientes.Le chimérisme qui en résulte est variable à l’intérieur et entre les donneurs de sang de cordon, et les lymphocytes T ont la plus grande variation. Des combinaisons d’immunothérapie illimitées peuvent être effectuées, ainsi que des études cinétiques mécanistiques et de dosage de médicaments, par exemple, la délétion des lymphocytes T CD8 pour confirmer leur rôle. Il est important de noter que les toxicités liées aux médicaments peuvent également être étudiées.Il a fourni un modèle préclinique plus pertinent et accessible pour tester les immunothérapies humaines en vue de leur traduction en clinique. Plusieurs essais cliniques sont actuellement en cours sur la base de ces données.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescent modèle de souris orthotopique de cancer du pancréas

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Recherche

Recherche en cancérologie

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

Modèle in vivo pour tester l&#39; effet de l&#39; hypoxie sur la tumeur métastase

Hypoxia has been implicated in the metastasis of Ewing sarcoma (ES) by clinical observations and in vitro data, yet direct evidence for its pro-metastatic ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

Le Colon-26 Carcinome portant une tumeur de la souris comme modèle pour l&#39;étude du cancer cachexie

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Greffe de la tumeur dans un modèle murin de xénogreffe de lymphome du manteau homme

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

Développement d’un humain modèle préclinique de Osteoclastogenesis de Monocytes du sang périphérique conjointement mis en culture avec des lignées cellulaires de Cancer du sein

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research (A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research (A-O)

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

Modèle de Murine des tumeurs métastatiques de foie dans le cadre des dommages de reperfusion d'ischémie

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Obtenir des sphères de cellules souches cancéreuses à partir de tumeurs gynécologiques et du cancer du sein

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

Un flux de travail de dépistage rapide pour identifier la thérapie combinée potentielle pour le GBM à l’aide de cellules souches de gliome dérivées du patient

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...

High-Resolution Ultrasonography for the Analysis of Orthotopic ATC Tumors in a Genetically Engineered Mouse Model

Échographie à haute résolution pour l’analyse des tumeurs ATC orthotopiques dans un modèle murin génétiquement modifié

Anaplastic thyroid carcinoma (ATC) is associated with a poor prognosis and short median survival time, but no effective treatment improves the outcomes ...