Name: testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors
Uploaded: 2022-12-16T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

ברצוננו להודות הן למתקן לחקר בעלי חיים (OLAR) על הטיפול בעכברים שלנו, והן למשאב המשותף של Flow Cytometry הנתמך על ידי מענק התמיכה של מרכז הסרטן (P30CA046934) במכון שלנו על עזרתם העצומה בכל עבודתנו. אנו מודים גם לגייל אקהרדט ולאנה קאפאסו על שיתוף הפעולה הראשון שלנו בחקר אימונותרפיה לחולי PDX אנושיים במודל HIS-BRGS שלנו. מחקר זה נתמך בחלקו על ידי מענק התמיכה של מרכז הסרטן P30CA06934 של המכונים הלאומיים לבריאות עם שימוש במשאב המשותף PHISM (מודלים פרה-קליניים של עכברי מערכת החיסון האנושית), RRID: SCR_021990 ו- Flow Cytometry Shared Resource, RRID: SCR_022035. מחקר זה נתמך בחלקו על ידי NIAID של המכונים הלאומיים לבריאות תחת חוזה מספר 75N93020C00058.

כל העבודה בבעלי חיים בוצעה תחת פרוטוקולים של בעלי חיים שאושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת קולורדו דנוור (IACUC Protocols #00593 ו- #00021). כל עבודות בעלי החיים בוצעו בהתאם למשרד משאבי חיות מעבדה (OLAR), מתקן מוכר על ידי האגודה האמריקאית לטיפול בחיות מעבדה, בקמפוס הרפואי של א...

<ol>
	<li>Chulpanova, D. S., Kitaeva, K. V., Rutland, C. S., Rizvanov, A. A., Solovyeva, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+tumor+models+for+advanced+cancer+immunotherapy.">Mouse tumor models for advanced cancer immunotherapy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4118 (2020).</li><li>Olson, B., Li, Y., Lin, Y., Liu, E. T., Patnaik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+cancer+immunotherapy+research.">Mouse models for cancer immunotherapy research.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1358-1365 (2018).</li><li>Marin-Jimenez, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+cancer+immunotherapy+in+a+human+immune+system+mouse+model:+correlating+treatment+responses+to+human+chimerism,+therapeutic+variables+and+immune+cell+phenotypes.">Testing cancer immunotherapy in a human immune system mouse model: correlating treatment responses to human chimerism, therapeutic variables and immune cell phenotypes.</a> Frontiers in Immunology. 12, 607282 (2021).</li><li>Yin, L., Wang, X. J., Chen, D. X., Liu, X. N., Wang, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+model:+a+review+on+preclinical+applications+for+cancer+immunotherapy.">Humanized mouse model: a review on preclinical applications for cancer immunotherapy.</a> American Journal of Cancer Research. 10 (12), 4568-4584 (2020).</li><li>Cogels, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+as+a+valuable+pre-clinical+model+for+cancer+immunotherapy+research.">Humanized mice as a valuable pre-clinical model for cancer immunotherapy research.</a> Frontiers in Oncology. 11, 784947 (2021).</li><li>Jin, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+humanized+mouse+with+patient-derived+xenografts+for+cancer+immunotherapy+studies:+A+comprehensive+review.">Development of humanized mouse with patient-derived xenografts for cancer immunotherapy studies: A comprehensive review.</a> Cancer Science. 112 (7), 2592-2606 (2021).</li><li>Capasso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+immune+responses+to+anti-PD-1+mono+and+combination+immunotherapy+in+hematopoietic+humanized+mice+implanted+with+tumor+xenografts.">Characterization of immune responses to anti-PD-1 mono and combination immunotherapy in hematopoietic humanized mice implanted with tumor xenografts.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 7 (1), 37 (2019).</li><li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+studying+efficacy+and+mechanisms+of+PD-1-targeted+cancer+immunotherapy.">Humanized mice in studying efficacy and mechanisms of PD-1-targeted cancer immunotherapy.</a> The FASEB Journal. 32 (3), 1537-1549 (2018).</li><li>Yong, K. S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+as+a+tool+to+predict+immunotoxicity+of+human+biologics.">Humanized mouse as a tool to predict immunotoxicity of human biologics.</a> Frontiers in Immunology. 11, 553362 (2020).</li><li>Shen, H. W., Jiang, X. L., Gonzalez, F. J., Yu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+transgenic+mouse+models+for+drug+metabolism+and+pharmacokinetic+research.">Humanized transgenic mouse models for drug metabolism and pharmacokinetic research.</a> Current Drug Metabolism. 12 (10), 997-1006 (2011).</li><li>Bosma, G. C., Custer, R. P., Bosma, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+severe+combined+immunodeficiency+mutation+in+the+mouse.">A severe combined immunodeficiency mutation in the mouse.</a> Nature. 301 (5900), 527-530 (1983).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+defects+in+innate+and+adaptive+immunologic+function+in+NOD/LtSz-scid+mice.">Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice.</a> The Journal of Immunology. 154 (1), 180-191 (1995).</li><li>Legrand, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+CD47/signal+regulatory+protein+alpha+(SIRP(alpha))+interaction+is+required+for+optimal+human+T-+and+natural+killer-+(NK)+cell+homeostasis+in+vivo.">Functional CD47/signal regulatory protein alpha (SIRP(alpha)) interaction is required for optimal human T- and natural killer- (NK) cell homeostasis in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (32), 13224-13229 (2011).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> The Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Traggiai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+human+adaptive+immune+system+in+cord+blood+cell-transplanted+mice.">Development of a human adaptive immune system in cord blood cell-transplanted mice.</a> Science. 304 (5667), 104-107 (2004).</li><li>Theocharides, A. P., Rongvaux, A., Fritsch, K., Flavell, R. A., Manz, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+hemato-lymphoid+system+mice.">Humanized hemato-lymphoid system mice.</a> Haematologica. 101 (1), 5-19 (2016).</li><li>Goldman, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+human+cell+engraftment+in+mice+deficient+in+RAG2+and+the+common+cytokine+receptor+gamma+chain.">Enhanced human cell engraftment in mice deficient in RAG2 and the common cytokine receptor gamma chain.</a> British Journal of Haematology. 103 (2), 335-342 (1998).</li><li>Stripecke, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innovations,+challenges,+and+minimal+information+for+standardization+of+humanized+mice.">Innovations, challenges, and minimal information for standardization of humanized mice.</a> EMBO Molecular Medicine. 12 (7), (2020).</li><li>Allen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+immune+system+mouse+models:+progress,+challenges+and+opportunities.">Humanized immune system mouse models: progress, challenges and opportunities.</a> Nature Immunology. 20 (7), 770-774 (2019).</li><li>Gammelgaard, O. L., Terp, M. G., Preiss, B., Ditzel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cancer+evolution+in+the+context+of+a+human+immune+system+in+mice.">Human cancer evolution in the context of a human immune system in mice.</a> Molecular Oncology. 12 (10), 1797-1810 (2018).</li><li>Rios-Doria, J., Stevens, C., Maddage, C., Lasky, K., Koblish, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+cancer+xenografts+in+humanized+mice.">Characterization of human cancer xenografts in humanized mice.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 8 (1), 000416 (2020).</li><li>Gombash Lampe, S. E., Kaspar, B. K., Foust, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+injections+in+neonatal+mice.">Intravenous injections in neonatal mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52037 (2014).</li><li>Lang, J., Weiss, N., Freed, B. M., Torres, R. M., Pelanda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+hematopoietic+humanized+mice+in+the+newborn+BALB/c-Rag2null+Il2r&#947;null+mouse+model:+a+multivariable+optimization+approach.">Generation of hematopoietic humanized mice in the newborn BALB/c-Rag2null Il2r&#947;null mouse model: a multivariable optimization approach.</a> Clinical Immunology. 140 (1), 102-116 (2011).</li><li>Laskowski, T. J., Hazen, A. L., Collazo, R. S., Haviland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rigor+and+reproducibility+of+cytometry+practices+for+immuno-oncology:+a+multifaceted+challenge.">Rigor and reproducibility of cytometry practices for immuno-oncology: a multifaceted challenge.</a> Cytometry Part A. 97 (2), 116-125 (2020).</li><li>Bagby, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+maintenance+of+a+preclinical+patient+derived+tumor+xenograft+model+for+the+investigation+of+novel+anti-cancer+therapies.">Development and maintenance of a preclinical patient derived tumor xenograft model for the investigation of novel anti-cancer therapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54393 (2016).</li><li>Laajala, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+design+and+analysis+of+preclinical+intervention+studies+in+vivo.">Optimized design and analysis of preclinical intervention studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 30723 (2016).</li><li>Na, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+patient-derived+xenografts+from+patients+with+gastrointestinal+stromal+tumors:+analysis+of+clinicopathological+characteristics+related+to+engraftment+success.">Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success.</a> Scientific Reports. 10 (1), 7996 (2020).</li><li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RX-5902,+a+novel+beta-catenin+modulator,+potentiates+the+efficacy+of+immune+checkpoint+inhibitors+in+preclinical+models+of+triple-negative+breast+cancer.">RX-5902, a novel beta-catenin modulator, potentiates the efficacy of immune checkpoint inhibitors in preclinical models of triple-negative breast cancer.</a> BMC Cancer. 20 (1), 1063 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+adrenocortical+cancer+humanized+mouse+model+to+characterize+anti-PD1+effects+on+tumor+microenvironment.">Development of an adrenocortical cancer humanized mouse model to characterize anti-PD1 effects on tumor microenvironment.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 105 (1), 26-42 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+lymphocyte+reconstitution+in+a+humanized+mouse+model+reveal+a+requirement+of+T+cells+for+human+B+cell+maturation.">Studies of lymphocyte reconstitution in a humanized mouse model reveal a requirement of T cells for human B cell maturation.</a> The Journal of Immunology. 190 (5), 2090-2101 (2013).</li><li>Katano, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-Rag2null+IL-2R&#947;null+mice:+an+alternative+to+NOG+mice+for+generation+of+humanized+mice.">NOD-Rag2null IL-2R&#947;null mice: an alternative to NOG mice for generation of humanized mice.</a> Experimental Animalas. 63 (3), 321-330 (2014).</li><li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parameters+for+establishing+humanized+mouse+models+to+study+human+immunity:+analysis+of+human+hematopoietic+stem+cell+engraftment+in+three+immunodeficient+strains+of+mice+bearing+the+IL2r&#947;(null)+mutation.">Parameters for establishing humanized mouse models to study human immunity: analysis of human hematopoietic stem cell engraftment in three immunodeficient strains of mice bearing the IL2r&#947;(null) mutation.</a> Clinical Immunology. 135 (1), 84-98 (2010).</li><li>Hasgur, S., Aryee, K. E., Shultz, L. D., Greiner, D. L., Brehm, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+immunodeficient+mice+bearing+human+immune+systems+by+the+engraftment+of+hematopoietic+stem+cells.">Generation of immunodeficient mice bearing human immune systems by the engraftment of hematopoietic stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1438, 67-78 (2016).</li><li>Andre, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+human+CD34++stem+cell-engrafted+nonobese+diabetic/SCID/IL-2R&#947;null+mice+show+impaired+CD8++T+cell+maintenance+and+a+functional+arrest+of+immature+NK+cells.">Long-term human CD34+ stem cell-engrafted nonobese diabetic/SCID/IL-2R&#947;null mice show impaired CD8+ T cell maintenance and a functional arrest of immature NK cells.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2710-2720 (2010).</li><li>Wunderlich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+multilineage+human+hematopoietic+reconstitution+and+function+in+NSGS+mice.">Improved multilineage human hematopoietic reconstitution and function in NSGS mice.</a> PLoS One. 13 (12), 0209034 (2018).</li><li>Lee, J., Brehm, M. A., Greiner, D., Shultz, L. D., Kornfeld, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engrafted+human+cells+generate+adaptive+immune+responses+to+Mycobacterium+bovis+BCG+infection+in+humanized+mice.">Engrafted human cells generate adaptive immune responses to Mycobacterium bovis BCG infection in humanized mice.</a> BMC Immunology. 14, 53 (2013).</li><li>Masse-Ranson, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+thymopoiesis+and+improved+T-cell+responses+in+HLA-A2/-DR2+transgenic+BRGS-based+human+immune+system+mice.">Accelerated thymopoiesis and improved T-cell responses in HLA-A2/-DR2 transgenic BRGS-based human immune system mice.</a> European Journal of Immunology. 49 (6), 954-965 (2019).</li><li>Oswald, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+infiltration+pattern+in+non-small+cell+lung+cancer+PDX+models+is+a+model+immanent+feature+and+correlates+with+a+distinct+molecular+and+phenotypic+make-up.">Immune cell infiltration pattern in non-small cell lung cancer PDX models is a model immanent feature and correlates with a distinct molecular and phenotypic make-up.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 10 (4), 004412 (2022).</li></ol>

במהלך 6 השנים האחרונות, תוך שימוש במומחיות שלנו הן באימונולוגיה והן בעכברים אנושיים, צוות המחקר שלנו פיתח מודל פרה-קליני נחוץ מאוד לבדיקת אימונותרפיה על מגוון גידולים אנושיים 3,7,30,31. פרוטוקול זה מדגיש את ההתחשבות בשונות...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated from:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)
to:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Kristina Larsen1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

מודלים של סרטן עכברים חשובים לביסוס מנגנונים בסיסיים של צמיחת הגידול ובריחה חיסונית. עם זאת, מחקרי טיפול בסרטן במודלים של עכברים הניבו תרגום סופי למרפאה בשל מודלים סינגניים מוגבלים והבדלים ספציפיים למין 1,2. הופעתם של טיפולים חיסוניים כגישה דומיננטית לשליטה בגידולים חזרה על הצורך במודל in vivo עם מערכת חיסון אנושית מתפקדת. ההתקדמות בעכברי מערכת החיסון האנושית (עכברי HIS ) בעשור האחרון אפשרה לחקור אימונו-אונקולוגיה in vivo במגוון רחב של סוגי סרטן וחומרים אימונותרפיים 3,4,5,6. מודלים של גידולים אנושיים, כולל xenografts שמקורם בקו תאים וקסנוגרפטים שמקורם בחולה (CDX ו-PDX, בהתאמה), גדלים היטב בעכברי HIS וברוב המקרים כמעט זהים לגידולם בפונדקאי החיסוני חסר קליטה המטופויטית אנושית 7,8. בהתבסס על ממצא מפתח זה, חוקרים השתמשו במודל העכבר HIS כדי לחקור אימונותרפיות אנושיות, כולל טיפולים משולבים שנועדו לשנות את המיקרו-סביבה של הגידול (TME) כדי להפחית את הדיכוי החיסוני ובכך להגביר את הרג הגידול המכוון על ידי מערכת החיסון. מודלים פרה-קליניים אלה מסייעים לטפל בבעיות של הטרוגניות של סרטן אנושי, ויכולים גם לחזות הצלחה בטיפול, כמו גם לעקוב אחר רעילות תרופות הקשורות למערכת החיסון 9,10.
ייצור מודל עכבר עם מערכת חיסון אנושית באמצעות הכנסת תאי גזע המטופויטיים אנושיים דורש עכבר מושתל מדוכא חיסון שלא ידחה את הקסנוגרפט. המודלים הנוכחיים של עכברי HIS נגזרים מזני עכברים מדוכאי חיסון שדווחו לפני יותר מ-30 שנה. זן העכבר הראשון עם כשל חיסוני שתואר היה עכברי SCID שהיו חסרים תאי T ו-B11, ואחריו NOD-SCID היברידי עם פולימורפיזם SIRPα האחראי לסבילות מקרופאגים של עכברים לתאים אנושיים, עקב קשירה מוגברת של אלל NOD SIRPα למולקולת CD47 האנושית12,13. בתחילת שנות ה-2000, מחיקת שרשרת הגמא הנפוצה של קולטן IL-2 (IL-2Rγc) בשני הזנים BALB/c ו-NOD שינתה את כללי המשחק עבור קליטה אנושית משופרת, עקב מחיקות גנטיות שאסרו על התפתחות תאי NK מארחים14,15,16,17. מודלים חלופיים, כגון עכברי BRG ו-NRG, משיגים מחסור בתאי T ו-B באמצעות מחיקה של הגן Rag1 או Rag2, הדרוש לסידור מחדש של גנים של קולטני תאי T ו-B ובכך להבשלה והישרדות של לימפוציטים18,19. עכבר BRGS (BALB/c -Rag2 null Il2R γCnullSirpα NOD) המשמש כאן משלב את חסר שרשרת IL-2Rγ ואת אללNOD SIRPα על רקע Rag2-/- וכתוצאה מכך עכבר בעל כשל חיסוני גבוה ללא תאי T, B או NK, אך עם מספיק מרץ ובריאות כדי לאפשר קליטה לטווח ארוך של יותר מ -30 שבועות13.
עכברי HIS יכולים להיווצר בדרכים רבות, כאשר הזרקת PBMC אנושית היא השיטה הישירה ביותר15,18,20. עם זאת, לעכברים אלה יש התרחבות בולטת של תאי T אנושיים פעילים שגורמת למחלת השתל לעומת המאכסן (GVHD) עד גיל 12 שבועות, מה שמונע מחקרים ארוכי טווח. לחלופין, תאי גזע המטופויטיים אנושיים מדם טבורי (CB), מח עצם וכבד עוברי יכולים לשמש גם לקליטה וייצור של מערכת החיסון האנושית דה נובו. במערכת זו, תאי הגזע ההמטופויטיים מייצרים מערכת חיסון אנושית מרובת שושלות עם דור של תאי T, B, ותאי חיסון מולדים שהם סובלניים מאוד לפונדקאי העכבר, בהשוואה לעכברי PBMC שמפתחים בעיקר תאי T. לכן, GVHD נעדר או מתעכב מאוד, וניתן להרחיב את הלימודים לעכברים עד גיל 10 חודשים. CB מספק מקור קל, נגיש ולא פולשני של תאי גזע המטופויטיים אנושיים CD34+ המאפשר השתלה של עכברי HIS מרובים עם מערכת חיסון זהה גנטית 17,18,20,21. במהלך השנים האחרונות, מודלים של עכברי HIS שימשו באופן נרחב לחקר אימונותרפיה ו- TME 3,4,5,6. למרות התפתחות מערכת החיסון שמקורה בבני אדם בעכברים אלה, גידולי קסנוגרפט אנושיים גדלים בקצב דומה בהשוואה לעכברי ביקורת מדוכאי חיסון ומאפשרים את יחסי הגומלין המורכבים בין תאי הסרטן לתאי מערכת החיסון, החשובה לשמירה על המיקרו-סביבה של PDX 3,7,8 המושתל . פרוטוקול זה שימש לביצוע למעלה מ-50 מחקרים שבדקו טיפולים בעכברי HIS-BRGS עם PDX ו-CDX. מסקנה חשובה היא שגידולים אנושיים בעכברי HIS שומרים על ה-TME הייחודי שלהם כפי שהוגדר על ידי הערכה מולקולרית של הגידול ביחס לדגימת החולה הראשונית ומאפייני החדירה החיסונית 3,22,23. הקבוצה שלנו מתמקדת בהערכה מעמיקה של HIS הן באיברי החיסון והן בגידול באמצעות ציטומטריית זרימה מרובת פרמטרים. במאמר זה אנו מתארים פרוטוקול להומניזציה של עכברי BRGS, הערכת כימריזם, השתלת גידולים אנושיים, מדידות גדילת גידולים, מתן טיפול בסרטן וניתוח תאי HIS לפי ציטומטריית זרימה.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe w/needles</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>1031815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Pro Separator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Golgi Stop Protein Transport Inhibitor with monensin</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Stim Cocktail</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>509305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chill 15 Rack</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-952</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-plugged glass pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-8B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Basement membrane extract</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>363200502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytek Aurora</td>
			<td>Cytek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9003-98-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eBioscience FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Set</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>00-5523-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryonic Stemcell FCS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10439001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tubes; 1.5 mL volume</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>616201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Benchmark</td>
			<td>100-106 500mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll Hypaque</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>45001752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo Software</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - fine</td>
			<td>Roboz Surgical&#160;</td>
			<td>RS5045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps normal</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>RS4919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>F75P1GAL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted Glass Slides</td>
			<td>Corning</td>
			<td>1255310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentlemacs C-Tubes</td>
			<td>Miltenyi&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACS Dissociator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass pipettes</td>
			<td>DWK Life Sciences</td>
			<td>63A53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS w/ Ca &#38; Mg</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>55037C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT25060CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I2511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>401108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMDM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12440053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase DL</td>
			<td>Roche</td>
			<td>5466202001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Blue</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>L23105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>JDC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-unabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>H2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>UHB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-unlabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>SA-DA4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiRad 350</td>
			<td>Precision X-Ray</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-nitrophenyl substrate</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>34045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRISM</td>
			<td>Graphpad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu FLT3L</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>308-FK-005/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu IL6</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>206-IL-010/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu SCF</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>255SC010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-39</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>8047-15-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>862945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipettes 25 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1367811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>567-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile molecular water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7732-18-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeti Cell Analyzer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>12004279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zombie Green</td>
			<td>biolegend</td>
			<td>423112</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors

היפוך האופי החיסוני של המיקרו-סביבה של הגידול הוא קריטי לטיפול מוצלח בסרטן באמצעות תרופות אימונותרפיות. מודלים של סרטן מורין מוגבלים מאוד במגוון שלהם וסובלים מתרגום לקוי למרפאה. כדי לשמש מודל פרה-קליני פיזיולוגי יותר למחקרים אימונותרפיים, פרוטוקול זה פותח כדי להעריך את הטיפול בגידולים אנושיים בעכבר שהורכב מחדש עם מערכת החיסון האנושית. פרוטוקול ייחודי זה מדגים התפתחות של עכברי מערכת החיסון האנושית (HIS, "אנושיים"), ולאחר מכן השתלה של גידול אנושי, או xenograft נגזר קו התא (CDX) או xenograft נגזר המטופל (PDX). העכברים שלו נוצרים על ידי הזרקת CD34+ תאי גזע המטופויטיים אנושיים שבודדו מדם טבורי לתוך BRGS בילוד (BALB/c Rag2-/- IL2RγC-/- NODSIRPα) עכברים בעלי כשל חיסוני גבוה המסוגלים גם לקבל גידול קסנוגני. מודגשת חשיבות הקינטיקה ומאפייני התפתחות מערכת החיסון האנושית והשתלת הגידול. לבסוף, מתוארת הערכה מעמיקה של המיקרו-סביבה של הגידול באמצעות ציטומטריית זרימה. במחקרים רבים המשתמשים בפרוטוקול זה, נמצא כי מיקרו-סביבה של גידולים בודדים משוחזרת בעכברי HIS-PDX; גידולים "חמים" מציגים חדירה חיסונית גדולה בעוד גידולים "קרים" לא. מודל זה משמש כשדה ניסויים לאימונותרפיה משולבת למגוון רחב של גידולים אנושיים ומהווה כלי חשוב בחיפוש אחר רפואה מותאמת אישית.

בעקבות פרוטוקול הגידול האגפי וציר הזמן הניסויי (איור 1), צמיחת הגידול והתגובה החיסונית לטיפול ממוקד מעכב טירוזין קינאז (TKI) ולטיפול משולב בניבולומאב נחקרו בשני PDX שונים של סרטן המעי הגס האנושי (CRC). תרופות TKI נחקרו בפונדקאים מדוכאי חיסון כדי להעריך את צמיחת הגידול רק...

Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

פרוטוקול זה מתאר את הדור של עכברי מערכת החיסון האנושית (HIS) עבור מחקרים אימונו-אונקולוגיים. הוראות ושיקולים בשימוש במודל זה לבדיקת אימונותרפיה אנושית על גידולים אנושיים המושתלים במודל זה מוצגים בדגש על אפיון התגובה של מערכת החיסון האנושית לגידול.

בדיקת אימונותרפיה לסרטן במודל עכבר אנושי הנושא גידולים אנושיים

Reversing the immunosuppressive nature of the tumor microenvironment is critical for the successful treatment of cancers with immunotherapy drugs. Murine ...

פרוטוקול זה מתאר את הדור של מערכת החיסון האנושית, או עכברי HIS למחקרים אימונו-אונקולוגיים פרה-קליניים. מודלים של סרטן עכברים מוגבלים במגוון שלהם ומתורגמים בצורה גרועה למרפאה. טכניקה זו משמשת כמודל פרה-קליני למחקרים אימונותרפיים על ידי הערכת הטיפול בגידולים אנושיים בעכבר עם מערכת חיסון אנושית.מודל העכבר האנושי יכול לשמש לחקר היבטים רבים של אימונולוגיה אנושית, כולל תגובות לזיהומים רבים, או סרטן של מערכת החיסון האנושית. השגת מקור אמין וחזק של דם טבורי ושמירה על בריאותה של מושבת עכברים מדוכאי חיסון יכולה להיות מאתגרת. מומחיות בציטומטריית זרימה וניתוח אימונולוגי היא חיונית.מי שתדגים את ההליך תהיה קריסטינה לארסן, אשת מקצוע בתחום שירותי המחקר מהמעבדה שלי. כדי להתחיל, להשעות מחדש את גלולת התא החיובי CD34 שבודד מדם טבורי ב 300 מיקרוליטר של מאגר מפריד תאים מגנטי לכל אחד כפול 10 לתאים השמיני. הוסף 100 מיקרוליטר של מגיב חוסם FCR לכל אחד כפול 10 לתא השמיני, ואחריו 100 מיקרוליטר של חרוזים מגנטיים חיוביים CD34 לכל אחד כפול 10 לתאים השמיני, ודגור בארבע מעלות צלזיוס במשך 30 דקות.לאחר מכן, הוסף חמישה מיליליטר של מאגר מפריד תאים מגנטי לכל אחד כפול 10 לתא השמיני, והסתובב ב 360 גרם במשך 10 דקות בארבע מעלות צלזיוס. חזור על שלב השטיפה והשהה מחדש את הגלולה ב 500 מיקרוליטר לכל 100 מיליון תאים של חיץ מפריד תאים מגנטי בצינור חרוטי 15 מיליליטר המסומן unfractionated. תייגו שתי שפופרות נוספות של 15 מיליליטר, CD34 שלילי וחיובי CD34 הניחו את שלושת הצינורות על מדף קירור.הפרד את התאים באמצעות תוכנית הבחירה החיובית של שתי עמודות על מפריד תאים מגנטי אוטומטי בארון בטיחות ביולוגית. לאחר מכן, להרחבה והקפאה של תאי גזע אנושיים חיוביים ל- CD34, הכינו דם טבורי, או מדיום CB כמתואר בכתב היד, ועברו דרך מסנן 0.22 מיקרון. להשעות מחדש את התאים החיוביים CD34 ב 100, 000 למיליליטר של CB בינוני, ולדגור ב 37 מעלות צלזיוס.ביום השלישי, הוסיפו נפח שווה של CB בינוני ללא ציטוקינים לצלוחית. ביום החמישי, קצור את התאים המורחבים CD34 חיוביים. פיפטה את תרחיף התא למעלה ולמטה, ולאסוף בצינור חרוטי 50 מיליליטר.מוסיפים מספיק CB בינוני כדי לכסות את החלק התחתון של הצלוחית. באמצעות מגרד התא, לגרד את כל החלק התחתון של הצלוחית. לאסוף את כל המדיה לתוך אותו צינור 50 מיליליטר, וצנטריפוגה.להשהות מחדש את התאים בשני מיליליטר של CB בינוני, וצנטריפוגה. שאפו את התווך עד הכדור, ותלו את הגלולה מחדש בתווך הקפאה. לאחר מכן, התחל הכנת תאים חיוביים CD34 שלוש שעות לאחר הקרנת גור.חם 10 מיליליטר של מדיה CB בצינור 50 מיליליטר. אחזר בקבוקון אחד של תאים חיוביים ל- CD34 מורחבים וקפואים במבחנה לכל ארבעה עד שישה גורים להזרקה. הפשירו במהירות בטמפרטורה של 50 עד 55 מעלות צלזיוס עד שניתן יהיה לראות רק כמות קטנה של קרח, והוסיפו את התאים לתווך CB המחומם.השתמש מיליליטר אחד של בינוני כדי לשטוף כל בקבוקון, ולסובב את התאים ב 360 גרם במשך 12 דקות בארבע מעלות צלזיוס. שאפו את המדיום בזהירות. להשהות מחדש את הגלולה בשני מיליליטר של מדיה CB ולספור את התאים.שוב, צנטריפוגות את התאים, שאפו את המדיום, והשעו מחדש את הגלולה ב -100 מיקרוליטר של PBS סטרילי לכל n ועוד גור אחד להזריק, וכתוצאה מכך 250, 000 עד 450, 000 תאים חיוביים CD34 לכל עכבר. לבידוד PBMC מדם עכברים, יש לערבב את הפרין הדם על ידי פיטום עדין למעלה ולמטה, ולאט לאט לכסות על גבי 500 מיקרוליטר של שיפוע צפיפות של 1.077 גרם למיליליטר תוך זהירות שלא להפריע לממשק. צנטריפוגה את הצינור ב 1, 220 גרם במשך 20 דקות בטמפרטורת החדר ללא הפסקות.מוציאים כמה שיותר תאים מהציפוי הבאפי עם פיפטה של 200 מיקרוליטר, ומוסיפים לצינור החדש של 1.5 מיליליטר המכיל 750 מיקרוליטר של מדיום הקציר. צנטריפוגה ב 360 גרם במשך 11 דקות. שואפים את המדיום ל-50 מיקרוליטר, ומשעימים מחדש את הגלולה ב-750 מיקרוליטר של מדיום הקציר.רכוש את הנתונים עבור 100 מיקרוליטר של כל דגימה על ציטומטר זרימה. לאחר מכן ייבא את קובץ fcs לתוכנה לעריכת נתוני זרימה והחל שער מצולע על תרשים FSC-A לעומת SSC-A. שנה את הצירים ל- FSC-A לעומת FSC-H, ושער התאים באלכסון ליניארי, למעט הכפילות הבולטות מהקו.בחר תאים אלה ושנה את הצירים ל- hCD45 לעומת mCD45. החל שער מצולע על האוכלוסייה HC45 חיובי, ולהחיל את השם אדם. החל שער מצולע על האוכלוסייה החיובית mCD45, והחל את עכבר השם.צור סטטיסטיקת ספירה עבור אוכלוסיות בני אדם ועכברים. לאחר מכן, בחר את האוכלוסייה האנושית ושנה את הצירים ל- CD19 לעומת CD3. החל שער מצולע על התאים החיוביים ל- CD19, ותן להם שם לתאי B.החל שער מצולע על האוכלוסייה החיובית ל- CD3, וקרא לו תאי T. לאחר מכן להחיל שער מצולע על האוכלוסייה השלילית הכפולה, ולקרוא לו non-TB. בחר את אוכלוסיית תאי T ושנה את הצירים ל- CD4 לעומת CD3.החל שער מצולע על האוכלוסייה החיובית ל- CD4, וקרא לו CD4 חיובי. החל שער מצולע על האוכלוסייה השלילית CD4, וקרא לו CD8. בחר את האוכלוסייה שאינה שחפת, ושנה את הצירים ל- CD56 לעומת מיאלואיד.החל שער מצולע על כלל האוכלוסייה החיובית ל- CD56, וקרא לו תאי NK. לאחר מכן להחיל שער מצולע על האוכלוסייה CD56 שלילי ומיאלואיד חיובי, ולקרוא לו מיאלואיד. צור טבלה עבור הנתונים הסטטיסטיים של אחוזים וספירה של כל האוכלוסיות, וייצא אותה לגיליון אלקטרוני.חשב אחוז hCD45 כימריזם באמצעות הנוסחה שצוינה. לאחר גידול תאי גידול בעכבר ומתן טיפולים תרופתיים, לקצור את הרקמות. הניחו את העכבר על לוח נתיחה מוקצף עם פינים כדי להחזיק אותם במקומם והידיים והרגליים מורחבות ב-45 מעלות.בצע חתך באמצע פלג הגוף העליון המתחיל ליד האגן ונמשך עד הסנטר. משוך את העור לקצה, והחזק אותו במקומו עם סיכות. לחלץ את בלוטות הלימפה באמצעות מלקחיים עדינים בסדר בית השחי, צוואר הרחם, mesenteric, מפשעתי, ו hiatal.הניחו את בלוטות הלימפה בצד אחד של מגלשת הזכוכית החלבית בצלחת פטרי בשמונה מיליליטר של מדיום הקציר. מחזיקים את המגלשות בזוויות ניצבות עם הקצוות החלביים פנימה, לוחצים בעדינות על הרקמות עד לשחרור התוכן הסלולרי. שטפו את המגלשה מספר פעמים על ידי הפרדה ביניהן וביחד כדי לשחרר את מספר התאים המרבי.אספו את התאים עם פיפטה מזכוכית בקוטר חמישה אינץ', וסננו אותם דרך פיפטה מחוברת כותנה בגודל תשעה אינץ' לצינור חרוטי מסומן של 15 מיליליטר. לאחר מכן, לחלץ את הגידול מן האגף הפתוח על ידי החזקת הגידול עם מלקחיים תוך חיתוך איטי בשולי הגידול עם מספריים דיסקציה. לשקול את הגידול ולהסיר 1/4 מהגידול לצורך עיבוד RNA ואימונוהיסטוכימיה.מניחים את 3/4 הגידול הנותרים לתוך צלחת של שישה סנטימטרים, וטוחנים אותו לחתיכות מילימטר אחד באמצעות להב אזמל. מעבירים את חתיכות הגידול לתוך צינור דיסוציאציה. לאחר מכן שטפו את הכלי עם מדיום TIL לא שלם, והוסיפו אותו לצינור.מוסיפים להכנת collagenase, ומנתקים את הרקמה באמצעות דיסוציאציה מכנית ב 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות עד שעה. מעבירים את המתלה מעל מסנן 100 מיקרון לתוך צינור חרוטי 50 מיליליטר ושוטפים את המסנן עם 10 מיליליטר של מדיה מלאה TIL. צנטריפוגה והשעיה מחדש של הגלולה באמצעי קציר מספיק עם DNase, כך שתרחיף התאים יכול לעבור בקלות דרך קצה פיפטה P1000 ולהקליט את עוצמת הקול לניתוח במורד הזרם.ב- PDX CRC 307P, הטיפול המשולב האט את צמיחת הגידול, כפי שנקבע על ידי נפחי צמיחת הגידול לאורך זמן, משקלי הגידול וקצב הצמיחה הספציפי. PDX CRC 307M שנבדק בקבוצה אחרת של עכברים הושפע פחות מאותו טיפול משולב בעכברי BRGS שלו. בהתבסס על כימריזם חיובי ל- hCD45 אנושי ותאי T אנושיים חיוביים ל- hCD3 בדם לפני השתלת הגידול, שני הפרמטרים גדלו במערכת החיסון ההיקפית וב- TIL בשילוב עם עכברים נושאי CRC 307P מטופלים, אך לא במודל CRC 307M.חקירת תאי T אנושיים גילתה יותר תאי T פעילים בגידולי CRC 307P, אך לא את הלימפה מעכברים שטופלו בשילוב. כמו כן, היו יותר תאי T חיוביים לזיכרון CD8 ופחות תאי T חיוביים ל-TIM-3 בשילוב שטופלו בגידולי CRC 307P. לעומת זאת, הבדל זה לא צוין בדגם CRC 307M.יתר על כן, לא נצפו שינויים בתדרים של אוכלוסיות תאי T ציטוטוקסיים בקרב העכברים המשולבים שטופלו, אם כי תאי T ציטוטוקסיים גבוהים יותר נצפו בעכברים שלא טופלו. הטיפול המשולב לא השפיע על התדירויות של Tregs באיברי הלימפה CRC 307P, או בגידולים, אם כי נתוני CRC 307M הראו מגמה של ירידה ב-Tregs. שינויים הקשורים למערכת החיסון בתאי הגידול הועלו באמצעות ציטומטריית זרימה.ביטוי מוגבר של MHC Class I ו- Class II נצפה על תאי הגידול CRC 307P שנכרתו מעכברי BRGS משולבים שטופלו ב- HIS BRGS. במודל CRC 307M, אותו טיפול תרופתי גרם לביטוי HLA Class II על תאי הגידול. באופן דומה, הטיפול המשולב הביא לביטוי מוגבר של PD-L1 על תאי הגידול CRC 307P חיוביים ל-EpCAM.לבסוף, נבדקו קורלציות של תגובות חיסוניות עם צמיחת הגידול. תאי T חיוביים ל- CD4 הראו מתאם מובהק עם צמיחת גידול קטנה יותר, וליתר דיוק תאי T מופעלים חיוביים HLA-DR בשילוב שטופלו בעכברי HIS . טכניקה סטרילית תוך בידוד התאים החיוביים CD34, כמו העכברים הם חיסוניים מאוד.הכימריזם המתקבל משתנה בתוך ובין תורמי דם טבורי, ולתאי T יש את השונות הגדולה ביותר. שילובי אימונותרפיה בלתי מוגבלים יכולים להתבצע, כמו גם מחקרים מכניסטיים ומינון תרופות, למשל, מחיקה של תאי T CD8 כדי לאשר את תפקידם. חשוב לציין, ניתן גם לחקור רעילות הקשורה לסמים.היא סיפקה מודל פרה-קליני רלוונטי ונגיש יותר לבדיקת אימונותרפיה אנושית לתרגום לקליניקה. מספר ניסויים קליניים נמצאים כעת בעיצומם בהתבסס על נתונים אלה.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

דגם פלורסנט Orthotopic עכבר של סרטן הלבלב

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

In vivo מודל השפעת בדיקה של היפוקסיה על גרורות של גידולים

Hypoxia has been implicated in the metastasis of Ewing sarcoma (ES) by clinical observations and in vitro data, yet direct evidence for its pro-metastatic ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

קולון-26 קרצינומה גידול נושאות עכבר כמודל לחקר סרטן תשישות

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Engraftment גידול במודל של עכברים Xenograft של האדם מנטל לימפומה התא

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

התפתחות מודל פרה האנושית של Osteoclastogenesis של דם היקפיים ומונוציטים תרבותי משותף עם שורות תאים של סרטן השד

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

תא היקפי של דם מונאפרור (PBMC) חרט הומניזציה מודל Xenograft עבור מחקר הטרנסג-אונקולוגיה (I-O)

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

מודל מורנה של גידולים גרורות בכבד בהגדרה של איסכמיה Reperfusion פציעה

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

קבלת סרטן גזע כדורים מגינקולוגית סרטן השד גידולים

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

זרימת עבודה מהירה של סינון לזיהוי טיפול משולב פוטנציאלי עבור GBM באמצעות תאי גזע גליומה שמקורם במטופל

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...

High-Resolution Ultrasonography for the Analysis of Orthotopic ATC Tumors in a Genetically Engineered Mouse Model

אולטרה-סאונד ברזולוציה גבוהה לניתוח גידולי ATC אורתוטופיים במודל עכבר מהונדס גנטית

Anaplastic thyroid carcinoma (ATC) is associated with a poor prognosis and short median survival time, but no effective treatment improves the outcomes ...