Name: testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors
Uploaded: 2022-12-16T13:50:00
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Vorremmo ringraziare sia l'Animal Research Facility (OLAR) per la loro cura dei nostri topi, sia la risorsa condivisa di citometria a flusso supportata dal Cancer Center Support Grant (P30CA046934) presso il nostro istituto per il loro immenso aiuto in tutto il nostro lavoro. Riconosciamo anche Gail Eckhardt e Anna Capasso per le nostre collaborazioni inaugurali che studiano le immunoterapie per PDX umani nel nostro modello HIS-BRGS. Questo studio è stato supportato in parte dal National Institutes of Health P30CA06934 Cancer Center Support Grant con l'uso della risorsa condivisa PHISM (Pre-clinical Human Immune System Mouse Models), RRID: SCR_021990 and Flow Cytometry Shared Resource, RRID: SCR_022035. Questa ricerca è stata sostenuta in parte dal NIAID del National Institutes of Health con il numero di contratto 75N93020C00058.

Tutto il lavoro sugli animali è stato eseguito secondo protocolli animali approvati dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali dell'Università del Colorado Denver (protocolli IACUC # 00593 e # 00021). Tutto il lavoro sugli animali è stato eseguito in conformità con l'Office of Laboratory Animal Resources (OLAR), una struttura accreditata dall'American Association for Laboratory Animal Care, presso l'Università del Colorado Denver Anschutz Medical Campus. Tutti i campioni di sangue del cordone ombel...

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	<li>Chulpanova, D. S., Kitaeva, K. V., Rutland, C. S., Rizvanov, A. A., Solovyeva, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+tumor+models+for+advanced+cancer+immunotherapy.">Mouse tumor models for advanced cancer immunotherapy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4118 (2020).</li><li>Olson, B., Li, Y., Lin, Y., Liu, E. T., Patnaik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+cancer+immunotherapy+research.">Mouse models for cancer immunotherapy research.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1358-1365 (2018).</li><li>Marin-Jimenez, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+cancer+immunotherapy+in+a+human+immune+system+mouse+model:+correlating+treatment+responses+to+human+chimerism,+therapeutic+variables+and+immune+cell+phenotypes.">Testing cancer immunotherapy in a human immune system mouse model: correlating treatment responses to human chimerism, therapeutic variables and immune cell phenotypes.</a> Frontiers in Immunology. 12, 607282 (2021).</li><li>Yin, L., Wang, X. J., Chen, D. X., Liu, X. N., Wang, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+model:+a+review+on+preclinical+applications+for+cancer+immunotherapy.">Humanized mouse model: a review on preclinical applications for cancer immunotherapy.</a> American Journal of Cancer Research. 10 (12), 4568-4584 (2020).</li><li>Cogels, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+as+a+valuable+pre-clinical+model+for+cancer+immunotherapy+research.">Humanized mice as a valuable pre-clinical model for cancer immunotherapy research.</a> Frontiers in Oncology. 11, 784947 (2021).</li><li>Jin, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+humanized+mouse+with+patient-derived+xenografts+for+cancer+immunotherapy+studies:+A+comprehensive+review.">Development of humanized mouse with patient-derived xenografts for cancer immunotherapy studies: A comprehensive review.</a> Cancer Science. 112 (7), 2592-2606 (2021).</li><li>Capasso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+immune+responses+to+anti-PD-1+mono+and+combination+immunotherapy+in+hematopoietic+humanized+mice+implanted+with+tumor+xenografts.">Characterization of immune responses to anti-PD-1 mono and combination immunotherapy in hematopoietic humanized mice implanted with tumor xenografts.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 7 (1), 37 (2019).</li><li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+studying+efficacy+and+mechanisms+of+PD-1-targeted+cancer+immunotherapy.">Humanized mice in studying efficacy and mechanisms of PD-1-targeted cancer immunotherapy.</a> The FASEB Journal. 32 (3), 1537-1549 (2018).</li><li>Yong, K. S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+as+a+tool+to+predict+immunotoxicity+of+human+biologics.">Humanized mouse as a tool to predict immunotoxicity of human biologics.</a> Frontiers in Immunology. 11, 553362 (2020).</li><li>Shen, H. W., Jiang, X. L., Gonzalez, F. J., Yu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+transgenic+mouse+models+for+drug+metabolism+and+pharmacokinetic+research.">Humanized transgenic mouse models for drug metabolism and pharmacokinetic research.</a> Current Drug Metabolism. 12 (10), 997-1006 (2011).</li><li>Bosma, G. C., Custer, R. P., Bosma, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+severe+combined+immunodeficiency+mutation+in+the+mouse.">A severe combined immunodeficiency mutation in the mouse.</a> Nature. 301 (5900), 527-530 (1983).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+defects+in+innate+and+adaptive+immunologic+function+in+NOD/LtSz-scid+mice.">Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice.</a> The Journal of Immunology. 154 (1), 180-191 (1995).</li><li>Legrand, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+CD47/signal+regulatory+protein+alpha+(SIRP(alpha))+interaction+is+required+for+optimal+human+T-+and+natural+killer-+(NK)+cell+homeostasis+in+vivo.">Functional CD47/signal regulatory protein alpha (SIRP(alpha)) interaction is required for optimal human T- and natural killer- (NK) cell homeostasis in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (32), 13224-13229 (2011).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> The Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Traggiai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+human+adaptive+immune+system+in+cord+blood+cell-transplanted+mice.">Development of a human adaptive immune system in cord blood cell-transplanted mice.</a> Science. 304 (5667), 104-107 (2004).</li><li>Theocharides, A. P., Rongvaux, A., Fritsch, K., Flavell, R. A., Manz, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+hemato-lymphoid+system+mice.">Humanized hemato-lymphoid system mice.</a> Haematologica. 101 (1), 5-19 (2016).</li><li>Goldman, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+human+cell+engraftment+in+mice+deficient+in+RAG2+and+the+common+cytokine+receptor+gamma+chain.">Enhanced human cell engraftment in mice deficient in RAG2 and the common cytokine receptor gamma chain.</a> British Journal of Haematology. 103 (2), 335-342 (1998).</li><li>Stripecke, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innovations,+challenges,+and+minimal+information+for+standardization+of+humanized+mice.">Innovations, challenges, and minimal information for standardization of humanized mice.</a> EMBO Molecular Medicine. 12 (7), (2020).</li><li>Allen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+immune+system+mouse+models:+progress,+challenges+and+opportunities.">Humanized immune system mouse models: progress, challenges and opportunities.</a> Nature Immunology. 20 (7), 770-774 (2019).</li><li>Gammelgaard, O. L., Terp, M. G., Preiss, B., Ditzel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cancer+evolution+in+the+context+of+a+human+immune+system+in+mice.">Human cancer evolution in the context of a human immune system in mice.</a> Molecular Oncology. 12 (10), 1797-1810 (2018).</li><li>Rios-Doria, J., Stevens, C., Maddage, C., Lasky, K., Koblish, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+cancer+xenografts+in+humanized+mice.">Characterization of human cancer xenografts in humanized mice.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 8 (1), 000416 (2020).</li><li>Gombash Lampe, S. E., Kaspar, B. K., Foust, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+injections+in+neonatal+mice.">Intravenous injections in neonatal mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52037 (2014).</li><li>Lang, J., Weiss, N., Freed, B. M., Torres, R. M., Pelanda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+hematopoietic+humanized+mice+in+the+newborn+BALB/c-Rag2null+Il2r&#947;null+mouse+model:+a+multivariable+optimization+approach.">Generation of hematopoietic humanized mice in the newborn BALB/c-Rag2null Il2r&#947;null mouse model: a multivariable optimization approach.</a> Clinical Immunology. 140 (1), 102-116 (2011).</li><li>Laskowski, T. J., Hazen, A. L., Collazo, R. S., Haviland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rigor+and+reproducibility+of+cytometry+practices+for+immuno-oncology:+a+multifaceted+challenge.">Rigor and reproducibility of cytometry practices for immuno-oncology: a multifaceted challenge.</a> Cytometry Part A. 97 (2), 116-125 (2020).</li><li>Bagby, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+maintenance+of+a+preclinical+patient+derived+tumor+xenograft+model+for+the+investigation+of+novel+anti-cancer+therapies.">Development and maintenance of a preclinical patient derived tumor xenograft model for the investigation of novel anti-cancer therapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54393 (2016).</li><li>Laajala, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+design+and+analysis+of+preclinical+intervention+studies+in+vivo.">Optimized design and analysis of preclinical intervention studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 30723 (2016).</li><li>Na, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+patient-derived+xenografts+from+patients+with+gastrointestinal+stromal+tumors:+analysis+of+clinicopathological+characteristics+related+to+engraftment+success.">Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success.</a> Scientific Reports. 10 (1), 7996 (2020).</li><li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RX-5902,+a+novel+beta-catenin+modulator,+potentiates+the+efficacy+of+immune+checkpoint+inhibitors+in+preclinical+models+of+triple-negative+breast+cancer.">RX-5902, a novel beta-catenin modulator, potentiates the efficacy of immune checkpoint inhibitors in preclinical models of triple-negative breast cancer.</a> BMC Cancer. 20 (1), 1063 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+adrenocortical+cancer+humanized+mouse+model+to+characterize+anti-PD1+effects+on+tumor+microenvironment.">Development of an adrenocortical cancer humanized mouse model to characterize anti-PD1 effects on tumor microenvironment.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 105 (1), 26-42 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+lymphocyte+reconstitution+in+a+humanized+mouse+model+reveal+a+requirement+of+T+cells+for+human+B+cell+maturation.">Studies of lymphocyte reconstitution in a humanized mouse model reveal a requirement of T cells for human B cell maturation.</a> The Journal of Immunology. 190 (5), 2090-2101 (2013).</li><li>Katano, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-Rag2null+IL-2R&#947;null+mice:+an+alternative+to+NOG+mice+for+generation+of+humanized+mice.">NOD-Rag2null IL-2R&#947;null mice: an alternative to NOG mice for generation of humanized mice.</a> Experimental Animalas. 63 (3), 321-330 (2014).</li><li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parameters+for+establishing+humanized+mouse+models+to+study+human+immunity:+analysis+of+human+hematopoietic+stem+cell+engraftment+in+three+immunodeficient+strains+of+mice+bearing+the+IL2r&#947;(null)+mutation.">Parameters for establishing humanized mouse models to study human immunity: analysis of human hematopoietic stem cell engraftment in three immunodeficient strains of mice bearing the IL2r&#947;(null) mutation.</a> Clinical Immunology. 135 (1), 84-98 (2010).</li><li>Hasgur, S., Aryee, K. E., Shultz, L. D., Greiner, D. L., Brehm, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+immunodeficient+mice+bearing+human+immune+systems+by+the+engraftment+of+hematopoietic+stem+cells.">Generation of immunodeficient mice bearing human immune systems by the engraftment of hematopoietic stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1438, 67-78 (2016).</li><li>Andre, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+human+CD34++stem+cell-engrafted+nonobese+diabetic/SCID/IL-2R&#947;null+mice+show+impaired+CD8++T+cell+maintenance+and+a+functional+arrest+of+immature+NK+cells.">Long-term human CD34+ stem cell-engrafted nonobese diabetic/SCID/IL-2R&#947;null mice show impaired CD8+ T cell maintenance and a functional arrest of immature NK cells.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2710-2720 (2010).</li><li>Wunderlich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+multilineage+human+hematopoietic+reconstitution+and+function+in+NSGS+mice.">Improved multilineage human hematopoietic reconstitution and function in NSGS mice.</a> PLoS One. 13 (12), 0209034 (2018).</li><li>Lee, J., Brehm, M. A., Greiner, D., Shultz, L. D., Kornfeld, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engrafted+human+cells+generate+adaptive+immune+responses+to+Mycobacterium+bovis+BCG+infection+in+humanized+mice.">Engrafted human cells generate adaptive immune responses to Mycobacterium bovis BCG infection in humanized mice.</a> BMC Immunology. 14, 53 (2013).</li><li>Masse-Ranson, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+thymopoiesis+and+improved+T-cell+responses+in+HLA-A2/-DR2+transgenic+BRGS-based+human+immune+system+mice.">Accelerated thymopoiesis and improved T-cell responses in HLA-A2/-DR2 transgenic BRGS-based human immune system mice.</a> European Journal of Immunology. 49 (6), 954-965 (2019).</li><li>Oswald, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+infiltration+pattern+in+non-small+cell+lung+cancer+PDX+models+is+a+model+immanent+feature+and+correlates+with+a+distinct+molecular+and+phenotypic+make-up.">Immune cell infiltration pattern in non-small cell lung cancer PDX models is a model immanent feature and correlates with a distinct molecular and phenotypic make-up.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 10 (4), 004412 (2022).</li></ol>

Negli ultimi 6 anni, utilizzando la nostra esperienza sia in immunologia che nei topi umanizzati, il nostro team di ricerca ha sviluppato un modello preclinico molto necessario per testare le immunoterapie su una varietà di tumori umani 3,7,30,31. Questo protocollo enfatizza la considerazione della variabilità del modello, con particolare attenzione alle popolazioni di cellule T umane incentr...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated from:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)
to:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Kristina Larsen1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

I modelli di cancro del topo sono importanti per stabilire i meccanismi di base della crescita tumorale e della fuga immunitaria. Tuttavia, gli studi sul trattamento del cancro in modelli murini hanno prodotto una traduzione finita alla clinica a causa dei limitati modelli singeneici e delle differenze specie-specifiche 1,2. L'emergere di terapie immunitarie come approccio dominante per controllare i tumori ha ribadito la necessità di un modello in vivo con un sistema immunitario umano funzionale. I progressi nei topi del sistema immunitario umano (topi HIS) negli ultimi dieci anni hanno reso possibile studiare l'immuno-oncologia in vivo in un'ampia varietà di tipi di cancro e agenti immunoterapeutici 3,4,5,6. I modelli tumorali umani, compresi gli xenotrapianti derivati da linee cellulari e derivati dal paziente (CDX e PDX, rispettivamente), crescono bene nei topi HIS e nella maggior parte dei casi sono quasi identici alla loro crescita nell'ospite immunodeficiente privo di attecchimento ematopoietico umano 7,8. Sulla base di questa scoperta chiave, i ricercatori hanno utilizzato il modello murino HIS per studiare le immunoterapie umane, comprese le terapie combinate progettate per alterare il microambiente tumorale (TME) per ridurre l'immunosoppressione e quindi migliorare l'uccisione del tumore diretta dal sistema immunitario. Questi modelli preclinici aiutano ad affrontare i problemi di eterogeneità dei tumori umani e possono anche prevedere il successo del trattamento e monitorare la tossicità dei farmaci correlati al sistema immunitario 9,10.
La produzione di un modello murino con un sistema immunitario umano attraverso l'introduzione di cellule staminali ematopoietiche umane richiede un topo immunodeficiente ricevente che non respinga lo xenotrapianto. Gli attuali modelli murini HIS derivano da ceppi murini immunodeficienti che sono stati segnalati oltre 30 anni fa. Il primo ceppo di topo immunodeficiente descritto erano topi SCID privi di cellule T e B11, seguiti da un ibrido NOD-SCID con un polimorfismo SIRPα responsabile della tolleranza dei macrofagi di topo alle cellule umane, a causa dell'aumento del legame per l'allele NOD SIRPα alla molecola umana CD4712,13. Nei primi anni 2000, la delezione della catena gamma comune del recettore IL-2 (IL-2Rγc) su entrambi i ceppi immunodeficienti BALB / c e NOD è stato un punto di svolta per l'attecchimento umano potenziato, a causa delle delezioni genetiche che vietano lo sviluppo delle cellule NK dell'ospite14,15,16,17. Modelli alternativi, come i topi BRG e NRG, raggiungono il deficit delle cellule T e B attraverso la delezione del gene Rag1 o Rag2, richiesto per i riarrangiamenti genici dei recettori delle cellule T e B e quindi la maturazione e la sopravvivenza dei linfociti18,19. Il topo BRGS (BALB/c -Rag2 nullIl2RγCnullSirpα NOD) qui utilizzato combina il deficit della catena IL-2Rγ e l'alleleNOD SIRPα sullo sfondo Rag2-/-, risultando in un topo altamente immunodeficiente senza cellule T, B o NK, ma con sufficiente vigore e salute per consentire un attecchimento a lungo termine di oltre 30 settimane13.
I topi HIS possono essere generati in diversi modi, con l'iniezione umana di PBMC che è il metodo più diretto15,18,20. Tuttavia, questi topi hanno una pronunciata espansione delle cellule T umane attivate che si traduce in malattia del trapianto contro l'ospite (GVHD) entro le 12 settimane di età, impedendo studi a lungo termine. In alternativa, le cellule staminali ematopoietiche umane dal sangue del cordone ombelicale (CB), dal midollo osseo e dal fegato fetale possono anche essere utilizzate per l'attecchimento e la produzione del sistema immunitario umano de novo. In questo sistema, le cellule staminali ematopoietiche producono un sistema immunitario umano multi-lignaggio con la generazione di T, B e cellule immunitarie innate che sono significativamente tolleranti dell'ospite del topo, rispetto ai topi PBMC che sviluppano principalmente cellule T. Pertanto, la GVHD è assente o molto ritardata e gli studi possono essere estesi a topi fino a 10 mesi di età. CB fornisce una fonte facile, accessibile e non invasiva di cellule staminali ematopoietiche umane CD34+ che facilita l'attecchimento di più topi HIS con sistemi immunitari geneticamente identici 17,18,20,21. Negli ultimi anni, i modelli murini HIS sono stati ampiamente utilizzati per studiare l'immunoterapia e la TME 3,4,5,6. Nonostante lo sviluppo di sistemi immunitari di derivazione umana in questi topi, i tumori dello xenotrapianto umano crescono a tassi simili rispetto ai topi immunodeficienti di controllo e consentono la complessa interazione tra le cellule tumorali e le cellule immunitarie, che è importante per mantenere il microambiente delPDX 3,7,8 innestato . Questo protocollo è stato utilizzato per eseguire oltre 50 studi testando trattamenti in topi HIS-BRGS con PDX e CDX. Una conclusione importante è che i tumori umani nei topi HIS mantengono la loro unica TME come definito dalla valutazione molecolare del tumore rispetto al campione iniziale del paziente e alle caratteristiche dell'infiltrato immunitario 3,22,23. Il nostro gruppo si concentra sulla valutazione approfondita dell'HIS sia negli organi immunitari che nel tumore utilizzando la citometria a flusso multiparametrica. Qui, descriviamo un protocollo per l'umanizzazione dei topi BRGS, la valutazione del chimerismo, l'impianto di tumori umani, le misurazioni della crescita tumorale, la somministrazione del trattamento del cancro e l'analisi delle cellule HIS mediante citometria a flusso.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe w/needles</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>1031815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Pro Separator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Golgi Stop Protein Transport Inhibitor with monensin</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Stim Cocktail</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>509305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chill 15 Rack</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-952</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-plugged glass pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-8B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Basement membrane extract</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>363200502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytek Aurora</td>
			<td>Cytek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9003-98-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eBioscience FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Set</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>00-5523-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryonic Stemcell FCS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10439001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tubes; 1.5 mL volume</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>616201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Benchmark</td>
			<td>100-106 500mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll Hypaque</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>45001752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo Software</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - fine</td>
			<td>Roboz Surgical&#160;</td>
			<td>RS5045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps normal</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>RS4919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>F75P1GAL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted Glass Slides</td>
			<td>Corning</td>
			<td>1255310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentlemacs C-Tubes</td>
			<td>Miltenyi&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACS Dissociator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass pipettes</td>
			<td>DWK Life Sciences</td>
			<td>63A53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS w/ Ca &#38; Mg</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>55037C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT25060CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I2511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>401108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMDM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12440053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase DL</td>
			<td>Roche</td>
			<td>5466202001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Blue</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>L23105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>JDC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-unabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>H2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>UHB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-unlabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>SA-DA4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiRad 350</td>
			<td>Precision X-Ray</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-nitrophenyl substrate</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>34045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRISM</td>
			<td>Graphpad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu FLT3L</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>308-FK-005/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu IL6</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>206-IL-010/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu SCF</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>255SC010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-39</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>8047-15-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>862945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipettes 25 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1367811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>567-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile molecular water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7732-18-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeti Cell Analyzer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>12004279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zombie Green</td>
			<td>biolegend</td>
			<td>423112</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors

Invertire la natura immunosoppressiva del microambiente tumorale è fondamentale per il successo del trattamento dei tumori con farmaci immunoterapici. I modelli di cancro murino sono estremamente limitati nella loro diversità e soffrono di scarsa traduzione in clinica. Per servire come modello preclinico più fisiologico per gli studi di immunoterapia, questo protocollo è stato sviluppato per valutare il trattamento dei tumori umani in un topo ricostituito con un sistema immunitario umano. Questo protocollo unico dimostra lo sviluppo di topi del sistema immunitario umano (HIS, "umanizzati"), seguito dall'impianto di un tumore umano, sia uno xenotrapianto derivato da linea cellulare (CDX) o uno xenotrapianto derivato dal paziente (PDX). I topi HIS sono generati iniettando cellule staminali ematopoietiche umane CD34 + isolate dal sangue del cordone ombelicale in topi neonatali BRGS (BALB / c Rag2-/- IL2RγC-/- NODSIRPα) altamente immunodeficienti che sono anche in grado di accettare un tumore xenogenico. Viene sottolineata l'importanza della cinetica e delle caratteristiche dello sviluppo del sistema immunitario umano e dell'impianto del tumore. Infine, viene descritta una valutazione approfondita del microambiente tumorale mediante citometria a flusso. In numerosi studi che utilizzano questo protocollo, è stato riscontrato che il microambiente tumorale dei singoli tumori è ricapitolato nei topi HIS-PDX; I tumori "caldi" mostrano una grande infiltrazione immunitaria mentre i tumori "freddi" no. Questo modello funge da banco di prova per le immunoterapie combinate per una vasta gamma di tumori umani e rappresenta uno strumento importante nella ricerca di una medicina personalizzata.

Seguendo il protocollo tumorale del fianco e la tempistica sperimentale (Figura 1), la crescita tumorale e la risposta immunitaria a una terapia mirata con inibitori della tirosin-chinasi (TKI) e al trattamento combinato con nivolumab sono state studiate in due distinti PDX per il cancro del colon-retto umano (CRC). I farmaci TKI sono stati studiati in ospiti immunodeficienti per valutare la crescita tumorale solo29. Questo modello ha permesso lo studio dei cambiament...

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Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Questo protocollo delinea la generazione di topi del sistema immunitario umano (HIS) per studi immuno-oncologici. Le istruzioni e le considerazioni nell'uso di questo modello per testare immunoterapici umani su tumori umani impiantati in questo modello sono presentate con un'enfasi sulla caratterizzazione della risposta del sistema immunitario umano al tumore.

Test di immunoterapie del cancro in un modello murino umanizzato che porta tumori umani

Reversing the immunosuppressive nature of the tumor microenvironment is critical for the successful treatment of cancers with immunotherapy drugs. Murine ...

Questo protocollo delinea la generazione di topi del sistema immunitario umano o HIS per studi preclinici di immuno-oncologia. I modelli di cancro del topo sono limitati nella loro diversità e si traducono male nella clinica. Questa tecnica serve come modello preclinico per gli studi di immunoterapia valutando il trattamento dei tumori umani in un topo con un sistema immunitario umano.Il modello murino umanizzato può essere utilizzato per studiare molteplici aspetti dell'immunologia umana, comprese le risposte a molte infezioni o tumori del sistema immunitario umano. Acquisire una fonte affidabile e robusta di sangue del cordone ombelicale e mantenere la salute della colonia di topi immunodeficiente può essere difficile. La competenza nella citometria a flusso e nell'analisi immunologica è essenziale.A dimostrare la procedura sarà Kristina Larsen, una professionista dei servizi di ricerca del mio laboratorio. Per iniziare, risospendere il pellet cellulare CD34-positivo isolato dal sangue del cordone ombelicale in 300 microlitri di tampone separatore di cellule magnetiche per una volta 10 alle ottave celle. Aggiungere 100 microlitri di reagente bloccante FCR per una volta 10 all'ottava cellula, seguita da 100 microlitri di perle magnetiche CD34-positive per una volta 10 all'ottava cellula, e incubare a quattro gradi Celsius per 30 minuti.Quindi, aggiungere cinque millilitri di tampone separatore di celle magnetiche per una volta 10 all'ottava cella e ruotare a 360 g per 10 minuti a quattro gradi Celsius. Ripetere la fase di lavaggio e risospendere il pellet in 500 microlitri per 100 milioni di celle di tampone separatore magnetico in un tubo conico da 15 millilitri etichettato non frazionato. Etichettare altri due tubi da 15 millilitri CD34-negativi e CD34-positivi Posizionare i tre tubi su una griglia di raffreddamento.Separare le celle utilizzando il programma di selezione positiva a due colonne su un separatore di celle magnetico automatico in un armadio di biosicurezza. Successivamente, per espandere e congelare le cellule staminali umane CD34-positive, preparare il sangue del cordone ombelicale, o mezzo CB come descritto nel manoscritto, e passare attraverso un filtro da 0,22 micron. Risospendere le cellule CD34-positive a 100.000 per millilitro di mezzo CB e incubare a 37 gradi Celsius.Il terzo giorno, aggiungere un volume uguale di mezzo CB senza citochine al pallone. Il quinto giorno, raccogliere le cellule CD34-positive espanse. Pipettare la sospensione cellulare su e giù e raccogliere in un tubo conico da 50 millilitri.Aggiungere una quantità di CB media sufficiente a coprire il fondo del pallone. Usando un raschietto cellulare, raschiare l'intero fondo del pallone. Raccogliere tutti i mezzi nello stesso tubo da 50 millilitri e centrifugare.Risospendere le cellule in due millilitri di mezzo CB e centrifugare. Aspirare il mezzo verso il pellet e risospendere il pellet in un mezzo di congelamento. Quindi, iniziare la preparazione delle cellule CD34-positive tre ore dopo l'irradiazione del cucciolo.Riscaldare 10 millilitri di supporti CB in un tubo da 50 millilitri. Recuperare una fiala di cellule CD34-positive espanse e congelate in vitro per ogni quattro-sei cuccioli da iniettare. Scongelare rapidamente a 50-55 gradi Celsius fino a quando non è visibile solo una piccola quantità di ghiaccio e aggiungere le cellule al mezzo CB riscaldato.Utilizzare un millilitro di mezzo per risciacquare ogni flaconcino e ruotare le cellule a 360 g per 12 minuti a quattro gradi Celsius. Aspirare il mezzo con attenzione. Risospendere il pellet in due millilitri di mezzo CB e contare le celle.Ancora una volta, centrifugare le cellule, aspirare il mezzo e risospendere il pellet in 100 microlitri di PBS sterile per n più un cucciolo da iniettare, ottenendo da 250.000 a 450.000 cellule CD34-positive per topo. Per l'isolamento del PBMC dal sangue del topo, mescolare l'eparina nel sangue pipettando delicatamente su e giù e sovrapporre lentamente sopra 500 microlitri di gradiente di densità di 1,077 grammi per millilitro facendo attenzione a non disturbare l'interfaccia. Centrifugare il tubo a 1.220 g per 20 minuti a temperatura ambiente senza pause.Rimuovere il maggior numero possibile di cellule dal buffy coat con una pipetta da 200 microlitri e aggiungere al nuovo tubo da 1,5 millilitri contenente 750 microlitri di terreno di raccolta. Centrifugare a 360 g per 11 minuti. Aspirare il mezzo a 50 microlitri e risospendere il pellet in 750 microlitri di terreno di raccolta.Acquisire i dati per 100 microlitri di ciascun campione su un citometro a flusso. Quindi importare il file fcs nel software di modifica dei dati di flusso e applicare una porta poligonale a un grafico FSC-A anziché SSC-A. Modificare gli assi impostandoli su FSC-A anziché FSC-H e aprire le celle sulla diagonale lineare, escludendo i doppietti che sporgono dalla linea.Selezionare queste celle e modificare gli assi in hCD45 anziché mCD45. Applicare una porta poligonale alla popolazione hCD45-positiva e applicare il nome umano. Applicare una porta poligonale alla popolazione mCD45-positiva e applicare il nome mouse.Crea una statistica di conteggio per le popolazioni umane e di topi. Quindi, selezionare la popolazione umana e modificare gli assi in CD19 rispetto a CD3. Applicare una porta poligonale alle cellule CD19-positive e denominarle cellule B.Applicare una porta poligonale alla popolazione CD3-positiva e denominarla cellule T. Quindi applicare una porta poligonale alla popolazione doppia negativa e chiamarla non-TB. Selezionare la popolazione di cellule T e modificare gli assi in CD4 anziché CD3.Applicare una porta poligonale alla popolazione CD4-positiva e denominarla CD4-positiva. Applicare una porta poligonale alla popolazione CD4-negativa e denominarla CD8. Selezionare la popolazione non TB e modificare gli assi in CD56 rispetto alla mieloide.Applicare una porta poligonale alla popolazione totale CD56-positiva e denominarla cellule NK. Quindi applicare una porta poligonale alla popolazione CD56-negativa e mieloide-positiva e chiamarla mieloide. Crea una tabella per le statistiche percentuali e di conteggio di tutte le popolazioni ed esportalo in un foglio di calcolo.Calcola la percentuale di chimerismo hCD45 usando la formula indicata. Dopo la crescita delle cellule tumorali nel topo e la somministrazione di trattamenti farmacologici, raccogliere i tessuti. Posizionare il mouse su una tavola di dissezione di schiuma con perni per tenerli in posizione e le braccia e le gambe estese a 45 gradi.Fai un'incisione fino al centro del busto iniziando vicino al bacino e estendendosi al mento. Tirare la pelle verso il bordo e tenerla in posizione con gli spilli. Estrarre i linfonodi usando una pinza fine nell'ordine ascellare, cervicale, mesenterico, inguinale e iatale.Posizionare i linfonodi su un lato del vetrino smerigliato in una capsula di Petri in otto millilitri di terreno di raccolta. Tenendo i vetrini ad angoli perpendicolari con i bordi smerigliati verso l'interno, premere delicatamente i tessuti fino a quando il contenuto cellulare non viene rilasciato. Risciacquare il vetrino più volte separandoli e unendoli per rilasciare il numero massimo di celle.Raccogliere le celle con una pipetta di vetro da cinque pollici e filtrarle attraverso una pipetta di cotone da nove pollici in un tubo conico etichettato da 15 millilitri. Successivamente, estrarre il tumore dal fianco aperto tenendo il tumore con una pinza mentre si tagliano lentamente i margini del tumore con le forbici di dissezione. Pesare il tumore e rimuovere 1/4 del tumore per l'elaborazione dell'RNA e dell'immunoistochimica.Metti i restanti 3/4 del tumore in un piatto di sei centimetri e tritalo in pezzi di un millimetro usando una lama di bisturi. Trasferire i pezzi del tumore in un tubo di dissociazione. Quindi sciacquare il piatto con un mezzo TIL incompleto e aggiungerlo al tubo.Aggiungere la preparazione della collagenasi e dissociare il tessuto utilizzando la dissociazione meccanica a 37 gradi Celsius per 30 minuti a un'ora. Passare la sospensione su un filtro da 100 micron in un tubo conico da 50 millilitri e sciacquare il filtro con 10 millilitri di mezzo completo TIL. Centrifugare e risospendere il pellet in un mezzo di raccolta sufficiente con DNasi, in modo che la sospensione delle celle possa facilmente passare attraverso una punta di pipetta P1000 e registrare il volume per l'analisi a valle.Nel PDX CRC 307P, il trattamento combinato ha rallentato la crescita del tumore, come determinato dai volumi di crescita del tumore nel tempo, dai pesi del tumore e dal tasso di crescita specifico. PDX CRC 307M testato in una diversa coorte di topi è stato meno influenzato dallo stesso trattamento combinato nei topi HIS BRGS. Sulla base del chimerismo hCD45-positivo e hCD3-positivo alle cellule T umane nel sangue prima dell'impianto del tumore, entrambi i parametri sono aumentati nel sistema immunitario periferico e nel TIL in combinazione con topi portatori di CRC 307P trattati, ma non nel modello CRC 307M.L'indagine sulle cellule T umane ha rivelato più cellule T attivate nei tumori CRC 307P, ma non la linfa dei topi trattati in combinazione. Inoltre, c'erano più cellule T CD8-positive alla memoria effettrice e meno cellule T TIM-3-positive nei tumori CRC 307P trattati in combinazione. Al contrario, questa differenza non è stata notata nel modello CRC 307M.Inoltre, non sono stati osservati cambiamenti nelle frequenze delle popolazioni di cellule T citotossiche tra i topi trattati in combinazione, sebbene siano state osservate cellule T citotossiche più elevate nei topi non trattati. Il trattamento combinato non ha influenzato le frequenze delle Treg negli organi linfatici del CRC 307P o nei tumori, sebbene i dati del CRC 307M abbiano mostrato una tendenza alla riduzione delle Treg. I cambiamenti correlati al sistema immunitario nelle cellule tumorali sono stati elevati utilizzando la citometria a flusso.Un aumento dell'espressione di MHC di classe I e II è stato osservato sulle cellule tumorali CRC 307P asportate da topi HIS BRGS trattati in combinazione. Nel modello CRC 307M, lo stesso trattamento farmacologico ha indotto l'espressione di HLA di classe II sulle cellule tumorali. Allo stesso modo, il trattamento combinato ha determinato un aumento dell'espressione di PD-L1 sulle cellule tumorali CRC 307P EpCAM-positive.Infine, sono state studiate le correlazioni delle risposte immunitarie con la crescita tumorale. L'aumento delle cellule T CD4-positive ha mostrato una correlazione significativa con una crescita tumorale più piccola, e più specificamente le cellule T attivate HLA-DR-positive nei topi HIS trattati con la combinazione. Tecnica sterile durante l'isolamento delle cellule CD34-positive, poiché i topi sono estremamente immunodeficienti.Il chimerismo risultante è variabile all'interno e tra i donatori di sangue del cordone ombelicale e le cellule T hanno la variazione maggiore. Possono essere eseguite combinazioni illimitate di immunoterapia, nonché studi cinetici meccanicistici e di dosaggio farmacologico, ad esempio la delezione delle cellule T CD8 per confermare il loro ruolo. È importante sottolineare che anche le tossicità correlate ai farmaci possono essere studiate.Ha fornito un modello preclinico più pertinente e accessibile per testare le immunoterapie umane per la traduzione in clinica. Diversi studi clinici sono ora in corso sulla base di questi dati.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

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Ricerca

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The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

Modello Murine dei tumori metastatici del fegato nell'impostazione della lesione alla riperfusione dell'ischemia

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Ottenere le sfere delle cellule staminali tumorali da tumori ginecologici e tumori del cancro

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

Un flusso di lavoro di screening rapido per identificare la potenziale terapia combinata per GBM utilizzando cellule staminali di glioma derivate dal paziente

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...

High-Resolution Ultrasonography for the Analysis of Orthotopic ATC Tumors in a Genetically Engineered Mouse Model

Ecografia ad alta risoluzione per l'analisi di tumori ATC ortotopici in un modello murino geneticamente modificato

Anaplastic thyroid carcinoma (ATC) is associated with a poor prognosis and short median survival time, but no effective treatment improves the outcomes ...