Name: testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors
Uploaded: 2022-12-16T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

Vi vil gjerne takke både Animal Research Facility (OLAR) for deres omsorg for våre mus, og Flow Cytometry Shared Resource støttet av Cancer Center Support Grant (P30CA046934) ved vårt institutt for deres enorme hjelp i alt vårt arbeid. Vi anerkjenner også både Gail Eckhardt og Anna Capasso for våre innledende samarbeid som studerer immunterapier mot humane PDXer i vår HIS-BRGS-modell. Denne studien ble støttet delvis av National Institutes of Health P30CA06934 Cancer Center Support Grant ved bruk av PHISM (Pre-clinical Human Immune System Mouse Models) Shared Resource, RRID: SCR_021990 and Flow Cytometry Shared Resource, RRID: SCR_022035. Denne forskningen ble støttet delvis av NIAID fra National Institutes of Health under kontraktsnummer 75N93020C00058.

Alt dyrearbeid ble utført under dyreprotokoller godkjent av University of Colorado Denver Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC protokoller #00593 og #00021). Alt dyrearbeid ble utført i samsvar med Office of Laboratory Animal Resources (OLAR), et akkreditert anlegg av American Association for Laboratory Animal Care, ved University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus. Alle navlestrengsblodprøver fra mennesker ble innhentet som donasjoner fra avidentifiserte givere og er derfor ikke underlagt godkje...

<ol>
	<li>Chulpanova, D. S., Kitaeva, K. V., Rutland, C. S., Rizvanov, A. A., Solovyeva, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+tumor+models+for+advanced+cancer+immunotherapy.">Mouse tumor models for advanced cancer immunotherapy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4118 (2020).</li><li>Olson, B., Li, Y., Lin, Y., Liu, E. T., Patnaik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+cancer+immunotherapy+research.">Mouse models for cancer immunotherapy research.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1358-1365 (2018).</li><li>Marin-Jimenez, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+cancer+immunotherapy+in+a+human+immune+system+mouse+model:+correlating+treatment+responses+to+human+chimerism,+therapeutic+variables+and+immune+cell+phenotypes.">Testing cancer immunotherapy in a human immune system mouse model: correlating treatment responses to human chimerism, therapeutic variables and immune cell phenotypes.</a> Frontiers in Immunology. 12, 607282 (2021).</li><li>Yin, L., Wang, X. J., Chen, D. X., Liu, X. N., Wang, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+model:+a+review+on+preclinical+applications+for+cancer+immunotherapy.">Humanized mouse model: a review on preclinical applications for cancer immunotherapy.</a> American Journal of Cancer Research. 10 (12), 4568-4584 (2020).</li><li>Cogels, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+as+a+valuable+pre-clinical+model+for+cancer+immunotherapy+research.">Humanized mice as a valuable pre-clinical model for cancer immunotherapy research.</a> Frontiers in Oncology. 11, 784947 (2021).</li><li>Jin, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+humanized+mouse+with+patient-derived+xenografts+for+cancer+immunotherapy+studies:+A+comprehensive+review.">Development of humanized mouse with patient-derived xenografts for cancer immunotherapy studies: A comprehensive review.</a> Cancer Science. 112 (7), 2592-2606 (2021).</li><li>Capasso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+immune+responses+to+anti-PD-1+mono+and+combination+immunotherapy+in+hematopoietic+humanized+mice+implanted+with+tumor+xenografts.">Characterization of immune responses to anti-PD-1 mono and combination immunotherapy in hematopoietic humanized mice implanted with tumor xenografts.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 7 (1), 37 (2019).</li><li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+studying+efficacy+and+mechanisms+of+PD-1-targeted+cancer+immunotherapy.">Humanized mice in studying efficacy and mechanisms of PD-1-targeted cancer immunotherapy.</a> The FASEB Journal. 32 (3), 1537-1549 (2018).</li><li>Yong, K. S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+as+a+tool+to+predict+immunotoxicity+of+human+biologics.">Humanized mouse as a tool to predict immunotoxicity of human biologics.</a> Frontiers in Immunology. 11, 553362 (2020).</li><li>Shen, H. W., Jiang, X. L., Gonzalez, F. J., Yu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+transgenic+mouse+models+for+drug+metabolism+and+pharmacokinetic+research.">Humanized transgenic mouse models for drug metabolism and pharmacokinetic research.</a> Current Drug Metabolism. 12 (10), 997-1006 (2011).</li><li>Bosma, G. C., Custer, R. P., Bosma, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+severe+combined+immunodeficiency+mutation+in+the+mouse.">A severe combined immunodeficiency mutation in the mouse.</a> Nature. 301 (5900), 527-530 (1983).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+defects+in+innate+and+adaptive+immunologic+function+in+NOD/LtSz-scid+mice.">Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice.</a> The Journal of Immunology. 154 (1), 180-191 (1995).</li><li>Legrand, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+CD47/signal+regulatory+protein+alpha+(SIRP(alpha))+interaction+is+required+for+optimal+human+T-+and+natural+killer-+(NK)+cell+homeostasis+in+vivo.">Functional CD47/signal regulatory protein alpha (SIRP(alpha)) interaction is required for optimal human T- and natural killer- (NK) cell homeostasis in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (32), 13224-13229 (2011).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> The Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Traggiai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+human+adaptive+immune+system+in+cord+blood+cell-transplanted+mice.">Development of a human adaptive immune system in cord blood cell-transplanted mice.</a> Science. 304 (5667), 104-107 (2004).</li><li>Theocharides, A. P., Rongvaux, A., Fritsch, K., Flavell, R. A., Manz, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+hemato-lymphoid+system+mice.">Humanized hemato-lymphoid system mice.</a> Haematologica. 101 (1), 5-19 (2016).</li><li>Goldman, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+human+cell+engraftment+in+mice+deficient+in+RAG2+and+the+common+cytokine+receptor+gamma+chain.">Enhanced human cell engraftment in mice deficient in RAG2 and the common cytokine receptor gamma chain.</a> British Journal of Haematology. 103 (2), 335-342 (1998).</li><li>Stripecke, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innovations,+challenges,+and+minimal+information+for+standardization+of+humanized+mice.">Innovations, challenges, and minimal information for standardization of humanized mice.</a> EMBO Molecular Medicine. 12 (7), (2020).</li><li>Allen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+immune+system+mouse+models:+progress,+challenges+and+opportunities.">Humanized immune system mouse models: progress, challenges and opportunities.</a> Nature Immunology. 20 (7), 770-774 (2019).</li><li>Gammelgaard, O. L., Terp, M. G., Preiss, B., Ditzel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cancer+evolution+in+the+context+of+a+human+immune+system+in+mice.">Human cancer evolution in the context of a human immune system in mice.</a> Molecular Oncology. 12 (10), 1797-1810 (2018).</li><li>Rios-Doria, J., Stevens, C., Maddage, C., Lasky, K., Koblish, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+cancer+xenografts+in+humanized+mice.">Characterization of human cancer xenografts in humanized mice.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 8 (1), 000416 (2020).</li><li>Gombash Lampe, S. E., Kaspar, B. K., Foust, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+injections+in+neonatal+mice.">Intravenous injections in neonatal mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52037 (2014).</li><li>Lang, J., Weiss, N., Freed, B. M., Torres, R. M., Pelanda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+hematopoietic+humanized+mice+in+the+newborn+BALB/c-Rag2null+Il2r&#947;null+mouse+model:+a+multivariable+optimization+approach.">Generation of hematopoietic humanized mice in the newborn BALB/c-Rag2null Il2r&#947;null mouse model: a multivariable optimization approach.</a> Clinical Immunology. 140 (1), 102-116 (2011).</li><li>Laskowski, T. J., Hazen, A. L., Collazo, R. S., Haviland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rigor+and+reproducibility+of+cytometry+practices+for+immuno-oncology:+a+multifaceted+challenge.">Rigor and reproducibility of cytometry practices for immuno-oncology: a multifaceted challenge.</a> Cytometry Part A. 97 (2), 116-125 (2020).</li><li>Bagby, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+maintenance+of+a+preclinical+patient+derived+tumor+xenograft+model+for+the+investigation+of+novel+anti-cancer+therapies.">Development and maintenance of a preclinical patient derived tumor xenograft model for the investigation of novel anti-cancer therapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54393 (2016).</li><li>Laajala, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+design+and+analysis+of+preclinical+intervention+studies+in+vivo.">Optimized design and analysis of preclinical intervention studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 30723 (2016).</li><li>Na, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+patient-derived+xenografts+from+patients+with+gastrointestinal+stromal+tumors:+analysis+of+clinicopathological+characteristics+related+to+engraftment+success.">Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success.</a> Scientific Reports. 10 (1), 7996 (2020).</li><li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RX-5902,+a+novel+beta-catenin+modulator,+potentiates+the+efficacy+of+immune+checkpoint+inhibitors+in+preclinical+models+of+triple-negative+breast+cancer.">RX-5902, a novel beta-catenin modulator, potentiates the efficacy of immune checkpoint inhibitors in preclinical models of triple-negative breast cancer.</a> BMC Cancer. 20 (1), 1063 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+adrenocortical+cancer+humanized+mouse+model+to+characterize+anti-PD1+effects+on+tumor+microenvironment.">Development of an adrenocortical cancer humanized mouse model to characterize anti-PD1 effects on tumor microenvironment.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 105 (1), 26-42 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+lymphocyte+reconstitution+in+a+humanized+mouse+model+reveal+a+requirement+of+T+cells+for+human+B+cell+maturation.">Studies of lymphocyte reconstitution in a humanized mouse model reveal a requirement of T cells for human B cell maturation.</a> The Journal of Immunology. 190 (5), 2090-2101 (2013).</li><li>Katano, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-Rag2null+IL-2R&#947;null+mice:+an+alternative+to+NOG+mice+for+generation+of+humanized+mice.">NOD-Rag2null IL-2R&#947;null mice: an alternative to NOG mice for generation of humanized mice.</a> Experimental Animalas. 63 (3), 321-330 (2014).</li><li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parameters+for+establishing+humanized+mouse+models+to+study+human+immunity:+analysis+of+human+hematopoietic+stem+cell+engraftment+in+three+immunodeficient+strains+of+mice+bearing+the+IL2r&#947;(null)+mutation.">Parameters for establishing humanized mouse models to study human immunity: analysis of human hematopoietic stem cell engraftment in three immunodeficient strains of mice bearing the IL2r&#947;(null) mutation.</a> Clinical Immunology. 135 (1), 84-98 (2010).</li><li>Hasgur, S., Aryee, K. E., Shultz, L. D., Greiner, D. L., Brehm, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+immunodeficient+mice+bearing+human+immune+systems+by+the+engraftment+of+hematopoietic+stem+cells.">Generation of immunodeficient mice bearing human immune systems by the engraftment of hematopoietic stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1438, 67-78 (2016).</li><li>Andre, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+human+CD34++stem+cell-engrafted+nonobese+diabetic/SCID/IL-2R&#947;null+mice+show+impaired+CD8++T+cell+maintenance+and+a+functional+arrest+of+immature+NK+cells.">Long-term human CD34+ stem cell-engrafted nonobese diabetic/SCID/IL-2R&#947;null mice show impaired CD8+ T cell maintenance and a functional arrest of immature NK cells.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2710-2720 (2010).</li><li>Wunderlich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+multilineage+human+hematopoietic+reconstitution+and+function+in+NSGS+mice.">Improved multilineage human hematopoietic reconstitution and function in NSGS mice.</a> PLoS One. 13 (12), 0209034 (2018).</li><li>Lee, J., Brehm, M. A., Greiner, D., Shultz, L. D., Kornfeld, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engrafted+human+cells+generate+adaptive+immune+responses+to+Mycobacterium+bovis+BCG+infection+in+humanized+mice.">Engrafted human cells generate adaptive immune responses to Mycobacterium bovis BCG infection in humanized mice.</a> BMC Immunology. 14, 53 (2013).</li><li>Masse-Ranson, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+thymopoiesis+and+improved+T-cell+responses+in+HLA-A2/-DR2+transgenic+BRGS-based+human+immune+system+mice.">Accelerated thymopoiesis and improved T-cell responses in HLA-A2/-DR2 transgenic BRGS-based human immune system mice.</a> European Journal of Immunology. 49 (6), 954-965 (2019).</li><li>Oswald, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+infiltration+pattern+in+non-small+cell+lung+cancer+PDX+models+is+a+model+immanent+feature+and+correlates+with+a+distinct+molecular+and+phenotypic+make-up.">Immune cell infiltration pattern in non-small cell lung cancer PDX models is a model immanent feature and correlates with a distinct molecular and phenotypic make-up.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 10 (4), 004412 (2022).</li></ol>

I løpet av de siste 6 årene, ved hjelp av vår kompetanse innen både immunologi og humaniserte mus, har vårt forskerteam utviklet en sårt tiltrengt preklinisk modell for å teste immunterapier på en rekke humane svulster 3,7,30,31. Denne protokollen legger vekt på hensynet til modellens variabilitet, med spesiell oppmerksomhet til immunterapi-sentriske humane T-cellepopulasjoner. I denne...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated from:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)
to:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Kristina Larsen1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Musekreftmodeller er viktige for å etablere grunnleggende mekanismer for tumorvekst og immunflukt. Imidlertid har kreftbehandlingsstudier i musemodeller gitt endelig oversettelse til klinikken på grunn av begrensede syngene modeller og artsspesifikke forskjeller 1,2. Fremveksten av immunterapier som en dominerende tilnærming til å kontrollere svulster har gjentatt behovet for en in vivo-modell med et funksjonelt humant immunsystem. Fremskritt i humane immunsystemmus (HIS mus) i løpet av det siste tiåret har gjort det mulig å studere immunonkologi in vivo i et bredt spekter av krefttyper og immunterapeutiske midler 3,4,5,6. Humane tumormodeller, inkludert cellelinjeavledede og pasientavledede xenotransplantater (henholdsvis CDX og PDX), vokser godt i HES-mus og er i de fleste tilfeller nesten identiske med veksten i den immundefekte verten som mangler human hematopoietisk engraftment 7,8. Basert på dette nøkkelfunnet har forskere brukt HIS-musemodellen til å studere humane immunterapier, inkludert kombinasjonsterapier designet for å endre tumormikromiljøet (TME) for å redusere immunsuppresjon og dermed forbedre immunrettet tumordrap. Disse prekliniske modellene bidrar til å løse problemene med heterogenitet av humane kreftformer, og kan også forutsi behandlingssuksess, samt overvåke immunrelaterte legemiddeltoksisiteter 9,10.
Produksjonen av en musemodell med et humant immunsystem gjennom innføring av humane hematopoietiske stamceller krever en mottakerimmundefekt mus som ikke vil avvise xenograft. Nåværende HIS musemodeller er avledet fra immundefekte musestammer som ble rapportert for over 30 år siden. Den første immundefekte musestammen som ble beskrevet var SCID-mus som manglet T- og B-celler11, etterfulgt av en hybrid NOD-SCID med en SIRPα-polymorfisme som var ansvarlig for musemakrofagtoleranse for humane celler, på grunn av økt binding for NOD SIRPα-allelen til det humane CD47-molekylet12,13. På begynnelsen av 2000-tallet var slettingen av den vanlige gammakjeden til IL-2-reseptoren (IL-2Rγc) på både BALB / c og NOD immundefekte stammer en spillveksler for forbedret menneskelig engraftment, på grunn av genetiske delesjoner som forbyr vert NK-celleutvikling14,15,16,17. Alternative modeller, som BRG- og NRG-mus, oppnår T- og B-cellemangel gjennom delesjon av Rag1- eller Rag2-genet, som kreves for T- og B-cellereseptorgenomorganiseringer og dermed modning og overlevelse av lymfocytter18,19. BRGS (BALB / c -Rag2 null Il2R γCnullSirpαNOD) mus som brukes her kombinerer IL-2Rγ kjedemangel og NOD SIRPα allel påRag2-/- bakgrunnen, noe som resulterer i en svært immundefekt mus uten T-, B- eller NK-celler, men med tilstrekkelig kraft og helse til å tillate langsiktig engraftment på mer enn 30 uker13.
HIS mus kan genereres på flere måter, med human PBMC-injeksjon som den mest direkte metoden15,18,20. Imidlertid har disse musene en uttalt utvidelse av aktiverte humane T-celler som resulterer i graft versus host disease (GVHD) ved 12 ukers alder, og forhindrer langsiktige studier. Alternativt kan humane hematopoietiske stamceller fra navlestrengsblod (CB), benmarg og fosterlever også brukes til engraftment og produksjon av det humane immunsystemet de novo. I dette systemet produserer de hematopoietiske stamcellene et humant immunsystem med flere linjer med generering av T, B og medfødte immunceller som er viktig tolerante for museverten, sammenlignet med PBMC-musene som hovedsakelig utvikler T-celler. Derfor er GVHD fraværende eller sterkt forsinket, og studier kan utvides til mus opp til 10 måneder. CB gir en enkel, tilgjengelig og ikke-invasiv kilde til CD34 + humane hematopoietiske stamceller som letter engraftment av flere HIS-mus med genetisk identiske immunsystemer 17,18,20,21. I løpet av de siste årene har HIS musemodeller blitt brukt mye for å studere immunterapi og TME 3,4,5,6. Til tross for utviklingen av humant avledet immunsystem i disse musene, vokser humane xenografttumorer med tilsvarende hastigheter sammenlignet med kontrollimmundefektmusene og tillater det komplekse samspillet mellom kreftcellene og immuncellene, noe som er viktig for å opprettholde mikromiljøet til den transplanterte PDX 3,7,8 . Denne protokollen har blitt brukt til å utføre over 50 studier som tester behandlinger i HIS-BRGS-mus med PDX og CDX. En viktig konklusjon er at humane svulster i HIS-musene opprettholder sin unike TME som definert ved molekylær evaluering av svulsten i forhold til den første pasientprøven og immuninfiltrategenskapene 3,22,23. Vår gruppe fokuserer på dybdeevaluering av HIS i både immunorganer og svulst ved hjelp av multiparameter flowcytometri. Her beskriver vi en protokoll for humanisering av BRGS-mus, evaluering av kimerisme, implantasjon av humane svulster, tumorvekstmålinger, kreftbehandlingsadministrasjon og analyse av HIS-cellene ved flowcytometri.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe w/needles</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>1031815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Pro Separator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Golgi Stop Protein Transport Inhibitor with monensin</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Stim Cocktail</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>509305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chill 15 Rack</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-952</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-plugged glass pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-8B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Basement membrane extract</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>363200502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytek Aurora</td>
			<td>Cytek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9003-98-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eBioscience FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Set</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>00-5523-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryonic Stemcell FCS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10439001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tubes; 1.5 mL volume</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>616201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Benchmark</td>
			<td>100-106 500mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll Hypaque</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>45001752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo Software</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - fine</td>
			<td>Roboz Surgical&#160;</td>
			<td>RS5045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps normal</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>RS4919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>F75P1GAL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted Glass Slides</td>
			<td>Corning</td>
			<td>1255310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentlemacs C-Tubes</td>
			<td>Miltenyi&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACS Dissociator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass pipettes</td>
			<td>DWK Life Sciences</td>
			<td>63A53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS w/ Ca &#38; Mg</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>55037C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT25060CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I2511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>401108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMDM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12440053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase DL</td>
			<td>Roche</td>
			<td>5466202001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Blue</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>L23105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>JDC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-unabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>H2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>UHB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-unlabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>SA-DA4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiRad 350</td>
			<td>Precision X-Ray</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-nitrophenyl substrate</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>34045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRISM</td>
			<td>Graphpad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu FLT3L</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>308-FK-005/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu IL6</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>206-IL-010/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu SCF</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>255SC010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-39</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>8047-15-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>862945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipettes 25 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1367811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>567-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile molecular water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7732-18-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeti Cell Analyzer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>12004279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zombie Green</td>
			<td>biolegend</td>
			<td>423112</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors

Reversering av den immunosuppressive naturen til tumormikromiljøet er kritisk for vellykket behandling av kreft med immunterapimedisiner. Murine kreftmodeller er ekstremt begrenset i sitt mangfold og lider av dårlig oversettelse til klinikken. For å tjene som en mer fysiologisk preklinisk modell for immunterapistudier, har denne protokollen blitt utviklet for å evaluere behandlingen av humane svulster i en mus rekonstituert med et humant immunsystem. Denne unike protokollen demonstrerer utviklingen av humant immunsystem (HIS, "humanisert") mus, etterfulgt av implantasjon av en human tumor, enten en cellelinjeavledet xenograft (CDX) eller en pasientavledet xenograft (PDX). HIS mus genereres ved å injisere CD34+ humane hematopoietiske stamceller isolert fra navlestrengsblod inn i neonatale BRGS (BALB / c Rag2-/- IL2RγC-/- NOD SIRPα) svært immundefekte mus som også er i stand til å akseptere en xenogen tumor. Betydningen av kinetikken og egenskapene til det menneskelige immunsystemutviklingen og tumorimplantasjonen understrekes. Til slutt beskrives en grundig evaluering av tumormikromiljøet ved hjelp av flowcytometri. I mange studier ved bruk av denne protokollen ble det funnet at tumormikromiljøet til individuelle svulster rekapituleres i HIS-PDX-mus; "Varme" svulster utviser stor immuninfiltrasjon, mens "kalde" svulster ikke gjør det. Denne modellen fungerer som et testområde for kombinasjonsimmunterapier for et bredt spekter av humane svulster og representerer et viktig verktøy i jakten på personlig medisin.

Etter flanketumorprotokollen og eksperimentell tidslinje (figur 1) ble tumorvekst og immunrespons på en målrettet tyrosinkinasehemmer (TKI) terapi og nivolumab kombinasjonsbehandling studert i to distinkte humane kolorektal kreft (CRC) PDX. TKI-legemidlene har blitt studert i immundefekte verter for å evaluere tumorvekst bare29. Denne modellen muliggjorde studiet av endringer i immunresponsen til TKI alene, og enda viktigere, i kombinasjon med anti-PD-1. Denne stud...

Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Denne protokollen skisserer genereringen av mus av humant immunsystem (HIS) for immunonkologistudier. Instruksjoner og betraktninger i bruken av denne modellen for testing av humane immunterapier på humane svulster implantert i denne modellen presenteres med vekt på å karakterisere responsen av det humane immunsystemet til svulsten.

Testing av kreftimmunterapi i en humanisert musemodell som bærer menneskelige svulster

Reversing the immunosuppressive nature of the tumor microenvironment is critical for the successful treatment of cancers with immunotherapy drugs. Murine ...

Denne protokollen skisserer genereringen av humant immunsystem, eller HIS mus for prekliniske immunonkologistudier. Musekreftmodeller er begrenset i deres mangfold og oversetter dårlig til klinikken. Denne teknikken fungerer som en preklinisk modell for immunterapistudier ved å evaluere behandlingen av humane svulster i en mus med et humant immunsystem.Den humaniserte musemodellen kan brukes til å studere flere aspekter av human immunologi, inkludert respons på mange infeksjoner eller kreft i det menneskelige immunsystemet. Å skaffe seg en pålitelig og robust kilde til ledningsblod og opprettholde helsen til den immundefekte musekolonien kan være utfordrende. Kompetanse innen flowcytometri og immunologisk analyse er viktig.Demonstrere prosedyren vil være Kristina Larsen, en forskningstjenester profesjonell fra laboratoriet mitt. For å begynne, resuspendere den CD34-positive cellepelleten isolert fra ledningsblod i 300 mikroliter magnetisk celleseparatorbuffer per en ganger 10 til den åttende cellen. Tilsett 100 mikroliter FCR-blokkerende reagens per en ganger 10 til de åttende cellene, etterfulgt av 100 mikroliter CD34-positive magnetiske perler per en gang 10 til de åttende cellene, og inkuber ved fire grader Celsius i 30 minutter.Deretter legger du til fem milliliter magnetisk celleseparatorbuffer per en ganger 10 til de åttende cellene, og spinner ved 360 g i 10 minutter ved fire grader Celsius. Gjenta vasketrinnet og resuspender pelleten i 500 mikroliter per 100 millioner celler magnetisk celleseparatorbuffer i et 15 milliliter konisk rør merket ufraksjonert. Merk ytterligere to 15 milliliters rør CD34-negative og CD34-positive Plasser de tre rørene på et kjølestativ.Separat cellene ved hjelp av de to kolonnene positive seleksjon program på en automatisk magnetisk celle separator i en biosafety skap. Deretter, for å utvide og fryse CD34-positive humane stamceller, forberede ledningsblod eller CB-medium som beskrevet i manuskriptet, og passere gjennom et 0,22 mikron filter. Resuspender CD34-positive celler ved 100 000 per milliliter CB-medium, og inkuber ved 37 grader Celsius.På dag tre, tilsett et likt volum CB-medium uten cytokiner til kolben. På dag fem høster du de utvidede CD34-positive cellene. Pipett cellesuspensjonen opp og ned, og samle i et 50 milliliter konisk rør.Tilsett nok CB-medium til å dekke bunnen av kolben. Bruk en celleskraper, skrap hele bunnen av kolben. Samle alle mediene i samme 50 milliliter rør og sentrifuge.Resuspender cellene i to milliliter CB-medium og sentrifuge. Aspirer mediet ned til pelleten, og resuspender pelleten i et frysemedium. Deretter begynner CD34-positiv cellepreparasjon tre timer etter bestråling av valp.Varm 10 ml CB-medier i et 50 milliliter rør. Hent ett hetteglass med in vitro utvidede og frosne CD34-positive celler for hver fjerde til seks valper som skal injiseres. Tine raskt ved 50 til 55 grader Celsius til bare en liten mengde is er synlig, og legg cellene til det oppvarmede CB-mediet.Bruk en milliliter medium til å skylle hvert hetteglass, og spinn cellene ved 360 g i 12 minutter ved fire grader Celsius. Aspirer mediet forsiktig. Resuspender pelleten i to milliliter CB-medier og tell cellene.Igjen, sentrifuge cellene, aspirere mediet, og resuspendere pelleten i 100 mikroliter steril PBS per n pluss en valp å injisere, noe som resulterer i 250.000 til 450.000 CD34-positive celler per mus. For PBMC-isolasjon fra museblod, bland blodheparinet ved å pipettere forsiktig opp og ned, og legg sakte over på toppen av 500 mikroliter på 1,077 gram per milliliter tetthetsgradient, og vær forsiktig så du ikke forstyrrer grensesnittet. Sentrifuge røret ved 1.220 g i 20 minutter ved romtemperatur uten pauser.Fjern så mange celler som mulig fra buffy-frakken med en 200 mikroliter pipette, og legg til det nye 1,5 milliliter røret som inneholder 750 mikroliter høstmedium. Sentrifuge ved 360 g i 11 minutter. Aspirer mediet til 50 mikroliter, og resuspender pelleten i 750 mikroliter høstmedium.Skaff dataene for 100 mikroliter av hver prøve på et flowcytometer. Deretter importerer du fcs-filen til flytdataredigeringsprogramvaren, og bruker en polygonport på et FSC-A- kontra SSC-A-plott. Endre aksene til FSC-A versus FSC-H, og port cellene på den lineære diagonalen, unntatt dublettene som stikker ut fra linjen.Velg disse cellene og endre aksene til hCD45 versus mCD45. Påfør en polygonport på den hCD45-positive populasjonen, og bruk navnet menneske. Påfør en polygonport på den mCD45-positive populasjonen, og bruk navnet mus.Opprett en tellestatistikk for populasjoner av mennesker og mus. Velg deretter den menneskelige populasjonen, og endre aksene til CD19 versus CD3. Påfør en polygonport på de CD19-positive cellene, og gi dem navn som B-celler.Påfør en polygonport på den CD3-positive populasjonen, og gi den navnet T-celler. Påfør deretter en polygonport på den dobbeltnegative populasjonen, og gi den navnet ikke-TB. Velg T-cellepopulasjonen og endre aksene til CD4 versus CD3.Påfør en polygonport på den CD4-positive populasjonen, og gi den navnet CD4-positiv. Påfør en polygonport på den CD4-negative populasjonen, og gi den navnet CD8. Velg ikke-TB-populasjonen, og endre aksene til CD56 versus myeloide.Påfør en polygonport på den totale CD56-positive populasjonen, og gi den navnet NK-celler. Påfør deretter en polygonport på den CD56-negative og myeloide positive populasjonen, og gi den navnet myeloid. Opprett en tabell for prosent- og tellestatistikk for alle populasjoner, og eksporter den til et regneark.Beregn prosent hCD45 chimerisme ved hjelp av den angitte formelen. Etter å ha vokst tumorceller i musen og administrert medikamentelle behandlinger, høst vevet. Plasser musen på et skumdisseksjonsbrett med pinner for å holde dem på plass og armer og ben forlenget ved 45 grader.Lag et snitt opp midt på overkroppen som starter nær bekkenet og strekker seg til haken. Trekk huden til kanten, og hold den på plass med pinner. Trekk ut lymfeknuter ved hjelp av fine tang i rekkefølgen aksillær, cervical, mesenteric, inguinal og hiatal.Plasser lymfeknuter på den ene siden av det frostede glassglasset i en petriskål i åtte milliliter høstmedium. Hold lysbildene i vinkelrette vinkler med de frostede kantene innover, trykk forsiktig på vevet til det cellulære innholdet slippes ut. Skyll lysbildet flere ganger ved å trekke dem fra hverandre og sammen for å frigjøre maksimalt antall celler.Samle cellene med en fem tommers glasspipette, og filtrer dem gjennom en ni tommers bomullsplugget pipette i et merket 15 milliliter konisk rør. Deretter trekker du ut svulsten fra den åpne flanken ved å holde svulsten med tang mens du sakte klipper på tumormarginene med disseksjonssaks. Vei svulsten og fjern 1/4 av svulsten for RNA og immunhistokjemi behandling.Plasser de resterende 3/4 av svulsten i en seks centimeter tallerken, og hakk den i en millimeter stykker ved hjelp av et skalpellblad. Overfør tumorbitene til et dissosiasjonsrør. Skyll deretter fatet med ufullstendig TIL-medium, og legg det til røret.Legg til kollagenasepreparat, og dissocier vevet ved hjelp av mekanisk dissosiasjon ved 37 grader Celsius i 30 minutter til en time. Før suspensjonen over et 100 mikron filter inn i et 50 milliliter konisk rør og skyll filteret med 10 ml TIL komplett medium. Sentrifuge og resuspendere pelleten i akkurat nok høstemedium med DNase, slik at celleopphenget lett kan passere gjennom en P1000-pipettespiss og registrere volumet for nedstrømsanalyse.I PDX CRC 307P reduserte kombinasjonsbehandlingen veksten av svulsten, som bestemt av tumorvekstvolum over tid, tumorvekter og den spesifikke veksthastigheten. PDX CRC 307M testet i en annen kohort av mus ble mindre påvirket av samme kombinasjonsbehandling i HIS BRGS-mus. Basert på total human hCD45-positiv og human T-celle hCD3-positiv kimerisme i blodet før tumorimplantasjon, økte begge parametrene i det perifere immunsystemet og TIL i kombinasjon med behandlede CRC 307P-bærende mus, men ikke CRC 307M-modellen.Undersøkelse av de humane T-cellene avslørte flere aktiverte T-celler i CRC 307P-svulstene, men ikke lymfene fra kombinasjonsbehandlede mus. Det var også flere effektorminne CD8-positive T-celler og færre TIM-3-positive T-celler i kombinasjonsbehandlede CRC 307P-svulster. I kontrast ble denne forskjellen ikke notert i CRC 307M-modellen.Videre ble det ikke observert endringer i frekvensen av cytotoksiske T-cellepopulasjoner blant de kombinasjonsbehandlede musene, selv om høyere cytotoksiske T-celler ble observert hos ubehandlede. Kombinasjonsbehandling påvirket ikke frekvensene av Tregs i verken CRC 307P lymfeorganer eller svulster, selv om CRC 307M-dataene viste en trend med redusert Tregs. Immunrelaterte forandringer i tumorceller var forhøyet ved hjelp av flowcytometri.Økt ekspresjon av MHC klasse I og klasse II ble observert på CRC 307P tumorceller skåret ut fra kombinasjonsbehandlede HIS BRGS-mus. I CRC 307M-modellen induserte den samme medikamentelle behandlingen HLA-klasse II-uttrykk på tumorcellene. På samme måte resulterte kombinasjonsbehandlingen i økt PD-L1-uttrykk på de EpCAM-positive CRC 307P-tumorcellene.Til slutt ble korrelasjoner av immunresponser med tumorvekst undersøkt. Økte CD4-positive T-celler viste en signifikant korrelasjon med mindre tumorvekst, og mer spesifikt de HLA-DR-positive aktiverte T-cellene i kombinasjonen behandlet HES-mus. Steril teknikk mens du isolerer de CD34-positive cellene, da musene er ekstremt immundefekte.Den resulterende kimerismen er variabel innenfor og mellom blodgivere, og T-celler har den største variasjonen. Ubegrensede immunterapikombinasjoner kan utføres, samt mekanistiske og medikamentdoseringskinetiske studier, for eksempel sletting av CD8 T-celler for å bekrefte deres rolle. Det er viktig at legemiddelrelaterte toksisiteter også kan studeres.Det ga en mer relevant og tilgjengelig preklinisk modell for å teste humane immunterapier for oversettelse til klinikken. Flere kliniske studier pågår nå basert på disse dataene.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescent ortotopiske musemodell for kreft i bukspyttkjertelen

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

In vivo modell for testing Effekt av hypoksi på tumormetastaser

Hypoxia has been implicated in the metastasis of Ewing sarcoma (ES) by clinical observations and in vitro data, yet direct evidence for its pro-metastatic ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

Colon-26 karsinom Tumor-bærende mus som en modell for studier av kreft kakeksi

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Svulst Engraftment i en Xenograft musemodell av menneskelig mantelen celle lymfomer

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

Utviklingen av en menneskelig prekliniske modell av Osteoclastogenesis fra perifert blod monocytter co kultivert med bryst kreftcelle linjer

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

Et humant perifert blod mononukleære Cell (PBMC) Engrafted Humanisert Xenograft modell for translational Immuno-onkologi (I-O) forskning

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

Murine modell av metastatisk leverskader svulster i innstillingen av iskemi reperfusion skade

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Få kreft stamcellesfærer fra gynekologiske og brystkreft svulster

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

En arbeidsflyt for rask screening for å identifisere potensiell kombinasjonsterapi for GBM ved bruk av pasientavledede gliomastammeceller

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...

High-Resolution Ultrasonography for the Analysis of Orthotopic ATC Tumors in a Genetically Engineered Mouse Model

Høyoppløselig ultralyd for analyse av ortotopiske ATC-svulster i en genetisk utviklet musemodell

Anaplastic thyroid carcinoma (ATC) is associated with a poor prognosis and short median survival time, but no effective treatment improves the outcomes ...