Name: testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors
Uploaded: 2022-12-16T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить как Центр исследований животных (OLAR) за заботу о наших мышах, так и общий ресурс проточной цитометрии, поддерживаемый грантом поддержки онкологического центра (P30CA046934) в нашем институте, за их огромную помощь во всей нашей работе. Мы также выражаем признательность Гейл Экхардт и Анне Капассо за наше первое сотрудничество по изучению иммунотерапии PDX человека в нашей модели HIS-BRGS. Это исследование было частично поддержано грантом поддержки онкологического центра Национального института здравоохранения P30CA06934 с использованием общего ресурса PHISM (доклинические модели иммунной системы человека), RRID: SCR_021990 и общего ресурса по проточной цитометрии, RRID: SCR_022035. Это исследование было частично поддержано NIAID Национальных институтов здравоохранения по контракту No 75N93020C00058.

Все работы с животными выполнялись в соответствии с протоколами на животных, одобренными Комитетом по уходу за животными и их использованию Университета Колорадо в Денвере (протоколы IACUC #00593 и #00021). Все работы с животными выполнялись в соответствии с Управлением ресурсов лабораторных ?...

<ol>
	<li>Chulpanova, D. S., Kitaeva, K. V., Rutland, C. S., Rizvanov, A. A., Solovyeva, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+tumor+models+for+advanced+cancer+immunotherapy.">Mouse tumor models for advanced cancer immunotherapy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4118 (2020).</li><li>Olson, B., Li, Y., Lin, Y., Liu, E. T., Patnaik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+cancer+immunotherapy+research.">Mouse models for cancer immunotherapy research.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1358-1365 (2018).</li><li>Marin-Jimenez, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+cancer+immunotherapy+in+a+human+immune+system+mouse+model:+correlating+treatment+responses+to+human+chimerism,+therapeutic+variables+and+immune+cell+phenotypes.">Testing cancer immunotherapy in a human immune system mouse model: correlating treatment responses to human chimerism, therapeutic variables and immune cell phenotypes.</a> Frontiers in Immunology. 12, 607282 (2021).</li><li>Yin, L., Wang, X. J., Chen, D. X., Liu, X. N., Wang, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+model:+a+review+on+preclinical+applications+for+cancer+immunotherapy.">Humanized mouse model: a review on preclinical applications for cancer immunotherapy.</a> American Journal of Cancer Research. 10 (12), 4568-4584 (2020).</li><li>Cogels, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+as+a+valuable+pre-clinical+model+for+cancer+immunotherapy+research.">Humanized mice as a valuable pre-clinical model for cancer immunotherapy research.</a> Frontiers in Oncology. 11, 784947 (2021).</li><li>Jin, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+humanized+mouse+with+patient-derived+xenografts+for+cancer+immunotherapy+studies:+A+comprehensive+review.">Development of humanized mouse with patient-derived xenografts for cancer immunotherapy studies: A comprehensive review.</a> Cancer Science. 112 (7), 2592-2606 (2021).</li><li>Capasso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+immune+responses+to+anti-PD-1+mono+and+combination+immunotherapy+in+hematopoietic+humanized+mice+implanted+with+tumor+xenografts.">Characterization of immune responses to anti-PD-1 mono and combination immunotherapy in hematopoietic humanized mice implanted with tumor xenografts.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 7 (1), 37 (2019).</li><li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+studying+efficacy+and+mechanisms+of+PD-1-targeted+cancer+immunotherapy.">Humanized mice in studying efficacy and mechanisms of PD-1-targeted cancer immunotherapy.</a> The FASEB Journal. 32 (3), 1537-1549 (2018).</li><li>Yong, K. S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+as+a+tool+to+predict+immunotoxicity+of+human+biologics.">Humanized mouse as a tool to predict immunotoxicity of human biologics.</a> Frontiers in Immunology. 11, 553362 (2020).</li><li>Shen, H. W., Jiang, X. L., Gonzalez, F. J., Yu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+transgenic+mouse+models+for+drug+metabolism+and+pharmacokinetic+research.">Humanized transgenic mouse models for drug metabolism and pharmacokinetic research.</a> Current Drug Metabolism. 12 (10), 997-1006 (2011).</li><li>Bosma, G. C., Custer, R. P., Bosma, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+severe+combined+immunodeficiency+mutation+in+the+mouse.">A severe combined immunodeficiency mutation in the mouse.</a> Nature. 301 (5900), 527-530 (1983).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+defects+in+innate+and+adaptive+immunologic+function+in+NOD/LtSz-scid+mice.">Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice.</a> The Journal of Immunology. 154 (1), 180-191 (1995).</li><li>Legrand, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+CD47/signal+regulatory+protein+alpha+(SIRP(alpha))+interaction+is+required+for+optimal+human+T-+and+natural+killer-+(NK)+cell+homeostasis+in+vivo.">Functional CD47/signal regulatory protein alpha (SIRP(alpha)) interaction is required for optimal human T- and natural killer- (NK) cell homeostasis in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (32), 13224-13229 (2011).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> The Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Traggiai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+human+adaptive+immune+system+in+cord+blood+cell-transplanted+mice.">Development of a human adaptive immune system in cord blood cell-transplanted mice.</a> Science. 304 (5667), 104-107 (2004).</li><li>Theocharides, A. P., Rongvaux, A., Fritsch, K., Flavell, R. A., Manz, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+hemato-lymphoid+system+mice.">Humanized hemato-lymphoid system mice.</a> Haematologica. 101 (1), 5-19 (2016).</li><li>Goldman, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+human+cell+engraftment+in+mice+deficient+in+RAG2+and+the+common+cytokine+receptor+gamma+chain.">Enhanced human cell engraftment in mice deficient in RAG2 and the common cytokine receptor gamma chain.</a> British Journal of Haematology. 103 (2), 335-342 (1998).</li><li>Stripecke, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innovations,+challenges,+and+minimal+information+for+standardization+of+humanized+mice.">Innovations, challenges, and minimal information for standardization of humanized mice.</a> EMBO Molecular Medicine. 12 (7), (2020).</li><li>Allen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+immune+system+mouse+models:+progress,+challenges+and+opportunities.">Humanized immune system mouse models: progress, challenges and opportunities.</a> Nature Immunology. 20 (7), 770-774 (2019).</li><li>Gammelgaard, O. L., Terp, M. G., Preiss, B., Ditzel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cancer+evolution+in+the+context+of+a+human+immune+system+in+mice.">Human cancer evolution in the context of a human immune system in mice.</a> Molecular Oncology. 12 (10), 1797-1810 (2018).</li><li>Rios-Doria, J., Stevens, C., Maddage, C., Lasky, K., Koblish, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+cancer+xenografts+in+humanized+mice.">Characterization of human cancer xenografts in humanized mice.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 8 (1), 000416 (2020).</li><li>Gombash Lampe, S. E., Kaspar, B. K., Foust, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+injections+in+neonatal+mice.">Intravenous injections in neonatal mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52037 (2014).</li><li>Lang, J., Weiss, N., Freed, B. M., Torres, R. M., Pelanda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+hematopoietic+humanized+mice+in+the+newborn+BALB/c-Rag2null+Il2r&#947;null+mouse+model:+a+multivariable+optimization+approach.">Generation of hematopoietic humanized mice in the newborn BALB/c-Rag2null Il2r&#947;null mouse model: a multivariable optimization approach.</a> Clinical Immunology. 140 (1), 102-116 (2011).</li><li>Laskowski, T. J., Hazen, A. L., Collazo, R. S., Haviland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rigor+and+reproducibility+of+cytometry+practices+for+immuno-oncology:+a+multifaceted+challenge.">Rigor and reproducibility of cytometry practices for immuno-oncology: a multifaceted challenge.</a> Cytometry Part A. 97 (2), 116-125 (2020).</li><li>Bagby, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+maintenance+of+a+preclinical+patient+derived+tumor+xenograft+model+for+the+investigation+of+novel+anti-cancer+therapies.">Development and maintenance of a preclinical patient derived tumor xenograft model for the investigation of novel anti-cancer therapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54393 (2016).</li><li>Laajala, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+design+and+analysis+of+preclinical+intervention+studies+in+vivo.">Optimized design and analysis of preclinical intervention studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 30723 (2016).</li><li>Na, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+patient-derived+xenografts+from+patients+with+gastrointestinal+stromal+tumors:+analysis+of+clinicopathological+characteristics+related+to+engraftment+success.">Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success.</a> Scientific Reports. 10 (1), 7996 (2020).</li><li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RX-5902,+a+novel+beta-catenin+modulator,+potentiates+the+efficacy+of+immune+checkpoint+inhibitors+in+preclinical+models+of+triple-negative+breast+cancer.">RX-5902, a novel beta-catenin modulator, potentiates the efficacy of immune checkpoint inhibitors in preclinical models of triple-negative breast cancer.</a> BMC Cancer. 20 (1), 1063 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+adrenocortical+cancer+humanized+mouse+model+to+characterize+anti-PD1+effects+on+tumor+microenvironment.">Development of an adrenocortical cancer humanized mouse model to characterize anti-PD1 effects on tumor microenvironment.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 105 (1), 26-42 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+lymphocyte+reconstitution+in+a+humanized+mouse+model+reveal+a+requirement+of+T+cells+for+human+B+cell+maturation.">Studies of lymphocyte reconstitution in a humanized mouse model reveal a requirement of T cells for human B cell maturation.</a> The Journal of Immunology. 190 (5), 2090-2101 (2013).</li><li>Katano, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-Rag2null+IL-2R&#947;null+mice:+an+alternative+to+NOG+mice+for+generation+of+humanized+mice.">NOD-Rag2null IL-2R&#947;null mice: an alternative to NOG mice for generation of humanized mice.</a> Experimental Animalas. 63 (3), 321-330 (2014).</li><li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parameters+for+establishing+humanized+mouse+models+to+study+human+immunity:+analysis+of+human+hematopoietic+stem+cell+engraftment+in+three+immunodeficient+strains+of+mice+bearing+the+IL2r&#947;(null)+mutation.">Parameters for establishing humanized mouse models to study human immunity: analysis of human hematopoietic stem cell engraftment in three immunodeficient strains of mice bearing the IL2r&#947;(null) mutation.</a> Clinical Immunology. 135 (1), 84-98 (2010).</li><li>Hasgur, S., Aryee, K. E., Shultz, L. D., Greiner, D. L., Brehm, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+immunodeficient+mice+bearing+human+immune+systems+by+the+engraftment+of+hematopoietic+stem+cells.">Generation of immunodeficient mice bearing human immune systems by the engraftment of hematopoietic stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1438, 67-78 (2016).</li><li>Andre, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+human+CD34++stem+cell-engrafted+nonobese+diabetic/SCID/IL-2R&#947;null+mice+show+impaired+CD8++T+cell+maintenance+and+a+functional+arrest+of+immature+NK+cells.">Long-term human CD34+ stem cell-engrafted nonobese diabetic/SCID/IL-2R&#947;null mice show impaired CD8+ T cell maintenance and a functional arrest of immature NK cells.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2710-2720 (2010).</li><li>Wunderlich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+multilineage+human+hematopoietic+reconstitution+and+function+in+NSGS+mice.">Improved multilineage human hematopoietic reconstitution and function in NSGS mice.</a> PLoS One. 13 (12), 0209034 (2018).</li><li>Lee, J., Brehm, M. A., Greiner, D., Shultz, L. D., Kornfeld, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engrafted+human+cells+generate+adaptive+immune+responses+to+Mycobacterium+bovis+BCG+infection+in+humanized+mice.">Engrafted human cells generate adaptive immune responses to Mycobacterium bovis BCG infection in humanized mice.</a> BMC Immunology. 14, 53 (2013).</li><li>Masse-Ranson, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+thymopoiesis+and+improved+T-cell+responses+in+HLA-A2/-DR2+transgenic+BRGS-based+human+immune+system+mice.">Accelerated thymopoiesis and improved T-cell responses in HLA-A2/-DR2 transgenic BRGS-based human immune system mice.</a> European Journal of Immunology. 49 (6), 954-965 (2019).</li><li>Oswald, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+infiltration+pattern+in+non-small+cell+lung+cancer+PDX+models+is+a+model+immanent+feature+and+correlates+with+a+distinct+molecular+and+phenotypic+make-up.">Immune cell infiltration pattern in non-small cell lung cancer PDX models is a model immanent feature and correlates with a distinct molecular and phenotypic make-up.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 10 (4), 004412 (2022).</li></ol>

За последние 6 лет, используя наш опыт как в области иммунологии, так и в области гуманизированных мышей, наша исследовательская группа разработала столь необходимую доклиническую модель для тестирования иммунотерапии на различных опухолях человека 3,7,30,31.<...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated from:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)
to:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Kristina Larsen1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Модели рака мышей важны для установления основных механизмов роста опухоли и иммунного ускользания. Однако исследования по лечению рака на мышиных моделях дали конечную трансляцию в клинику из-за ограниченных сингенных моделей и видоспецифических различий 1,2. Появление иммунной терапии в качестве доминирующего подхода к борьбе с опухолями подтвердило необходимость модели in vivo с функциональной иммунной системой человека. Достижения в области мышей иммунной системы человека (мышей HIS) за последнее десятилетие позволили изучать иммуноонкологию in vivo при самых разных типах рака и иммунотерапевтических агентах 3,4,5,6. Модели опухолей человека, включая ксенотрансплантаты, полученные из клеточной линии, и ксенотрансплантаты, полученные от пациента (CDX и PDX соответственно), хорошо растут у мышей с HIS и в большинстве случаев почти идентичны их росту у иммунодефицитного хозяина, лишенного гемопоэтического приживления человека 7,8. Основываясь на этом ключевом выводе, исследователи использовали мышиную модель HIS для изучения иммунотерапии человека, включая комбинированную терапию, предназначенную для изменения микроокружения опухоли (TME) для снижения иммуносупрессии и, таким образом, усиления иммунно-направленного уничтожения опухоли. Эти доклинические модели помогают решить проблемы гетерогенности рака человека, а также могут прогнозировать успех лечения, а также контролировать токсичность лекарств, связанных с иммунитетом 9,10.
Для получения мышиной модели с иммунной системой человека путем введения гемопоэтических стволовых клеток человека требуется мышь-реципиент с иммунодефицитом, которая не будет отторгать ксенотрансплантат. Современные модели мышей HIS получены из иммунодефицитных штаммов мышей, о которых сообщалось более 30 лет назад. Первым описанным иммунодефицитным штаммом мышей были мыши с ТКИД, у которых отсутствовали Т- и В-клетки11, за которыми следовал гибрид NOD-SCID с полиморфизмом SIRPα, ответственным за толерантность макрофагов мыши к клеткам человека, из-за повышенного связывания аллеля NOD SIRPα с молекулой CD47человека 12,13. В начале 2000-х годов делеция общей гамма-цепи рецептора IL-2 (IL-2Rγc) на штаммах с иммунодефицитом BALB/c и NOD изменила правила игры для усиленного приживления человека из-за генетических делеций, запрещающих развитие NK-клеток хозяина14,15,16,17. Альтернативные модели, такие как мыши BRG и NRG, достигают дефицита Т- и В-клеток путем делеции гена Rag1 или Rag2, необходимого для перестройки генов рецепторов Т- и В-клеток и, следовательно, созревания и выживания лимфоцитов18,19. Мышь BRGS (BALB/c -Rag2 nullIl2R γCnullSirpαNOD), используемая в настоящем описании, сочетает в себе дефицит цепи IL-2Rγ и аллель NOD SIRPα на фоне Rag2-/-, в результате чего мышь с высоким иммунодефицитом отсутствует без Т, В или NK-клеток, но с достаточной энергией и здоровьем, чтобы обеспечить долгосрочное приживление более 30 недель13.
Мыши HIS могут быть получены несколькими способами, при этом инъекция PBMC человека является наиболее прямым методом15,18,20. Тем не менее, у этих мышей наблюдается выраженная экспансия активированных Т-клеток человека, что приводит к реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ) к 12-недельному возрасту, что препятствует долгосрочным исследованиям. В качестве альтернативы, гемопоэтические стволовые клетки человека из пуповинной крови (КБ), костного мозга и печени плода также могут быть использованы для приживления и производства иммунной системы человека de novo. В этой системе гемопоэтические стволовые клетки продуцируют многолинейную иммунную систему человека с генерацией Т, В и врожденных иммунных клеток, которые, что важно, толерантны к мыши-хозяину, по сравнению с мышами PBMC, которые развивают в основном Т-клетки. Поэтому РТПХ отсутствует или сильно задерживается, и исследования могут быть распространены на мышей до 10-месячного возраста. CB обеспечивает простой, доступный и неинвазивный источник CD34+ гемопоэтических стволовых клеток человека, который облегчает приживление нескольких мышей HIS с генетически идентичной иммунной системой 17,18,20,21. За последние несколько лет модели мышей HIS широко использовались для изучения иммунотерапии и TME 3,4,5,6. Несмотря на развитие иммунной системы человека у этих мышей, опухоли ксенотрансплантата человека растут с той же скоростью по сравнению с контрольными иммунодефицитными мышами и допускают сложное взаимодействие между раковыми клетками и иммунными клетками, что важно для поддержания микроокружения привитого PDX 3,7,8 . Этот протокол был использован для проведения более 50 исследований, в которых тестировались методы лечения мышей HIS-BRGS с PDX и CDX. Важным выводом является то, что опухоли человека у мышей HIS сохраняют свой уникальный TME, определяемый молекулярной оценкой опухоли по отношению к исходному образцу пациента и характеристиками иммунного инфильтрата 3,22,23. Наша группа фокусируется на углубленной оценке ГИС как в иммунных органах, так и в опухоли с использованием многопараметрической проточной цитометрии. Здесь мы описываем протокол гуманизации мышей BRGS, оценку химеризма, имплантацию опухолей человека, измерения роста опухоли, назначение лечения рака и анализ клеток HIS с помощью проточной цитометрии.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe w/needles</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>1031815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Pro Separator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Golgi Stop Protein Transport Inhibitor with monensin</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Stim Cocktail</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>509305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chill 15 Rack</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-952</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-plugged glass pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-8B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Basement membrane extract</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>363200502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytek Aurora</td>
			<td>Cytek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9003-98-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eBioscience FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Set</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>00-5523-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryonic Stemcell FCS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10439001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tubes; 1.5 mL volume</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>616201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Benchmark</td>
			<td>100-106 500mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll Hypaque</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>45001752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo Software</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - fine</td>
			<td>Roboz Surgical&#160;</td>
			<td>RS5045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps normal</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>RS4919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>F75P1GAL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted Glass Slides</td>
			<td>Corning</td>
			<td>1255310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentlemacs C-Tubes</td>
			<td>Miltenyi&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACS Dissociator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass pipettes</td>
			<td>DWK Life Sciences</td>
			<td>63A53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS w/ Ca &#38; Mg</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>55037C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT25060CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I2511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>401108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMDM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12440053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase DL</td>
			<td>Roche</td>
			<td>5466202001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Blue</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>L23105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>JDC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-unabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>H2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>UHB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-unlabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>SA-DA4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiRad 350</td>
			<td>Precision X-Ray</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-nitrophenyl substrate</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>34045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRISM</td>
			<td>Graphpad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu FLT3L</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>308-FK-005/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu IL6</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>206-IL-010/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu SCF</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>255SC010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-39</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>8047-15-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>862945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipettes 25 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1367811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>567-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile molecular water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7732-18-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeti Cell Analyzer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>12004279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zombie Green</td>
			<td>biolegend</td>
			<td>423112</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors

Изменение иммуносупрессивной природы микроокружения опухоли имеет решающее значение для успешного лечения рака иммунотерапевтическими препаратами. Модели рака мышей крайне ограничены в своем разнообразии и страдают от плохого перевода в клинику. Чтобы служить более физиологической доклинической моделью для исследований иммунотерапии, этот протокол был разработан для оценки лечения опухолей человека у мышей, восстановленных с иммунной системой человека. Этот уникальный протокол демонстрирует развитие иммунной системы человека (HIS, «гуманизированный») мышей с последующей имплантацией опухоли человека, либо ксенотрансплантата, полученного из клеточной линии (CDX), либо ксенотрансплантата, полученного из пациента (PDX). Мыши HIS генерируются путем инъекции CD34+ гемопоэтических стволовых клеток человека, выделенных из пуповинной крови, в новорожденных мышей с высоким иммунодефицитом BRGS (BALB/c Rag2-/- IL2RγC-/- NODSIRPα), которые также способны принимать ксеногенную опухоль. Подчеркивается важность кинетики и особенностей развития иммунной системы человека и имплантации опухоли. Наконец, описана углубленная оценка микроокружения опухоли с помощью проточной цитометрии. В многочисленных исследованиях с использованием этого протокола было обнаружено, что опухолевое микроокружение отдельных опухолей повторяется у мышей HIS-PDX; «Горячие» опухоли проявляют большую иммунную инфильтрацию, в то время как «холодные» опухоли этого не делают. Эта модель служит испытательным полигоном для комбинированной иммунотерапии широкого спектра опухолей человека и представляет собой важный инструмент в поисках персонализированной медицины.

В соответствии с протоколом опухоли на боку и экспериментальной временной шкалой (рис. 1) рост опухоли и иммунный ответ на терапию таргетным ингибитором тирозинкиназы (ИТК) и комбинированное лечение ниволумабом были изучены в двух различных PDX колоректального рака чело?...

Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

В этом протоколе описывается генерация мышей иммунной системы человека (HIS) для иммуноонкологических исследований. Инструкции и соображения по использованию этой модели для тестирования иммунотерапевтических средств человека на опухолях человека, имплантированных в эту модель, представлены с акцентом на характеристику реакции иммунной системы человека на опухоль.

Тестирование иммунотерапии рака на гуманизированной мышиной модели с опухолями человека

Reversing the immunosuppressive nature of the tumor microenvironment is critical for the successful treatment of cancers with immunotherapy drugs. Murine ...

В этом протоколе описывается генерация иммунной системы человека или мышей HIS для доклинических иммуноонкологических исследований. Модели рака мышей ограничены в своем разнообразии и плохо переносятся в клинику. Этот метод служит доклинической моделью для исследований иммунотерапии путем оценки лечения опухолей человека у мышей с иммунной системой человека.Гуманизированная модель мыши может быть использована для изучения нескольких аспектов иммунологии человека, включая реакцию на многие инфекции или рак иммунной системы человека. Приобретение надежного и надежного источника пуповинной крови и поддержание здоровья колонии мышей с иммунодефицитом может быть сложной задачей. Опыт в области проточной цитометрии и иммунологического анализа имеет важное значение.Продемонстрирует процедуру Кристина Ларсен, специалист по исследованиям из моей лаборатории. Для начала ресуспендируют CD34-положительную клеточную гранулу, выделенную из пуповинной крови, в 300 микролитрах буфера магнитного сепаратора клеток на 10 до восьмой клетки. Добавьте 100 микролитров реагента, блокирующего FCR, на один раз 10 в восьмую ячейку, затем 100 микролитров CD34-положительных магнитных шариков на 10 восьмых клеток и инкубируйте при четырех градусах Цельсия в течение 30 минут.Затем добавьте пять миллилитров буфера сепаратора магнитных ячеек по 10 раз в восьмую ячейку и вращайте при 360 г в течение 10 минут при четырех градусах Цельсия. Повторите этап промывки и ресуспендируйте гранулы в 500 микролитрах на 100 миллионов ячеек буфера сепаратора магнитных ячеек в конической трубке объемом 15 миллилитров, меченной нефракционированной. Пометьте еще две 15-миллилитровые пробирки: CD34-отрицательный и CD34-положительный Поместите три пробирки на охлаждающую решетку.Разделите ячейки с помощью двухколонной программы положительного отбора на автоматическом магнитном сепараторе ячеек в шкафу биобезопасности. Затем для расширения и замораживания CD34-положительных стволовых клеток человека готовят пуповинную кровь или CB-среду, как описано в рукописи, и пропускают через фильтр 0,22 микрона. Ресуспендируют CD34-положительные клетки при 100 000 на миллилитр среды CB и инкубируют при 37 градусах Цельсия.На третий день добавьте в колбу равный объем среды CB без цитокинов. На пятый день соберите расширенные CD34-положительные клетки. Пипеткой суспензируйте ячейку вверх и вниз и соберите в 50-миллилитровую коническую трубку.Добавьте достаточное количество CB medium, чтобы покрыть дно колбы. С помощью клеточного скребка соскребите все дно колбы. Соберите все носители в одну и ту же 50-миллилитровую пробирку и центрифугу.Ресуспендируют клетки в двух миллилитрах среды CB и центрифуге. Аспирируйте среду вниз к грануле и ресуспендируйте гранулы в морозильной среде. Затем начните подготовку CD34-положительных клеток через три часа после облучения щенков.Разогрейте 10 миллилитров CB в 50-миллилитровой пробирке. Извлеките один флакон in vitro расширенных и замороженных CD34-положительных клеток на каждые четыре-шесть щенков для инъекции. Быстро разморозьте при температуре от 50 до 55 градусов по Цельсию, пока не станет видно небольшое количество льда, и добавьте ячейки в нагретую среду CB.Используйте один миллилитр среды для ополаскивания каждого флакона и вращайте клетки при 360 г в течение 12 минут при четырех градусах Цельсия. Тщательно аспирируйте среду. Ресуспендируйте гранулу в двух миллилитрах CB-среды и посчитайте ячейки.Опять же, центрифугируют клетки, аспирируют среду и ресуспендируют гранулу в 100 микролитрах стерильного PBS на n плюс один щенок для инъекции, в результате чего получается от 250 000 до 450 000 CD34-положительных клеток на мышь. Для выделения PBMC из крови мыши смешайте гепарин крови, осторожно пипеткой вверх и вниз, и медленно наложите сверху 500 микролитров градиента плотности 1,077 грамма на миллилитр, стараясь не нарушить границу раздела. Центрифугируют пробирку по 1,220 г в течение 20 минут при комнатной температуре без перерывов.Удалите как можно больше клеток из охристой оболочки с помощью пипетки объемом 200 микролитров и добавьте в новую 1,5-миллилитровую пробирку, содержащую 750 микролитров питательной среды. Центрифуга при 360 г в течение 11 минут. Аспирируйте среду до 50 микролитров и ресуспендируйте гранулу в 750 микролитров уборочной среды.Получите данные для 100 микролитров каждого образца на проточном цитометре. Затем импортируйте файл fcs в программное обеспечение для редактирования данных потока и примените полигональный вентиль к графику FSC-A и SSC-A. Измените оси на FSC-A и FSC-H и расположите ячейки по линейной диагонали, исключив дублеты, выступающие из линии.Выделите эти ячейки и измените оси на hCD45 против mCD45. Примените полигональные ворота к hCD45-положительной популяции и примените имя человека. Примените полигональные ворота к mCD45-положительной популяции и примените имя мыши.Создайте статистику подсчета для популяций людей и мышей. Затем выберите человеческую популяцию и измените оси на CD19 против CD3. Примените полигональные ворота к CD19-положительным ячейкам и назовите их B-клетками.Примените полигональные ворота к CD3-положительной популяции и назовите ее Т-клетками. Затем примените полигональные ворота к двойной отрицательной популяции и назовите ее не-ТБ. Выберите популяцию Т-клеток и измените оси на CD4 по сравнению с CD3.Примените полигональные ворота к CD4-положительной популяции и назовите ее CD4-положительной. Примените полигональный вентиль к CD4-отрицательной популяции и назовите его CD8. Выберите популяцию, не страдающую туберкулезом, и измените оси на CD56 по сравнению с миелоидом.Примените полигональные ворота к общей CD56-положительной популяции и назовите ее NK-клетками. Затем примените полигональные ворота к CD56-отрицательной и миелоид-положительной популяции и назовите ее миелоидной. Создайте таблицу для процентной статистики и статистики подсчета всех популяций и экспортируйте ее в электронную таблицу.Рассчитайте процент химеризма hCD45 по указанной формуле. После выращивания опухолевых клеток у мыши и введения медикаментозного лечения собирают ткани. Поместите мышь на доску для рассечения пенопласта с булавками, чтобы удерживать их на месте, а руки и ноги вытянуть под углом 45 градусов.Сделайте разрез по середине туловища, начиная с таза и доходя до подбородка. Подтяните кожу к краю, и удерживайте ее на месте булавками. Извлеките лимфатические узлы с помощью тонких щипцов в порядке подмышечных, шейных, брыжеечных, паховых и паховидных.Поместите лимфатические узлы с одной стороны предметного стекла в чашку Петри в восемь миллилитров среды для сбора урожая. Держа предметные стекла под перпендикулярными углами матовыми краями внутрь, аккуратно прижимайте ткани до тех пор, пока клеточное содержимое не освободится. Промойте предметное стекло несколько раз, раздвинув их и вместе, чтобы освободить максимальное количество ячеек.Соберите клетки с помощью пятидюймовой стеклянной пипетки и отфильтруйте их через девятидюймовую ватную пипетку в маркированную 15-миллилитровую коническую трубку. Затем извлеките опухоль из открытого бока, удерживая опухоль щипцами, медленно разрезая края опухоли ножницами для рассечения. Взвесьте опухоль и удалите 1/4 опухоли для обработки РНК и иммуногистохимии.Поместите оставшиеся 3/4 опухоли в шестисантиметровую посуду и измельчите ее на кусочки размером в один миллиметр с помощью лезвия скальпеля. Перенесите кусочки опухоли в диссоциативную трубку. Затем промойте посуду неполной средой TIL и добавьте ее в тюбик.Добавьте препарат коллагеназы и диссоциируйте ткань с помощью механической диссоциации при 37 градусах Цельсия в течение от 30 минут до одного часа. Пропустите суспензию над фильтром толщиной 100 микрон в коническую трубку объемом 50 миллилитров и промойте фильтр 10 миллилитрами фильтрующего материала TIL. Центрифугируйте и ресуспендируйте гранулы в достаточно питательной среде с ДНКазой, чтобы суспензия клеток могла легко пройти через наконечник пипетки P1000 и записать объем для последующего анализа.В PDX CRC 307P комбинированное лечение замедляло рост опухоли, что определялось объемами роста опухоли с течением времени, весом опухоли и удельной скоростью роста. PDX CRC 307M, протестированный в другой когорте мышей, был менее затронут тем же комбинированным лечением у мышей HIS BRGS. Основываясь на общем hCD45-положительном и человеческом Т-клеточном hCD3-положительном химеризме в крови до имплантации опухоли, оба параметра увеличивались в периферической иммунной системе и TIL в сочетании с обработанными мышами, несущими CRC 307P, но не с моделью CRC 307M.Исследование Т-клеток человека выявило больше активированных Т-клеток в опухолях CRC 307P, но не лимфы у мышей, получавших комбинированную обработку. Кроме того, было больше эффекторных CD8-положительных Т-клеток памяти и меньше TIM-3-положительных Т-клеток в комбинированных опухолях CRC 307P. Напротив, эта разница не была отмечена в модели CRC 307M.Кроме того, никаких изменений в частотах цитотоксических популяций Т-клеток не наблюдалось среди мышей, получавших комбинированную терапию, хотя более высокие цитотоксические Т-клетки наблюдались у необработанных. Комбинированное лечение не влияло на частоту Tregs ни в лимфатических органах CRC 307P, ни в опухолях, хотя данные CRC 307M показали тенденцию к снижению Tregs. Иммунные изменения в опухолевых клетках были повышены с помощью проточной цитометрии.Повышенная экспрессия MHC класса I и класса II наблюдалась на опухолевых клетках CRC 307P, вырезанных у мышей HIS BRGS, обработанных комбинированным лечением. В модели CRC 307M то же лекарственное лечение индуцировало экспрессию HLA класса II на опухолевых клетках. Аналогичным образом, комбинированное лечение привело к увеличению экспрессии PD-L1 на EpCAM-положительных опухолевых клетках CRC 307P.Наконец, были исследованы корреляции иммунных реакций с опухолевым ростом. Увеличение CD4-положительных Т-клеток показало значительную корреляцию с меньшим ростом опухоли и, в частности, с HLA-DR-положительными активированными Т-клетками в комбинации, обработанной мышами HIS. Стерильный метод при выделении CD34-положительных клеток, так как мыши крайне иммунодефицитны.Результирующий химеризм варьирует внутри и между донорами пуповинной крови, и Т-клетки имеют наибольшие вариации. Могут быть выполнены неограниченные комбинации иммунотерапии, а также механистические и кинетические исследования дозирования лекарств, например, делеция CD8 Т-клеток для подтверждения их роли. Важно отметить, что токсичность, связанная с наркотиками, также может быть изучена.Он предоставил более актуальную и доступную доклиническую модель для тестирования иммунотерапии человека для трансляции в клинику. На основе этих данных в настоящее время проводится несколько клинических испытаний.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Флуоресцентные Ортотопическая Мышь Модель панкреатического рака

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

В Vivo модели для тестирования влияния гипоксии на метастазирование опухолей

Hypoxia has been implicated in the metastasis of Ewing sarcoma (ES) by clinical observations and in vitro data, yet direct evidence for its pro-metastatic ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

Colon-26 РАК-ОПУХОЛЕНОСИТЕЛЕЙ мышь в качестве модели для изучения рака кахексия

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Опухоль приживления в гранулы ксенотрансплантата мыши модель человека Мантия клеточная лимфома

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

Развитие человека доклинических модели Osteoclastogenesis от периферической крови моноциты совместно культивируемых с линии клеток рака молочной железы

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

Моноядерная клетка периферической крови человека (PBMC) привитала гуманизированная модель ксенотрансплантата для трансляционной иммуноонкологии (I-O)

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

Murine Модель метастатических опухолей печени в настройке Ишемия Реперфузия Травмы

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Получение Рак стволовых клеток Сферы от гинекологических и опухолей рака молочной железы

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

Быстрый процесс скрининга для определения потенциальной комбинированной терапии GBM с использованием стволовых клеток глиомы, полученных от пациента

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...

High-Resolution Ultrasonography for the Analysis of Orthotopic ATC Tumors in a Genetically Engineered Mouse Model

Ультразвуковое исследование высокого разрешения для анализа ортотопических опухолей АТХ на генно-инженерной мышиной модели

Anaplastic thyroid carcinoma (ATC) is associated with a poor prognosis and short median survival time, but no effective treatment improves the outcomes ...