Name: testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors
Uploaded: 2022-12-16T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

Vi vill tacka både Animal Research Facility (OLAR) för deras vård av våra möss och Flow Cytometry Shared Resource som stöds av Cancer Center Support Grant (P30CA046934) vid vårt institut för deras enorma hjälp i allt vårt arbete. Vi tackar också både Gail Eckhardt och Anna Capasso för våra inledande samarbeten som studerar immunterapier mot humana PDX i vår HIS-BRGS-modell. Denna studie stöddes delvis av National Institutes of Health P30CA06934 Cancer Center Support Grant med användning av PHISM (Pre-clinical Human Immune System Mouse Models) Shared Resource, RRID: SCR_021990 and Flow Cytometry Shared Resource, RRID: SCR_022035. Denna forskning stöddes delvis av NIAID från National Institutes of Health under kontraktsnummer 75N93020C00058.

Allt djurarbete utfördes enligt djurprotokoll godkända av University of Colorado Denver Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC Protocols #00593 och #00021). Allt djurarbete utfördes i enlighet med Office of Laboratory Animal Resources (OLAR), en ackrediterad anläggning av American Association for Laboratory Animal Care, vid University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus. Alla humana navelsträngsblodprover erhölls som donationer från avidentifierade givare och är därför inte föremål för god...

<ol>
	<li>Chulpanova, D. S., Kitaeva, K. V., Rutland, C. S., Rizvanov, A. A., Solovyeva, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+tumor+models+for+advanced+cancer+immunotherapy.">Mouse tumor models for advanced cancer immunotherapy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4118 (2020).</li><li>Olson, B., Li, Y., Lin, Y., Liu, E. T., Patnaik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+cancer+immunotherapy+research.">Mouse models for cancer immunotherapy research.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1358-1365 (2018).</li><li>Marin-Jimenez, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+cancer+immunotherapy+in+a+human+immune+system+mouse+model:+correlating+treatment+responses+to+human+chimerism,+therapeutic+variables+and+immune+cell+phenotypes.">Testing cancer immunotherapy in a human immune system mouse model: correlating treatment responses to human chimerism, therapeutic variables and immune cell phenotypes.</a> Frontiers in Immunology. 12, 607282 (2021).</li><li>Yin, L., Wang, X. J., Chen, D. X., Liu, X. N., Wang, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+model:+a+review+on+preclinical+applications+for+cancer+immunotherapy.">Humanized mouse model: a review on preclinical applications for cancer immunotherapy.</a> American Journal of Cancer Research. 10 (12), 4568-4584 (2020).</li><li>Cogels, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+as+a+valuable+pre-clinical+model+for+cancer+immunotherapy+research.">Humanized mice as a valuable pre-clinical model for cancer immunotherapy research.</a> Frontiers in Oncology. 11, 784947 (2021).</li><li>Jin, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+humanized+mouse+with+patient-derived+xenografts+for+cancer+immunotherapy+studies:+A+comprehensive+review.">Development of humanized mouse with patient-derived xenografts for cancer immunotherapy studies: A comprehensive review.</a> Cancer Science. 112 (7), 2592-2606 (2021).</li><li>Capasso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+immune+responses+to+anti-PD-1+mono+and+combination+immunotherapy+in+hematopoietic+humanized+mice+implanted+with+tumor+xenografts.">Characterization of immune responses to anti-PD-1 mono and combination immunotherapy in hematopoietic humanized mice implanted with tumor xenografts.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 7 (1), 37 (2019).</li><li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+studying+efficacy+and+mechanisms+of+PD-1-targeted+cancer+immunotherapy.">Humanized mice in studying efficacy and mechanisms of PD-1-targeted cancer immunotherapy.</a> The FASEB Journal. 32 (3), 1537-1549 (2018).</li><li>Yong, K. S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+as+a+tool+to+predict+immunotoxicity+of+human+biologics.">Humanized mouse as a tool to predict immunotoxicity of human biologics.</a> Frontiers in Immunology. 11, 553362 (2020).</li><li>Shen, H. W., Jiang, X. L., Gonzalez, F. J., Yu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+transgenic+mouse+models+for+drug+metabolism+and+pharmacokinetic+research.">Humanized transgenic mouse models for drug metabolism and pharmacokinetic research.</a> Current Drug Metabolism. 12 (10), 997-1006 (2011).</li><li>Bosma, G. C., Custer, R. P., Bosma, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+severe+combined+immunodeficiency+mutation+in+the+mouse.">A severe combined immunodeficiency mutation in the mouse.</a> Nature. 301 (5900), 527-530 (1983).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+defects+in+innate+and+adaptive+immunologic+function+in+NOD/LtSz-scid+mice.">Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice.</a> The Journal of Immunology. 154 (1), 180-191 (1995).</li><li>Legrand, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+CD47/signal+regulatory+protein+alpha+(SIRP(alpha))+interaction+is+required+for+optimal+human+T-+and+natural+killer-+(NK)+cell+homeostasis+in+vivo.">Functional CD47/signal regulatory protein alpha (SIRP(alpha)) interaction is required for optimal human T- and natural killer- (NK) cell homeostasis in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (32), 13224-13229 (2011).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> The Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Traggiai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+human+adaptive+immune+system+in+cord+blood+cell-transplanted+mice.">Development of a human adaptive immune system in cord blood cell-transplanted mice.</a> Science. 304 (5667), 104-107 (2004).</li><li>Theocharides, A. P., Rongvaux, A., Fritsch, K., Flavell, R. A., Manz, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+hemato-lymphoid+system+mice.">Humanized hemato-lymphoid system mice.</a> Haematologica. 101 (1), 5-19 (2016).</li><li>Goldman, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+human+cell+engraftment+in+mice+deficient+in+RAG2+and+the+common+cytokine+receptor+gamma+chain.">Enhanced human cell engraftment in mice deficient in RAG2 and the common cytokine receptor gamma chain.</a> British Journal of Haematology. 103 (2), 335-342 (1998).</li><li>Stripecke, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innovations,+challenges,+and+minimal+information+for+standardization+of+humanized+mice.">Innovations, challenges, and minimal information for standardization of humanized mice.</a> EMBO Molecular Medicine. 12 (7), (2020).</li><li>Allen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+immune+system+mouse+models:+progress,+challenges+and+opportunities.">Humanized immune system mouse models: progress, challenges and opportunities.</a> Nature Immunology. 20 (7), 770-774 (2019).</li><li>Gammelgaard, O. L., Terp, M. G., Preiss, B., Ditzel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cancer+evolution+in+the+context+of+a+human+immune+system+in+mice.">Human cancer evolution in the context of a human immune system in mice.</a> Molecular Oncology. 12 (10), 1797-1810 (2018).</li><li>Rios-Doria, J., Stevens, C., Maddage, C., Lasky, K., Koblish, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+cancer+xenografts+in+humanized+mice.">Characterization of human cancer xenografts in humanized mice.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 8 (1), 000416 (2020).</li><li>Gombash Lampe, S. E., Kaspar, B. K., Foust, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+injections+in+neonatal+mice.">Intravenous injections in neonatal mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52037 (2014).</li><li>Lang, J., Weiss, N., Freed, B. M., Torres, R. M., Pelanda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+hematopoietic+humanized+mice+in+the+newborn+BALB/c-Rag2null+Il2r&#947;null+mouse+model:+a+multivariable+optimization+approach.">Generation of hematopoietic humanized mice in the newborn BALB/c-Rag2null Il2r&#947;null mouse model: a multivariable optimization approach.</a> Clinical Immunology. 140 (1), 102-116 (2011).</li><li>Laskowski, T. J., Hazen, A. L., Collazo, R. S., Haviland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rigor+and+reproducibility+of+cytometry+practices+for+immuno-oncology:+a+multifaceted+challenge.">Rigor and reproducibility of cytometry practices for immuno-oncology: a multifaceted challenge.</a> Cytometry Part A. 97 (2), 116-125 (2020).</li><li>Bagby, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+maintenance+of+a+preclinical+patient+derived+tumor+xenograft+model+for+the+investigation+of+novel+anti-cancer+therapies.">Development and maintenance of a preclinical patient derived tumor xenograft model for the investigation of novel anti-cancer therapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54393 (2016).</li><li>Laajala, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+design+and+analysis+of+preclinical+intervention+studies+in+vivo.">Optimized design and analysis of preclinical intervention studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 30723 (2016).</li><li>Na, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+patient-derived+xenografts+from+patients+with+gastrointestinal+stromal+tumors:+analysis+of+clinicopathological+characteristics+related+to+engraftment+success.">Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success.</a> Scientific Reports. 10 (1), 7996 (2020).</li><li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RX-5902,+a+novel+beta-catenin+modulator,+potentiates+the+efficacy+of+immune+checkpoint+inhibitors+in+preclinical+models+of+triple-negative+breast+cancer.">RX-5902, a novel beta-catenin modulator, potentiates the efficacy of immune checkpoint inhibitors in preclinical models of triple-negative breast cancer.</a> BMC Cancer. 20 (1), 1063 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+adrenocortical+cancer+humanized+mouse+model+to+characterize+anti-PD1+effects+on+tumor+microenvironment.">Development of an adrenocortical cancer humanized mouse model to characterize anti-PD1 effects on tumor microenvironment.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 105 (1), 26-42 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+lymphocyte+reconstitution+in+a+humanized+mouse+model+reveal+a+requirement+of+T+cells+for+human+B+cell+maturation.">Studies of lymphocyte reconstitution in a humanized mouse model reveal a requirement of T cells for human B cell maturation.</a> The Journal of Immunology. 190 (5), 2090-2101 (2013).</li><li>Katano, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-Rag2null+IL-2R&#947;null+mice:+an+alternative+to+NOG+mice+for+generation+of+humanized+mice.">NOD-Rag2null IL-2R&#947;null mice: an alternative to NOG mice for generation of humanized mice.</a> Experimental Animalas. 63 (3), 321-330 (2014).</li><li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parameters+for+establishing+humanized+mouse+models+to+study+human+immunity:+analysis+of+human+hematopoietic+stem+cell+engraftment+in+three+immunodeficient+strains+of+mice+bearing+the+IL2r&#947;(null)+mutation.">Parameters for establishing humanized mouse models to study human immunity: analysis of human hematopoietic stem cell engraftment in three immunodeficient strains of mice bearing the IL2r&#947;(null) mutation.</a> Clinical Immunology. 135 (1), 84-98 (2010).</li><li>Hasgur, S., Aryee, K. E., Shultz, L. D., Greiner, D. L., Brehm, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+immunodeficient+mice+bearing+human+immune+systems+by+the+engraftment+of+hematopoietic+stem+cells.">Generation of immunodeficient mice bearing human immune systems by the engraftment of hematopoietic stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1438, 67-78 (2016).</li><li>Andre, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+human+CD34++stem+cell-engrafted+nonobese+diabetic/SCID/IL-2R&#947;null+mice+show+impaired+CD8++T+cell+maintenance+and+a+functional+arrest+of+immature+NK+cells.">Long-term human CD34+ stem cell-engrafted nonobese diabetic/SCID/IL-2R&#947;null mice show impaired CD8+ T cell maintenance and a functional arrest of immature NK cells.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2710-2720 (2010).</li><li>Wunderlich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+multilineage+human+hematopoietic+reconstitution+and+function+in+NSGS+mice.">Improved multilineage human hematopoietic reconstitution and function in NSGS mice.</a> PLoS One. 13 (12), 0209034 (2018).</li><li>Lee, J., Brehm, M. A., Greiner, D., Shultz, L. D., Kornfeld, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engrafted+human+cells+generate+adaptive+immune+responses+to+Mycobacterium+bovis+BCG+infection+in+humanized+mice.">Engrafted human cells generate adaptive immune responses to Mycobacterium bovis BCG infection in humanized mice.</a> BMC Immunology. 14, 53 (2013).</li><li>Masse-Ranson, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+thymopoiesis+and+improved+T-cell+responses+in+HLA-A2/-DR2+transgenic+BRGS-based+human+immune+system+mice.">Accelerated thymopoiesis and improved T-cell responses in HLA-A2/-DR2 transgenic BRGS-based human immune system mice.</a> European Journal of Immunology. 49 (6), 954-965 (2019).</li><li>Oswald, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+infiltration+pattern+in+non-small+cell+lung+cancer+PDX+models+is+a+model+immanent+feature+and+correlates+with+a+distinct+molecular+and+phenotypic+make-up.">Immune cell infiltration pattern in non-small cell lung cancer PDX models is a model immanent feature and correlates with a distinct molecular and phenotypic make-up.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 10 (4), 004412 (2022).</li></ol>

Under de senaste 6 åren, med hjälp av vår expertis inom både immunologi och humaniserade möss, har vårt forskargrupp utvecklat en välbehövlig preklinisk modell för att testa immunterapier på en mängd olika mänskliga tumörer 3,7,30,31. Detta protokoll betonar övervägande av modellens variabilitet, med särskild uppmärksamhet på de immunterapicentrerade humana T-cellpopulationern...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated from:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)
to:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Kristina Larsen1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Muscancermodeller är viktiga för att etablera grundläggande mekanismer för tumörtillväxt och immunflykt. Cancerbehandlingsstudier i musmodeller har dock gett begränsad översättning till kliniken på grund av begränsade syngena modeller och artspecifika skillnader 1,2. Framväxten av immunterapier som ett dominerande tillvägagångssätt för att kontrollera tumörer har upprepat behovet av en in vivo-modell med ett funktionellt mänskligt immunsystem. Framsteg inom humana immunsystemmöss (HIS-möss) under det senaste decenniet har gjort det möjligt att studera immunonkologi in vivo i en mängd olika cancertyper och immunterapeutiska medel 3,4,5,6. Humana tumörmodeller, inklusive cellinjehärledda och patienthärledda xenotransplantat (CDX respektive PDX), växer bra hos HIS-möss och är i de flesta fall nästan identiska med deras tillväxt i den immunbristfälliga värden som saknar human hematopoetisk engraftment 7,8. Baserat på detta viktiga fynd har forskare använt HIS-musmodellen för att studera humana immunterapier, inklusive kombinationsterapier utformade för att förändra tumörmikromiljön (TME) för att minska immunsuppression och därmed förbättra immunriktad tumördöd. Dessa prekliniska modeller hjälper till att ta itu med problemen med heterogenitet hos mänskliga cancerformer och kan också förutsäga behandlingsframgång samt övervaka immunrelaterade läkemedelstoxiciteter 9,10.
Produktionen av en musmodell med ett mänskligt immunsystem genom införande av humana hematopoetiska stamceller kräver en mottagande immunbristfällig mus som inte kommer att avvisa xenogramfen. Nuvarande HIS-musmodeller härrör från immunbristfälliga musstammar som rapporterades för över 30 år sedan. Den första immunbristfälliga musstammen som beskrevs var SCID-möss som saknade T- och B-celler11, följt av en hybrid NOD-SCID med en SIRPα-polymorfism som är ansvarig för musmakrofagtolerans mot mänskliga celler, på grund av ökad bindning för NOD SIRPα-allelen till den humana CD47-molekylen12,13. I början av 2000-talet var deletionen av den gemensamma gammakedjan av IL-2-receptorn (IL-2Rγc) på både BALB / c och NOD immunbristfälliga stammar en spelväxlare för förbättrad mänsklig engraftment, på grund av genetiska deletioner som förbjuder värd NK-cellutveckling14,15,16,17. Alternativa modeller, såsom BRG- och NRG-möss, uppnår T- och B-cellbrist genom deletion av Rag1- eller Rag2-genen, som krävs för omarrangemang av T- och B-cellreceptorgener och därmed mognad och överlevnad av lymfocyter18,19. BRGS-musen (BALB/c -Rag2 nullIl2RγCnullSirpα NOD) som används här kombinerar IL-2Rγ-kedjebristen ochNOD SIRPα-allelen på Rag2-/-bakgrunden, vilket resulterar i en mus med mycket immunbrist utan T-, B- eller NK-celler, men ändå med tillräcklig kraft och hälsa för att möjliggöra långvarig engraftment på mer än 30 veckor13.
HIS-möss kan genereras på flera sätt, med human PBMC-injektion som den mest direkta metoden15,18,20. Dessa möss har dock en uttalad expansion av aktiverade humana T-celler som resulterar i transplantat mot värdsjukdom (GVHD) vid 12 veckors ålder, vilket förhindrar långtidsstudier. Alternativt kan humana hematopoetiska stamceller från navelsträngsblod (CB), benmärg och fosterlever också användas för engraftment och produktion av det mänskliga immunsystemet de novo. I detta system producerar de hematopoetiska stamcellerna ett humant immunsystem med flera linjer med generering av T, B och medfödda immunceller som är viktiga toleranta mot musvärden jämfört med PBMC-mössen som utvecklar mestadels T-celler. Därför är GVHD frånvarande eller kraftigt försenad, och studier kan utvidgas till möss upp till 10 månaders ålder. CB tillhandahåller en enkel, tillgänglig och icke-invasiv källa till CD34 + humana hematopoetiska stamceller som underlättar engraftment av flera HIS-möss med genetiskt identiska immunsystem 17,18,20,21. Under de senaste åren har HIS-musmodeller använts i stor utsträckning för att studera immunterapi och TME 3,4,5,6. Trots utvecklingen av humant härledda immunsystem hos dessa möss växer humana xenografttumörer i liknande takt jämfört med kontrollimmunbristfälliga möss och möjliggör det komplexa samspelet mellan cancercellerna och immuncellerna, vilket är viktigt för att upprätthålla mikromiljön hos den transplanterade PDX 3,7,8 . Detta protokoll har använts för att utföra över 50 studier som testar behandlingar i HIS-BRGS-möss med PDX och CDX. En viktig slutsats är att humana tumörer i HIS-mössen bibehåller sin unika TME som definieras genom molekylär utvärdering av tumören i förhållande till det initiala patientprovet och immuninfiltratkarakteristika 3,22,23. Vår grupp fokuserar på djupgående utvärdering av HIS i både immunorgan och tumör med hjälp av multiparameterflödescytometri. Här beskriver vi ett protokoll för humanisering av BRGS-möss, utvärdering av chimärism, implantation av humana tumörer, tumörtillväxtmätningar, administrering av cancerbehandling och analys av HIS-cellerna genom flödescytometri.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe w/needles</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>1031815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Pro Separator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Golgi Stop Protein Transport Inhibitor with monensin</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Stim Cocktail</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>509305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chill 15 Rack</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-952</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-plugged glass pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-8B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Basement membrane extract</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>363200502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytek Aurora</td>
			<td>Cytek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9003-98-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eBioscience FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Set</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>00-5523-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryonic Stemcell FCS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10439001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tubes; 1.5 mL volume</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>616201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Benchmark</td>
			<td>100-106 500mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll Hypaque</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>45001752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo Software</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - fine</td>
			<td>Roboz Surgical&#160;</td>
			<td>RS5045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps normal</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>RS4919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>F75P1GAL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted Glass Slides</td>
			<td>Corning</td>
			<td>1255310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentlemacs C-Tubes</td>
			<td>Miltenyi&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACS Dissociator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass pipettes</td>
			<td>DWK Life Sciences</td>
			<td>63A53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS w/ Ca &#38; Mg</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>55037C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT25060CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I2511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>401108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMDM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12440053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase DL</td>
			<td>Roche</td>
			<td>5466202001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Blue</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>L23105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>JDC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-unabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>H2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>UHB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-unlabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>SA-DA4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiRad 350</td>
			<td>Precision X-Ray</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-nitrophenyl substrate</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>34045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRISM</td>
			<td>Graphpad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu FLT3L</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>308-FK-005/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu IL6</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>206-IL-010/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu SCF</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>255SC010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-39</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>8047-15-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>862945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipettes 25 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1367811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>567-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile molecular water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7732-18-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeti Cell Analyzer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>12004279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zombie Green</td>
			<td>biolegend</td>
			<td>423112</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors

Att vända den immunsuppressiva naturen hos tumörmikromiljön är avgörande för framgångsrik behandling av cancer med immunterapiläkemedel. Murina cancermodeller är extremt begränsade i sin mångfald och lider av dålig översättning till kliniken. För att fungera som en mer fysiologisk preklinisk modell för immunterapistudier har detta protokoll utvecklats för att utvärdera behandlingen av humana tumörer i en mus rekonstituerad med ett humant immunsystem. Detta unika protokoll visar utvecklingen av humant immunsystem (HIS, "humaniserad") möss, följt av implantation av en mänsklig tumör, antingen en cellinjehärledd xenograft (CDX) eller en patienthärledd xenograft (PDX). HIS-möss genereras genom att injicera CD34 + humana hematopoetiska stamceller isolerade från navelsträngsblod i neonatal BRGS (BALB / c Rag2-/- IL2RγC-/- NODSIRPα) mycket immunbristfälliga möss som också kan acceptera en xenogen tumör. Betydelsen av kinetiken och egenskaperna hos det mänskliga immunsystemets utveckling och tumörimplantation betonas. Slutligen beskrivs en fördjupad utvärdering av tumörmikromiljön med hjälp av flödescytometri. I många studier med användning av detta protokoll fann man att tumörmikromiljön hos enskilda tumörer rekapituleras i HIS-PDX-möss; "Heta" tumörer uppvisar stor immuninfiltration medan "kalla" tumörer inte gör det. Denna modell fungerar som en testplats för kombinationsimmunterapier för ett brett spektrum av mänskliga tumörer och representerar ett viktigt verktyg i strävan efter personlig medicin.

Efter flanktumörprotokollet och experimentell tidslinje (figur 1) studerades tumörtillväxt och immunsvar mot en riktad tyrosinkinashämmare (TKI) och kombinationsbehandling med nivolumab i två distinkta humana kolorektal cancer (CRC) PDX. TKI-läkemedlen har studerats i immunbristfälliga värdar för att utvärdera tumörtillväxt endast29. Denna modell möjliggjorde studier av förändringar i immunsvaret av TKI ensam, och ännu viktigare, i kombination med anti...

Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Detta protokoll beskriver genereringen av möss med humant immunsystem (HIS) för immunonkologistudier. Instruktioner och överväganden vid användning av denna modell för testning av humana immunotherapeutics på humana tumörer implanterade i denna modell presenteras med tonvikt på att karakterisera det mänskliga immunsystemets svar på tumören.

Testa cancerimmunotherapeutics i en humaniserad musmodell som bär mänskliga tumörer

Reversing the immunosuppressive nature of the tumor microenvironment is critical for the successful treatment of cancers with immunotherapy drugs. Murine ...

Detta protokoll beskriver genereringen av humant immunsystem, eller HIS-möss för prekliniska immunonkologistudier. Muscancermodeller är begränsade i sin mångfald och översätter dåligt till kliniken. Denna teknik fungerar som en preklinisk modell för immunterapistudier genom att utvärdera behandlingen av humana tumörer i en mus med ett mänskligt immunsystem.Den humaniserade musmodellen kan användas för att studera flera aspekter av mänsklig immunologi, inklusive svar på många infektioner eller cancer i det mänskliga immunsystemet. Att skaffa en pålitlig och robust källa till navelsträngsblod och upprätthålla hälsan hos den immunbristfälliga muskolonin kan vara utmanande. Expertis inom flödescytometri och immunologisk analys är avgörande.Demonstrerar proceduren kommer att vara Kristina Larsen, en forskningstjänstpersonal från mitt laboratorium. För att börja, resuspendera den CD34-positiva cellpelleten isolerad från navelsträngsblod i 300 mikroliter magnetisk cellseparatorbuffert per en gånger 10 till den åttonde cellen. Tillsätt 100 mikroliter FCR-blockerande reagens per en gånger 10 till de åttonde cellerna, följt av 100 mikroliter CD34-positiva magnetiska pärlor per en gånger 10 till de åttonde cellerna och inkubera vid fyra grader Celsius i 30 minuter.Tillsätt sedan fem milliliter magnetisk cellseparatorbuffert per en gånger 10 till de åttonde cellerna och snurra vid 360 g i 10 minuter vid fyra grader Celsius. Upprepa tvättsteget och återsuspendera pelleten i 500 mikroliter per 100 miljoner celler magnetisk cellseparatorbuffert i ett 15 ml koniskt rör märkt ofraktionerat. Märk ytterligare två 15 milliliter rör CD34-negativa och CD34-positiva Placera de tre rören på ett kylställ.Separera cellerna med hjälp av det positiva selektionsprogrammet med två kolumner på en automatisk magnetisk cellseparator i ett biosäkerhetsskåp. Därefter, för att expandera och frysa CD34-positiva humana stamceller, förbered navelsträngsblod eller CB-medium som beskrivs i manuskriptet och passera genom ett 0,22 mikronfilter. Resuspendera de CD34-positiva cellerna vid 100 000 per milliliter CB-medium och inkubera vid 37 grader Celsius.På dag tre, tillsätt en lika stor volym CB-medium utan cytokiner till kolven. På dag fem, skörda de expanderade CD34-positiva cellerna. Pipettera cellsuspensionen upp och ner och samla i ett 50 ml koniskt rör.Tillsätt tillräckligt med CB-medium för att täcka kolvens botten. Skrapa hela kolvens botten med en cellskrapa. Samla alla medier i samma 50 ml rör och centrifugera.Återsuspendera cellerna i två milliliter CB-medium och centrifugera. Aspirera mediet ner till pelleten och suspendera pelleten i ett frysmedium. Börja sedan CD34-positiv cellberedning tre timmar efter bestrålning av valpar.Värm 10 ml CB-media i ett 50 ml rör. Hämta en injektionsflaska med in vitro expanderade och frysta CD34-positiva celler för varje fyra till sex valpar att injicera. Tina snabbt vid 50 till 55 grader Celsius tills bara en liten mängd is är synlig och tillsätt cellerna till det uppvärmda CB-mediet.Använd en milliliter medium för att skölja varje injektionsflaska och snurra cellerna vid 360 g i 12 minuter vid fyra grader Celsius. Aspirera mediet försiktigt. Återsuspendera pelleten i två milliliter CB-media och räkna cellerna.Återigen, centrifugera cellerna, aspirera mediet och resuspendera pelleten i 100 mikroliter steril PBS per n plus en valpar att injicera, vilket resulterar i 250 000 till 450 000 CD34-positiva celler per mus. För PBMC-isolering från musblod, blanda blodheparinet genom att försiktigt pipettera upp och ner och långsamt överlagra ovanpå 500 mikroliter 1,077 gram per milliliter densitetsgradient och var försiktig så att du inte stör gränssnittet. Centrifugera röret vid 1 220 g i 20 minuter vid rumstemperatur utan pauser.Ta bort så många celler som möjligt från buffyskiktet med en 200 mikroliter pipett och lägg till det nya 1,5 milliliterröret innehållande 750 mikroliter skördmedium. Centrifugera vid 360 g i 11 minuter. Aspirera mediet till 50 mikroliter och resuspendera pelleten i 750 mikroliter skördmedium.Hämta data för 100 mikroliter av varje prov på en flödescytometer. Importera sedan fcs-filen till flödesdataredigeringsprogrammet och tillämpa en polygongrind på ett FSC-A- kontra SSC-A-diagram. Ändra axlarna till FSC-A jämfört med FSC-H och grinda cellerna på den linjära diagonalen, exklusive dubbletterna som sticker ut från linjen.Markera dessa celler och ändra axlarna till hCD45 jämfört med mCD45. Applicera en polygongrind på den hCD45-positiva populationen och använd namnet människa. Applicera en polygongrind på den mCD45-positiva populationen och använd namnet mus.Skapa en räkningsstatistik för mänskliga populationer och muspopulationer. Välj sedan den mänskliga populationen och ändra axlarna till CD19 kontra CD3. Applicera en polygongrind på de CD19-positiva cellerna och namnge dem B-celler.Applicera en polygongrind på den CD3-positiva populationen och namnge den T-celler. Applicera sedan en polygongrind på den dubbla negativa populationen och namnge den icke-TB. Välj T-cellpopulationen och ändra axlarna till CD4 jämfört med CD3.Applicera en polygongrind på den CD4-positiva populationen och namnge den CD4-positiv. Applicera en polygongrind på den CD4-negativa populationen och ge den namnet CD8. Välj icke-TB-populationen och ändra axlarna till CD56 kontra myeloid.Applicera en polygongrind på den totala CD56-positiva populationen och namnge den NK-celler. Applicera sedan en polygongrind på den CD56-negativa och myeloidpositiva populationen och namnge den myeloid. Skapa en tabell för procent- och räkningsstatistik för alla populationer och exportera den till ett kalkylblad.Beräkna procent hCD45-chimärism med den angivna formeln. Efter att ha odlat tumörceller i musen och administrerat läkemedelsbehandlingar, skörda vävnaderna. Placera musen på en skumdissektionsbräda med stift för att hålla dem på plats och armar och ben utsträckta vid 45 grader.Gör ett snitt upp i mitten av bålen som börjar nära bäckenet och sträcker sig till hakan. Dra huden till kanten och håll den på plats med stift. Extrahera lymfkörtlarna med fina pincett i ordningen axillär, livmoderhals, mesenterisk, inguinal och hiatal.Placera lymfkörtlarna på ena sidan av den frostat glasskivan i en petriskål i åtta milliliter skördmedium. Håll objektglasen i vinkelräta vinklar med de frostat kanterna inåt, tryck försiktigt på vävnaderna tills cellinnehållet släpps. Skölj glaset flera gånger genom att dra isär dem och tillsammans för att frigöra maximalt antal celler.Samla cellerna med en fem tums glaspipett och filtrera dem genom en nio tums bomullspluggad pipett i ett märkt 15 ml koniskt rör. Därefter extrahera tumören från den öppna flanken genom att hålla tumören med pincett medan du långsamt klipper vid tumörmarginalerna med dissektionssax. Väg tumören och ta bort 1/4 av tumören för RNA och immunohistokemi bearbetning.Placera de återstående 3/4 av tumören i en sex centimeter skål och haka den i en millimeter bitar med ett skalpellblad. Överför tumörbitarna till ett dissociationsrör. Skölj sedan skålen med ofullständigt TIL-medium och lägg den i röret.Tillsätt kollagenaspreparat och dissociera vävnaden med mekanisk dissociation vid 37 grader Celsius i 30 minuter till en timme. För suspensionen över ett 100 mikron filter i ett 50 ml koniskt rör och skölj filtret med 10 ml TIL komplett media. Centrifugera och återsuspendera pelleten i precis tillräckligt skördemedium med DNase, så att cellsuspensionen lätt kan passera genom en P1000-pipettspets och registrera volymen för nedströmsanalys.I PDX CRC 307P bromsade kombinationsbehandlingen tumörens tillväxt, vilket bestämdes av tumörtillväxtvolymer över tid, tumörvikter och den specifika tillväxthastigheten. PDX CRC 307M som testades i en annan kohort av möss påverkades mindre av samma kombinationsbehandling hos HIS BRGS-möss. Baserat på övergripande human hCD45-positiv och human T-cell hCD3-positiv chimärism i blodet före tumörimplantation ökade båda parametrarna i det perifera immunsystemet och TIL i kombination med behandlade CRC 307P-bärande möss, men inte CRC 307M-modellen.Undersökning av de humana T-cellerna avslöjade fler aktiverade T-celler i CRC 307P-tumörerna, men inte lymfan från kombinationsbehandlade möss. Det fanns också fler effektorminnes-CD8-positiva T-celler och färre TIM-3-positiva T-celler i kombinationsbehandlade CRC 307P-tumörer. Däremot noterades inte denna skillnad i CRC 307M-modellen.Vidare observerades inga förändringar i frekvenserna av cytotoxiska T-cellspopulationer hos kombinationsbehandlade möss, även om högre cytotoxiska T-celler observerades hos obehandlade. Kombinationsbehandling påverkade inte frekvenserna av Tregs i vare sig CRC 307P-lymforgan eller tumörer, även om CRC 307M-data visade en trend med minskade Tregs. Immunrelaterade förändringar i tumörceller förhöjdes med hjälp av flödescytometri.Ökat uttryck av MHC klass I och klass II observerades på CRC 307P-tumörceller som skärs ut från kombinationsbehandlade HIS BRGS-möss. I CRC 307M-modellen inducerade samma läkemedelsbehandling HLA klass II-uttryck på tumörcellerna. På liknande sätt resulterade kombinationsbehandlingen i ökat PD-L1-uttryck på de EpCAM-positiva CRC 307P-tumörcellerna.Slutligen undersöktes korrelationer mellan immunsvar och tumörtillväxt. Ökade CD4-positiva T-celler visade en signifikant korrelation med mindre tumörtillväxt, och mer specifikt de HLA-DR-positiva aktiverade T-cellerna i kombinationen behandlade HIS-möss. Steril teknik vid isolering av de CD34-positiva cellerna, eftersom mössen är extremt immunbristfälliga.Den resulterande chimärismen varierar inom och mellan navelsträngsblodgivare, och T-celler har den största variationen. Obegränsade immunterapikombinationer kan utföras, liksom mekanistiska och läkemedelsdoseringskinetiska studier, till exempel deletion av CD8-T-celler för att bekräfta deras roll. Viktigt är att läkemedelsrelaterade toxiciteter också kan studeras.Det gav en mer relevant och tillgänglig preklinisk modell för att testa humana immunterapier för översättning till kliniken. Flera kliniska prövningar pågår nu baserat på dessa data.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescerande Orthotopic musmodell för cancer i bukspottskörteln

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

In vivo modell för att testa effekten av hypoxi på tumörmetastas

Hypoxia has been implicated in the metastasis of Ewing sarcoma (ES) by clinical observations and in vitro data, yet direct evidence for its pro-metastatic ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

Colon-26 karcinom tumörbärande mus som en modell för studier av cancerkakexi

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Tumör Engraftment i en Xenograft musmodell av mänskliga mantelcellslymfom

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

Utveckling av en mänsklig preklinisk modell av Osteoclastogenesis från perifert blod monocyter Co odlade med Breast Cancer cellinjer

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

En human perifert blod mononukleär cell (PBMC) inympad humaniserad xenograft modell för translationell Immuno-onkologi (I-O) forskning

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

Murin modell av metastaserande levertumörer i inställningen av ischemia reperfusion skada

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Erhålla Cancer Stem Cell Spheres från gynekologiska och bröstcancertumörer

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

Ett snabbt screeningarbetsflöde för att identifiera potentiell kombinationsterapi för GBM med hjälp av patientbaserade Glioma-stamceller

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...

High-Resolution Ultrasonography for the Analysis of Orthotopic ATC Tumors in a Genetically Engineered Mouse Model

Högupplöst ultraljud för analys av ortotopiska ATC-tumörer i en genetiskt modifierad musmodell

Anaplastic thyroid carcinoma (ATC) is associated with a poor prognosis and short median survival time, but no effective treatment improves the outcomes ...