Name: testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors
Uploaded: 2022-12-16T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

Hem Hayvan Araştırma Tesisi'ne (OLAR) farelerimize gösterdikleri özen için hem de enstitümüzdeki Kanser Merkezi Destek Hibesi (P30CA046934) tarafından desteklenen Akış Sitometrisi Ortak Kaynağı'na tüm çalışmalarımızda muazzam yardımları için teşekkür ederiz. Ayrıca, HIS-BRGS modelimizde insan PDX'lerine immünoterapileri inceleyen açılış işbirliklerimiz için hem Gail Eckhardt'a hem de Anna Capasso'ya teşekkür ediyoruz. Bu çalışma kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri P30CA06934 Kanser Merkezi Destek Hibesi tarafından PHISM (Pre-clinical Human Immune System Mouse Models) Paylaşılan Kaynak, RRID: SCR_021990 ve Akış Sitometrisi Paylaşılan Kaynağı, RRID: SCR_022035 kullanılarak desteklenmiştir. Bu araştırma kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri NIAID tarafından 75N93020C00058 Sözleşme Numarası altında desteklenmiştir.

Tüm hayvan çalışmaları, Colorado Denver Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC Protokolleri #00593 ve #00021) tarafından onaylanan hayvan protokolleri kapsamında gerçekleştirilmiştir. Tüm hayvan çalışmaları, Colorado Denver Üniversitesi Anschutz Tıp Kampüsü'ndeki Amerikan Laboratuvar Hayvanları Bakımı Derneği tarafından akredite edilmiş bir tesis olan Laboratuvar Hayvanları Kaynakları Ofisi'ne (OLAR) uygun olarak gerçekleştirildi. Tüm insan kordon kanı örnekl...

<ol>
	<li>Chulpanova, D. S., Kitaeva, K. V., Rutland, C. S., Rizvanov, A. A., Solovyeva, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+tumor+models+for+advanced+cancer+immunotherapy.">Mouse tumor models for advanced cancer immunotherapy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4118 (2020).</li><li>Olson, B., Li, Y., Lin, Y., Liu, E. T., Patnaik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+cancer+immunotherapy+research.">Mouse models for cancer immunotherapy research.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1358-1365 (2018).</li><li>Marin-Jimenez, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+cancer+immunotherapy+in+a+human+immune+system+mouse+model:+correlating+treatment+responses+to+human+chimerism,+therapeutic+variables+and+immune+cell+phenotypes.">Testing cancer immunotherapy in a human immune system mouse model: correlating treatment responses to human chimerism, therapeutic variables and immune cell phenotypes.</a> Frontiers in Immunology. 12, 607282 (2021).</li><li>Yin, L., Wang, X. J., Chen, D. X., Liu, X. N., Wang, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+model:+a+review+on+preclinical+applications+for+cancer+immunotherapy.">Humanized mouse model: a review on preclinical applications for cancer immunotherapy.</a> American Journal of Cancer Research. 10 (12), 4568-4584 (2020).</li><li>Cogels, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+as+a+valuable+pre-clinical+model+for+cancer+immunotherapy+research.">Humanized mice as a valuable pre-clinical model for cancer immunotherapy research.</a> Frontiers in Oncology. 11, 784947 (2021).</li><li>Jin, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+humanized+mouse+with+patient-derived+xenografts+for+cancer+immunotherapy+studies:+A+comprehensive+review.">Development of humanized mouse with patient-derived xenografts for cancer immunotherapy studies: A comprehensive review.</a> Cancer Science. 112 (7), 2592-2606 (2021).</li><li>Capasso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+immune+responses+to+anti-PD-1+mono+and+combination+immunotherapy+in+hematopoietic+humanized+mice+implanted+with+tumor+xenografts.">Characterization of immune responses to anti-PD-1 mono and combination immunotherapy in hematopoietic humanized mice implanted with tumor xenografts.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 7 (1), 37 (2019).</li><li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+studying+efficacy+and+mechanisms+of+PD-1-targeted+cancer+immunotherapy.">Humanized mice in studying efficacy and mechanisms of PD-1-targeted cancer immunotherapy.</a> The FASEB Journal. 32 (3), 1537-1549 (2018).</li><li>Yong, K. S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+as+a+tool+to+predict+immunotoxicity+of+human+biologics.">Humanized mouse as a tool to predict immunotoxicity of human biologics.</a> Frontiers in Immunology. 11, 553362 (2020).</li><li>Shen, H. W., Jiang, X. L., Gonzalez, F. J., Yu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+transgenic+mouse+models+for+drug+metabolism+and+pharmacokinetic+research.">Humanized transgenic mouse models for drug metabolism and pharmacokinetic research.</a> Current Drug Metabolism. 12 (10), 997-1006 (2011).</li><li>Bosma, G. C., Custer, R. P., Bosma, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+severe+combined+immunodeficiency+mutation+in+the+mouse.">A severe combined immunodeficiency mutation in the mouse.</a> Nature. 301 (5900), 527-530 (1983).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+defects+in+innate+and+adaptive+immunologic+function+in+NOD/LtSz-scid+mice.">Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice.</a> The Journal of Immunology. 154 (1), 180-191 (1995).</li><li>Legrand, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+CD47/signal+regulatory+protein+alpha+(SIRP(alpha))+interaction+is+required+for+optimal+human+T-+and+natural+killer-+(NK)+cell+homeostasis+in+vivo.">Functional CD47/signal regulatory protein alpha (SIRP(alpha)) interaction is required for optimal human T- and natural killer- (NK) cell homeostasis in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (32), 13224-13229 (2011).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> The Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Traggiai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+human+adaptive+immune+system+in+cord+blood+cell-transplanted+mice.">Development of a human adaptive immune system in cord blood cell-transplanted mice.</a> Science. 304 (5667), 104-107 (2004).</li><li>Theocharides, A. P., Rongvaux, A., Fritsch, K., Flavell, R. A., Manz, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+hemato-lymphoid+system+mice.">Humanized hemato-lymphoid system mice.</a> Haematologica. 101 (1), 5-19 (2016).</li><li>Goldman, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+human+cell+engraftment+in+mice+deficient+in+RAG2+and+the+common+cytokine+receptor+gamma+chain.">Enhanced human cell engraftment in mice deficient in RAG2 and the common cytokine receptor gamma chain.</a> British Journal of Haematology. 103 (2), 335-342 (1998).</li><li>Stripecke, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innovations,+challenges,+and+minimal+information+for+standardization+of+humanized+mice.">Innovations, challenges, and minimal information for standardization of humanized mice.</a> EMBO Molecular Medicine. 12 (7), (2020).</li><li>Allen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+immune+system+mouse+models:+progress,+challenges+and+opportunities.">Humanized immune system mouse models: progress, challenges and opportunities.</a> Nature Immunology. 20 (7), 770-774 (2019).</li><li>Gammelgaard, O. L., Terp, M. G., Preiss, B., Ditzel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cancer+evolution+in+the+context+of+a+human+immune+system+in+mice.">Human cancer evolution in the context of a human immune system in mice.</a> Molecular Oncology. 12 (10), 1797-1810 (2018).</li><li>Rios-Doria, J., Stevens, C., Maddage, C., Lasky, K., Koblish, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+cancer+xenografts+in+humanized+mice.">Characterization of human cancer xenografts in humanized mice.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 8 (1), 000416 (2020).</li><li>Gombash Lampe, S. E., Kaspar, B. K., Foust, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+injections+in+neonatal+mice.">Intravenous injections in neonatal mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52037 (2014).</li><li>Lang, J., Weiss, N., Freed, B. M., Torres, R. M., Pelanda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+hematopoietic+humanized+mice+in+the+newborn+BALB/c-Rag2null+Il2r&#947;null+mouse+model:+a+multivariable+optimization+approach.">Generation of hematopoietic humanized mice in the newborn BALB/c-Rag2null Il2r&#947;null mouse model: a multivariable optimization approach.</a> Clinical Immunology. 140 (1), 102-116 (2011).</li><li>Laskowski, T. J., Hazen, A. L., Collazo, R. S., Haviland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rigor+and+reproducibility+of+cytometry+practices+for+immuno-oncology:+a+multifaceted+challenge.">Rigor and reproducibility of cytometry practices for immuno-oncology: a multifaceted challenge.</a> Cytometry Part A. 97 (2), 116-125 (2020).</li><li>Bagby, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+maintenance+of+a+preclinical+patient+derived+tumor+xenograft+model+for+the+investigation+of+novel+anti-cancer+therapies.">Development and maintenance of a preclinical patient derived tumor xenograft model for the investigation of novel anti-cancer therapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54393 (2016).</li><li>Laajala, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+design+and+analysis+of+preclinical+intervention+studies+in+vivo.">Optimized design and analysis of preclinical intervention studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 30723 (2016).</li><li>Na, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+patient-derived+xenografts+from+patients+with+gastrointestinal+stromal+tumors:+analysis+of+clinicopathological+characteristics+related+to+engraftment+success.">Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success.</a> Scientific Reports. 10 (1), 7996 (2020).</li><li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RX-5902,+a+novel+beta-catenin+modulator,+potentiates+the+efficacy+of+immune+checkpoint+inhibitors+in+preclinical+models+of+triple-negative+breast+cancer.">RX-5902, a novel beta-catenin modulator, potentiates the efficacy of immune checkpoint inhibitors in preclinical models of triple-negative breast cancer.</a> BMC Cancer. 20 (1), 1063 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+adrenocortical+cancer+humanized+mouse+model+to+characterize+anti-PD1+effects+on+tumor+microenvironment.">Development of an adrenocortical cancer humanized mouse model to characterize anti-PD1 effects on tumor microenvironment.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 105 (1), 26-42 (2020).</li><li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+lymphocyte+reconstitution+in+a+humanized+mouse+model+reveal+a+requirement+of+T+cells+for+human+B+cell+maturation.">Studies of lymphocyte reconstitution in a humanized mouse model reveal a requirement of T cells for human B cell maturation.</a> The Journal of Immunology. 190 (5), 2090-2101 (2013).</li><li>Katano, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-Rag2null+IL-2R&#947;null+mice:+an+alternative+to+NOG+mice+for+generation+of+humanized+mice.">NOD-Rag2null IL-2R&#947;null mice: an alternative to NOG mice for generation of humanized mice.</a> Experimental Animalas. 63 (3), 321-330 (2014).</li><li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parameters+for+establishing+humanized+mouse+models+to+study+human+immunity:+analysis+of+human+hematopoietic+stem+cell+engraftment+in+three+immunodeficient+strains+of+mice+bearing+the+IL2r&#947;(null)+mutation.">Parameters for establishing humanized mouse models to study human immunity: analysis of human hematopoietic stem cell engraftment in three immunodeficient strains of mice bearing the IL2r&#947;(null) mutation.</a> Clinical Immunology. 135 (1), 84-98 (2010).</li><li>Hasgur, S., Aryee, K. E., Shultz, L. D., Greiner, D. L., Brehm, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+immunodeficient+mice+bearing+human+immune+systems+by+the+engraftment+of+hematopoietic+stem+cells.">Generation of immunodeficient mice bearing human immune systems by the engraftment of hematopoietic stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1438, 67-78 (2016).</li><li>Andre, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+human+CD34++stem+cell-engrafted+nonobese+diabetic/SCID/IL-2R&#947;null+mice+show+impaired+CD8++T+cell+maintenance+and+a+functional+arrest+of+immature+NK+cells.">Long-term human CD34+ stem cell-engrafted nonobese diabetic/SCID/IL-2R&#947;null mice show impaired CD8+ T cell maintenance and a functional arrest of immature NK cells.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2710-2720 (2010).</li><li>Wunderlich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+multilineage+human+hematopoietic+reconstitution+and+function+in+NSGS+mice.">Improved multilineage human hematopoietic reconstitution and function in NSGS mice.</a> PLoS One. 13 (12), 0209034 (2018).</li><li>Lee, J., Brehm, M. A., Greiner, D., Shultz, L. D., Kornfeld, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engrafted+human+cells+generate+adaptive+immune+responses+to+Mycobacterium+bovis+BCG+infection+in+humanized+mice.">Engrafted human cells generate adaptive immune responses to Mycobacterium bovis BCG infection in humanized mice.</a> BMC Immunology. 14, 53 (2013).</li><li>Masse-Ranson, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+thymopoiesis+and+improved+T-cell+responses+in+HLA-A2/-DR2+transgenic+BRGS-based+human+immune+system+mice.">Accelerated thymopoiesis and improved T-cell responses in HLA-A2/-DR2 transgenic BRGS-based human immune system mice.</a> European Journal of Immunology. 49 (6), 954-965 (2019).</li><li>Oswald, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+infiltration+pattern+in+non-small+cell+lung+cancer+PDX+models+is+a+model+immanent+feature+and+correlates+with+a+distinct+molecular+and+phenotypic+make-up.">Immune cell infiltration pattern in non-small cell lung cancer PDX models is a model immanent feature and correlates with a distinct molecular and phenotypic make-up.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 10 (4), 004412 (2022).</li></ol>

Son 6 yılda, hem immünoloji hem de insanlaştırılmış farelerdeki uzmanlığımızı kullanarak, araştırma ekibimiz çeşitli insan tümörleri üzerinde immünoterapileri test etmek için çok ihtiyaç duyulan bir klinik öncesi model geliştirdi 3,7,30,31. Bu protokol, immünoterapi merkezli insan T hücresi popülasyonlarına özel dikkat göstererek, modelin değişkenliğinin dikkat...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated from:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)
to:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Kristina Larsen1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Fare kanseri modelleri, tümör büyümesinin ve immün kaçışın temel mekanizmalarını oluşturmak için önemlidir. Bununla birlikte, fare modellerinde yapılan kanser tedavisi çalışmaları, sınırlı sinjenik modeller ve türe özgü farklılıklar nedeniyle kliniğe sonlu çeviri sağlamıştır 1,2. İmmün tedavilerin tümörleri kontrol etmek için baskın bir yaklaşım olarak ortaya çıkması, fonksiyonel bir insan bağışıklık sistemine sahip in vivo bir modele olan ihtiyacı yinelemiştir. Son on yılda insan bağışıklık sistemi farelerinde (HIS fareleri) meydana gelen ilerlemeler, immüno-onkolojiyi in vivo olarak çok çeşitli kanser türlerinde ve immünoterapötik ajanlarda incelemeyi mümkün kılmıştır 3,4,5,6. Hücre hattı kaynaklı ve hasta kaynaklı ksenogreftler (sırasıyla CDX ve PDX) dahil olmak üzere insan tümör modelleri, HIS farelerinde iyi büyür ve çoğu durumda, insan hematopoetik engraftmanı olmayan immün yetmezlikli konakçıdaki büyümeleriyle neredeyse aynıdır 7,8. Bu önemli bulguya dayanarak, araştırmacılar, immünsüpresyonu azaltmak ve böylece bağışıklık yönelimli tümör öldürmeyi arttırmak için tümör mikroçevresini (TME) değiştirmek için tasarlanmış kombinasyon terapileri de dahil olmak üzere insan immünoterapilerini incelemek için HIS fare modelini kullanıyorlar. Bu preklinik modeller, insan kanserlerinin heterojenliği konularının ele alınmasına yardımcı olur ve ayrıca tedavi başarısını tahmin edebilir ve bağışıklıkla ilişkili ilaç toksisitelerini izleyebilir 9,10.
İnsan hematopoetik kök hücrelerinin tanıtılması yoluyla insan bağışıklık sistemine sahip bir fare modelinin üretilmesi, ksenograftı reddetmeyecek bir alıcı immün yetmezlikli fare gerektirir. Mevcut HIS fare modelleri, 30 yıl önce bildirilen immün yetmezlikli fare suşlarından türetilmiştir. Tanımlanan ilk immün yetmezlikli fare suşu, T ve B hücreleri11'den yoksun SCID fareleriydi, bunu insan CD47 molekülü12,13'e NOD SIRPa alelinin bağlanmasının artması nedeniyle, insan hücrelerine fare makrofaj toleransından sorumlu bir SIRPa polimorfizmine sahip hibrit bir NOD-SCID izledi. 2000'li yılların başında, IL-2 reseptörünün (IL-2Rγc) ortak gama zincirinin hem BALB / c hem de NOD immün yetmezlikli suşlarda silinmesi, konakçı NK hücre gelişimini yasaklayan genetik delesyonlar nedeniyle gelişmiş insan engraftmanı için bir oyun değiştiriciydi14,15,16,17. BRG ve NRG fareleri gibi alternatif modeller, T ve B hücre reseptör geninin yeniden düzenlenmesi için gerekli olan Rag1 veya Rag2 geninin silinmesi ve böylece lenfositlerin olgunlaşması ve hayatta kalması yoluyla T ve B hücre eksikliğine ulaşır18,19. Burada kullanılan BRGS (BALB/c -Rag2 nullIl2R γCnullSirpαNOD) faresi, IL-2Rγ zincir eksikliğini ve Rag2-/- arka planındakiNOD SIRPα alelini birleştirerek, T, B veya NK hücreleri olmayan, ancak 30 haftadan fazla uzun süreli aşılamaya izin verecek kadar güçlü ve sağlıklı bir fareyle sonuçlanan yüksek immün yetmezlikli bir fare ile sonuçlanır13.
HIS fareleri çeşitli şekillerde üretilebilir, insan PBMC enjeksiyonu en doğrudan yöntem15,18,20'dir. Bununla birlikte, bu fareler, 12 haftalıkken greft versus host hastalığı (GVHD) ile sonuçlanan ve uzun süreli çalışmaları önleyen aktif insan T hücrelerinin belirgin bir genişlemesine sahiptir. Alternatif olarak, göbek kordon kanı (CB), kemik iliği ve fetal karaciğerden elde edilen insan hematopoetik kök hücreleri, insan bağışıklık sistemi de novo'nun engraftasyonu ve üretimi için de kullanılabilir. Bu sistemde, hematopoetik kök hücreler, çoğunlukla T hücreleri geliştiren PBMC farelerine kıyasla, fare konakçısına önemli ölçüde toleranslı olan T, B ve doğuştan gelen bağışıklık hücrelerinin üretilmesiyle çok soylu bir insan bağışıklık sistemi üretir. Bu nedenle, GVHD yoktur veya büyük ölçüde gecikmiştir ve çalışmalar 10 aya kadar olan farelere genişletilebilir. CB, genetik olarak aynı bağışıklık sistemlerine sahip birden fazla HIS faresinin aşılanmasını kolaylaştıran kolay, erişilebilir ve invaziv olmayan bir CD34 + insan hematopoetik kök hücre kaynağı sağlar 17,18,20,21. Son birkaç yılda, HIS fare modelleri immünoterapiyi ve TME 3,4,5,6'yı incelemek için yaygın olarak kullanılmıştır. Bu farelerde insan kaynaklı bağışıklık sistemlerinin gelişmesine rağmen, insan ksenogreft tümörleri, kontrol immün yetmezlikli farelere kıyasla benzer oranlarda büyür ve aşılanmış PDX'in mikro ortamını korumak için önemli olan kanser hücreleri ile bağışıklık hücreleri arasındaki karmaşık etkileşime izin verir 3,7,8 . Bu protokol, PDX'ler ve CDX'ler ile HIS-BRGS farelerde tedavileri test eden 50'den fazla çalışma gerçekleştirmek için kullanılmıştır. Önemli bir sonuç, HBYS farelerindeki insan tümörlerinin, tümörün ilk hasta örneğine göre moleküler değerlendirmesi ve immün infiltrasyon özellikleri 3,22,23 ile tanımlandığı gibi benzersiz TME'lerini koruduğudur. Grubumuz, çok parametreli akım sitometrisi kullanılarak hem immün organlarda hem de tümörde HBYS'nin derinlemesine değerlendirilmesine odaklanmaktadır. Burada, BRGS farelerinin insancıllaştırılması, kimerizmin değerlendirilmesi, insan tümörlerinin implantasyonu, tümör büyüme ölçümleri, kanser tedavisi uygulaması ve HIS hücrelerinin akış sitometrisi ile analizi için bir protokol açıklanmaktadır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe w/needles</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>1031815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL tubes</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Pro Separator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Golgi Stop Protein Transport Inhibitor with monensin</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Stim Cocktail</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>509305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chill 15 Rack</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-092-952</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-plugged glass pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-8B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Basement membrane extract</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>363200502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytek Aurora</td>
			<td>Cytek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9003-98-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eBioscience FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Set</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>00-5523-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryonic Stemcell FCS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10439001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tubes; 1.5 mL volume</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>616201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Benchmark</td>
			<td>100-106 500mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll Hypaque</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>45001752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo Software</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - fine</td>
			<td>Roboz Surgical&#160;</td>
			<td>RS5045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps normal</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>RS4919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>F75P1GAL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted Glass Slides</td>
			<td>Corning</td>
			<td>1255310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentlemacs C-Tubes</td>
			<td>Miltenyi&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACS Dissociator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass pipettes</td>
			<td>DWK Life Sciences</td>
			<td>63A53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS w/ Ca &#38; Mg</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>55037C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT25060CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I2511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>401108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMDM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12440053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase DL</td>
			<td>Roche</td>
			<td>5466202001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Blue</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>L23105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>JDC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgG-unabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>H2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-AP</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>UHB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human IgM-unlabeled</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>SA-DA4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiRad 350</td>
			<td>Precision X-Ray</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-nitrophenyl substrate</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>34045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRISM</td>
			<td>Graphpad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu FLT3L</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>308-FK-005/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu IL6</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>206-IL-010/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rec Hu SCF</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>255SC010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Corning</td>
			<td>45000-39</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>8047-15-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>862945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipettes 25 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1367811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>567-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile molecular water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7732-18-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeti Cell Analyzer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>12004279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zombie Green</td>
			<td>biolegend</td>
			<td>423112</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

testing cancer immunotherapeutics in a humanized mouse model bearing human tumors

Tümör mikroçevresinin immünsüpresif doğasının tersine çevrilmesi, immünoterapi ilaçları ile kanserlerin başarılı tedavisi için kritik öneme sahiptir. Murin kanseri modelleri çeşitliliklerinde son derece sınırlıdır ve kliniğe kötü çeviriden muzdariptir. İmmünoterapi çalışmaları için daha fizyolojik bir preklinik model olarak hizmet etmek için, bu protokol, bir insan bağışıklık sistemi ile yeniden oluşturulmuş bir farede insan tümörlerinin tedavisini değerlendirmek için geliştirilmiştir. Bu eşsiz protokol, insan bağışıklık sistemi (HIS, "insancıllaştırılmış") farelerin gelişimini, ardından hücre hattından türetilmiş bir ksenograft (CDX) veya hasta kaynaklı bir ksenogreft (PDX) olmak üzere bir insan tümörünün implantasyonunu göstermektedir. HIS fareleri, göbek kordon kanından izole edilen CD34 + insan hematopoetik kök hücrelerinin, ksenojenik bir tümörü de kabul edebilen yüksek immün yetmezlikli farelere yenidoğan BRGS'ye (BALB / c Rag2-/- IL2RγC-/- NODSIRPα) enjekte edilmesiyle üretilir. İnsan bağışıklık sistemi gelişiminin ve tümör implantasyonunun kinetiğinin ve özelliklerinin önemi vurgulanmaktadır. Son olarak, akış sitometrisi kullanılarak tümör mikroçevresinin derinlemesine bir değerlendirmesi açıklanmaktadır. Bu protokolü kullanan çok sayıda çalışmada, bireysel tümörlerin tümör mikroçevresinin HIS-PDX farelerde özetlendiği bulunmuştur; "Sıcak" tümörler büyük bağışıklık infiltrasyonu sergilerken, "soğuk" tümörler bunu yapmaz. Bu model, çok çeşitli insan tümörleri için kombinasyon immünoterapileri için bir test alanı görevi görür ve kişiselleştirilmiş tıp arayışında önemli bir aracı temsil eder.

Yan tümör protokolünü ve deneysel zaman çizelgesini takiben (Şekil 1), tümör büyümesi ve hedeflenen tirozin kinaz inhibitörü (TKI) tedavisine ve nivolumab kombinasyon tedavisine karşı immün yanıt iki ayrı insan kolorektal kanseri (CRC) PDX'inde incelenmiştir. TKİ ilaçları immün yetmezlikli konakçılarda tümör büyümesini değerlendirmek için sadece29 kez incelenmiştir. Bu model, TKİ'nin bağışıklık tepkisindeki değişikliklerin tek ba...

Watch this Scientific Journal Video about Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors at JoVE.com

Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Bu protokol, immüno-onkoloji çalışmaları için insan bağışıklık sistemi (HIS) farelerinin neslini özetlemektedir. Bu modelde implante edilen insan tümörleri üzerinde insan immünoterapötiklerini test etmek için bu modelin kullanımındaki talimatlar ve hususlar, insan bağışıklık sisteminin tümöre tepkisini karakterize etmeye vurgu yapılarak sunulmuştur.

İnsan Tümörleri Taşıyan İnsanlaştırılmış Bir Fare Modelinde Kanser İmmünoterapötiklerinin Test Edilmesi

Reversing the immunosuppressive nature of the tumor microenvironment is critical for the successful treatment of cancers with immunotherapy drugs. Murine ...

Bu protokol, klinik öncesi immüno-onkoloji çalışmaları için İnsan Bağışıklık Sistemi veya HIS farelerinin oluşumunu özetlemektedir. Fare kanseri modelleri çeşitliliklerinde sınırlıdır ve kliniğe kötü bir şekilde tercüme edilir. Bu teknik, insan bağışıklık sistemine sahip bir farede insan tümörlerinin tedavisini değerlendirerek immünoterapi çalışmaları için klinik öncesi bir model olarak hizmet eder.İnsanlaştırılmış fare modeli, birçok enfeksiyona verilen tepkiler veya insan bağışıklık sisteminin kanserleri de dahil olmak üzere insan immünolojisinin birçok yönünü incelemek için kullanılabilir. Güvenilir ve sağlam bir kordon kanı kaynağı edinmek ve immün yetmezlikli fare kolonisinin sağlığını korumak zor olabilir. Akım sitometrisi ve immünolojik analizde uzmanlık esastır.Prosedürü gösteren, laboratuvarımdan bir araştırma hizmetleri uzmanı olan Kristina Larsen olacak. Başlamak için, kordon kanından izole edilen CD34-pozitif hücre peletini, sekizinci hücrelere bir kez 10 kez 300 mikrolitre manyetik hücre ayırıcı tamponunda yeniden askıya alın. Sekizinci hücrelere bir kez 10 kez 10 başına 100 mikrolitre FCR bloke edici reaktif, ardından sekizinci hücrelere bir kez 10 kez 10 mikrolitre CD34-pozitif manyetik boncuk ekleyin ve 30 dakika boyunca dört santigrat derecede inkübe edin.Daha sonra, sekizinci hücrelere bir kez 10 kez beş mililitre manyetik hücre ayırıcı tampon ekleyin ve dört santigrat derecede 10 dakika boyunca 360 g'da döndürün. Yıkama adımını tekrarlayın ve peleti, fraksiyone edilmemiş etiketli 15 mililitrelik bir konik tüpte 100 milyon manyetik hücre ayırıcı tampon hücresi başına 500 mikrolitrede yeniden askıya alın. İki adet daha 15 mililitrelik tüpü etiketleyin CD34-negatif ve CD34-pozitif Üç tüpü bir soğutma rafına yerleştirin.Bir biyogüvenlik kabinindeki otomatik manyetik hücre ayırıcı üzerindeki iki sütunlu pozitif seçim programını kullanarak hücreleri ayırın. Daha sonra, CD34 pozitif insan kök hücrelerini genişletmek ve dondurmak için, makalede açıklandığı gibi kordon kanı veya CB ortamı hazırlayın ve 0.22 mikronluk bir filtreden geçirin. CD34-pozitif hücreleri mililitre CB ortamı başına 100.000'de yeniden askıya alın ve 37 santigrat derecede inkübe edin.Üçüncü günde, şişeye sitokinler olmadan eşit miktarda CB ortamı ekleyin. Beşinci günde, genişletilmiş CD34-pozitif hücreleri toplayın. Hücre süspansiyonunu yukarı ve aşağı pipetleyin ve 50 mililitrelik konik bir tüpte toplayın.Şişenin tabanını örtmek için yeterli CB ortamı ekleyin. Bir hücre kazıyıcı kullanarak, şişenin tüm tabanını kazıyın. Tüm medyayı aynı 50 mililitrelik tüpte toplayın ve santrifüj.Hücreleri iki mililitre CB ortamında yeniden askıya alın ve santrifüj. Ortamı pelet haline getirin ve peleti dondurucu bir ortamda yeniden askıya alın. Daha sonra, yavru ışınlamasından üç saat sonra CD34 pozitif hücre hazırlığına başlayın.50 mililitrelik bir tüpte 10 mililitre CB ortamını ısıtın. Her dört ila altı yavrunun enjekte etmesi için bir şişe in vitro genişletilmiş ve dondurulmuş CD34-pozitif hücre alın. Sadece az miktarda buz görünene kadar 50 ila 55 santigrat derecede hızla çözün ve hücreleri ısıtılmış CB ortamına ekleyin.Her bir şişeyi durulamak için bir mililitre ortam kullanın ve hücreleri dört santigrat derecede 12 dakika boyunca 360 g'da döndürün. Ortamı dikkatlice aspire edin. Peletleri iki mililitre CB ortamında tekrar askıya alın ve hücreleri sayın.Yine, hücreleri santrifüj edin, ortamı aspire edin ve peleti n başına 100 mikrolitre steril PBS artı enjekte edilecek bir yavru içinde yeniden askıya alın, bu da fare başına 250.000 ila 450.000 CD34 pozitif hücre ile sonuçlanır. Fare kanından PBMC izolasyonu için, kan heparinini yavaşça yukarı ve aşağı pipetleyerek karıştırın ve arayüzü rahatsız etmemeye dikkat ederek mililitre yoğunluk gradyanı başına 500 mikrolitre 1.077 gramın üzerine yavaşça yerleştirin. Tüpü 1.220 g'da oda sıcaklığında 20 dakika boyunca ara vermeden santrifüjleyin.200 mikrolitrelik bir pipetle kabarık kaplamadan mümkün olduğunca çok hücre çıkarın ve 750 mikrolitre hasat ortamı içeren yeni 1,5 mililitrelik tüpe ekleyin. 11 dakika boyunca 360 g'da santrifüj. Ortamı 50 mikrolitreye aspire edin ve peleti 750 mikrolitre hasat ortamında yeniden askıya alın.Bir akış sitometresindeki her numunenin 100 mikrolitresi için veri elde edin. Ardından fcs dosyasını akış verileri düzenleme yazılımına aktarın ve FSC-A ve SSC-A grafiğine çokgen kapısı uygulayın. Eksenleri FSC-H'ye karşı FSC-A olarak değiştirin ve çizgiden çıkıntı yapan çiftleri hariç tutarak hücreleri doğrusal diyagonal olarak açın.Bu hücreleri seçin ve eksenleri mCD45'e karşı hCD45 olarak değiştirin. hCD45 pozitif popülasyona bir çokgen kapısı uygulayın ve insan adını uygulayın. mCD45 pozitif popülasyona bir çokgen kapısı uygulayın ve fare adını uygulayın.İnsan ve fare popülasyonları için bir sayım istatistiği oluşturun. Ardından, insan popülasyonunu seçin ve eksenleri CD3'e karşı CD19 olarak değiştirin. CD19 pozitif hücrelere çokgen kapısı uygulayın ve bunları B hücreleri olarak adlandırın.CD3 pozitif popülasyona bir çokgen kapısı uygulayın ve bunu T-hücreleri olarak adlandırın. Ardından, çift negatif popülasyona bir çokgen kapısı uygulayın ve TB olmayan olarak adlandırın. T hücresi popülasyonunu seçin ve eksenleri CD3 yerine CD4 olarak değiştirin.CD4 pozitif popülasyona bir çokgen kapısı uygulayın ve CD4 pozitif olarak adlandırın. CD4 negatif popülasyona bir çokgen kapısı uygulayın ve CD8 olarak adlandırın. TB olmayan popülasyonu seçin ve eksenleri miyeloidlere karşı CD56 olarak değiştirin.Toplam CD56 pozitif popülasyona bir çokgen kapısı uygulayın ve NK hücreleri olarak adlandırın. Daha sonra CD56-negatif ve miyeloid-pozitif popülasyona bir çokgen kapısı uygulayın ve bunu miyeloid olarak adlandırın. Tüm popülasyonların yüzde ve sayım istatistikleri için bir tablo oluşturun ve bunu bir elektronik tabloya aktarın.Belirtilen formülü kullanarak yüzde hCD45 kimerizmini hesaplayın. Farede tümör hücrelerini büyüttükten ve ilaç tedavilerini uyguladıktan sonra, dokuları toplayın. Fareyi yerinde tutmak için pimleri olan bir köpük diseksiyon tahtasına yerleştirin ve kollar ve bacaklar 45 derecede uzatı.Gövdenin ortasından pelvisin yakınından başlayıp çeneye kadar uzanan bir kesi yapın. Cildi kenara doğru çekin ve pimlerle yerinde tutun. Lenf nodlarını aksiller, servikal, mezentrik, inguinal ve hiatal sırayla ince forseps kullanarak çıkarın.Lenf düğümlerini buzlu cam slaydın bir tarafına sekiz mililitre hasat ortamında bir Petri kabına yerleştirin. Slaytları buzlu kenarları içe doğru olacak şekilde dik açılarda tutarak, hücresel içerikler serbest bırakılana kadar dokuları hafifçe bastırın. Maksimum hücre sayısını serbest bırakmak için slaytı birbirinden ayırarak ve birlikte çekerek birkaç kez durulayın.Hücreleri beş inçlik bir cam pipetle toplayın ve dokuz inçlik pamukla takılı bir pipetten etiketli 15 mililitrelik bir konik tüpe filtreleyin. Daha sonra, tümörü forseps ile tutarak tümörü açık kanattan çıkarın ve diseksiyon makası ile tümör kenarlarında yavaşça sniping yapın. Tümörü tartın ve RNA ve immünohistokimya işleme için tümörün 1 / 4'ünü çıkarın.Tümörün kalan 3 / 4'ünü altı santimetrelik bir kaba yerleştirin ve bir neşter bıçağı kullanarak bir milimetre parçaya bölün. Tümör parçalarını bir ayrışma tüpüne aktarın. Daha sonra kabı eksik TIL ortamıyla durulayın ve tüpe ekleyin.Kollajenaz preparatı ekleyin ve 30 dakika ila bir saat boyunca 37 santigrat derecede mekanik ayrışma kullanarak dokuyu ayırın. Süspansiyonu 100 mikronluk bir filtrenin üzerinden 50 mililitrelik bir konik tüpe geçirin ve filtreyi 10 mililitre TIL komple ortam ile durulayın. Peleti DNaz ile yeterli hasat ortamında santrifüj edin ve yeniden askıya alın, böylece hücre süspansiyonu bir P1000 pipet ucundan kolayca geçebilir ve aşağı akış analizi için hacmi kaydedebilir.PDX CRC 307P'de, kombinasyon tedavisi, zaman içindeki tümör büyüme hacimleri, tümör ağırlıkları ve spesifik büyüme hızı ile belirlendiği gibi, tümörün büyümesini yavaşlattı. Farklı bir fare kohortunda test edilen PDX CRC 307M, HIS BRGS farelerinde aynı kombinasyon tedavisinden daha az etkilenmiştir. Tümör implantasyonundan önce kandaki genel insan hCD45-pozitif ve insan T-hücresi hCD3-pozitif kimerizmine dayanarak, her iki parametre de periferik bağışıklık sisteminde ve TIL'de tedavi edilen CRC 307P taşıyan farelerle kombinasyon halinde artmıştır, ancak CRC 307M modelinde artmamıştır.İnsan T hücrelerinin araştırılması, CRC 307P tümörlerinde daha fazla aktive olmuş T hücresi ortaya çıkardı, ancak kombinasyonla tedavi edilen farelerden gelen lenf ortaya çıkmadı. Ayrıca, kombinasyon tedavisi gören CRC 307P tümörlerinde daha fazla efektör bellek CD8-pozitif T-hücresi ve daha az TIM-3-pozitif T-hücresi vardı. Buna karşılık, bu fark CRC 307M modelinde belirtilmedi.Ayrıca, kombinasyonla tedavi edilen fareler arasında sitotoksik T hücresi popülasyonlarının frekanslarında herhangi bir değişiklik gözlenmemiştir, ancak tedavi edilmeyenlerde daha yüksek sitotoksik T hücreleri gözlenmiştir. Kombinasyon tedavisi, CRC 307P lenf organlarında veya tümörlerde Treg'lerin frekanslarını etkilemedi, ancak CRC 307M verileri Treg'lerin azalması eğilimini gösterdi. Tümör hücrelerinde immün ile ilgili değişiklikler akım sitometrisi kullanılarak yükseltildi.MHC sınıf I ve sınıf II'nin ekspresyonunun, kombinasyonla tedavi edilen HIS BRGS farelerinden eksize edilen CRC 307P tümör hücrelerinde arttığı gözlendi. CRC 307M modelinde, aynı ilaç tedavisi tümör hücrelerinde HLA sınıf II ekspresyonunu indüklemiştir. Benzer şekilde, kombinasyon tedavisi, EpCAM-pozitif CRC 307P tümör hücrelerinde PD-L1 ekspresyonunun artmasına neden oldu.Son olarak, immün yanıtların tümör büyümesi ile korelasyonları araştırıldı. Artmış CD4-pozitif T hücreleri, daha küçük tümör büyümesi ile anlamlı bir korelasyon gösterdi ve daha spesifik olarak, tedavi edilen HIS farelerinin kombinasyonundaki HLA-DR-pozitif aktive edilmiş T hücreleri. CD34 pozitif hücreleri izole ederken steril teknik, fareler son derece immün yetmezliklidir.Ortaya çıkan kimerizm, kordon kanı bağışçıları içinde ve arasında değişkendir ve T hücreleri en büyük varyasyona sahiptir. Sınırsız immünoterapi kombinasyonlarının yanı sıra mekanik ve ilaç dozlama kinetik çalışmaları, örneğin rollerini doğrulamak için CD8 T hücrelerinin silinmesi yapılabilir. Önemli olarak, ilaca bağlı toksisiteler de incelenebilir.İnsan immünoterapilerini kliniğe çevrilmek üzere test etmek için daha alakalı ve erişilebilir bir klinik öncesi model sağladı. Şu anda bu verilere dayanarak birkaç klinik çalışma devam etmektedir.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Pankreas Kanseri Floresan Ortotopik Fare Modeli

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

Tümör metastaz üzerinde Hipoksi Test Etkisinin Vivo Modeli

Hypoxia has been implicated in the metastasis of Ewing sarcoma (ES) by clinical observations and in vitro data, yet direct evidence for its pro-metastatic ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

Kolon-26 Karsinoma Tümör taşıyan Kanser Kaşeksi Araştırmaları Modeli Olarak Fare

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Tümör Engraftment insan Mantle hücreli lenfoma, Xenograft fare modeli

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

Osteoclastogenesis periferik kan monosit kültürlü meme kanseri hücre hatları ile birlikte gelen bir insan preklinik modelinin geliştirilmesi

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

Çevirisel İmmüno-onkoloji (I-O) Araştırma için İnsani Periferik Kan Mononükleer Hücre (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Modeli

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

İskemi Reperfüzyon Hasarı Ayarında Metastatik Karaciğer Tümörlerinin Murine Modeli

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Jinekolojik ve Meme Kanseri Tümörlerinden Kanser Kök Hücre Kürelerinin Alınması

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

Hasta Kaynaklı Glioma Kök Hücreleri Kullanarak GBM için Potansiyel Kombinasyon Tedavisini Belirlemek için Hızlı Tarama İş Akışı

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...

High-Resolution Ultrasonography for the Analysis of Orthotopic ATC Tumors in a Genetically Engineered Mouse Model

Genetiği Değiştirilmiş Bir Fare Modelinde Ortotopik ATC Tümörlerinin Analizi için Yüksek Çözünürlüklü Ultrasonografi

Anaplastic thyroid carcinoma (ATC) is associated with a poor prognosis and short median survival time, but no effective treatment improves the outcomes ...