Name: spontaneous murine model of anaplastic thyroid cancer
Uploaded: 2023-02-03T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Spontaneous Murine Model of Anaplastic Thyroid Cancer at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من قبل البرنامج الوطني لتطوير البحوث الرئيسية في الصين (2021YFA1301203) ؛ المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82103031 ، 82103918 ، 81973408 ، 82272933) ؛ مشروع حضانة البحوث السريرية ، مستشفى غرب الصين ، جامعة سيتشوان (22HXFH019) ؛ مشروع التعاون الدولي لمكتب العلوم والتكنولوجيا لبلدية تشنغدو (2020-GH02-00017-HZ) ؛ مؤسسة العلوم الطبيعية في سيتشوان ، 2022NSFSC1314 ؛ "مشروع 1.3.5 لتخصصات التميز ، مستشفى غرب الصين ، جامعة سيتشوان" (ZYJC18035 ، ZYJC18025 ، ZYYC20003 ، ZYJC18003) ؛ وبرنامج سيتشوان للعلوم والتكنولوجيا (2023YFS0098).

تم تنفيذ الإجراءات الحيوانية الموصوفة هنا بموافقة لجنة أخلاقيات الحيوان في مستشفى غرب الصين ، جامعة سيتشوان ، تشنغدو ، سيتشوان ، الصين.
1. تحريض الفئران TBP
<ol><li>تحديد النمط الجيني للفئران<ol><li>في حوالي 3 أسابيع ، افصل الفئران الإناث عن ذكور الفئران. في الوقت نفسه ، اس...

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2019.">Cancer statistics, 2019.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 69 (1), 7-34 (2019).</li><li>Parenti, R., Salvatorelli, L., Magro, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaplastic+thyroid+carcinoma:+Current+treatments+and+potential+new+therapeutic+options+with+emphasis+on+TfR1/CD71.">Anaplastic thyroid carcinoma: Current treatments and potential new therapeutic options with emphasis on TfR1/CD71.</a> International Journal of Endocrinology. 2014, 685396 (2014).</li><li>Baldini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+effects+of+the+urokinase+plasminogen+activator+inhibitor+WX-340+on+anaplastic+thyroid+cancer+cell+lines.">In vitro and in vivo effects of the urokinase plasminogen activator inhibitor WX-340 on anaplastic thyroid cancer cell lines.</a> International Journal of Molecular Sciences. 23 (7), 3724 (2022).</li><li>Haugen, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Thyroid+Association+Management+guidelines+for+adult+patients+with+thyroid+nodules+and+differentiated+thyroid+cancer:+what+is+new+and+what+has+changed.">American Thyroid Association Management guidelines for adult patients with thyroid nodules and differentiated thyroid cancer: what is new and what has changed.</a> Cancer. 123 (3), 372-381 (2015).</li><li>O'Neill, J. P., Shaha, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaplastic+thyroid+cancer.">Anaplastic thyroid cancer.</a> Oral Oncology. 49 (7), 702-706 (2013).</li><li>Simoes-Pereira, J., Capitao, R., Limbert, E., Leite, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaplastic+thyroid+cancer:+Clinical+picture+of+the+last+two+decades+at+a+single+oncology+referral+centre+and+novel+therapeutic+options.">Anaplastic thyroid cancer: Clinical picture of the last two decades at a single oncology referral centre and novel therapeutic options.</a> Cancers. 11 (8), 1188 (2019).</li><li>Fagin, J. A., Wells, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biologic+and+clinical+perspectives+on+thyroid+cancer.">Biologic and clinical perspectives on thyroid cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (11), 1054-1067 (2016).</li><li>Neff, R. L., Farrar, W. B., Kloos, R. T., Burman, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaplastic+thyroid+cancer.">Anaplastic thyroid cancer.</a> Endocrinology and Metabolism Clinics of North America. 37 (2), 525-538 (2008).</li><li>Lareau, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Droplet-based+combinatorial+indexing+for+massive-scale+single-cell+chromatin+accessibility.">Droplet-based combinatorial indexing for massive-scale single-cell chromatin accessibility.</a> Nature Biotechnology. 37 (8), 916-924 (2019).</li><li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+methylome+landscapes+of+mouse+embryonic+stem+cells+and+early+embryos+analyzed+using+reduced+representation+bisulfite+sequencing.">Single-cell methylome landscapes of mouse embryonic stem cells and early embryos analyzed using reduced representation bisulfite sequencing.</a> Genome Research. 23 (12), 2126-2135 (2013).</li><li>Mooijman, D., Dey, S. S., Boisset, J. -. C., Crosetto, N., van Oudenaarden, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+5hmC+sequencing+reveals+chromosome-wide+cell-to-cell+variability+and+enables+lineage+reconstruction.">Single-cell 5hmC sequencing reveals chromosome-wide cell-to-cell variability and enables lineage reconstruction.</a> Nature Biotechnology. 34 (8), 852-856 (2016).</li><li>Smallridge, R. C., Marlow, L. A., Copland, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaplastic+thyroid+cancer:+molecular+pathogenesis+and+emerging+therapies.">Anaplastic thyroid cancer: molecular pathogenesis and emerging therapies.</a> Endocrine-Related Cancer. 16 (1), 17-44 (2009).</li><li>Charles, R. -. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+genetically+engineered+mouse+models+of+papillary+and+anaplastic+thyroid+cancers:+enabling+translational+biology+for+patient+care+improvement.">Overview of genetically engineered mouse models of papillary and anaplastic thyroid cancers: enabling translational biology for patient care improvement.</a> Current Protocols in Pharmacology. 69, 1-14 (2015).</li><li>Tuttle, R. M., Haugen, B., Perrier, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Updated+American+joint+committee+on+cancer/tumor-nodemetastasis+staging+system+for+differentiated+and+anaplastic+thyroid+cancer+(8th+Edition):+What+changed+and+why.">Updated American joint committee on cancer/tumor-nodemetastasis staging system for differentiated and anaplastic thyroid cancer (8th Edition): What changed and why.</a> Thyroid. 27 (6), 751-756 (2017).</li><li>McFadden, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p53+constrains+progression+to+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+a+Braf-mutant+mouse+model+of+papillary+thyroid+cancer.">p53 constrains progression to anaplastic thyroid carcinoma in a Braf-mutant mouse model of papillary thyroid cancer.</a> Protocols of the National Academy of Sciences. 111 (16), 1600-1609 (2014).</li><li>Gunda, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinations+of+BRAF+inhibitor+and+anti-PD-1/PD-L1+antibody+improve+survival+and+tumour+immunity+in+an+immunocompetent+model+of+orthotopic+murine+anaplastic+thyroid+cancer.">Combinations of BRAF inhibitor and anti-PD-1/PD-L1 antibody improve survival and tumour immunity in an immunocompetent model of orthotopic murine anaplastic thyroid cancer.</a> British Journal of Cancer. 119 (10), 1223-1232 (2018).</li><li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+ultrasonography+for+the+analysis+of+orthotopic+ATC+tumors+in+a+genetically+engineered+mouse+model.">High-resolution ultrasonography for the analysis of orthotopic ATC tumors in a genetically engineered mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (188), e64615 (2022).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+recurrent+altered+genes+in+Chinese+patients+with+anaplastic+thyroid+cancer.">Novel recurrent altered genes in Chinese patients with anaplastic thyroid cancer.</a> The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 106 (4), 988-998 (2021).</li><li>Luo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pan-cancer+single-cell+analysis+reveals+the+heterogeneity+and+plasticity+of+cancer-associated+fibroblasts+in+the+tumor+microenvironment.">Pan-cancer single-cell analysis reveals the heterogeneity and plasticity of cancer-associated fibroblasts in the tumor microenvironment.</a> Nature Communications. 13 (1), 6619 (2022).</li><li>Luo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+dedifferentiation+of+thyroid+cancer+by+integrated+analysis.">Characterizing dedifferentiation of thyroid cancer by integrated analysis.</a> Science Advances. 7 (31), (2021).</li><li>Knostman, K. A. B., Jhiang, S. M., Capen, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+alterations+in+thyroid+cancer:+the+role+of+mouse+models.">Genetic alterations in thyroid cancer: the role of mouse models.</a> Veterinary Pathology. 44 (1), 1-14 (2007).</li><li>Kim, C. S., Zhu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+from+mouse+models+of+thyroid+cancer.">Lessons from mouse models of thyroid cancer.</a> Thyroid. 19 (12), 1317-1331 (2009).</li><li>Champa, D., Di Cristofano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+the+mouse.">Modeling anaplastic thyroid carcinoma in the mouse.</a> Hormones and Cancer. 6 (1), 37-44 (2015).</li><li>Cabanillas, M. E., Ryder, M., Jimenez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+therapy+for+advanced+thyroid+cancer:+kinase+inhibitors+and+beyond.">Targeted therapy for advanced thyroid cancer: kinase inhibitors and beyond.</a> Endocrine Reviews. 40 (6), 1573-1604 (2019).</li><li>Ljubas, J., Ovesen, T., Rusan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+review+of+phase+II+targeted+therapy+clinical+trials+in+anaplastic+thyroid+cancer.">A systematic review of phase II targeted therapy clinical trials in anaplastic thyroid cancer.</a> Cancers. 11 (7), 943 (2019).</li><li>Huang, N. -. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+update+of+the+appropriate+treatment+strategies+in+anaplastic+thyroid+cancer:+a+population-based+study+of+735+patients.">An update of the appropriate treatment strategies in anaplastic thyroid cancer: a population-based study of 735 patients.</a> International Journal of Endocrinology. 2019, 8428547 (2019).</li><li>Subbiah, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dabrafenib+and+trametinib+treatment+in+patients+with+locally+advanced+or+metastatic+BRAF+V600-mutant+anaplastic+thyroid+cancer.">Dabrafenib and trametinib treatment in patients with locally advanced or metastatic BRAF V600-mutant anaplastic thyroid cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 36 (1), 7-13 (2018).</li><li>Baldini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+selective+inhibitors+of+Aurora+kinases+on+anaplastic+thyroid+carcinoma+cell+lines.">Effects of selective inhibitors of Aurora kinases on anaplastic thyroid carcinoma cell lines.</a> Endocrine-Related Cancer. 21 (5), 797-811 (2014).</li></ol>

الخطوات الحاسمة ضمن بروتوكول تشريح ورم الغدة الدرقية أثناء التشريح ، يجب فهم الموقع التشريحي للغدة الدرقية بشكل صحيح. الغدة الدرقية هي غدة على شكل فراشة تقع على الجانب الظهري من الغدة تحت الفك السفلي بالقرب من غضروف الغدة الدرقية والقصبة الهوائية. أثناء العملية ، تم تجنب قطع شر...

سرطان الغدة الدرقية هو واحد من الأورام الخبيثة الغدد الصماءالأكثر شيوعا 1 ، والتي تنشأ من ظهارة الغدة الدرقية. في السنوات الأخيرة ، زاد معدل الإصابة بسرطان الغدة الدرقية بسرعة في جميع أنحاء العالم2. يمكن تقسيم سرطان الغدة الدرقية إلى أنواع متميزة وفقا لدرجة تمايز الخلايا السرطانية. على أساس السلوك السريري والأنسجة ، تنقسم سرطانات الغدة الدرقية إلى سرطانات متمايزة جيدا ، بما في ذلك سرطان الغدة الدرقية الحليمي (PTC) وسرطان الغدة الدرقية الجريبي (FTC) ، وسرطان ضعيف التمايز (PDTC) ، وسرطان الغدة الدرقية غير المتمايز أو الكشمي (ATC) 3. على عكس PTC ، وهو نوع شائع مع سلوك معتدل وتشخيص أفضل4 ، ATC هو ورم خبيث نادر وعدواني للغاية يمثل 2٪ إلى 3٪ من جميع أورام الغدة الدرقية5. على الرغم من أن ATC نادر الحدوث ، إلا أنه مسؤول عن حوالي 50٪ من الوفيات المرتبطة بسرطان الغدة الدرقية ، مع بقاء كئيب (6-8 أشهر)6,7. يتم تشخيص أكثر من 50٪ من حالات ATC على أنها ورم خبيث في الرئة8. بالإضافة إلى الطبيعة العدوانية ل ATC ، تم تطوير علاج فعال محدود في العيادة. لذلك ، فإن مرضى ATC لديهم تشخيص قاتم9،10،11. هذا يشير إلى أن هناك حاجة ماسة إلى مزيد من الدراسات المتعمقة حول الآليات الجزيئية الكامنة وراء تطوير ATC والعلاج.
تكوين الورم في ATC هو عملية ديناميكية غير متمايزة. أعاقت صعوبة جمع عينات الورم البشري في كل مرحلة من مراحل الدراسات السريرية فهم آلية التطور من السرطانات المتمايزة جيدا إلى السرطانات غير المتمايزة. في المقابل ، فإن استخدام نماذج ATC الفئران (mATC) يفضل جمع عينات mATC في دورة تكوين الورم بأكملها. لذلك ، يمكننا أن نفهم بشكل أفضل آليات تكوين الورم من خلال تحليل العملية الديناميكية غير المتمايزة. بالإضافة إلى ذلك ، ساهم عدم تجانس عينات ATC السريرية أيضا في صعوبة فهم الآلية الجزيئية. ومع ذلك ، تشترك الفئران في نفس الخلفيات الجينية وتم الحفاظ عليها في بيئات معيشية مماثلة ، مما يضمن اتساق كل ورم. هذا يسهل استكشاف الدور العام لتطوير ATC12،13،14. بالإضافة إلى ذلك ، mATC هو نموذج ورم في الموقع يمكنه استعادة تأثير الموقع التشريحي والبيئة المكروية الخاصة بالأنسجة. على هذا النحو ، بالمقارنة مع الفئران التي تعاني من نقص المناعة شائعة الاستخدام ، فإن mATC هو نموذج فأر عفوي مع نظام مناعي سليم وبيئة دقيقة مناعية.
لذلك ، قمنا ببناء mATC المستحث بشكل مشروط مع سلالة C57BL / 6 ، وهو نموذج فأر قادر على إعادة إنتاج السمات المرضية لسرطان الغدة الدرقية غير المتمايز. بناء على هذا النموذج ، قدمنا لمحة موجزة عن الأساس الجزيئي وأفكار البناء والسمات المرضية وتطبيقات mATC. بالإضافة إلى ذلك ، لاحظنا وأبلغنا عن نمو الورم ، ووقت البقاء على قيد الحياة ، ورم خبيث ، والسمات المرضية ل mATC. نعتقد أن هذه ستكون نظرة عامة معلوماتية لمساعدة الباحثين الآخرين في استخدام هذا النموذج بشكل أسهل.
قمنا ببناء نموذج mATC الشرطي القابل للحث ، كما أبلغ عنه لأول مرة McFadden15 ؛ في البداية ، قمنا ببناء الفئران: TPO-cre / ERT2 و Braf flox / wt و Trp53flox / wt. على وجه التحديد ، تضمنت الفئران TPO-cre / ERT2 مروج بيروكسيديز الغدة الدرقية البشري (TPO) (مروج خاص بالغدة الدرقية) ، مما أدى إلى التعبير عن جين اندماج cre-ERT2 (وهو كري recombinase يندمج في مجال ربط ليجند مستقبلات هرمون الاستروجين البشري). عادة ما يقتصر Cre-ERT2 على السيتوبلازم ويدخل النواة فقط عند تعرضه لعقار تاموكسيفين ، مما يحفز cre على ممارسة نشاط الإنزيم المؤتلف. عندما يتم تهجين الفئران مع الفئران التي تحمل تسلسلات loxP المحاطة ، بعد تحريض عقار تاموكسيفين ، تقوم إعادة التركيب بوساطة الإنشاء بحذف التسلسلات المتخبطة في خلايا الغدة الدرقية لتحقيق الغرض من ضرب أو طرق جينات معينة.
بالإضافة إلى ذلك ، فإن الفئران Braf flox / wt هي أليل غير قابل للضرب من Braf البشري بناء على نظام cre-loxP. يتم ترميز نسخة Brafflox / wt murine بواسطة exons الداخلية 1-14 و loxP المحاطة ب exons البشرية 15-18. بعد الاستئصال بوساطة الإنشاء للمناطق المتخبطة ، يتم استخدام exon 15 الطافر (المعدل باستبدال الأحماض الأمينية V600E المرتبط ب BrafV600E النشط بشكل أساسي في السرطانات البشرية) والإكسونات الداخلية 16-18 لتوليد النصوص. علاوة على ذلك ، فإن الفئران Trp53 flox / wt هي أليلات بالضربة القاضية من Trp53 البشري ولها مواقع loxP تحيط بالإكسونات 2-10 من Trp53. عند التقاطع مع الفئران مع cre recombinase ، فإن إعادة التركيب بوساطة cre تحذف التسلسل المتخبط لضرب Trp53. بعد ذلك ، تم تهجين الفئران TPO-cre / ERT2 و Braf flox / w و Trp53flox / wt للحصول على TB (TPO-cre/ ERT2; براففلوكس / بالوزن) الفئران و TBP (TPO-cre / ERT2; براففلوكس / بالوزن ؛ Trp53فلوكس / بالوزن) الفئران ، والتي يمكن استخدامها لتوليد PTC و ATC. بعد حوالي 8 أسابيع ، تم تحفيز الفئران عن طريق إعطاء 150 مجم / كجم من عقار تاموكسيفين داخل الصفاق (i.p) مذاب في زيت الذرة لإدارتين. يمكن مراقبة نمو الورم عن طريق التصوير بالموجات فوق الصوتية عالية التردد (تم تسجيل النقطة الأولى للتصوير بالموجات فوق الصوتية في اليوم 0). تم إجراء التصوير بالموجات فوق الصوتية الأولية بعد 40 يوما من إدخال عقار تاموكسيفين.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100x&#160;Citrate antigen retrieval solution (PH 6.0)</td>
			<td>MXB</td>
			<td>Cat# MVS-0101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50x EDTA antigen retrieval solution(pH 9.5)</td>
			<td>ZSGB-GIO</td>
			<td>Cat# ZLI-9071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brafflox/wt mice</td>
			<td>Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caspase-3</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>Cat# AC033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD8</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>Cat# 98941; RRID:AB_2756376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD206</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>Cat# 24595; RRID:AB_2892682</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chamber for anesthesia induction</td>
			<td>RWDlifescience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enhanced DAB chromogenic kit</td>
			<td>MXB</td>
			<td>Cat# DAB-2031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin staining solution</td>
			<td>ZSGB-GIO</td>
			<td>Cat# ZLI-9613</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F4/80</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Cat# 100790; RRID:AB_10675322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foxp3</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>Cat# 12653; RRID:AB_2797979</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fully enclosed tissue dehydrator</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>ASP300S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin staining solution</td>
			<td>ZSGB-GIO</td>
			<td>Cat# ZLI-9610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoCore Arcadia fully automatic tissue embedding machine</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ki67</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>Cat# AF1738</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotating Slicer</td>
			<td>RWDlifescience</td>
			<td>&#160;Minux S700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPlink detection kits (Biotin-Streptavidin HRP Detection Systems)</td>
			<td>ZSGB-GIO</td>
			<td>Cat# SP-9001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TPO-cre/ERT2 mice</td>
			<td>Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trp53flox/wt mice</td>
			<td>Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cell crusher</td>
			<td>Ningbo Xinyi Ultrasound Equipment Co., Ltd</td>
			<td>JY92-IIN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound gel</td>
			<td>Keppler</td>
			<td>KL-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound system</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spontaneous murine model of anaplastic thyroid cancer

سرطان الغدة الدرقية الكشمي (ATC) هو ورم خبيث نادر ولكنه مميت مع تشخيص كئيب. هناك حاجة ملحة لمزيد من البحث المتعمق حول التسرطن وتطوير ATC ، وكذلك الأساليب العلاجية ، حيث يتم استنفاد العلاجات القياسية بشكل أساسي في مرضى ATC. ومع ذلك ، فقد أعاق الانتشار المنخفض الدراسات السريرية الشاملة وجمع عينات الأنسجة ، لذلك لم يتم إحراز تقدم يذكر في إنشاء علاجات فعالة. استخدمنا الهندسة الوراثية لإنشاء نموذج فأر ATC قابل للتحفيز المشروط (mATC) في خلفية C57BL / 6. تم التنميط الجيني لنموذج الفئران ATC بواسطة TPO-cre / ERT2. برافCA / بالوزن ؛ Trp53ex2-10 / ex2-10 والناجم عن الحقن داخل الصفاق مع عقار تاموكسيفين. باستخدام نموذج الفئران ، قمنا بالتحقيق في ديناميكيات الورم (تراوح حجم الورم من 12.4 مم 2 إلى 32.5 مم2 بعد 4 أشهر من التحريض) ، والبقاء على قيد الحياة (كان متوسط فترة البقاء على قيد الحياة 130 يوما) ، وورم خبيث (حدثت نقائل الرئة في 91.6٪ من الفئران) منحنيات والسمات المرضية (تتميز ب Cd8 و Foxp3 و F4 / 80 و Cd206 و Ki67 و Caspase-3 تلطيخ كيميائي مناعي). أشارت النتائج إلى أن mATC العفوي يمتلك ديناميكيات ورم متشابهة للغاية وبيئة دقيقة مناعية لأورام ATC البشرية. في الختام ، مع التشابه الكبير في السمات الفيزيولوجية المرضية والأنماط الجينية الموحدة ، حل نموذج mATC النقص في أنسجة ATC السريرية وعدم تجانس العينة إلى حد ما. لذلك ، فإنه سيسهل الآلية والدراسات الانتقالية ل ATC ويوفر نهجا للتحقيق في إمكانات العلاج للعقاقير الجزيئية الصغيرة وعوامل العلاج المناعي ل ATC.

لقد حثثنا mATC على التحقيق في نمو الورم ، ووقت بقاء الفئران ، والخصائص المرضية. بعد الحث ، تم التضحية بالفئران على الفور ، وتم جمع العينات (الغدة الدرقية والرئة والكبد) بمجرد العثور على أحد الحالات التالية: 1) الضائقة التنفسية الناجمة عن ضغط الورم. 2) انخفاض الشهية والنطق غير الطبيعي. 3) الخمول ب...

Watch this Scientific Journal Video about Spontaneous Murine Model of Anaplastic Thyroid Cancer at JoVE.com

Spontaneous Murine Model of Anaplastic Thyroid Cancer

هنا ، نقدم خط أنابيب قياسي للحصول على أورام ATC الفئران بواسطة نماذج الفئران العفوية المعدلة وراثيا. علاوة على ذلك ، نقدم ديناميات الورم والمعلومات المرضية حول الآفات الأولية والمنتشرة. سيساعد هذا النموذج الباحثين على فهم تكوين الأورام وتسهيل اكتشاف الأدوية.

نموذج الفئران العفوية لسرطان الغدة الدرقية الكشمي

Anaplastic thyroid cancer (ATC) is a rare but lethal malignancy with a dismal prognosis. There is an urgent need for more in-depth research on the ...

نقدم خط أنابيب قياسي للحصول على أورام MATC وتقديم ديناميكيات الورم والمعلومات المرضية. ستساعد هذه الوحدة الباحثين على فهم تكوين الأورام السرطانية وتسهيل اكتشاف الأدوية. يسهل MATC جمع عينات MATC في دورة تكوين الأورام بأكملها ، وكل منها عبارة عن نموذج مرآة عفوية ، مع نظام المناعة الكامل والبيئة المكروية المناعية.يمكن استخدام MATC لدراسة آثار وظائف جينية محددة على ATC ، وفهم آليات تطور ورم الغدة الدرقية ، وفي النهاية تحسين تشخيص مرضى ATC. للبدء ، قم بوزن عقار تاموكسيفين وحله في 15 مل من زيت الذرة عن طريق الموجات فوق الصوتية بتركيز 20 ملليغرام لكل ملليلتر. ثم قم بتخزينه في وعاء بني عند أربع درجات مئوية.في حوالي ثمانية أسابيع ، قم بوزن الفئران بموازين إلكترونية ثم قم بإعطاء عقار تاموكسيفين داخل الصفاق مرتين في فترة أسبوع واحد. بعد تحضير أدوات التشريح ومحلول تثبيت أنسجة الماوس ، املأ طبقا نظيفا طوله 10 سم بحوالي 10 ملليلتر من برنامج تلفزيوني معقم لتخزين الأنسجة مؤقتا ، ولغسل الدم من سطح الأنسجة. لاستخراج الغدة الدرقية ، ضع الماوس الرحيم على لوحة التشريح.بعد تطهير منطقة الرقبة ، استخدم المقص وملقط معقمة. قم بعمل شق صغير فوق مركز الترقوة واستمر عند خط الوسط حتى الفم. حدد موقع الغدة تحت الفك السفلي وقم بإزالتها لكشف الموقع التشريحي للغدة الدرقية ، والذي يقع بالقرب من غضروف الغدة الدرقية والقصبة الهوائية.بمجرد تحديد موقع الغدة الدرقية ، يتم تشريحها بعناية من بقية منطقة الرقبة باستخدام مقص معقم ، ووضعها في الطبق المعد مسبقا الذي يحتوي على برنامج تلفزيوني معقم. إزالة الدم من سطح أنسجة الغدة الدرقية ، وباستخدام مقص معقم ، قم بقطع القصبة الهوائية بعناية. ثم وضع أنسجة الغدة الدرقية على قطعة قماش معقمة وقياس حجم الفص الأيسر والأيمن من الغدة الدرقية باستخدام ملاقط الورنية.باستخدام شفرة معقمة ، قسم الفصين الأيسر والأيمن من الغدة الدرقية إلى قسمين. ضع جزءا في ملليلتر من محلول بارافورمالدهيد 4٪ للتثبيت وآخر في النيتروجين السائل للحفظ. لاستخراج الرئة والكبد ، قرصة فوق قضيب الماوس مباشرة بعد تطهير المنطقة.ثم قم بعمل شق صغير وقطع على طول خط الوسط للبطن إلى العظم تحت الترقوة. فضح تجويف البطن. بعد تحديد موقع الكبد في الجزء العلوي من البطن ، قم بإزالته بعناية ووضعه في طبق جديد يحتوي على برنامج تلفزيوني معقم.مراقبة بشكل صارخ وحساب ورم خبيث في الرئة والكبد ، تليها الحصول على صورة. بشفرة معقمة ، قسم أنسجة الرئة والكبد إلى قسمين. كما هو موضح سابقا ، قم بإصلاح جزء واحد والحفاظ على الجزء الآخر في النيتروجين السائل.تم رسم منحنى نمو الورم لمراقبة التغيير الديناميكي لحجم الورم. نمت الأورام ببطء في المرحلة المبكرة ، وأصبحت أسرع بشكل كبير في المرحلة المتأخرة. من ناحية أخرى ، تم رسم منحنى البقاء على قيد الحياة بناء على وقت البقاء المسجل.كان متوسط بقاء MATC 130 يوما. بالإضافة إلى ذلك ، تم العثور على ما يقرب من 92 ٪ ورم خبيث الرئة في معظم MATC. في تلطيخ HE للأورام الأولية وأنسجة الرئة النقيلي في MATC ، أظهرت الأنسجة المستحثة لمدة شهر واحد ميزات صلبة غير مكتملة وتعايش الهياكل المسامية والخلايا الخبيثة ، في حين اختفت الهياكل المسامية للغدة الدرقية وتصلب الورم تماما بعد شهرين من التحريض.كشف الورم الرئيسي أن الخلايا السرطانية كانت متنوعة شكليا ، مع خلايا عملاقة متعددة الأشكال وخلايا على شكل مغزل. علاوة على ذلك ، أظهر تلطيخ HE لأنسجة الرئة النقيلي أن أنسجة الرئة الطبيعية كانت عبارة عن بنية شبكية ذات هياكل سنخية واضحة ومساحات هوائية. ومع ذلك ، أظهرت النقائل الرئوية فقدان البنية الشبكية الطبيعية ، وسماكة تجويف الهواء ، وحمة الرئة.وفي الوقت نفسه ، أظهر التلوين المناعي الكيميائي لورم MATC بأجسام مضادة مختلفة خلايا سرطانية تكاثرية عالية التكاثر ، وتسلل الخلايا الليمفاوية ، وتسلل واسع النطاق للخلايا النخاعية ، وهو ما كان متسقا مع العينات السريرية. أثناء التشريح ، يجب فهم الموقع التشريحي للغدة الدرقية بشكل صحيح. يتم وضع الغدة الدرقية بالقرب من غضروف الغدة الدرقية والقصبة الهوائية.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

فأري موديل التجريبية التنمية الورم الأصلي والبريتوني ورم خبيث<em&gt; عبر</em&gt; مثلي تلقيح مع خلايا المبيض سرطان

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

الإجراءات الجراحية ومنهجية لنموذج الفئران قبل السريرية<em&gt; دي نوفو</em&gt; سرطان الثديي الانبثاث

A rate-limiting aspect of transgenic mouse models of mammary adenocarcinoma is that primary tumor burden in mammary tissue typically defines study ...

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

والفئران مثلي المثانة نموذج ورم والورم نظام لكشف

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

نموذج الفأر من التعب المستحث بواسطة الطرفية تشعيع

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

نموذج عصب الوركي مورين في فيفو غزو Perineural

Cancer cells invade nerves through a process termed perineural invasion (PNI), in which cancer cells proliferate and migrate in the nerve ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

نموذج أورثوتوبيك طرحه ونيون مورين سينجينيك المعتمدة على الاندروجين والاخصاء مقاومة سرطان البروستاتا

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

نماذج Xenograft المتوارثية المستمدة من المريض لسرطان الخلايا البولية البشرية ونمو ورم سرطان القولون والمستقيم وورم الانبثاث العفوي

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Performing Data Mining And Integrative Analysis Of Biomarker in Breast Cancer Using Multiple Publicly Accessible Databases

أداء استخراج البيانات والتحليل التكاملي لمؤشر الحيوية في سرطان الثدي باستخدام قواعد بيانات متعددة يمكن الوصول اليها علنا

In recent years, emerging databases were designed to lower the barriers for approaching the intricate cancer genomic datasets, thereby, facilitating ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

نموذج مورين من أورام الكبد النقيلي في وضع إصابة نقص تروية التسريب

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

A Murine Ommaya Xenograft Model to Study Direct-Targeted Therapy of Leptomeningeal Disease

نموذج مورين أومايا زينوغرافت لدراسة العلاج المباشر المستهدف لمرض اللبتومينينجال

Leptomeningeal disease (LMD) is an uncommon type of central nervous system (CNS) metastasis to the cerebral spinal fluid (CSF). The most common cancers ...