Name: spontaneous murine model of anaplastic thyroid cancer
Uploaded: 2023-02-03T13:20:00
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Este trabajo fue apoyado por el Programa Nacional de Desarrollo de Investigación Clave de China (2021YFA1301203); la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (82103031, 82103918, 81973408, 82272933); el Proyecto de Incubación de Investigación Clínica, Hospital de China Occidental, Universidad de Sichuan (22HXFH019); el Proyecto de Cooperación Internacional de la Oficina Municipal de Ciencia y Tecnología de Chengdu (2020-GH02-00017-HZ); Fundación de Ciencias Naturales de Sichuan, 2022NSFSC1314; el "1.3.5 proyecto para disciplinas de excelencia, Hospital de China Occidental, Universidad de Sichuan" (ZYJC18035, ZYJC18025, ZYYC20003, ZYJC18003); y Programa de Ciencia y Tecnología de Sichuan (2023YFS0098).

Los procedimientos con animales descritos aquí se realizaron con la aprobación del Comité de Ética Animal del Hospital de China Occidental, Universidad de Sichuan, Chengdu, Sichuan, China.
1. Inducción de ratones TBP
<ol><li>Identificar el genotipo de los ratones<ol><li>Alrededor de las 3 semanas, separe los ratones hembra de los ratones machos. Al mismo tiempo, use una abrazadera de marca auricular para arreglar una marca auricular. Coloque las marcas auriculares en la...

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2019.">Cancer statistics, 2019.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 69 (1), 7-34 (2019).</li><li>Parenti, R., Salvatorelli, L., Magro, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaplastic+thyroid+carcinoma:+Current+treatments+and+potential+new+therapeutic+options+with+emphasis+on+TfR1/CD71.">Anaplastic thyroid carcinoma: Current treatments and potential new therapeutic options with emphasis on TfR1/CD71.</a> International Journal of Endocrinology. 2014, 685396 (2014).</li><li>Baldini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+effects+of+the+urokinase+plasminogen+activator+inhibitor+WX-340+on+anaplastic+thyroid+cancer+cell+lines.">In vitro and in vivo effects of the urokinase plasminogen activator inhibitor WX-340 on anaplastic thyroid cancer cell lines.</a> International Journal of Molecular Sciences. 23 (7), 3724 (2022).</li><li>Haugen, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Thyroid+Association+Management+guidelines+for+adult+patients+with+thyroid+nodules+and+differentiated+thyroid+cancer:+what+is+new+and+what+has+changed.">American Thyroid Association Management guidelines for adult patients with thyroid nodules and differentiated thyroid cancer: what is new and what has changed.</a> Cancer. 123 (3), 372-381 (2015).</li><li>O'Neill, J. P., Shaha, A. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biologic+and+clinical+perspectives+on+thyroid+cancer.">Biologic and clinical perspectives on thyroid cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (11), 1054-1067 (2016).</li><li>Neff, R. L., Farrar, W. B., Kloos, R. T., Burman, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaplastic+thyroid+cancer.">Anaplastic thyroid cancer.</a> Endocrinology and Metabolism Clinics of North America. 37 (2), 525-538 (2008).</li><li>Lareau, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Droplet-based+combinatorial+indexing+for+massive-scale+single-cell+chromatin+accessibility.">Droplet-based combinatorial indexing for massive-scale single-cell chromatin accessibility.</a> Nature Biotechnology. 37 (8), 916-924 (2019).</li><li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+methylome+landscapes+of+mouse+embryonic+stem+cells+and+early+embryos+analyzed+using+reduced+representation+bisulfite+sequencing.">Single-cell methylome landscapes of mouse embryonic stem cells and early embryos analyzed using reduced representation bisulfite sequencing.</a> Genome Research. 23 (12), 2126-2135 (2013).</li><li>Mooijman, D., Dey, S. S., Boisset, J. -. C., Crosetto, N., van Oudenaarden, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+5hmC+sequencing+reveals+chromosome-wide+cell-to-cell+variability+and+enables+lineage+reconstruction.">Single-cell 5hmC sequencing reveals chromosome-wide cell-to-cell variability and enables lineage reconstruction.</a> Nature Biotechnology. 34 (8), 852-856 (2016).</li><li>Smallridge, R. C., Marlow, L. A., Copland, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaplastic+thyroid+cancer:+molecular+pathogenesis+and+emerging+therapies.">Anaplastic thyroid cancer: molecular pathogenesis and emerging therapies.</a> Endocrine-Related Cancer. 16 (1), 17-44 (2009).</li><li>Charles, R. -. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+genetically+engineered+mouse+models+of+papillary+and+anaplastic+thyroid+cancers:+enabling+translational+biology+for+patient+care+improvement.">Overview of genetically engineered mouse models of papillary and anaplastic thyroid cancers: enabling translational biology for patient care improvement.</a> Current Protocols in Pharmacology. 69, 1-14 (2015).</li><li>Tuttle, R. M., Haugen, B., Perrier, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Updated+American+joint+committee+on+cancer/tumor-nodemetastasis+staging+system+for+differentiated+and+anaplastic+thyroid+cancer+(8th+Edition):+What+changed+and+why.">Updated American joint committee on cancer/tumor-nodemetastasis staging system for differentiated and anaplastic thyroid cancer (8th Edition): What changed and why.</a> Thyroid. 27 (6), 751-756 (2017).</li><li>McFadden, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p53+constrains+progression+to+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+a+Braf-mutant+mouse+model+of+papillary+thyroid+cancer.">p53 constrains progression to anaplastic thyroid carcinoma in a Braf-mutant mouse model of papillary thyroid cancer.</a> Protocols of the National Academy of Sciences. 111 (16), 1600-1609 (2014).</li><li>Gunda, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinations+of+BRAF+inhibitor+and+anti-PD-1/PD-L1+antibody+improve+survival+and+tumour+immunity+in+an+immunocompetent+model+of+orthotopic+murine+anaplastic+thyroid+cancer.">Combinations of BRAF inhibitor and anti-PD-1/PD-L1 antibody improve survival and tumour immunity in an immunocompetent model of orthotopic murine anaplastic thyroid cancer.</a> British Journal of Cancer. 119 (10), 1223-1232 (2018).</li><li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+ultrasonography+for+the+analysis+of+orthotopic+ATC+tumors+in+a+genetically+engineered+mouse+model.">High-resolution ultrasonography for the analysis of orthotopic ATC tumors in a genetically engineered mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (188), e64615 (2022).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+recurrent+altered+genes+in+Chinese+patients+with+anaplastic+thyroid+cancer.">Novel recurrent altered genes in Chinese patients with anaplastic thyroid cancer.</a> The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 106 (4), 988-998 (2021).</li><li>Luo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pan-cancer+single-cell+analysis+reveals+the+heterogeneity+and+plasticity+of+cancer-associated+fibroblasts+in+the+tumor+microenvironment.">Pan-cancer single-cell analysis reveals the heterogeneity and plasticity of cancer-associated fibroblasts in the tumor microenvironment.</a> Nature Communications. 13 (1), 6619 (2022).</li><li>Luo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+dedifferentiation+of+thyroid+cancer+by+integrated+analysis.">Characterizing dedifferentiation of thyroid cancer by integrated analysis.</a> Science Advances. 7 (31), (2021).</li><li>Knostman, K. A. B., Jhiang, S. M., Capen, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+alterations+in+thyroid+cancer:+the+role+of+mouse+models.">Genetic alterations in thyroid cancer: the role of mouse models.</a> Veterinary Pathology. 44 (1), 1-14 (2007).</li><li>Kim, C. S., Zhu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+from+mouse+models+of+thyroid+cancer.">Lessons from mouse models of thyroid cancer.</a> Thyroid. 19 (12), 1317-1331 (2009).</li><li>Champa, D., Di Cristofano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+the+mouse.">Modeling anaplastic thyroid carcinoma in the mouse.</a> Hormones and Cancer. 6 (1), 37-44 (2015).</li><li>Cabanillas, M. E., Ryder, M., Jimenez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+therapy+for+advanced+thyroid+cancer:+kinase+inhibitors+and+beyond.">Targeted therapy for advanced thyroid cancer: kinase inhibitors and beyond.</a> Endocrine Reviews. 40 (6), 1573-1604 (2019).</li><li>Ljubas, J., Ovesen, T., Rusan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+review+of+phase+II+targeted+therapy+clinical+trials+in+anaplastic+thyroid+cancer.">A systematic review of phase II targeted therapy clinical trials in anaplastic thyroid cancer.</a> Cancers. 11 (7), 943 (2019).</li><li>Huang, N. -. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+update+of+the+appropriate+treatment+strategies+in+anaplastic+thyroid+cancer:+a+population-based+study+of+735+patients.">An update of the appropriate treatment strategies in anaplastic thyroid cancer: a population-based study of 735 patients.</a> International Journal of Endocrinology. 2019, 8428547 (2019).</li><li>Subbiah, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dabrafenib+and+trametinib+treatment+in+patients+with+locally+advanced+or+metastatic+BRAF+V600-mutant+anaplastic+thyroid+cancer.">Dabrafenib and trametinib treatment in patients with locally advanced or metastatic BRAF V600-mutant anaplastic thyroid cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 36 (1), 7-13 (2018).</li><li>Baldini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+selective+inhibitors+of+Aurora+kinases+on+anaplastic+thyroid+carcinoma+cell+lines.">Effects of selective inhibitors of Aurora kinases on anaplastic thyroid carcinoma cell lines.</a> Endocrine-Related Cancer. 21 (5), 797-811 (2014).</li></ol>

Pasos críticos dentro del protocolo para la disección de tumores tiroideos Durante la disección, la ubicación anatómica de la glándula tiroides debe entenderse correctamente. La glándula tiroides es una glándula en forma de mariposa ubicada en el lado dorsal de la glándula submandibular cerca del cartílago tiroides y la tráquea. Durante el procedimiento, se evitó cuidadosamente cortar las arterias sanguíneas en ambos lados del cuello.
Modificación y so...

El cáncer de tiroides es una de las neoplasias endocrinas más comunes1, que se origina en el epitelio tiroideo. En los últimos años, la incidencia de cáncer de tiroides ha aumentado rápidamente en todo el mundo2. El cáncer de tiroides se puede dividir en distintos tipos según el grado de diferenciación de las células tumorales. Sobre la base del comportamiento clínico y la histología, los carcinomas de tiroides se dividen en carcinomas bien diferenciados, incluyendo carcinoma papilar de tiroides (PTC) y carcinoma folicular de tiroides (FTC), carcinoma pobremente diferenciado (PDTC) y carcinoma indiferenciado o anaplásico de tiroides (ATC)3. A diferencia del PTC, que es un tipo común con comportamiento leve y mejor pronóstico4, el ATC es una neoplasia maligna rara y altamente agresiva que representa del 2% al 3% de todos los tumores tiroideos5. Aunque el ATC es raro, es responsable de aproximadamente el 50% de las muertes relacionadas con el cáncer de tiroides, con una supervivencia sombría (6-8 meses)6,7. Más del 50% de los casos de ATC se diagnostican como metástasis pulmonar8. Además de la naturaleza agresiva del ATC, se ha desarrollado un tratamiento efectivo limitado en la clínica. Por lo tanto, los pacientes con ATC tienen un pronóstico sombrío 9,10,11. Esto sugiere que se necesitan urgentemente más estudios en profundidad sobre los mecanismos moleculares subyacentes al desarrollo del ATC y el tratamiento.
La tumorigénesis del ATC es un proceso dinámico desdiferenciado. La dificultad para recolectar muestras de tumores humanos en cada etapa de los estudios clínicos ha dificultado la comprensión del mecanismo de desarrollo de carcinomas bien diferenciados a indiferenciados. En contraste, el uso de modelos murinos de ATC (mATC) favorece la recolección de muestras de mATC en todo el curso de la tumorigénesis. Por lo tanto, podemos comprender mejor los mecanismos de formación de tumores analizando el proceso dinámico desdiferenciado. Además, la heterogeneidad de las muestras clínicas de ATC también ha contribuido a la dificultad de comprender el mecanismo molecular. Sin embargo, los ratones compartían los mismos antecedentes genéticos y se mantuvieron en entornos de vida similares, asegurando la consistencia de cada tumor. Esto facilita explorar el papel generalizado del desarrollo de ATC12,13,14. Además, mATC es un modelo tumoral in situ que puede restaurar la influencia de la ubicación anatómica y el microambiente específico del tejido. Como tal, en comparación con los ratones inmunodeficientes de uso común, mATC es un modelo murino espontáneo con un sistema inmune intacto y un microambiente inmune.
Por lo tanto, construimos mATC inducido condicionalmente con la cepa C57BL/6, que es un modelo murino capaz de reproducir las características patológicas del carcinoma tiroideo desdiferenciado. Con base en este modelo, dimos una breve descripción de las bases moleculares, ideas de construcción, características patológicas y aplicaciones de mATC. Además, observamos e informamos el crecimiento tumoral, el tiempo de supervivencia, la metástasis y las características patológicas de mATC. Creemos que esta será una visión general informática para ayudar a otros investigadores a usar este modelo más fácilmente.
Construimos un modelo mATC inducible condicional, como se informó por primera vez en McFadden15; inicialmente, construimos ratones: TPO-cre / ERT2, Braf flox / wt y Trp53flox / wt. Específicamente, los ratones TPO-cre / ERT2 incluyeron el promotor de la peroxidasa tiroidea humana (TPO) (un promotor específico de la tiroides), impulsando la expresión de un gen de fusión cre-ERT2 (una recombinasa cre fusionada a un dominio de unión al ligando del receptor de estrógeno humano). Cre-ERT2 generalmente se limita al citoplasma y entra en el núcleo solo cuando se expone al tamoxifeno, que induce a cre a ejercer actividad enzimática recombinante. Cuando los ratones se cruzan con ratones portadores de secuencias flanqueadas por loxP, después de la inducción de tamoxifeno, la recombinación mediada por cre elimina las secuencias floxed en las células tiroideas para lograr el propósito de eliminar o golpear genes específicos.
Además, los ratones Braf flox/wt son un alelo knock-in de Braf humano basado en el sistema cre-loxP. La transcripción murina Brafflox/wt está codificada por los exones endógenos 1-14 y los exones humanos flanqueados por loxP 15-18. Después de la escisión mediada por cre de las regiones floxed, el exón mutante 15 (modificado con una sustitución de aminoácidos V600E vinculada con BrafV600E constitutivamente activo en cánceres humanos) y los exones endógenos 16-18 se utilizan para generar las transcripciones. Además, los ratones Trp53 flox/wt son alelos knockout de Trp53 humano y tienen sitios loxP flanqueando los exones 2-10 de Trp53. Cuando se cruza con ratones con una recombinasa cre, la recombinación mediada por cre elimina la secuencia floxed para eliminar Trp53. Luego, se cruzaron ratones TPO-cre/ERT2, Braf flox/w y Trp53flox/wt para obtener TB (TPO-cre/ERT2; Brafflox/wt) ratones y TBP (TPO-cre/ERT2; Brafflox/wt; Trp53flox/wt) ratones, que podrían usarse para generar PTC y ATC. Después de aproximadamente 8 semanas, los ratones fueron inducidos por una administración intraperitoneal (i.p.) de 150 mg / kg de tamoxifeno disuelto en aceite de maíz durante dos administraciones. El crecimiento tumoral podría controlarse mediante ecografía de alta frecuencia (el primer punto de tiempo de la ecografía se registró como el Día 0). La ecografía inicial se realizó 40 días después de la introducción del tamoxifeno.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100x&#160;Citrate antigen retrieval solution (PH 6.0)</td>
			<td>MXB</td>
			<td>Cat# MVS-0101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50x EDTA antigen retrieval solution(pH 9.5)</td>
			<td>ZSGB-GIO</td>
			<td>Cat# ZLI-9071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brafflox/wt mice</td>
			<td>Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caspase-3</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>Cat# AC033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD8</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>Cat# 98941; RRID:AB_2756376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD206</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>Cat# 24595; RRID:AB_2892682</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chamber for anesthesia induction</td>
			<td>RWDlifescience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enhanced DAB chromogenic kit</td>
			<td>MXB</td>
			<td>Cat# DAB-2031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin staining solution</td>
			<td>ZSGB-GIO</td>
			<td>Cat# ZLI-9613</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F4/80</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Cat# 100790; RRID:AB_10675322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foxp3</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>Cat# 12653; RRID:AB_2797979</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fully enclosed tissue dehydrator</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>ASP300S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin staining solution</td>
			<td>ZSGB-GIO</td>
			<td>Cat# ZLI-9610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoCore Arcadia fully automatic tissue embedding machine</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ki67</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>Cat# AF1738</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotating Slicer</td>
			<td>RWDlifescience</td>
			<td>&#160;Minux S700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPlink detection kits (Biotin-Streptavidin HRP Detection Systems)</td>
			<td>ZSGB-GIO</td>
			<td>Cat# SP-9001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TPO-cre/ERT2 mice</td>
			<td>Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trp53flox/wt mice</td>
			<td>Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cell crusher</td>
			<td>Ningbo Xinyi Ultrasound Equipment Co., Ltd</td>
			<td>JY92-IIN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound gel</td>
			<td>Keppler</td>
			<td>KL-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound system</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spontaneous murine model of anaplastic thyroid cancer

El cáncer anaplásico de tiroides (ATC) es una neoplasia maligna rara pero letal con un pronóstico sombrío. Existe una necesidad urgente de una investigación más profunda sobre la carcinogénesis y el desarrollo de ATC, así como métodos terapéuticos, ya que los tratamientos estándar se agotan esencialmente en pacientes con ATC. Sin embargo, la baja prevalencia ha obstaculizado estudios clínicos exhaustivos y la recolección de muestras de tejido, por lo que se ha avanzado poco en la creación de tratamientos efectivos. Utilizamos ingeniería genética para crear un modelo murino ATC condicionalmente inducible (mATC) en un fondo C57BL/6. El modelo murino ATC fue genotipado por TPO-cre/ERT2; BrafCA/wt; Trp53 ex2-10/ex2-10 e inducido por inyección intraperitoneal con tamoxifeno. Con el modelo murino, investigamos la dinámica tumoral (el tamaño del tumor varió de 12,4 mm 2 a 32,5 mm2 después de 4 meses de inducción), la supervivencia (la mediana del período de supervivencia fue de 130 días) y metástasis (las metástasis pulmonares ocurrieron en el 91,6% de los ratones) curvas y características patológicas (caracterizadas por tinción inmunohistoquímica Cd8, Foxp3, F4/80, Cd206, Ki67 y Caspasa-3). Los resultados indicaron que el mATC espontáneo posee una dinámica tumoral y un microambiente inmunológico muy similares a los tumores ATC humanos. En conclusión, con una alta similitud en las características fisiopatológicas y genotipos unificados, el modelo mATC resolvió la escasez de tejido clínico ATC y la heterogeneidad de la muestra hasta cierto punto. Por lo tanto, facilitaría el mecanismo y los estudios traslacionales de ATC y proporcionaría un enfoque para investigar el potencial de tratamiento de fármacos moleculares pequeños y agentes de inmunoterapia para ATC.

Inducimos mATC para investigar el crecimiento tumoral, el tiempo de supervivencia del ratón y las características patológicas. Después de la inducción, los ratones fueron sacrificados inmediatamente y se recolectaron muestras (tiroides, pulmón e hígado) una vez que se encontró una de las siguientes afecciones: 1) dificultad respiratoria causada por compresión tumoral; 2) disminución del apetito y vocalización anormal; 3) letargo inusualmente irritable; y 4) pérdida de peso corporal de más del 20%. Durante el...

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Spontaneous Murine Model of Anaplastic Thyroid Cancer

Aquí, presentamos una tubería estándar para obtener tumores murinos ATC mediante modelos espontáneos de ratón genéticamente modificados. Además, presentamos la dinámica tumoral y la información patológica sobre las lesiones primarias y metastástasis. Este modelo ayudará a los investigadores a comprender la tumorigénesis y facilitar los descubrimientos de fármacos.

Modelo murino espontáneo de cáncer anaplásico de tiroides

Anaplastic thyroid cancer (ATC) is a rare but lethal malignancy with a dismal prognosis. There is an urgent need for more in-depth research on the ...

Presentamos un pipeline estándar para obtener tumores MATC y presentamos la dinámica tumoral y la información patológica. Este módulo ayudará a los investigadores a comprender la oncogénesis tumoral y facilitar los descubrimientos de fármacos. El MATC facilita la recolección de muestras de MATC en todo el curso de oncogénesis tumoral, y cada uno es un modelo de espejo espontáneo, con el sistema inmune completo y el microambiente inmune.MATC se puede utilizar para estudiar los efectos de funciones genéticas específicas en ATC, comprender los mecanismos de progresión del tumor tiroideo y, en última instancia, mejorar el pronóstico de los pacientes con ATC. Para comenzar, pese el tamoxifeno y disuélvalo en 15 mililitros de aceite de maíz por ultrasonido a una concentración de 20 miligramos por mililitro. Luego guárdelo en un recipiente marrón a cuatro grados centígrados.Alrededor de las ocho semanas, pesar los ratones con balanzas electrónicas y luego administrar tamoxifeno por vía intraperitoneal dos veces en un intervalo de una semana. Después de preparar las herramientas de disección y la solución de fijación de tejido de ratón, llene un plato limpio de 10 centímetros con aproximadamente 10 mililitros de PBS estéril para el almacenamiento temporal de tejidos y para lavar la sangre de la superficie del tejido. Para la extracción de la tiroides, coloque el ratón sacrificado en el tablero de disección.Después de desinfectar el área del cuello, use tijeras y fórceps estériles. Haga una pequeña incisión por encima del centro de la clavícula y continúe en la línea media hasta la boca. Localice la glándula submandibular y retírela para exponer la ubicación anatómica de la tiroides, que está cerca del cartílago tiroides y la tráquea.Una vez localizada la glándula tiroides, diseccionar cuidadosamente del resto de la región del cuello con tijeras estériles, y ponerla en el plato previamente preparado que contiene PBS estéril. Retire la sangre de la superficie del tejido tiroideo y, con tijeras estériles, corte cuidadosamente la tráquea. Luego coloque el tejido tiroideo en el paño estéril y mida el tamaño de los lóbulos izquierdo y derecho de la glándula tiroides usando calibradores Vernier.Con una cuchilla estéril, divida los lóbulos izquierdo y derecho de la glándula tiroides en dos partes. Ponga una parte en dos mililitros de solución de paraformaldehído al 4% para la fijación y otra en nitrógeno líquido para su conservación. Para extraer el pulmón y el hígado, pellizque justo por encima del pene del ratón después de desinfectar el área.Luego haga una pequeña incisión y corte a lo largo de la línea media del abdomen hasta el hueso subclavio. Exponga la cavidad abdominal. Después de localizar el hígado en la parte superior del abdomen, retírelo con cuidado y colóquelo en un nuevo plato que contenga PBS estéril.Observe y cuente groseramente la metástasis en el pulmón y el hígado, seguido de la obtención de una imagen. Con una cuchilla estéril, divida los tejidos pulmonares y hepáticos en dos partes. Como se demostró anteriormente, fije una parte y conserve la otra parte en nitrógeno líquido.La curva de crecimiento tumoral se trazó para observar la alteración dinámica del tamaño del tumor. Los tumores crecieron lentamente en la etapa temprana y se volvieron dramáticamente más rápidos en la etapa tardía. Por otro lado, se trazó una curva de supervivencia basada en el tiempo de supervivencia registrado.La mediana de supervivencia de MATC fue de 130 días. Además, se encontró aproximadamente un 92% de metástasis pulmonar en la mayoría de los MATC. En la tinción HE de los tumores primarios y tejidos pulmonares metastásicos de MATC, los tejidos inducibles de un mes mostraron características solidificadas incompletas y la coexistencia de estructuras foliculares y células malignas, mientras que las estructuras foliculares tiroideas desaparecieron y el tumor se solidificó completamente después de una inducción de dos meses.El tumor primario reveló que las células tumorales eran morfológicamente diversas, con células gigantes pleomórficas y células en forma de huso. Además, la tinción HE de tejidos pulmonares metastásicos mostró que el tejido pulmonar normal era una estructura reticular con estructuras alveolares claras y espacios aéreos. Sin embargo, las metástasis pulmonares mostraron una pérdida de la estructura reticular normal, engrosamiento de la cavidad aérea y parénquima pulmonar.Mientras tanto, la tinción inmunohistoquímica del tumor MATC con diferentes anticuerpos mostró células tumorales altamente proliferativas, infiltración de linfocitos, una infiltración extensa de células mieloides, que fue consistente con muestras clínicas. Durante la disección, la ubicación anatómica de la glándula tiroides debe entenderse correctamente. La glándula tiroides se coloca cerca del cartílago tiroides y la tráquea.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

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Murino modelo experimental de desarrollo del tumor original y la metástasis peritoneal<em&gt; vía</em&gt; Ortotópico La inoculación con células de carcinoma de ovario

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

Investigación

Investigación sobre el cáncer

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

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Procedimientos quirúrgicos y metodología para un modelo murino preclínico<em&gt; De Novo</em&gt; Metástasis del cáncer mamario

A rate-limiting aspect of transgenic mouse models of mammary adenocarcinoma is that primary tumor burden in mammary tissue typically defines study ...

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

Un Modelo de tumor y el tumor murino ortotópico de vejiga Sistema de Detección

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Un modelo de ratón de la fatiga inducida por irradiación periférica

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Identification and Characterization of Metastatic Factors by Gene Transfer into the Novel RIP-Tag; RIP-tva Murine Model

Identification and Characterization of Metastatic Factors by Gene Transfer into the Novel RIP-Tag; RIP-tva Murine Model

Identificación y caracterización de factores metastásicos por transferencia de genes dentro de la novela RIP-etiqueta; RIP-tva modelo murino

Metastatic cancer accounts for 90% of deaths in patients with solid tumors. There is an urgent need to better understand the drivers of cancer metastasis ...

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

Un modelo de nervio ciático murinos In Vivo de invasión Perineural

Cancer cells invade nerves through a process termed perineural invasion (PNI), in which cancer cells proliferate and migrate in the nerve ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Un modelo murino Syngeneic bioluminiscente y fluorescente ortotópico de cáncer de próstata andrógeno-dependiente y resistente a la castración

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Performing Data Mining And Integrative Analysis Of Biomarker in Breast Cancer Using Multiple Publicly Accessible Databases

Realizar la minería de datos y análisis integrativos de biomarcadores en el cáncer de mama utilizando múltiples bases de datos accesibles públicamente

In recent years, emerging databases were designed to lower the barriers for approaching the intricate cancer genomic datasets, thereby, facilitating ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

Modelo murino de tumores hepáticos metastásicos en el escenario de la lesión por reperfusión de isquemia

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

A Murine Ommaya Xenograft Model to Study Direct-Targeted Therapy of Leptomeningeal Disease

Un modelo de xenoinjerto murino de Ommaya para estudiar la terapia dirigida directamente de la enfermedad leptomeningeal

Leptomeningeal disease (LMD) is an uncommon type of central nervous system (CNS) metastasis to the cerebral spinal fluid (CSF). The most common cancers ...