Name: spontaneous murine model of anaplastic thyroid cancer
Uploaded: 2023-02-03T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Spontaneous Murine Model of Anaplastic Thyroid Cancer at JoVE.com

Bu çalışma Çin Ulusal Anahtar Araştırma Geliştirme Programı (2021YFA1301203) tarafından desteklenmiştir; Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82103031, 82103918, 81973408, 82272933); Klinik Araştırma Kuluçka Projesi, Batı Çin Hastanesi, Sichuan Üniversitesi (22HXFH019); Chengdu Belediyesi Bilim ve Teknoloji Bürosu Uluslararası İşbirliği Projesi (2020-GH02-00017-HZ); Sichuan Doğa Bilimleri Vakfı, 2022NSFSC1314; "1.3.5 mükemmellik disiplinleri projesi, Batı Çin Hastanesi, Sichuan Üniversitesi" (ZYJC18035, ZYJC18025, ZYYC20003, ZYJC18003); ve Sichuan Bilim ve Teknoloji Programı (2023YFS0098).

Burada açıklanan hayvan prosedürleri, Batı Çin Hastanesi, Sichuan Üniversitesi, Chengdu, Sichuan, Çin Hayvan Etik Komitesi'nin onayı ile gerçekleştirilmiştir.
1. TBP farelerin indüksiyonu
<ol><li>Farelerin genotipini tanımlayın<ol><li>Yaklaşık 3 haftada, dişi fareleri erkek farelerden ayırın. Aynı zamanda, bir kulak etiketini sabitlemek için kulak etiketi kelepçesini kullanın. Kulak etiketlerini kulağın alt yarısına ve orta üçte birine yerleştir...

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2019.">Cancer statistics, 2019.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 69 (1), 7-34 (2019).</li><li>Parenti, R., Salvatorelli, L., Magro, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaplastic+thyroid+carcinoma:+Current+treatments+and+potential+new+therapeutic+options+with+emphasis+on+TfR1/CD71.">Anaplastic thyroid carcinoma: Current treatments and potential new therapeutic options with emphasis on TfR1/CD71.</a> International Journal of Endocrinology. 2014, 685396 (2014).</li><li>Baldini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+effects+of+the+urokinase+plasminogen+activator+inhibitor+WX-340+on+anaplastic+thyroid+cancer+cell+lines.">In vitro and in vivo effects of the urokinase plasminogen activator inhibitor WX-340 on anaplastic thyroid cancer cell lines.</a> International Journal of Molecular Sciences. 23 (7), 3724 (2022).</li><li>Haugen, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Thyroid+Association+Management+guidelines+for+adult+patients+with+thyroid+nodules+and+differentiated+thyroid+cancer:+what+is+new+and+what+has+changed.">American Thyroid Association Management guidelines for adult patients with thyroid nodules and differentiated thyroid cancer: what is new and what has changed.</a> Cancer. 123 (3), 372-381 (2015).</li><li>O'Neill, J. P., Shaha, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaplastic+thyroid+cancer.">Anaplastic thyroid cancer.</a> Oral Oncology. 49 (7), 702-706 (2013).</li><li>Simoes-Pereira, J., Capitao, R., Limbert, E., Leite, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaplastic+thyroid+cancer:+Clinical+picture+of+the+last+two+decades+at+a+single+oncology+referral+centre+and+novel+therapeutic+options.">Anaplastic thyroid cancer: Clinical picture of the last two decades at a single oncology referral centre and novel therapeutic options.</a> Cancers. 11 (8), 1188 (2019).</li><li>Fagin, J. A., Wells, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biologic+and+clinical+perspectives+on+thyroid+cancer.">Biologic and clinical perspectives on thyroid cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (11), 1054-1067 (2016).</li><li>Neff, R. L., Farrar, W. B., Kloos, R. T., Burman, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaplastic+thyroid+cancer.">Anaplastic thyroid cancer.</a> Endocrinology and Metabolism Clinics of North America. 37 (2), 525-538 (2008).</li><li>Lareau, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Droplet-based+combinatorial+indexing+for+massive-scale+single-cell+chromatin+accessibility.">Droplet-based combinatorial indexing for massive-scale single-cell chromatin accessibility.</a> Nature Biotechnology. 37 (8), 916-924 (2019).</li><li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+methylome+landscapes+of+mouse+embryonic+stem+cells+and+early+embryos+analyzed+using+reduced+representation+bisulfite+sequencing.">Single-cell methylome landscapes of mouse embryonic stem cells and early embryos analyzed using reduced representation bisulfite sequencing.</a> Genome Research. 23 (12), 2126-2135 (2013).</li><li>Mooijman, D., Dey, S. S., Boisset, J. -. C., Crosetto, N., van Oudenaarden, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+5hmC+sequencing+reveals+chromosome-wide+cell-to-cell+variability+and+enables+lineage+reconstruction.">Single-cell 5hmC sequencing reveals chromosome-wide cell-to-cell variability and enables lineage reconstruction.</a> Nature Biotechnology. 34 (8), 852-856 (2016).</li><li>Smallridge, R. C., Marlow, L. A., Copland, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaplastic+thyroid+cancer:+molecular+pathogenesis+and+emerging+therapies.">Anaplastic thyroid cancer: molecular pathogenesis and emerging therapies.</a> Endocrine-Related Cancer. 16 (1), 17-44 (2009).</li><li>Charles, R. -. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+genetically+engineered+mouse+models+of+papillary+and+anaplastic+thyroid+cancers:+enabling+translational+biology+for+patient+care+improvement.">Overview of genetically engineered mouse models of papillary and anaplastic thyroid cancers: enabling translational biology for patient care improvement.</a> Current Protocols in Pharmacology. 69, 1-14 (2015).</li><li>Tuttle, R. M., Haugen, B., Perrier, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Updated+American+joint+committee+on+cancer/tumor-nodemetastasis+staging+system+for+differentiated+and+anaplastic+thyroid+cancer+(8th+Edition):+What+changed+and+why.">Updated American joint committee on cancer/tumor-nodemetastasis staging system for differentiated and anaplastic thyroid cancer (8th Edition): What changed and why.</a> Thyroid. 27 (6), 751-756 (2017).</li><li>McFadden, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p53+constrains+progression+to+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+a+Braf-mutant+mouse+model+of+papillary+thyroid+cancer.">p53 constrains progression to anaplastic thyroid carcinoma in a Braf-mutant mouse model of papillary thyroid cancer.</a> Protocols of the National Academy of Sciences. 111 (16), 1600-1609 (2014).</li><li>Gunda, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinations+of+BRAF+inhibitor+and+anti-PD-1/PD-L1+antibody+improve+survival+and+tumour+immunity+in+an+immunocompetent+model+of+orthotopic+murine+anaplastic+thyroid+cancer.">Combinations of BRAF inhibitor and anti-PD-1/PD-L1 antibody improve survival and tumour immunity in an immunocompetent model of orthotopic murine anaplastic thyroid cancer.</a> British Journal of Cancer. 119 (10), 1223-1232 (2018).</li><li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+ultrasonography+for+the+analysis+of+orthotopic+ATC+tumors+in+a+genetically+engineered+mouse+model.">High-resolution ultrasonography for the analysis of orthotopic ATC tumors in a genetically engineered mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (188), e64615 (2022).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+recurrent+altered+genes+in+Chinese+patients+with+anaplastic+thyroid+cancer.">Novel recurrent altered genes in Chinese patients with anaplastic thyroid cancer.</a> The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 106 (4), 988-998 (2021).</li><li>Luo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pan-cancer+single-cell+analysis+reveals+the+heterogeneity+and+plasticity+of+cancer-associated+fibroblasts+in+the+tumor+microenvironment.">Pan-cancer single-cell analysis reveals the heterogeneity and plasticity of cancer-associated fibroblasts in the tumor microenvironment.</a> Nature Communications. 13 (1), 6619 (2022).</li><li>Luo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+dedifferentiation+of+thyroid+cancer+by+integrated+analysis.">Characterizing dedifferentiation of thyroid cancer by integrated analysis.</a> Science Advances. 7 (31), (2021).</li><li>Knostman, K. A. B., Jhiang, S. M., Capen, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+alterations+in+thyroid+cancer:+the+role+of+mouse+models.">Genetic alterations in thyroid cancer: the role of mouse models.</a> Veterinary Pathology. 44 (1), 1-14 (2007).</li><li>Kim, C. S., Zhu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+from+mouse+models+of+thyroid+cancer.">Lessons from mouse models of thyroid cancer.</a> Thyroid. 19 (12), 1317-1331 (2009).</li><li>Champa, D., Di Cristofano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+the+mouse.">Modeling anaplastic thyroid carcinoma in the mouse.</a> Hormones and Cancer. 6 (1), 37-44 (2015).</li><li>Cabanillas, M. E., Ryder, M., Jimenez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+therapy+for+advanced+thyroid+cancer:+kinase+inhibitors+and+beyond.">Targeted therapy for advanced thyroid cancer: kinase inhibitors and beyond.</a> Endocrine Reviews. 40 (6), 1573-1604 (2019).</li><li>Ljubas, J., Ovesen, T., Rusan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+review+of+phase+II+targeted+therapy+clinical+trials+in+anaplastic+thyroid+cancer.">A systematic review of phase II targeted therapy clinical trials in anaplastic thyroid cancer.</a> Cancers. 11 (7), 943 (2019).</li><li>Huang, N. -. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+update+of+the+appropriate+treatment+strategies+in+anaplastic+thyroid+cancer:+a+population-based+study+of+735+patients.">An update of the appropriate treatment strategies in anaplastic thyroid cancer: a population-based study of 735 patients.</a> International Journal of Endocrinology. 2019, 8428547 (2019).</li><li>Subbiah, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dabrafenib+and+trametinib+treatment+in+patients+with+locally+advanced+or+metastatic+BRAF+V600-mutant+anaplastic+thyroid+cancer.">Dabrafenib and trametinib treatment in patients with locally advanced or metastatic BRAF V600-mutant anaplastic thyroid cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 36 (1), 7-13 (2018).</li><li>Baldini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+selective+inhibitors+of+Aurora+kinases+on+anaplastic+thyroid+carcinoma+cell+lines.">Effects of selective inhibitors of Aurora kinases on anaplastic thyroid carcinoma cell lines.</a> Endocrine-Related Cancer. 21 (5), 797-811 (2014).</li></ol>

Tiroid tümörü diseksiyonu için protokol dahilinde kritik adımlar Diseksiyon sırasında, tiroid bezinin anatomik yerinin doğru anlaşılması gerekir. Tiroid bezi, submandibuler bezin dorsal tarafında, tiroid kıkırdağı ve trakeaya yakın bir yerde bulunan kelebek şeklinde bir bezdir. İşlem sırasında, boynun her iki tarafındaki kan arterlerinin kesilmesinden dikkatlice kaçınıldı.
mATC ırkının değiştirilmesi ve sorun giderilmesi A...

Tiroid kanseri, tiroid epiteli kökenini en sık gören endokrin malignitelerden biridir1. Son yıllarda tiroid kanseri insidansı tüm dünyada hızla artmıştır2. Tiroid kanseri, tümör hücresi farklılaşma derecesine göre farklı tiplere ayrılabilir. Klinik davranış ve histoloji temelinde, tiroid karsinomları papiller tiroid karsinomu (PTC) ve foliküler tiroid karsinomu (FTC), kötü diferansiye karsinom (PDTC) ve tiroidin diferansiye edilmemiş veya anaplastik karsinomu (ATC)3 dahil olmak üzere iyi diferansiye karsinomlara ayrılır. Hafif davranışlı ve daha iyi prognozlu4 yaygın bir tip olan PTC'nin aksine, ATC tüm tiroid tümörlerinin %2 ila %3'ünü oluşturan, nadir ve oldukça agresif bir malignitedir5. ATK nadir olmasına rağmen, tiroid kanserine bağlı ölümlerin yaklaşık %50'sinden sorumludur ve kasvetli sağkalım (6-8 ay)6,7. ATC olgularının %50'sinden fazlası akciğer metastazı 8 olarak teşhisedilir. ATC'nin agresif doğasına ek olarak, klinikte sınırlı etkili tedavi geliştirilmiştir. Bu nedenle ATC hastalarının kasvetli prognozu 9,10,11'dir. Bu, ATK'nın gelişiminin ve tedavisinin altında yatan moleküler mekanizmalar hakkında acilen daha derinlemesine çalışmalara ihtiyaç duyulduğunu göstermektedir.
ATC'nin tümörigenezi dinamik bir farklılaşmamış süreçtir. Klinik çalışmaların her aşamasında insan tümör örneklerinin toplanmasındaki zorluk, iyi diferansiye karsinomlardan farklılaşmamış karsinomlara kadar gelişim mekanizmasının anlaşılmasını engellemiştir. Buna karşılık, murin ATC modellerinin (mATC) kullanımı, tüm tümörigenez seyrinde mATC örneklerinin toplanmasını desteklemektedir. Bu nedenle, dinamik farklılaşmamış süreci analiz ederek tümör oluşum mekanizmalarını daha iyi anlayabiliriz. Ek olarak, klinik ATC örneklerinin heterojenliği de moleküler mekanizmanın anlaşılmasındaki zorluğa katkıda bulunmuştur. Bununla birlikte, fareler aynı genetik geçmişleri paylaştılar ve benzer yaşam ortamlarında tutuldular ve her tümörün tutarlılığını sağladılar. Bu, ATC gelişiminin genelleştirilmiş rolünü keşfetmeyi kolaylaştırır12,13,14. Ek olarak, mATC, anatomik lokalizasyonun ve dokuya özgü mikro çevrenin etkisini geri kazanabilen in situ bir tümör modelidir. Bu nedenle, yaygın olarak kullanılan immün yetmezlikli farelerle karşılaştırıldığında, mATC, sağlam bir bağışıklık sistemi ve bağışıklık mikroçevresi olan spontan bir murin modelidir.
Bu nedenle, dediferansiye tiroid karsinomunun patolojik özelliklerini yeniden üretebilen bir murin modeli olan C57BL/6 suşu ile şartlı olarak indüklenen mATC oluşturduk. Bu modele dayanarak, mATC'nin moleküler temeli, yapım fikirleri, patolojik özellikleri ve uygulamaları hakkında kısa bir genel bakış sunduk. Ayrıca tümör büyümesini, sağkalım süresini, metastazını ve mATC'nin patolojik özelliklerini gözlemledik ve raporladık. Bunun, diğer araştırmacıların bu modeli daha kolay kullanmalarına yardımcı olmak için bilgilendirici bir genel bakış olacağına inanıyoruz.
İlk olarak McFadden15 tarafından bildirildiği gibi koşullu indüklenebilir bir mATC modeli oluşturduk; Başlangıçta, fareler inşa ettik: TPO-cre / ERT2, Braf flox / wt ve Trp53flox / wt. Spesifik olarak, TPO-cre / ERT2 fareleri, bir cre-ERT2 füzyon geninin (bir insan östrojen reseptörü ligand bağlanma alanına kaynaşmış bir cre rekombinaz) ekspresyonunu yönlendiren insan tiroid peroksidaz (TPO) promotörünü (tiroide özgü bir promotör) içeriyordu. Cre-ERT2 genellikle sitoplazma ile sınırlıdır ve çekirdeğe sadece tamoksifene maruz kaldığında girer, bu da cre'yi rekombinant enzim aktivitesi göstermeye teşvik eder. Fareler, loxP kanatlı sekanslar taşıyan farelerle çaprazlandığında, tamoksifen indüksiyonundan sonra, kre aracılı rekombinasyon, spesifik genlerde nakavt veya nakavt etme amacına ulaşmak için tiroid hücrelerindeki flokslu dizileri siler.
Ek olarak, Braf flox / wt fareleri, cre-loxP sistemine dayanan insan Braf'ın bir knock-in aleli. Brafflox / wt murin transkripti, endojen ekzonlar 1-14 ve loxP kanatlı insan ekzonları 15-18 tarafından kodlanır. Flokslu bölgelerin kreasyona aracılı eksizyonundan sonra, mutant ekzon 15 (insan kanserlerinde yapısal olarak aktif Braf V600E ile bağlantılı birV600E amino asit ikamesi ile modifiye edilmiş) ve endojen ekzonlar 16-18 transkriptleri oluşturmak için kullanılır. Ayrıca, Trp53 flox / wt fareleri, insan Trp53'ün nakavt alelleridir ve Trp53'ün ekzonları 2-10'u çevreleyen loxP bölgelerine sahiptir. Bir cre rekombinaz ile farelerle çaprazlandığında, cre-mediated rekombinasyon, Trp53'ü nakavt etmek için flokslu diziyi siler. Daha sonra, TB elde etmek için TPO-cre / ERT2, Braf flox / w ve Trp53flox / wt fareleri çaprazlandı (TPO-cre/ ERT2; Braffloks/wt) fareler ve TBP (TPO-cre/ERT2; Braffloks/ağırlık; Trp53floks/ağırlık) PTC ve ATC üretmek için kullanılabilecek fareler. Yaklaşık 8 hafta sonra, fareler, iki uygulama için mısır yağında çözünmüş 150 mg / kg tamoksifenin intraperitoneal (i.p.) uygulaması ile indüklendi. Tümör büyümesi yüksek frekanslı ultrasonografi ile izlenebilir (ultrasonografinin ilk zaman noktası Gün 0 olarak kaydedildi). İlk ultrasonografi tamoksifen girişinden 40 gün sonra yapıldı.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100x&#160;Citrate antigen retrieval solution (PH 6.0)</td>
			<td>MXB</td>
			<td>Cat# MVS-0101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50x EDTA antigen retrieval solution(pH 9.5)</td>
			<td>ZSGB-GIO</td>
			<td>Cat# ZLI-9071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brafflox/wt mice</td>
			<td>Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caspase-3</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>Cat# AC033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD8</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>Cat# 98941; RRID:AB_2756376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD206</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>Cat# 24595; RRID:AB_2892682</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chamber for anesthesia induction</td>
			<td>RWDlifescience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enhanced DAB chromogenic kit</td>
			<td>MXB</td>
			<td>Cat# DAB-2031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin staining solution</td>
			<td>ZSGB-GIO</td>
			<td>Cat# ZLI-9613</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F4/80</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Cat# 100790; RRID:AB_10675322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foxp3</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>Cat# 12653; RRID:AB_2797979</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fully enclosed tissue dehydrator</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>ASP300S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin staining solution</td>
			<td>ZSGB-GIO</td>
			<td>Cat# ZLI-9610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoCore Arcadia fully automatic tissue embedding machine</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ki67</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>Cat# AF1738</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotating Slicer</td>
			<td>RWDlifescience</td>
			<td>&#160;Minux S700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPlink detection kits (Biotin-Streptavidin HRP Detection Systems)</td>
			<td>ZSGB-GIO</td>
			<td>Cat# SP-9001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TPO-cre/ERT2 mice</td>
			<td>Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trp53flox/wt mice</td>
			<td>Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cell crusher</td>
			<td>Ningbo Xinyi Ultrasound Equipment Co., Ltd</td>
			<td>JY92-IIN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound gel</td>
			<td>Keppler</td>
			<td>KL-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound system</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spontaneous murine model of anaplastic thyroid cancer

Anaplastik tiroid kanseri (ATK) nadir görülen ancak ölümcül bir malignitedir ve kötü prognoza sahiptir. ATC'nin karsinogenezi ve gelişimi ile terapötik yöntemler hakkında daha derinlemesine araştırmalara acil ihtiyaç vardır, çünkü standart tedaviler ATC hastalarında esasen tükenmektedir. Bununla birlikte, düşük prevalansı kapsamlı klinik çalışmaları ve doku örneklerinin toplanmasını engellemiştir, bu nedenle etkili tedavilerin oluşturulmasında çok az ilerleme kaydedilmiştir. C57BL/6 arka planında koşullu olarak indüklenebilir bir ATC murin modeli (mATC) oluşturmak için genetik mühendisliğini kullandık. ATC murin modeli TPO-cre/ERT2 ile genotiplendirildi; BrafCA/wt; Trp53 ex2-10/ex2-10 ve tamoksifen ile intraperitoneal enjeksiyon ile indüklenir. Murin modeli ile tümör dinamikleri (tümör boyutu 4 aylık indüksiyondan sonra 12.4 mm2 ile 32.5mm2 arasında değişmiştir), sağkalım (medyan sağkalım süresi 130 gün idi) ve metastaz (akciğer metastazları farelerin %91.6'sında meydana geldi) eğrilerini ve patolojik özellikleri (Cd8, Foxp3, F4/80, Cd206, Ki67 ve Kaspaz-3 immünohistokimyasal boyama ile karakterize) araştırdık. Sonuçlar, spontan mATC'nin insan ATC tümörlerine oldukça benzer tümör dinamiklerine ve immünolojik mikroçevreye sahip olduğunu göstermiştir. Sonuç olarak, patofizyolojik özellikler ve birleşik genotiplerdeki yüksek benzerlik ile mATC modeli, klinik ATC dokusu ve örnek heterojenitesinin eksikliğini bir dereceye kadar çözmüştür. Bu nedenle, ATK'nın mekanizmasını ve translasyonel çalışmalarını kolaylaştıracak ve ATC için küçük moleküler ilaçların ve immünoterapi ajanlarının tedavi potansiyelini araştırmak için bir yaklaşım sağlayacaktır.

Tümör büyümesini, fare sağkalım süresini ve patolojik özellikleri araştırmak için mATC'yi indükledik. İndüksiyondan sonra, fareler derhal kurban edildi ve aşağıdaki durumlardan biri bulunduğunda örnekler (tiroid, akciğer ve karaciğer) toplandı: 1) tümör kompresyonunun neden olduğu solunum sıkıntısı; 2) iştah azalması ve anormal seslendirme; 3) alışılmadık uyuşukluk; ve 4) %20'nin üzerinde vücut ağırlığı kaybı. Örnekleme işlemi sırasında, tüm farelerin (12/12) indüksiyonda...

Watch this Scientific Journal Video about Spontaneous Murine Model of Anaplastic Thyroid Cancer at JoVE.com

Spontaneous Murine Model of Anaplastic Thyroid Cancer

Burada, spontan genetiği değiştirilmiş fare modelleri ile murin ATC tümörleri elde etmek için standart bir boru hattı sunuyoruz. Ayrıca, primer ve metastaz yapmış lezyonlar hakkında tümör dinamikleri ve patolojik bilgiler sunulmuştur. Bu model, araştırmacıların tümörigenezi anlamalarına ve ilaç keşiflerini kolaylaştırmalarına yardımcı olacaktır.

Anaplastik Tiroid Kanserinin Spontan Murin Modeli

Anaplastic thyroid cancer (ATC) is a rare but lethal malignancy with a dismal prognosis. There is an urgent need for more in-depth research on the ...

Bu yazıda MATC tümörleri elde etmek ve tümör dinamikleri ile patolojik bilgiler sunmak için standart bir boru hattı sunulmaktadır. Bu modül, araştırmacıların tümör onkogenezini anlamalarına ve ilaç keşiflerini kolaylaştırmalarına yardımcı olacaktır. MATC, tüm tümör onkogenezi seyrinde MATC örneklerinin toplanmasını kolaylaştırır ve her biri tam bağışıklık sistemi ve bağışıklık mikroçevresi ile spontan bir ayna modelidir.MATC, spesifik gen fonksiyonlarının ATC üzerindeki etkilerini incelemek, tiroid tümörü progresyonunun mekanizmalarını anlamak ve sonuçta ATC hastalarının prognozunu iyileştirmek için kullanılabilir. Başlamak için, tamoksifeni tartın ve mililitre başına 20 miligramlık bir konsantrasyonda ultrasonla 15 mililitre mısır yağı içinde çözün. Sonra dört santigrat derecede kahverengi bir kapta saklayın.Yaklaşık sekiz haftada, fareleri elektronik terazilerle tartın ve ardından tamoksifeni bir hafta arayla iki kez intraperitoneal olarak uygulayın. Diseksiyon aletlerini ve fare-doku sabitleme solüsyonunu hazırladıktan sonra, geçici doku depolaması ve doku yüzeyindeki kanı yıkamak için yaklaşık 10 mililitre steril PBS ile temiz bir 10 santimetrelik kabı doldurun. Tiroid ekstraksiyonu için, ötenazi fareyi diseksiyon tahtasına yerleştirin.Boyun bölgesini dezenfekte ettikten sonra steril makas ve forseps kullanın. Klavikulanın merkezinin üzerinde küçük bir kesi yapın ve orta hatta ağza kadar devam edin. Submandibuler bezi bulun ve tiroid kıkırdağı ve trakeaya yakın olan tiroidin anatomik yerini ortaya çıkarmak için çıkarın.Tiroid bezi yerleştirildikten sonra, steril makas kullanarak boyun bölgesinin geri kalanından dikkatlice diseke edin ve steril PBS içeren önceden hazırlanmış kaba koyun. Kanı tiroid dokusunun yüzeyinden çıkarın ve steril makasla trakeayı dikkatlice kesin. Daha sonra tiroid dokusunu steril bezin üzerine koyun ve Vernier kumpaslarını kullanarak tiroid bezinin sol ve sağ loblarının boyutunu ölçün.Steril bir bıçak kullanarak, tiroid bezinin sol ve sağ loblarını iki parçaya bölün. Bir parçayı sabitleme için iki mililitre% 4 paraformaldehit çözeltisine, diğerini ise koruma için sıvı azota koyun. Akciğeri ve karaciğeri çıkarmak için, bölgeyi dezenfekte ettikten sonra farenin penisinin hemen üstüne sıkıştırın.Daha sonra küçük bir kesi yapın ve karın orta çizgisi boyunca subklaviyen kemiğe kesin. Karın boşluğunu açığa çıkarın. Karaciğeri karnın üst kısmına yerleştirdikten sonra, dikkatlice çıkarın ve steril PBS içeren yeni bir kaba yerleştirin.Akciğer ve karaciğerdeki metastazı büyük ölçüde gözlemleyin ve sayın, ardından bir resim elde edin. Steril bir bıçakla, akciğer ve karaciğer dokularını iki parçaya bölün. Daha önce gösterildiği gibi, bir parçayı sabitleyin ve diğer kısmı sıvı azotta koruyun.Tümör büyüme eğrisi, tümör boyutunun dinamik değişimini gözlemlemek için çizildi. Tümörler erken evrede yavaş büyüdü ve geç evrede çarpıcı bir şekilde daha hızlı hale geldi. Öte yandan, kaydedilen hayatta kalma süresine dayanarak bir hayatta kalma eğrisi çizildi.MATC'nin medyan sağkalımı 130 gündü. Ek olarak, çoğu MATC'de yaklaşık% 92 akciğer metastazı bulundu. MATC'nin primer tümörleri ve metastatik akciğer dokularının HE boyamasında, bir aylık indüklenebilir dokular eksik katılaşmış özellikler ve foliküler yapılar ile malign hücrelerin bir arada bulunmasını gösterirken, tiroid foliküler yapıları kayboldu ve tümör iki aylık bir indüksiyondan sonra tamamen katılaştı.Primer tümör, tümör hücrelerinin morfolojik olarak farklı olduğunu, pleomorfik dev hücreler ve iğ şeklindeki hücreler olduğunu ortaya koydu. Ayrıca, metastatik akciğer dokularının HE boyaması, normal akciğer dokusunun açık alveoler yapılara ve hava boşluklarına sahip retiküler bir yapı olduğunu göstermiştir. Bununla birlikte, akciğer metastazları normal retiküler yapı kaybı, hava boşluğu kalınlaşması ve akciğer parankimini gösterdi.Bu arada, MATC tümörünün farklı antikorlarla immünohistokimyasal boyanması, klinik örneklerle tutarlı olan yüksek proliferatif tümör hücreleri, lenfosit infiltrasyonu, miyeloid hücrelerin geniş bir infiltrasyonunu gösterdi. Diseksiyon sırasında, tiroid bezinin anatomik yerinin doğru anlaşılması gerekir. Tiroid bezi tiroid kıkırdağının ve trakeanın yanına yerleştirilir.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Orijinal Tümör Geliştirme Murin Deneysel Modeli ve Periton Metastaz<em&gt; yoluyla</emYumurtalık Kanseri Hücreleri ile&gt; Ortotopik aşılama

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

Kanser Araştırmaları

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

Klinik Öncesi Bir Murin Modeli İçin Cerrahi Prosedürler ve Metodoloji<emDe Novo</emMeme Kanseri Metastazı

A rate-limiting aspect of transgenic mouse models of mammary adenocarcinoma is that primary tumor burden in mammary tissue typically defines study ...

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

Bir Fare Ortotopik Mesane Tümör Modeli ve Tümör Tespit Sistemi

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Periferik Radyasyonla Bağlı Yorgunluk A Fare Modeli

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Identification and Characterization of Metastatic Factors by Gene Transfer into the Novel RIP-Tag; RIP-tva Murine Model

Identification and Characterization of Metastatic Factors by Gene Transfer into the Novel RIP-Tag; RIP-tva Murine Model

Kimlik ve metastatik faktörler gen transferi ile karakterizasyonu roman RIP-etiketinin içine; RIP-tva fare modeli

Metastatic cancer accounts for 90% of deaths in patients with solid tumors. There is an urgent need to better understand the drivers of cancer metastasis ...

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

Vivo fare siyatik sinir modeli Perineural işgali

Cancer cells invade nerves through a process termed perineural invasion (PNI), in which cancer cells proliferate and migrate in the nerve ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Kollarındaki ve floresan Orthotopic Syngeneic fare modeli androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Performing Data Mining And Integrative Analysis Of Biomarker in Breast Cancer Using Multiple Publicly Accessible Databases

Veri madenciliği ve meme kanserinde biyomarker Integrative analizi gerçekleştirmek birden çok genel erişilebilir veritabanları kullanma

In recent years, emerging databases were designed to lower the barriers for approaching the intricate cancer genomic datasets, thereby, facilitating ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

İskemi Reperfüzyon Hasarı Ayarında Metastatik Karaciğer Tümörlerinin Murine Modeli

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

A Murine Ommaya Xenograft Model to Study Direct-Targeted Therapy of Leptomeningeal Disease

Leptomeningeal Hastalığın Doğrudan Hedefli Tedavisini Incelemek için Bir Murine Ommaya Xenograft Modeli

Leptomeningeal disease (LMD) is an uncommon type of central nervous system (CNS) metastasis to the cerebral spinal fluid (CSF). The most common cancers ...