Name: high-resolution ultrasonography for the analysis of orthotopic atc tumors in a genetically engineered mouse model
Uploaded: 2022-10-11T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-Resolution Ultrasonography for the Analysis of Orthotopic ATC Tumors in a Genetically Engineered Mouse Model at JoVE.com

Cette recherche n’a reçu aucune subvention spécifique d’organismes de financement publics, commerciaux ou sans but lucratif.

La présente étude a été réalisée avec l’approbation du Comité de soin et d’utilisation des animaux de l’Université du Sichuan. TPO-cre/ERT2; BrafCA/poids; Des souris transgéniques Trp53 Δex2-10/Δex2-10 10 ont été utilisées dans cette étude (voir le tableau des matériaux). Les étapes du protocole peuvent être modifiées pour différentes espèces animales si nécessaire. Douze souris, dont six femelles et six mâles, avec un ?...

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	<li>Maniakas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+overall+survival+in+patients+with+anaplastic+thyroid+carcinoma,+2000-2019.">Evaluation of overall survival in patients with anaplastic thyroid carcinoma, 2000-2019.</a> JAMA Oncology. 6 (9), 1397-1404 (2020).</li><li>Molinaro, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaplastic+thyroid+carcinoma:+From+clinicopathology+to+genetics+and+advanced+therapies.">Anaplastic thyroid carcinoma: From clinicopathology to genetics and advanced therapies.</a> Nature Reviews Endocrinology. 13 (11), 644-660 (2017).</li><li>Champa, D., Di Cristofano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+the+mouse.">Modeling anaplastic thyroid carcinoma in the mouse.</a> Hormones and Cancer. 6 (1), 37-44 (2015).</li><li>Vitiello, M., Kusmic, C., Faita, F., Poliseno, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+lymph+node+volume+by+ultra-high-frequency+ultrasound+imaging+in+the+Braf/Pten+genetically+engineered+mouse+model+of+melanoma.">Analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the Braf/Pten genetically engineered mouse model of melanoma.</a> Journal of Visualized Experiments. 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K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+ultrasound+including+elastography+and+contrast-enhanced+ultrasound+(CEUS)+for+early+detection+and+characterization+of+liver+lesions+in+the+humanized+tumor+mouse+model.">High resolution ultrasound including elastography and contrast-enhanced ultrasound (CEUS) for early detection and characterization of liver lesions in the humanized tumor mouse model.</a> Clinical Hemorheology and Microcirculation. 52 (2-4), 93-106 (2012).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+imaging+for+the+study+of+mouse+models+of+thyroid+cancer.">Preclinical imaging for the study of mouse models of thyroid cancer.</a> International Journal of Molecular Sciences. 18 (12), 2731 (2017).</li><li>Renault, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+ultrasound+imaging+of+the+mouse.">High-resolution ultrasound imaging of the mouse.</a> Journal of Radiologie. 87, 1937-1945 (2006).</li><li>McFadden, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p53+constrains+progression+to+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+a+Braf-mutant+mouse+model+of+papillary+thyroid+cancer.">p53 constrains progression to anaplastic thyroid carcinoma in a Braf-mutant mouse model of papillary thyroid cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (16), 1600-1609 (2014).</li><li>Garassini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+principles+of+ultrasonic+diagnosis.">Basic principles of ultrasonic diagnosis.</a> GEN. 39 (4), 283-289 (1985).</li><li>Aldrich, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+physics+of+ultrasound+imaging.">Basic physics of ultrasound imaging.</a> Critical Care Medicine. 35, 131-137 (2007).</li><li>Mancini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+ultrasound+microimaging+of+thyroid+in+living+mice.">Morphological ultrasound microimaging of thyroid in living mice.</a> Endocrinology. 150 (10), 4810-4815 (2009).</li><li>Ying, M., Yung, D. M., Ho, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-dimensional+ultrasound+measurement+of+thyroid+gland+volume:+a+new+equation+with+higher+correlation+with+3-D+ultrasound+measurement.">Two-dimensional ultrasound measurement of thyroid gland volume: a new equation with higher correlation with 3-D ultrasound measurement.</a> Ultrasound in Medicine &amp; Biology. 34 (1), 56-63 (2008).</li></ol>

Ce protocole utilise l’échographie à haute résolution pour analyser les tumeurs ATC orthotopiques dans un modèle murin génétiquement modifié. Le modèle transgénique, avec un génotype de TPO-cre/ERT2 ; BrafCA/poids; Trp53 Δex2-10/Δex2-10, a été développé dans notre laboratoire. Les animaux surexpriment BrafV600E et manquent de Trp53; L’injection intrapéritonéale de tamoxifène chez les animaux entraîne une croissance tumorale après environ 1 mois<s...

Bien que le carcinome anaplasique de la thyroïde (ATC) représente moins de 2 % des cancers de la thyroïde, il cause plus de 50 % des décès liés au cancer de la thyroïde chaque année. Le temps de survie médian après le diagnostic d’ATC n’est que d’environ 6 mois, et aucun traitement n’est disponible qui améliore significativement la survie 1,2.
La rareté de l’ATC a entravé la recherche sur la façon dont la maladie commence et progresse agressivement. Des modèles murins génétiquement modifiés qui imitent la maladie sont récemment devenus disponibles, qui fournissent des informations sur la maladie et ses réponses aux traitements possibles 3,4,5. De telles études nécessitent une imagerie tumorale précise pour les mesures et la surveillance, qui est généralement effectuée à l’aide de l’imagerie par résonance magnétique, de la tomodensitométrie ou de l’échographie à haute résolution 6,7. L’échographie a été largement utilisée dans les organes de souris. Il présente des avantages par rapport à l’imagerie par résonance magnétique et à la tomodensitométrie, car il peut être effectué en temps réel et n’expose pas le sujet à un rayonnement, et l’équipement nécessaire est suffisamment petit pour être portable 8,9. Cependant, les études sur la surveillance continue de la croissance de l’ATC à l’aide d’ultrasons sont rares; Par conséquent, ce travail explore l’utilité de l’échographie dans ce contexte.
Ici, un protocole d’utilisation de l’échographie à haute résolution pour scanner, surveiller et mesurer avec précision les tumeurs dans un modèle murin d’ATC est présenté.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adhesive tape</td>
			<td>Winner</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia system</td>
			<td>RWDlifescience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brafflox/wt mice</td>
			<td>Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chamber for anesthesia induction</td>
			<td>RWDlifescience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Winner</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td>Veet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric heating blanket</td>
			<td>Petbee</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporizer</td>
			<td>RWDlifescience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical gloves</td>
			<td>Winner</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper towels</td>
			<td>Breeze</td>
			<td>B914JY</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TPO-cre/ERT2 mice</td>
			<td>Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trp53flox/wt mice</td>
			<td>Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound gel</td>
			<td>Keppler</td>
			<td>KL-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound machine</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-resolution ultrasonography for the analysis of orthotopic atc tumors in a genetically engineered mouse model

Le carcinome anaplasique de la thyroïde (ATC) est associé à un mauvais pronostic et à une courte durée médiane de survie, mais aucun traitement efficace n’améliore significativement les résultats. Les modèles murins génétiquement modifiés qui imitent la progression de l’ATC peuvent aider les chercheurs à étudier les traitements pour cette maladie. Croisement de trois génotypes différents de souris, un TPO-cre/ERT2; BrafCA/poids; Le modèle ATC transgénique Trp53 Δex2-10/Δex2-10 a été développé. Le modèle murin ATC a été induit par une injection intrapéritonéale de tamoxifène avec surexpression de BrafV600E et délétion de Trp53, et les tumeurs ont été générées en environ 1 mois. Une échographie à haute résolution a été appliquée pour étudier l’initiation et la progression de la tumeur, et la courbe de croissance dynamique a été obtenue en mesurant la taille des tumeurs. Par rapport à l’imagerie par résonance magnétique (IRM) et à la tomodensitométrie, l’échographie présente des avantages dans l’observation du modèle murin ATC, comme être non invasive, portable, en temps réel et sans exposition aux rayonnements. Les ultrasons haute résolution conviennent aux mesures dynamiques et multiples. Cependant, l’examen échographique de la thyroïde chez la souris nécessite des connaissances anatomiques et une expérience pertinentes. Cet article fournit une procédure détaillée pour l’utilisation d’ultrasons à haute résolution pour scanner les tumeurs dans le modèle ATC transgénique. Pendant ce temps, l’ajustement des paramètres ultrasoniques, les compétences en échographie, l’anesthésie et la récupération des animaux, et d’autres éléments qui nécessitent une attention pendant le processus sont énumérés.

La taille moyenne de l’ATC droit au début de l’étude était de 4,867 mm2 et la taille moyenne de l’ATC gauche était de 5,189mm2. Sur la quatrième mesure, la taille moyenne de l’ATC droit était passée à 11,844 mm 2, tandis que la taille tumorale du lobe gauche avait atteint 9,280 mm2. La taille ATC totale est passée de 10,057mm2 à 15,843 mm2. Dans la dernière étape de l’étude, l’ATC a connu une croissance rapide. En ce qui concerne l...

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High-Resolution Ultrasonography for the Analysis of Orthotopic ATC Tumors in a Genetically Engineered Mouse Model

Le présent protocole décrit l’échographie à haute fréquence pour visualiser l’ensemble de la glande thyroïde de la souris et surveiller la croissance du carcinome anaplasique de la thyroïde.

Échographie à haute résolution pour l’analyse des tumeurs ATC orthotopiques dans un modèle murin génétiquement modifié

Anaplastic thyroid carcinoma (ATC) is associated with a poor prognosis and short median survival time, but no effective treatment improves the outcomes ...

Ce protocole aide les utilisateurs à utiliser l’échographie à haute résolution pour scanner, surveiller et mesurer les tumeurs dans le modèle murin de carcinome anaplasique de la thyroïde. L’échographie s’est avérée fiable chez la souris pour l’imagerie de tissus qui occupent des emplacements corporels similaires à ceux des tissus humains, y compris le foie, la thyroïde et le fœtus. Pour commencer, allumez le système d’échographie et créez un nouveau dossier pour capturer les images et collecter les données.Ensuite, sélectionnez la sonde linéaire de 40 mégahertz, cliquez sur le motif tissulaire superficiel pour activer le transducteur de tissu superficiel et utilisez le mode B résultant pour l’imagerie thyroïdienne. Nettoyez la plate-forme d’imagerie animale et allumez le bouton chauffant pour que la température de la plate-forme atteigne 38 à 40 degrés Celsius avant de placer l’animal dessus. Anesthésiez la souris et placez-la sur la plate-forme chauffée.Couvrez le museau avec un cône nasal relié à la sortie d’anesthésie. Ensuite, avec la souris en décubitus dorsal, utilisez du ruban adhésif pour fixer ses membres à la plate-forme chauffée. Pour l’imagerie tumorale, ajustez le système d’imagerie pour optimiser la résolution.Réglez le gain bidimensionnel sur 25 à 30 décibels, la profondeur de l’image sur 10 millimètres et le centre sur trois à six millimètres. Après avoir réglé les paramètres, appliquez généreusement le gel à ultrasons sur la zone de peau nue obtenue à l’aide d’une crème dépilatoire. En tenant la sonde, placez-la en contact avec le gel à ultrasons sur la poitrine.Ensuite, balayez de la poitrine vers le cou pour localiser la thyroïde. Identifier les tumeurs anaplasiques du carcinome thyroïdien de la trachée et des muscles de la sangle en fonction de l’emplacement anatomique et de l’écho échographique. Sur la base de l’impression de la tumeur totale, confirmez la section d’image avec le plus grand diamètre tumoral de gauche à droite.Ensuite, appuyez sur le bouton de congélation et mesurez les diamètres tumoraux antéropostérieur et de gauche à droite à l’aide de l’étrier à ultrasons. Après avoir terminé les scans, essuyez le gel à ultrasons et retirez le ruban de contention des membres de l’animal. La taille de la tumeur ATC des lobes droit et gauche a été mesurée sur quatre intervalles de temps.Sur la quatrième mesure, la taille moyenne de l’ATC droit avait atteint 11,844 millimètres carrés, tandis que la taille de la tumeur du lobe gauche avait atteint 9,280 millimètres carrés, ce qui faisait du total une augmentation moyenne de la taille à 15,843 millimètres carrés. Fait intéressant, chez la souris marquée P92, la taille de la tumeur était presque quatre fois plus grande que la taille de la mesure initiale. Le principal avantage de cette technique est que l’échographie est flexible et peut être réalisée en temps réel sans aucun rayonnement.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

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