Name: orthotopic implantation of patient-derived cancer cells in mice recapitulates advanced colorectal cancer
Uploaded: 2023-02-10T13:05:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer at JoVE.com

We danken de Cellex Foundation, het CIBERONC-netwerk en het Instituto de Salud Carlos III voor hun steun. Bovendien bedanken we ook het preklinische beeldvormingsplatform van het Vall d'Hebron Research Institute (VHIR), waar de experimenten werden uitgevoerd.

Van alle patiënten werd schriftelijke geïnformeerde toestemming verkregen. Het project werd goedgekeurd door de Commissie Onderzoeksethiek van het Universitair Ziekenhuis Vall d'Hebron, Barcelona, Spanje (goedkeuring ID: PR(IR)79/2009 PR(AG)114/2014, PR(AG)18/2018). Menselijke darmweefselmonsters bestonden uit biopsieën van niet-necrotische gebieden met primaire adenocarcinomen of levermetastasen, overeenkomend met patiënten met darm- en endeldarmkanker die tumorresectie ondergingen. De experimenten werden uitgevoerd...

<ol>
	<li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Cancer+Statistics+2020:+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: a Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).</li><li>Puig, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+personalized+preclinical+model+to+evaluate+the+metastatic+potential+of+patient-derived+colon+cancer+initiating+cells.">A personalized preclinical model to evaluate the metastatic potential of patient-derived colon cancer initiating cells.</a> Clinical Cancer Research. 19 (24), 6787-6801 (2013).</li><li>Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+development+and+disease+with+organoids.">Modeling development and disease with organoids.</a> Cell. 165 (7), 1586-1597 (2016).</li><li>Byrne, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interrogating+open+issues+in+cancer+precision+medicine+with+patient-derived+xenografts.">Interrogating open issues in cancer precision medicine with patient-derived xenografts.</a> Nature Reviews. Cancer. 17 (4), 254-268 (2017).</li><li>Vatandoust, S., Price, T. J., Karapetis, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorectal+cancer:+Metastases+to+a+single+organ.">Colorectal cancer: Metastases to a single organ.</a> World Journal of Gastroenterology. 21 (41), 11767-11776 (2015).</li><li>Cespedes, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+microinjection+of+human+colon+cancer+cells+in+nude+mice+induces+tumor+foci+in+all+clinically+relevant+metastatic+sites.">Orthotopic microinjection of human colon cancer cells in nude mice induces tumor foci in all clinically relevant metastatic sites.</a> The American Journal of Pathology. 170 (3), 1077-1085 (2007).</li><li>Durkee, B. Y., Weichert, J. P., Halberg, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+animal+micro-CT+colonography.">Small animal micro-CT colonography.</a> Methods. 50 (1), 36-41 (2010).</li><li>Boll, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Double-contrast+micro-CT+colonoscopy+in+live+mice.">Double-contrast micro-CT colonoscopy in live mice.</a> International Journal of Colorectal Disease. 26 (6), 721-727 (2011).</li><li>O'Brien, C. A., Pollett, A., Gallinger, S., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+colon+cancer+cell+capable+of+initiating+tumour+growth+in+immunodeficient+mice.">A human colon cancer cell capable of initiating tumour growth in immunodeficient mice.</a> Nature. 445 (7123), 106-110 (2007).</li><li>Jensen, M. M., Jorgensen, J. T., Binderup, T., Kjaer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+volume+in+subcutaneous+mouse+xenografts+measured+by+microCT+is+more+accurate+and+reproducible+than+determined+by+18F-FDG-microPET+or+external+caliper.">Tumor volume in subcutaneous mouse xenografts measured by microCT is more accurate and reproducible than determined by 18F-FDG-microPET or external caliper.</a> BMC Medical Imaging. 8, 16 (2008).</li><li>Herpers, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+patient-derived+organoid+screenings+identify+MCLA-158+as+a+therapeutic+EGFR+x+LGR5+bispecific+antibody+with+efficacy+in+epithelial+tumors.">Functional patient-derived organoid screenings identify MCLA-158 as a therapeutic EGFR x LGR5 bispecific antibody with efficacy in epithelial tumors.</a> Nature Cancer. 3 (4), 418-436 (2022).</li><li>Chicote, I., Camara, J. A., Palmer, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+colorectal+cancer+orthotopic+patient-derived+xenograft+models+for+cancer+and+stem+cell+research.">Advanced colorectal cancer orthotopic patient-derived xenograft models for cancer and stem cell research.</a> Methods in Molecular Biology. 2171, 321-329 (2020).</li></ol>

In de afgelopen decennia zijn er veel nieuwe antikankertherapieën ontwikkeld en getest bij patiënten met verschillende tumortypes, waaronder colorectale kanker (CRC). Hoewel in veel gevallen veelbelovende resultaten in preklinische modellen zijn waargenomen, is de therapeutische werkzaamheid bij patiënten met gevorderde gemetastaseerde CRC vaak beperkt. Daarom is er dringend behoefte aan preklinische modellen die het mogelijk maken om de werkzaamheid van nieuwe therapeutische geneesmiddelen te testen in een klinisch r...

Colorectale kanker (CRC) is wereldwijd de tweede belangrijkste doodsoorzaak doorkanker1. Het vermogen om in vitro of in vivo tumormodellen te genereren die zijn afgeleid van tumorcellen van individuele patiënten, heeft de precisiegeneeskunde in de oncologie geavanceerd. In het afgelopen decennium zijn van patiënten afgeleide organoïden (BOB's) of xenotransplantaten (PDX'en) door veel onderzoeksgroepen over de hele wereld gebruikt2. BOB's zijn meercellige in vitro structuren die lijken op de kenmerken van het oorspronkelijke tumorweefsel en zichzelf kunnen organiseren en vernieuwen3. Deze veelbelovende in vitro modellen kunnen met succes worden gebruikt voor het screenen van geneesmiddelen en het faciliteren van translationeel onderzoek. Aan de andere kant geven PDX-modellen getrouw het oorspronkelijke CRC weer op alle relevante niveaus, van histologie tot moleculaire eigenschappen en geneesmiddelrespons 2,4.
In vivo PDX-modellen worden meestal gekweekt als subcutane tumoren in immunodeficiënte muizen. Met behulp van deze aanpak zijn PDX'en de gouden standaard geworden in kankeronderzoek, met name voor het bestuderen van de gevoeligheid of resistentie van geneesmiddelen. CRC-gerelateerde sterfgevallen worden echter meestal geassocieerd met de aanwezigheid van gemetastaseerde laesies in de lever, de longen of de peritoneale holte, en geen van de twee benaderingen (PDO of PDX) kan de geavanceerde klinische setting recapituleren. Bovendien is aangetoond dat de specifieke plaats van tumorgroei belangrijke biologische kenmerken bepaalt die van invloed zijn op de werkzaamheid van geneesmiddelen en de prognose van de ziekte2. Daarom is er dringend behoefte aan het opstellen van preklinische modellen die kunnen worden gebruikt om de werkzaamheid van geneesmiddelen tegen kanker in een klinisch relevante gemetastaseerde setting te beoordelen6.
Microcomputertomografie (μCT)-scanners kunnen functioneren als verkleinde klinische CT-scanners, die primaire tumor- en metastasebeeldvorming bij muizen bieden met een geschaalde beeldresolutie die evenredig is met die van CT-beelden van kankerpatiënten7. Om het slechte wekedelencontrast van de μCT-techniek tegen te gaan, kunnen radiologische jodiumhoudende contrastmiddelen worden gebruikt om het contrast te verbeteren en de tumorbelasting te evalueren. Met behulp van een dubbele contrastbenadering wordt oraal en intraperitoneaal jodium op verschillende tijdstippen toegediend. Het contrast dat oraal wordt toegediend, helpt bij het bepalen van de grenzen tussen tumorweefsel en blindedarm in de darm.  Aan de andere kant maakt het intraperitoneaal toegediende contrast het mogelijk om de externe limieten van de tumormassa te identificeren, die vaak groeit en het peritoneum binnendringt8.
Het manuscript beschrijft een protocol om orthotope implantatie uit te voeren van kankercellen van patiënten in de blindedarmwand van immunodeficiënte muizen, en de methodologie om de groei van darmtumoren te volgen met behulp van μCT-scanning. Het huidige manuscript laat zien dat het model het klinische scenario van gevorderde darmtumoren en gemetastaseerde ziekte bij CRC-patiënten recapituleert die niet kunnen worden bestudeerd met behulp van PDO- of PDXO-modellen. Aangezien orthotope PDX-modellen van CRC het klinische scenario van CRC-patiënten samenvatten, concluderen we dat ze tot nu toe de beste zijn voor het testen van de werkzaamheid van antitumorale geneesmiddelen bij gevorderde darmtumoren en gemetastaseerde ziekte.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>REAGENT</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Apo-Transferrin</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>T1147-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement</td>
			<td>Life Technologies S.A (Spain)</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine Aqueous Solution 2%</td>
			<td>DH MATERIAL M&#201;DICO, S.L.</td>
			<td>1111696250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>C0130-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>G6152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM /F12&#160;</td>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES S.A.</td>
			<td>21331-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I&#160;&#160;</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>D4263-5VL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>PEPRO TECH EC LTD.</td>
			<td>AF-100-15-500 &#181;g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF basic</td>
			<td>PEPRO TECH EC LTD.</td>
			<td>100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fungizone</td>
			<td>Life Technologies S.A (Spain)</td>
			<td>15290026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamycin</td>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES S.A.</td>
			<td>15750037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Salt</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>H4784-250MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>I9278-5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iopamiro</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin</td>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES S.A.</td>
			<td>15160047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES S.A.</td>
			<td>25030032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Matrix</td>
			<td>CULTEK, S.L.U.</td>
			<td>356235/356234/354234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metacam, 5 mg/mL</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-essential amino acids</td>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES S.A.</td>
			<td>11140035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nystatin</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>N4014-50MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strep</td>
			<td>Life Technologies S.A (Spain)</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS), sterile</td>
			<td>Labclinics S.A</td>
			<td>L0615-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>P0130-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Putrescine</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>P5780-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBC Lysis Buffer&#160;</td>
			<td>Labclinics S.A</td>
			<td>00-4333-57</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate</td>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES S.A.</td>
			<td>11360039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Selenite</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>S5261-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ESSENTIAL SUPPLIES</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8 weeks-old NOD.CB17-Prkdcscid/NcrCrl mice</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Micro-Fine 0.5 ml U 100 needle 0.33 mm (29G) x 12.7 mm&#160;</td>
			<td>BECTON DICKINSON, S.A.U.</td>
			<td>320926</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade #24</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer 100 &#181;m</td>
			<td>Cultek, SLU</td>
			<td>45352360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps and Surgical scissors</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lacryvisc, 3 mg/g, ophthalmic gel</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surfasafe</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture PROLENE 5-0&#160;</td>
			<td>JOHNSON&#38;JOHNSON S, A.</td>
			<td>8720H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EQUIPMENT/SOFTWARE</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quantum FX &#181;CT Imaging system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>http://www.perkinelmer.com/es/product/quantum-gx-instrument-120-240-cls140083</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic implantation of patient-derived cancer cells in mice recapitulates advanced colorectal cancer

In het afgelopen decennium zijn meer geavanceerde preklinische modellen voor colorectale kanker (CRC) ontwikkeld met behulp van kankercellen van patiënten en 3D-tumoroïden. Aangezien tumororganoïden afkomstig van patiënten de kenmerken van de oorspronkelijke tumor kunnen behouden, maken deze betrouwbare preklinische modellen screening van kankergeneesmiddelen en de studie van resistentiemechanismen voor geneesmiddelen mogelijk. CRC-gerelateerde sterfte bij patiënten wordt echter meestal geassocieerd met de aanwezigheid van gemetastaseerde ziekte. Het is daarom essentieel om de werkzaamheid van antikankertherapieën te evalueren in relevante in vivo modellen die de belangrijkste moleculaire kenmerken van menselijke kankermetastasen echt samenvatten. We hebben een orthotopisch model opgesteld op basis van de injectie van CRC-kankercellen rechtstreeks in de blindedarmwand van muizen. Deze tumorcellen ontwikkelen primaire tumoren in de blindedarm die uitzaaien naar de lever en longen, wat vaak wordt waargenomen bij patiënten met gevorderde CRC. Dit CRC-muismodel kan worden gebruikt om geneesmiddelresponsen te evalueren die worden gecontroleerd door microcomputertomografie (μCT), een klinisch relevante kleinschalige beeldvormingsmethode die gemakkelijk primaire tumoren of metastasen bij patiënten kan identificeren. Hier beschrijven we de chirurgische ingreep en de vereiste methodologie om kankercellen van patiënten te implanteren in de blindedarmwand van immunodeficiënte muizen.

Muizen die orthotopisch waren geïmplanteerd met kankercellen van de patiënt werden wekelijks gecontroleerd door middel van μCT-scans. Aan het einde van het experiment werden de dieren geëuthanaseerd. Darmen, ceca (figuur 1A,B), levers, longen en andere mogelijke laesies werden verzameld, opgenomen in een cassette en 's nachts gefixeerd met 4% formaline. Darmweefsel van een muis zonder tumor in de blindedarm werd gebruikt als controle (Figuur 1C</stro...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer at JoVE.com

Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer

Dit protocol beschrijft de orthotope implantatie van kankercellen van patiënten in de blindedarmwand van immunodeficiënte muizen. Het model recapituleert gevorderde uitgezaaide ziekte van colorectale kanker en maakt de evaluatie van nieuwe therapeutische geneesmiddelen mogelijk in een klinisch relevant scenario van long- en levermetastasen.

Orthotope implantatie van patiënt-afgeleide kankercellen bij muizen recapituleert gevorderde colorectale kanker

Over the last decade, more sophisticated preclinical colorectal cancer (CRC) models have been established using patient-derived cancer cells and 3D ...

Dit protocol beschrijft de orthotope implantatie van kankercellen van patiënten in de blindedarmwand van immunodeficiënte muizen. Dit model recapituleert gevorderde colorectale kanker gemetastaseerde ziekte. Het orthotope colorectale kankermodel dat hier wordt gepresenteerd, recapituleert het klinische scenario van gevorderde darmtumoren en gemetastaseerde ziekte bij patiënten met colorectale kanker die niet kunnen worden bestudeerd met behulp van van patiënten afgeleide organoïden of van patiënten afgeleide xenotransplantaatmodellen.Van een geëuthanaseerde muis haalt u de tumor eruit door deze voorzichtig van de huid en het omliggende niet-tumorweefsel te verwijderen met een schaar en een pincet. Plaats de geoogste tumoren in PBS bij vier graden Celsius. Dissocieer met een mes de tumoren in een kweekplaat van 10 centimeter met een millimeter medium.Plaats het homogene gedissocieerde monster in een conische buis van 15 milliliter. Voeg vervolgens het medium toe tot een laatste volume van vijf milliliter. Voeg vervolgens het digestiemedium toe aan de buis.Plaats de buis gedurende een uur op een hoek van 45 graden in een celkweekincubator bij 37 graden Celsius. Meng tijdens de incubatie van een uur de oplossing elke 15 minuten met een pipet van vijf milliliter. Voeg na incubatie vijf milliliter medium toe en meng goed.Sorteer de oplossing vervolgens met een celzeef van 100 micrometer met behulp van een steriele buis van 50 milliliter. Centrifugeer de gesorteerde cellen op 500 g gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Zuig het supernatans op en resuspendeer de pellet in drie milliliter 1x RBC Lysis Buffer-oplossing.Incubeer gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Voeg vervolgens drie milliliter medium toe en meng het monster. Centrifugeer op 500 g gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur en zuig het supernatant op.Resuspendeer de pellet met vijf tot 10 milliliter medium en gebruik een celteller om het totale aantal cellen te berekenen. Na het centrifugeren van de cellen op 500 g gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur, resuspenderen in 10 milliliter PBS. Herhaal de centrifugatie en was met 10 milliliter PBS.Resuspendeer de pellet om een concentratie van 20 keer 10 op de zes cellen per milliliter te verkrijgen en meng goed om een homogene celsuspensie te verkrijgen. Maak vervolgens een spuit van 29 g klaar voor injectie met blindedarm. Laad 50 microliter van de tumorcelsuspensie in de spuit en zorg ervoor dat er geen luchtbellen in de spuit achterblijven.Plaats de spuit op ijs. Steriliseer eerst de operatieplaats door te besproeien met desinfecterend reinigingsmiddel en af te vegen. Ontharen vervolgens de buik met een muizenontharingsmachine.Plaats de muis in rugligging en desinfecteer de buik door te schrobben met chloorhexidine of povidonjodium. Maak een longitudinale incisie van één centimeter over de onderbuik met behulp van een operatieschaar. Scheid de huid voorzichtig naar de zijkanten om het buikvlies bloot te leggen.Maak vervolgens een incisie van 0,5 tot één centimeter in het buikvlies, voldoende om de blindedarm naar buiten te brengen. Isoleer met een voorgesneden steriel gaas de blindedarm zorgvuldig van de muis. Bevochtig de blindedarm was een zoutoplossing tijdens de procedure.Immobiliseer de blindedarm door deze voorzichtig met een tang vast te houden en breng de naald vervolgens oppervlakkig in de blindedarmwand. Injecteer langzaam het volledige volume van 50 microliter tumorcelsuspensie. Dit proces duurt ongeveer 10 seconden.Verwijder na de injectie langzaam de naald uit de blindedarm en oefen lichte druk uit op de injectieplaats met een wattenstaafje. Reinig de blindedarm met een zoutoplossing om vuil te verwijderen en breng de blindedarm terug naar de buik van het dier. Sluit het buikvlies met 5/0 hechtingen en sluit vervolgens de huid van de buik met 5/0 hechtingen.Orthotope CRC-PDX-tumoren werden waargenomen in de darm van muizen die waren geïmplanteerd met kankercellen van patiënten. Histologische analyse door hematoxyline- en eosinekleuring op de blindedarm toonde de aanwezigheid van tumorcellen aan. De histologische analyse onthulde ook longmetastasen en levermetastasen bij de geïmplanteerde muizen.Muizen met orthotope tumoren werden behandeld met het vehiculum, het testmedicijn of het chemotherapiemedicijn irinotecan. Analyse van micro-CT-scanbeelden toonde aan dat het testmedicijn in vergelijking met het vehiculum een vermindering van het tumorvolume veroorzaakte, die verder werd verminderd in combinatie met behandeling met irinotecan. Dit model zal helpen bij het bestuderen van de biologie van de metastase in colorectale kankertumoren.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

Geavanceerde diermodel van colorectale metastase in de lever: Imaging technieken en eigenschappen van gemetastaseerde Clones

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Isolatie van circulerende tumorcellen in een orthotopische muismodel van colorectale kanker

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

Establishment of a Primary Culture of Patient-derived Soft Tissue Sarcoma

Oprichting van een primaire cultuur van patiënt-afgeleide weke delen Sarcoom

Soft tissue sarcomas (STS) represent a spectrum of heterogeneous malignancies with a difficult diagnosis, classification, and management. To date, more ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Orthotopic injectie van borstkankercellen in de borstklier vet Pad muizen

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Patiënt-afgeleide Orthotopic xenograft modellen voor humaan Urotheelcelcarcinoom en colorectale kanker tumor groei en spontane metastasen

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Oprichting van maagkanker patiënten afgeleide xenograft modellen en primaire cellijnen

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Echografie-geleide Orthotopic implantatie van Murine pancreatic Ductal adenocarcinoom

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Drug Screening van primaire patiënt afgeleid tumor Xenografts bij zebravissen

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

Generation and Culturing of High-Grade Serous Ovarian Cancer Patient-Derived Organoids

Generatie en kweek van hoogwaardige sereuze eierstokkankerpatiënt-afgeleide organoïden

Organoids are 3D dynamic tumor models that can be grown successfully from patient-derived ovarian tumor tissue, ascites, or pleural fluid and aid in the ...

Translational Orthotopic Models of Glioblastoma Multiforme

Translationele orthotopische modellen van glioblastoom multiforme

Genetically engineered mouse (GEM) models for human glioblastoma multiforme (GBM) are critical to understanding the development and progression of brain ...