Name: implantation and evaluation of melanoma in the murine choroid via optical coherence tomography
Uploaded: 2022-12-02T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography at JoVE.com

تم دعم هذه الدراسة جزئيا من خلال المنحة 1304/20 من مؤسسة العلوم الإسرائيلية (ISF) ، إسرائيل ، لآري ماركوفيتش. نشكر شاهار إيشالوم وآدي يوسيبوفيتش ، من قسم علم الأمراض ، مركز كابلان الطبي ، رحوفوت ، إسرائيل ، على تحليل الأنسجة.

تمت الموافقة على التجارب في البروتوكول من قبل المجلس الوطني الإسرائيلي للتجارب على الحيوانات والامتثال لبيان ARVO لاستخدام الحيوانات في أبحاث العيون والرؤية. تم استخدام إناث الفئران C57BL / 6 ، الذين تتراوح أعمارهم بين 8-10 أسابيع ، في الدراسة الحالية وتعرضوا لدورات الضوء والظلام لمدة 12/12 ساعة. ...

<ol>
	<li>Jager, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uveal+melanoma.">Uveal melanoma.</a> Nature Reviews Disease Primers. 6 (1), 1-25 (2020).</li><li>Bustamante, P., Piquet, L., Landreville, S., Burnier, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uveal+melanoma+pathobiology:+Metastasis+to+the+liver.">Uveal melanoma pathobiology: Metastasis to the liver.</a> Seminars in Cancer Biology. 71, 65-85 (2021).</li><li>Damato, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+treatment+of+choroidal+melanoma+in+relation+to+the+prevention+of+metastatic+death-A+personal+view.">Ocular treatment of choroidal melanoma in relation to the prevention of metastatic death-A personal view.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 66, 187-199 (2018).</li><li>Jouhi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+small+fatal+choroidal+melanoma+study.+A+survey+by+the+European+Ophthalmic+Oncology+Group.">The small fatal choroidal melanoma study. A survey by the European Ophthalmic Oncology Group.</a> American Journal of Ophthalmology. 202, 100-108 (2019).</li><li>Cao, J., Jager, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+eye+models+for+uveal+melanoma.">Animal eye models for uveal melanoma.</a> Ocular Oncology and Pathology. 1 (3), 141-150 (2015).</li><li>Uner, O. E., Gandrakota, N., Azarcon, C. P., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+uveal+melanoma.">Animal models of uveal melanoma.</a> Annals of Eye Science. 7, 21-30 (2022).</li><li>Yang, H., Dithmar, S., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon+alpha+2b+decreases+hepatic+micrometastasis+in+a+murine+model+of+ocular+melanoma+by+activation+of+intrinsic+hepatic+natural+killer+cells.">Interferon alpha 2b decreases hepatic micrometastasis in a murine model of ocular melanoma by activation of intrinsic hepatic natural killer cells.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45 (7), 2056-2064 (2004).</li><li>Yang, H., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+immunologic+and+anti-angiogenic+therapy+reduces+hepatic+micrometastases+in+a+murine+ocular+melanoma+model.">Combined immunologic and anti-angiogenic therapy reduces hepatic micrometastases in a murine ocular melanoma model.</a> Current Eye Research. 31 (6), 557-562 (2006).</li><li>Rusciano, D., Lorenzoni, P., Burger, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+liver+metastasis.">Murine models of liver metastasis.</a> Invasion &amp; Metastasis. 14 (1-6), 349-361 (1994).</li><li>Diaz, C. E., Rusciano, D., Dithmar, S., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B16LS9+melanoma+cells+spread+to+the+liver+from+the+murine+ocular+posterior+compartment+(PC).">B16LS9 melanoma cells spread to the liver from the murine ocular posterior compartment (PC).</a> Current Eye Research. 18 (2), 125-129 (1999).</li><li>Rusciano, D., Lorenzoni, P., Burger, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+liver+metastasis.">Murine models of liver metastasis.</a> Invasion &amp; Metastasis. 14 (1-6), 349-361 (1994).</li><li>Ashur-Fabian, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrac+delayed+the+onset+of+ocular+melanoma+in+an+orthotopic+mouse+model.">Tetrac delayed the onset of ocular melanoma in an orthotopic mouse model.</a> Frontiers in Endocrinology. 12, 632335 (2019).</li><li>Elia, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+c-met+overexpression+in+liver-metastatic+B16-LS9+melanoma+cells.">Mechanisms regulating c-met overexpression in liver-metastatic B16-LS9 melanoma cells.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 81 (3), 477-487 (2001).</li><li>Harning, R., Szalay, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+metastasis+of+in+vivo+and+in+vitro+derived+syngeneic+murine+melanoma.">Ocular metastasis of in vivo and in vitro derived syngeneic murine melanoma.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 28 (9), 1599-1604 (1987).</li><li>Ezra-Elia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+an+in+vivo+imaging+system+be+used+to+determine+localization+and+biodistribution+of+AAV5-mediated+gene+expression+following+subretinal+and+intravitreal+delivery+in+mice.">Can an in vivo imaging system be used to determine localization and biodistribution of AAV5-mediated gene expression following subretinal and intravitreal delivery in mice.</a> Experimental Eye Research. 176, 227-234 (2018).</li><li>Notting, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+bioluminescent+imaging+of+human+uveal+melanoma+in+a+new+mouse+model+of+local+tumor+growth+and+metastasis.">Whole-body bioluminescent imaging of human uveal melanoma in a new mouse model of local tumor growth and metastasis.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 46 (5), 1581-1587 (2005).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+xenograft+murine+human+uveal+melanoma+model+develops+hepatic+micrometastases.">In-vivo xenograft murine human uveal melanoma model develops hepatic micrometastases.</a> Melanoma Research. 18 (2), 95-103 (2008).</li><li>Murthy, R. K., Haji, S., Sambhav, K., Grover, S., Chalam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+applications+of+spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+retinal+diseases.">Clinical applications of spectral domain optical coherence tomography in retinal diseases.</a> Biomedical Journal. 39 (2), 107-120 (2016).</li><li>Drexler, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrahigh-resolution+ophthalmic+optical+coherence+tomography.">Ultrahigh-resolution ophthalmic optical coherence tomography.</a> Nature Medicine. 7 (4), 502-507 (2001).</li><li>Ochakovski, G. A., Fischer, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotyping+of+mouse+models+with+OCT.">Phenotyping of mouse models with OCT.</a> Methods in Molecular Biology. 1834, 285-291 (2019).</li><li>Zaks, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+imaging+for+assessing+tumor+growth+in+mouse+models+of+ocular+melanoma.">In-vivo imaging for assessing tumor growth in mouse models of ocular melanoma.</a> Experimental Eye Research. 204, 108431 (2021).</li><li>Brar, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Academy+of+Ophthalmology+2022-2023+BCSC.+2.">American Academy of Ophthalmology 2022-2023 BCSC. 2.</a> Fundamentals and principles of ophthalmology. , (2022).</li><li>Duker, J. S., Waheed, N. K., Goldman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Retinal OCT: Optical Coherence Tomography, 2nd Edition. , (2021).</li><li>Tomayko, M. M., Reynolds, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+subcutaneous+tumor+size+in+athymic+(nude)+mice.">Determination of subcutaneous tumor size in athymic (nude) mice.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 24 (3), 148-154 (1989).</li><li>Richards, J. R., Yoo, J. H., Shin, D., Odelberg, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+uveal+melanoma:+Strengths,+weaknesses,+and+future+directions.">Mouse models of uveal melanoma: Strengths, weaknesses, and future directions.</a> Pigment Cell &amp; Melanoma Research. 33 (2), 264 (2020).</li><li>Chen, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoacoustic+molecular+imaging-escorted+adipose+photodynamic-browning+synergy+for+fighting+obesity+with+virus-like+complexes.">Photoacoustic molecular imaging-escorted adipose photodynamic-browning synergy for fighting obesity with virus-like complexes.</a> Nature Nanotechnology. 16 (4), 455-465 (2021).</li><li>Yu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+visualization+of+early+cancer+hepatic+micrometastasis+and+intraoperative+image-guided+surgery+by+photoacoustic+imaging.">Label-free visualization of early cancer hepatic micrometastasis and intraoperative image-guided surgery by photoacoustic imaging.</a> Journal of Nuclear Medicine. 61 (7), 1079-1085 (2020).</li></ol>

سرطان الجلد العنبي هو مرض مدمر هناك حاجة ماسة إلى أساليب علاجية جديدة له. ومع ذلك ، فإن البحث عن سرطان الجلد العنبي والعلاجات المحتملة محدود بسبب التحديات التقنية للنماذج الحيوانية للورم الميلانيني العنبي1،25. أورام العين ، التي يسببها الحقن داخل العين للخل...

الورم الميلانيني العنبي (UM) هو الورم الخبيث الأولي داخل العين الأكثر شيوعا لدى البالغين. ما يقرب من 90 ٪ من الأورام الميلانينية العينية تنشأ من الخلايا الصباغية في منطقة المشيمية في القناة العنبية1. UM هو سبب رئيسي للمراضة والوفيات ، حيث تشير التقديرات إلى أن ما يقرب من 50 ٪ من المرضى يصابون بمرض نقيلي ، مع كون الكبد هو الموقع الرئيسي للورم الخبيث2. قد يقلل العلاج المبكر للآفات الأولية من فرصة حدوث النقائل ، ولكن لا يوجد علاج فعال يمنع تكوين النقائل3.
يشمل العلاج القياسي لسرطان الجلد العنبي العلاج الإشعاعي ، والذي يرتبط بفقدان الرؤية بسبب اعتلال الأعصاب البصرية ، واعتلال الشبكية ، ومتلازمة العين الجافة ، وإعتام عدسة العين. عادة ما يتأخر الاستئصال الجراحي حتى يتم التعرف على نمو الآفة وتوصيفها. ومع ذلك ، فإن مثل هذا التأخير قد يسمح بتطور المرض النقيلي4. في بعض الحالات ، مطلوب استئصال غير مجدي. بالطبع ، هذا الإجراء الجذري يضر بالرؤية ويؤدي إلى تدهور جمالي كبير.
كانت هناك العديد من الجهود المكرسة لتطوير نماذج تجريبية لدراسة سرطان الجلد العنبي. تعد النماذج الحيوانية قبل السريرية التي تسمح بالتقييم الدقيق لهذا الورم الخبيث أساسية للتحقيق في الاستراتيجيات التشخيصية والعلاجية الجديدة لسرطان الجلد العنبي. تعتمد النماذج الحيوانية التجريبية لسرطان الجلد العيني بشكل أساسي على تلقيح الخلايا السرطانية في الفئران والجرذان والأرانب 5,6. نماذج الفئران فعالة من حيث التكلفة وتستخدم على نطاق واسع لدراسات سرطان الجلد بسبب معدل تكاثرها السريع وتشابه الجينوم العالي مع البشر. يستخدم خط خلايا سرطان الجلد الجلدي B16 بشكل شائع لتلقيح الفئران C57BL6 وإحداث أورام وراثية. عند استخدام هذا النموذج للحث على سرطان الجلد العنبي ، تحتاج العيون الحاملة للورم عادة إلى استئصالها بعد 7-14 يوما من التلقيح. علاوة على ذلك ، B16 هو نموذج شديد التوغل. تدعم الطبيعة المناعية للعين ورم خبيث ، ويمكن عادة اكتشاف النقائل بعد 3-4 أسابيع من تلقيح الخلايا السرطانية. تعرض الثقافات الفرعية لخط B16 الأصلي خصائص نقيلية مميزة6. على سبيل المثال ، يحتوي خط سرطان الجلد في كوينز على معدل نقيلي مرتفع 7,8. يحتوي خط الخلية B16LS9 على مورفولوجيا الخلايا المتغصنة وتم اشتقاقه من نقائل الكبد للفئران C57BL / 6 المحقونة بخط سرطان الجلد الجلدي الأبوي B16F19. عند حقنها في المقصورة الخلفية للعين ، تبين أن هذه الخلايا تشكل أوراما داخل العين ، والتي تشبه نسيجيا سرطان الجلد العنبي البشري وتشكل نقائل خاصة بالكبد في C57BL / 6 ، ولكن ليس Balb / C ، الفئران10،11،12. وراثيا ، تتميز الخلايا بتعبير أعلى عن الجين الورمي الأولي c-met ، والذي يعمل كمستقبل خلوي لعامل نمو خلايا الكبد13. في المقابل ، ينتقل B16F10 ،الممر العاشر من B16 الأبوي ، بشكل أساسي إلى الرئتين عند تلقيحه داخل العين14. كل من B16F10 و B16LS9 مصطبغان12.
تحد العديد من التحديات الرئيسية من نجاح نماذج سرطان الجلد العنبي الفأر. أولا ، قد يؤدي ارتجاع الخلايا السرطانية إلى سرطان الجلد خارج العين أو تحت الملتحمة. ثانيا ، غالبا ما يكون نمو الورم بعد التلقيح داخل العين لخلايا سرطان الجلد متغيرا للغاية ، مما يشكل صعوبات في تقييم العلاج والتقدم. صعوبة رئيسية أخرى هي القدرة المحدودة على متابعة نمو الورم في الجسم الحي. في حين أن التصوير الحيوي ، مثل الأورام التي تعبر عن لوسيفيراز ، يستخدم بشكل شائع لمراقبة نمو ورم العين15,16 ، إلا أنه لا يمكنه توفير معلومات عن موقع الورم داخل العين. لذلك ، يتم إجراء تقييم الورم عادة بعد استئصال العين10,17. هذا يحد بشكل كبير من القدرة على توصيف تطور الورم والاستجابة للعلاجات على نطاق واسع. عقبة رئيسية أخرى في دراسة سرطان الجلد العنبي هي صعوبة مراقبة الآفات في الفئران المصطبغة. هناك حاجة إلى نهج جديدة ، للتغلب على هذه الصعوبات ، لتعزيز البحث عن سرطان الجلد العنبي في النماذج الحيوانية.
يوفر التصوير المقطعي للتماسك البصري (OCT) قدرات مميزة للتصوير بعمق في أقسام العين المختلفة بدقة عالية ، وهو أمر لا مثيل له في المنهجيات الأخرى ، بما في ذلك الموجات فوق الصوتية18,19. تم استخدام التصوير المقطعي المحوسب في النماذج الحيوانية لدراسة أمراض العين المختلفة20. في الآونة الأخيرة ، تم عرض التصوير المقطعي المحوسب كوسيلة غير جراحية لتقييم نمو الورم داخل العين21. يصور البروتوكول الموصوف هنا زرع خلايا سرطان الجلد في مشيمية الفئران واستخدام OCT للتنبؤ بتوطين الورم داخل العين وحجمه في وقت تلقيح الخلايا.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 &#956;L glass syringe (Hamilton Co., Bonaduz, Switzerland)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>721711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G needles</td>
			<td>BD Microbalance</td>
			<td>2025-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezole hydrochloride</td>
			<td>Orion Phrma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B16LS9 cells</td>
			<td>from Hans Grossniklaus USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine&#160;</td>
			<td>richter pharma</td>
			<td>102047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 female mice</td>
			<td>Envigo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Essential vitamin mixture</td>
			<td>satorius</td>
			<td>01-025-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>rhenium</td>
			<td>10270106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-025-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroxyethylcellulose 1.4% eye drops</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>390862</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSight OCT segmentation software&#160;</td>
			<td>Phoenix Micron, Inc&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>bremer pharma GMBH (medimarket)</td>
			<td>17889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-020-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine&#160;</td>
			<td>zoetis (vetmarket)</td>
			<td>102532</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ofloxacin 0.3% eye drops</td>
			<td>allergan</td>
			<td>E92170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical coherence tomography&#160;</td>
			<td>Phoenix Micron, Inc&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxybuprocaine 0.4%</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>393050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin-amphoteracin</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-033-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)&#160;</td>
			<td>satorius</td>
			<td>02-023-1a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI cell media</td>
			<td>satorius</td>
			<td>01-104-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-042-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>OPMI-6 CFC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide 0.5%</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>390723</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

implantation and evaluation of melanoma in the murine choroid via optical coherence tomography

يعد إنشاء نماذج تجريبية لسرطان الجلد المشيمي أمرا صعبا من حيث القدرة على تحفيز الأورام في التوطين الصحيح. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الصعوبات في مراقبة سرطان الجلد المشيمي الخلفي في الجسم الحي تحد من موقع الورم وتقييم النمو في الوقت الفعلي. يعمل النهج الموصوف هنا على تحسين تقنيات إنشاء سرطان الجلد المشيمي في الفئران عبر إجراء حقن الخلايا B16LS9 المشيمية متعدد الخطوات. لتمكين الدقة في الحقن في الأبعاد الصغيرة للعنبية الفأرية ، يتم تنفيذ الإجراء الكامل تحت المجهر. أولا ، يتم تشكيل محيط الملتحمة في المنطقة الظهرية الزمنية للعين. بعد ذلك ، يتم إنشاء مسار في الفضاء المشيمي الفرعي عن طريق إدخال إبرة من خلال الصلبة المكشوفة. ويتبع ذلك إدخال إبرة حادة في القناة وحقن خلايا سرطان الجلد في المشيمية. بعد الحقن مباشرة، يتم استخدام التصوير المقطعي للتماسك البصري غير الباضع (OCT) لتحديد موقع الورم وتقدمه. يتم تقييم انفصال الشبكية كمؤشر لموقع الورم وحجمه. تتيح الطريقة المقدمة الحث القابل للتكرار للورم الميلانيني الموضعي المشيمي في الفئران والتصوير الحي لتقييم نمو الورم. على هذا النحو ، فإنه يوفر أداة قيمة لدراسة أورام العين.

تم فحص العيون عبر OCT مباشرة بعد حقن خلايا B16LS9. لوحظ انفصال الشبكية المحلي بعد الحقن. أظهرت الفئران ثلاثة أنماط من RD: البؤري (الشكل 2 ، اللوحة العلوية) ، والتسرب إلى الجسم الزجاجي (الشكل 2 ، اللوحة الوسطى) ، و RD الممتد (الشكل 2 ، اللوحة السفلية).</stro...

Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography at JoVE.com

Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography

يصف هذا البروتوكول زرع وتقييم سرطان الجلد في المشيمية الفئران باستخدام التصوير المقطعي للتماسك البصري.

زرع وتقييم سرطان الجلد في المشيمية الفئران عن طريق التصوير المقطعي للتماسك البصري

Establishing experimental choroidal melanoma models is challenging in terms of the ability to induce tumors at the correct localization. In addition, ...

يعد إنشاء الأورام كجزء خلفي من العين أمرا صعبا. تتيح هذه الطريقة تحريض أورام سرطان الجلد المشيمية القابلة للتكاثر في الفئران ، والتصوير الحي لنمو الورم للتقييم. يستخدم هذا البروتوكول التصوير الحي OCT لتقييم موقع الأورام بالفعل في وقت تلقيح الخلايا السرطانية ، ومتابعة نمو الورم في الحيوانات الحية.سرطان الجلد العنبي هو مرض مدمر مع ما يقرب من 50 ٪ من معدل ورم خبيث. يعد تطوير النماذج التجريبية أمرا أساسيا لتطوير الأبحاث التي تهدف إلى إمكانيات علاجية جديدة. ميزة هذه الطريقة هي أن التقييم الفوري لنجاح الحقن يسمح بالوصول إلى مجموعات الدراسة ذات الأورام المتجانسة ومتابعتها باستمرار عن طريق التصوير الحي.لفحص تطور الورم. يتطلب الحقن في عيون الفأر الصغير الممارسة. تتيح لك القدرة على تصور الخلايا المحقونة تقييم نجاحك على الفور والتكرار مع المزيد من الفئران حسب الضرورة.سيوضح الإجراء الدكتور ديميتري جابر من مختبر أبحاث طب العيون في مركز كابلان الطبي. للبدء ، ضع 0.4٪ مخدر موضعي للعين ، أوكسيبوبروكائين على كلتا عيني الفأر المخدر. ثم ضع موضعيا 0.5٪ تروبيكاميد على كلتا العينين لتوسيع حدقة العين ، متبوعا ب 1.4٪ هيدروكسي إيثيل السليلوز كمواد تشحيم لتجنب جفاف العينين.راقب عين واحدة من الماوس تحت مجهر التشغيل. امسك الجفون مفتوحة بملقط معقم داخل العين. ثم امسك الملتحمة الصدغية العلوية واسحبها نحو وضع الأنف تحت الأرض.تأمين هذا الموقف عن طريق عقد الملتحمة النسيان طوال العملية. باستخدام طرف إبرة قياس 30 ، قم بعمل محيط ملتحمة صغير في المنطقة الصدغية الظهرية حوالي واحد إلى ملليمترين خلف الطرف. إزالة كبسولة الأوتار الزائدة من فتحة الصفاق.أدخل طرف الإبرة لاختراق الصلبة لإنشاء مسار في الفضاء تحت المشيمية حتى يظهر اللون البني للمشيمية من خلال المادة البيضاء المكشوفة للصلب. قم بتحميل الخلايا في حقنة هاميلتون زجاجية معقمة سعة 10 ميكرولتر مثبتة بإبرة حادة قياس 32 ملتوية بزاوية 45 درجة. أدخل إبرة المحقنة المحملة حوالي مليمترين في القناة التي تم إنشاؤها ، وحقن ميكرولتر من تعليق الخلية.ثبت الإبرة في مكانها بعد الحقن لمدة ثانيتين إلى ثلاث ثوان حتى يتم التخلص من كل السوائل. قم بإزالة الإبرة عن طريق سحبها برفق لتجنب التسرب من المسالك. مباشرة بعد تلقيح خلايا سرطان الجلد ، لاحظ العين المحقونة للحيوان عن طريق مسح OCT.بناء على عمليات الفحص ، قم بتصنيف انفصال الشبكية أو أنماط RD وفقا لثلاث فئات RD المحلية أو التسرب إلى الجسم الزجاجي أو RD الممتد. افتح برنامج تحليل تجزئة OCT للتنبؤ بحجم الورم بناء على ارتفاع RD. قم بقياس ارتفاع RD المحلي في عمليات فحص OCT ، وصنفها إلى ثلاث مجموعات. في مرحلة ما بعد الجراحة ، ضع 0.3٪ من أوفلوكساسين موضعيا.يصور هذا الشكل التنبؤ القائم على OCT لنمو الورم بعد حقن الخلايا تحت المشيمية. أظهرت الفئران ثلاثة أنماط من RD ، البؤري ، التسرب إلى الجسم الزجاجي ، و RD الممتد. كان هناك ارتباط بين نمط RD مباشرة بعد الحقن ، وتوطين الأورام بعد خمسة أيام من الحقن. ارتبط RD البؤري بنمو الخلايا السرطانية التي اقتصرت على المشيمية.ومع ذلك ، فإن ملاحظة الخلايا في الجسم الزجاجي بعد الحقن في الحيوانات التي تظهر RD البؤري تشير إلى نمو الورم في التجويف الزجاجي والمشيمية. عندما لوحظ RD الممتد بعد الحقن ، تم تفريق الأورام في جميع أنحاء المشيمية والجسم الزجاجي بعد خمسة أيام. يمكن تقسيم نطاق أحجام الورم المستحثة في هذا النموذج إلى صغيرة ومتوسطة وكبيرة.تظهر هنا صور تمثيلية لقياس OCT لارتفاع RD بعد الحقن ، وصورة قاع العين المقابلة ، ومسح OCT أفقي لارتفاع الورم وعرضه في اليوم الخامس بعد الحقن ، وصورة قاع العين المقابلة له ، وقسم العين الملطخة H&E المقابل الذي يوضح قياسات الورم المماثلة. يتم عرض قياسات حجم الورم للفئران التي قدمت RD صغيرة أو متوسطة أو كبيرة مباشرة بعد حقن الخلايا هنا. يمكن أن يؤثر ضبط قوة الحقن على حجم الورم وموقعه.من المهم معايرة هذا وتقييم نمط انفصال الشبكية المستحث بواسطة OCT بعد الحقن. يعد التصوير المباشر لأورام المشيمية أداة تجريبية مهمة تسمح بفحص تأثير العوامل المختلفة أو العلاجات المحتملة على تطور الورم.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

نموذج الفأر من التعب المستحث بواسطة الطرفية تشعيع

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

استخدام الموجات فوق الصوتية تسترشد الأنسجة الموجهة غرس الخلوية لإنشاء تكثيفها الورم المنتشر بيولوجيا ذات الصلة

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

تخصيب اليورانيوم وتوصيف ميكرونفيرونمينتس المناعي والمناعة غير ورم في المنشأة الأورام مورين تحت الجلد

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

رصد المورفولوجية والفسيولوجية طولية من الماغنيسيوم الورم ثلاثي الأبعاد باستخدام التصوير المقطعي التماسك البصري

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

Rapid Generation of Primary Murine Melanocyte and Fibroblast Cultures

الجيل السريع من الخلايا الصباغية الأولية Murine والثقافات الليفية

Defects in fibroblast or melanocyte function are associated with skin diseases, including poor barrier function, defective wound healing, pigmentation ...

Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells

التحكم المكاني والزماني للبدء من الميلانوما من الخلايا الجذعية المتحولة للخلايا الصباغية

Cutaneous melanoma is well known as the most aggressive skin cancer. Although the risk factors and major genetic alterations continue to be documented ...

Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice

جيل من الكبد البشرية العظام الإنسان الجلد البقري النظام الأساسي في الفئران نقص المناعة

In recent decades, subcutaneously implanted patient-derived xenograft tumors or cultured human cell lines have been increasingly recognized as more ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

الموجات فوق الصوتية غرس العظام البنكرياس الاقنيه اللحمية

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells

في المختبر تقييم التحول Oncogenic في الخلايا الظهارية ماماري الإنسان

Tumorigenesis is a multi-step process in which cells acquire capabilities&#160;that allow their growth, survival, and dissemination under hostile ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

نمذجة ورم خبيث في الدماغ عن طريق حقن الوريد الخلفي لخلايا سرطان الثدي الالتهابية

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...