Name: implantation and evaluation of melanoma in the murine choroid via optical coherence tomography
Uploaded: 2022-12-02T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography at JoVE.com

מחקר זה נתמך בחלקו על ידי מענק 1304/20 מהקרן הלאומית למדע (ISF), ישראל, עבור אריה מרקוביץ. אנו מודים לשחר איש-שלום ולעדי יוסיפוביץ, מהמחלקה לפתולוגיה, המרכז הרפואי קפלן, רחובות, ישראל, על ניתוח היסטולוגיה.

הניסויים בפרוטוקול אושרו על ידי המועצה הלאומית הישראלית לניסויים בבעלי חיים ועומדים בהצהרת ARVO לשימוש בבעלי חיים בחקר העיניים והראייה. נקבות עכברי C57BL/6, בגילאי 8-10 שבועות, שימשו במחקר הנוכחי ונחשפו למחזורי אור-חושך של 12/12 שעות. בעלי החיים התקבלו ממקור מסחרי (ראו טבלת חומרים).
<p class...

<ol>
	<li>Jager, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uveal+melanoma.">Uveal melanoma.</a> Nature Reviews Disease Primers. 6 (1), 1-25 (2020).</li><li>Bustamante, P., Piquet, L., Landreville, S., Burnier, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uveal+melanoma+pathobiology:+Metastasis+to+the+liver.">Uveal melanoma pathobiology: Metastasis to the liver.</a> Seminars in Cancer Biology. 71, 65-85 (2021).</li><li>Damato, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+treatment+of+choroidal+melanoma+in+relation+to+the+prevention+of+metastatic+death-A+personal+view.">Ocular treatment of choroidal melanoma in relation to the prevention of metastatic death-A personal view.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 66, 187-199 (2018).</li><li>Jouhi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+small+fatal+choroidal+melanoma+study.+A+survey+by+the+European+Ophthalmic+Oncology+Group.">The small fatal choroidal melanoma study. A survey by the European Ophthalmic Oncology Group.</a> American Journal of Ophthalmology. 202, 100-108 (2019).</li><li>Cao, J., Jager, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+eye+models+for+uveal+melanoma.">Animal eye models for uveal melanoma.</a> Ocular Oncology and Pathology. 1 (3), 141-150 (2015).</li><li>Uner, O. E., Gandrakota, N., Azarcon, C. P., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+uveal+melanoma.">Animal models of uveal melanoma.</a> Annals of Eye Science. 7, 21-30 (2022).</li><li>Yang, H., Dithmar, S., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon+alpha+2b+decreases+hepatic+micrometastasis+in+a+murine+model+of+ocular+melanoma+by+activation+of+intrinsic+hepatic+natural+killer+cells.">Interferon alpha 2b decreases hepatic micrometastasis in a murine model of ocular melanoma by activation of intrinsic hepatic natural killer cells.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45 (7), 2056-2064 (2004).</li><li>Yang, H., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+immunologic+and+anti-angiogenic+therapy+reduces+hepatic+micrometastases+in+a+murine+ocular+melanoma+model.">Combined immunologic and anti-angiogenic therapy reduces hepatic micrometastases in a murine ocular melanoma model.</a> Current Eye Research. 31 (6), 557-562 (2006).</li><li>Rusciano, D., Lorenzoni, P., Burger, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+liver+metastasis.">Murine models of liver metastasis.</a> Invasion &amp; Metastasis. 14 (1-6), 349-361 (1994).</li><li>Diaz, C. E., Rusciano, D., Dithmar, S., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B16LS9+melanoma+cells+spread+to+the+liver+from+the+murine+ocular+posterior+compartment+(PC).">B16LS9 melanoma cells spread to the liver from the murine ocular posterior compartment (PC).</a> Current Eye Research. 18 (2), 125-129 (1999).</li><li>Rusciano, D., Lorenzoni, P., Burger, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+liver+metastasis.">Murine models of liver metastasis.</a> Invasion &amp; Metastasis. 14 (1-6), 349-361 (1994).</li><li>Ashur-Fabian, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrac+delayed+the+onset+of+ocular+melanoma+in+an+orthotopic+mouse+model.">Tetrac delayed the onset of ocular melanoma in an orthotopic mouse model.</a> Frontiers in Endocrinology. 12, 632335 (2019).</li><li>Elia, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+c-met+overexpression+in+liver-metastatic+B16-LS9+melanoma+cells.">Mechanisms regulating c-met overexpression in liver-metastatic B16-LS9 melanoma cells.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 81 (3), 477-487 (2001).</li><li>Harning, R., Szalay, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+metastasis+of+in+vivo+and+in+vitro+derived+syngeneic+murine+melanoma.">Ocular metastasis of in vivo and in vitro derived syngeneic murine melanoma.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 28 (9), 1599-1604 (1987).</li><li>Ezra-Elia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+an+in+vivo+imaging+system+be+used+to+determine+localization+and+biodistribution+of+AAV5-mediated+gene+expression+following+subretinal+and+intravitreal+delivery+in+mice.">Can an in vivo imaging system be used to determine localization and biodistribution of AAV5-mediated gene expression following subretinal and intravitreal delivery in mice.</a> Experimental Eye Research. 176, 227-234 (2018).</li><li>Notting, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+bioluminescent+imaging+of+human+uveal+melanoma+in+a+new+mouse+model+of+local+tumor+growth+and+metastasis.">Whole-body bioluminescent imaging of human uveal melanoma in a new mouse model of local tumor growth and metastasis.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 46 (5), 1581-1587 (2005).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+xenograft+murine+human+uveal+melanoma+model+develops+hepatic+micrometastases.">In-vivo xenograft murine human uveal melanoma model develops hepatic micrometastases.</a> Melanoma Research. 18 (2), 95-103 (2008).</li><li>Murthy, R. K., Haji, S., Sambhav, K., Grover, S., Chalam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+applications+of+spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+retinal+diseases.">Clinical applications of spectral domain optical coherence tomography in retinal diseases.</a> Biomedical Journal. 39 (2), 107-120 (2016).</li><li>Drexler, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrahigh-resolution+ophthalmic+optical+coherence+tomography.">Ultrahigh-resolution ophthalmic optical coherence tomography.</a> Nature Medicine. 7 (4), 502-507 (2001).</li><li>Ochakovski, G. A., Fischer, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotyping+of+mouse+models+with+OCT.">Phenotyping of mouse models with OCT.</a> Methods in Molecular Biology. 1834, 285-291 (2019).</li><li>Zaks, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+imaging+for+assessing+tumor+growth+in+mouse+models+of+ocular+melanoma.">In-vivo imaging for assessing tumor growth in mouse models of ocular melanoma.</a> Experimental Eye Research. 204, 108431 (2021).</li><li>Brar, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Academy+of+Ophthalmology+2022-2023+BCSC.+2.">American Academy of Ophthalmology 2022-2023 BCSC. 2.</a> Fundamentals and principles of ophthalmology. , (2022).</li><li>Duker, J. S., Waheed, N. K., Goldman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Retinal OCT: Optical Coherence Tomography, 2nd Edition. , (2021).</li><li>Tomayko, M. M., Reynolds, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+subcutaneous+tumor+size+in+athymic+(nude)+mice.">Determination of subcutaneous tumor size in athymic (nude) mice.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 24 (3), 148-154 (1989).</li><li>Richards, J. R., Yoo, J. H., Shin, D., Odelberg, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+uveal+melanoma:+Strengths,+weaknesses,+and+future+directions.">Mouse models of uveal melanoma: Strengths, weaknesses, and future directions.</a> Pigment Cell &amp; Melanoma Research. 33 (2), 264 (2020).</li><li>Chen, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoacoustic+molecular+imaging-escorted+adipose+photodynamic-browning+synergy+for+fighting+obesity+with+virus-like+complexes.">Photoacoustic molecular imaging-escorted adipose photodynamic-browning synergy for fighting obesity with virus-like complexes.</a> Nature Nanotechnology. 16 (4), 455-465 (2021).</li><li>Yu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+visualization+of+early+cancer+hepatic+micrometastasis+and+intraoperative+image-guided+surgery+by+photoacoustic+imaging.">Label-free visualization of early cancer hepatic micrometastasis and intraoperative image-guided surgery by photoacoustic imaging.</a> Journal of Nuclear Medicine. 61 (7), 1079-1085 (2020).</li></ol>

מלנומה של ענבל היא מחלה הרסנית שעבורה יש צורך רב בגישות טיפוליות חדשניות. עם זאת, המחקר על מלנומה ענביה וטיפולים פוטנציאליים מוגבל על ידי האתגרים הטכניים של מלנומה uveal מודלים בעלי חיים 1,25. גידולים עיניים, הנגרמים על ידי הזרקה תוך עינית של תאים סרטניים, משתני?...

מלנומה של Uveal (UM) היא הממאירות הראשונית התוך עינית השכיחה ביותר במבוגרים. כ-90% מהמלנומות של העין מקורן במלנוציטים באזור הכורואידי של דרכי הענבל1. UM הוא גורם עיקרי לתחלואה ותמותה, שכן ההערכה היא כי קרוב ל -50% מהחולים מפתחים מחלה גרורתית, כאשר הכבד הוא האתר העיקרי של גרורות2. טיפול מוקדם בנגעים ראשוניים עשוי להפחית את הסיכוי לגרורות, אך אין טיפול יעיל המונע היווצרות גרורות3.
הטיפול המקובל במלנומה של הענבל כולל הקרנות, הקשורות לאובדן ראייה עקב נוירופתיה אופטית, רטינופתיה, תסמונת העין היבשה וקטרקט. כריתה כירורגית מתעכבת בדרך כלל עד לזיהוי ואפיון צמיחת הנגע. עם זאת, עיכוב כזה עלול לאפשר התפתחות מחלה גרורתית4. במקרים מסוימים, נדרשת אינוקלציה חסרת תוחלת. כמובן שהליך רדיקלי זה פוגע בראייה וגורם להידרדרות אסתטית דרמטית.
מאמצים רבים הוקדשו לפיתוח מודלים ניסיוניים לחקר מלנומה של הענבה. מודלים פרה-קליניים של בעלי חיים המאפשרים הערכה מדויקת של ממאירות זו הם המפתח לחקר אסטרטגיות אבחון וטיפול חדשניות למלנומה של הענבה. מודלים ניסיוניים של מלנומה עינית בבעלי חיים מבוססים בעיקר על חיסון תאי גידול בעכברים, חולדות וארנבות 5,6. מודלים של עכברים הם חסכוניים ונמצאים בשימוש נרחב במחקרי מלנומה בשל קצב ההתרבות המהיר שלהם ודמיון גנומי גבוה לבני אדם. קו תאי המלנומה העורית B16 משמש בדרך כלל לחיסון עכברי C57BL6 ולגרימת גידולים סינגניים. כאשר משתמשים במודל זה כדי לגרום למלנומה של העגלה, עיניים נושאות גידול בדרך כלל צריכות לעבור אינקולציה 7-14 יום לאחר החיסון. יתר על כן, B16 הוא מודל פולשני מאוד. האופי החיסוני של העין תומך בגרורות, וגרורות עשויות בדרך כלל להתגלות 3-4 שבועות לאחר חיסון תאי הגידול. תת-תרבויות של קו B16 המקורי מציגות תכונות גרורתיות מובהקות6. לדוגמה, לקו המלנומה של קווינס יש שיעור גרורתי גבוה 7,8. לקו התאים B16LS9 יש מורפולוגיה של תאים דנדריטיים והוא נגזר מגרורות בכבד של עכברי C57BL/6 שהוזרקו לקו המלנומה העורית של ההורים B16F19. כאשר הוזרקו לתא האחורי של העין, תאים אלה הוכחו כיוצרים גידולים תוך עיניים, אשר דומים היסטולוגית למלנומה של הענבל האנושי ויוצרים גרורות ספציפיות לכבד ב- C57BL/6, אך לא Balb/C, עכברים10,11,12. מבחינה גנטית, התאים מאופיינים בביטוי גבוה יותר של הפרוטו-אונקוגן c-met, הפועל כקולטן תאי לגורם גדילה של הפטוציטים13. לעומת זאת, B16F10, המעברהעשירי של B16 ההורי, שולח גרורות בעיקר לריאות כאשר הוא מחוסן תוך עינית14. גם B16F10 וגם B16LS9 הם פיגמנט12.
מספר אתגרים מרכזיים מגבילים את ההצלחה של מודלים של מלנומה של מורין uveal. ראשית, ריפלוקס של תאי הגידול עלול להוביל למלנומה חוץ-עינית או תת-לחמית. שנית, צמיחת הגידול לאחר חיסון תוך עיני של תאי מלנומה היא לעתים קרובות משתנה מאוד, ומציבה קשיים בהערכת הטיפול והתקדמותו. קושי מרכזי נוסף הוא היכולת המוגבלת לעקוב אחר צמיחת הגידול in vivo. בעוד הדמיה ביולומינסנטית, כגון של גידולים המבטאים לוציפראז, משמשת בדרך כלל למעקב אחר צמיחת הגידול העיני15,16, היא אינה יכולה לספק מידע על המיקום התוך עיני של הגידול. לכן, הערכה של הגידול מבוצעת בדרך כלל לאחר enucleation של העין10,17. זה מגביל מאוד את היכולת לאפיין את התקדמות הגידול ואת התגובה לטיפולים באופן נרחב. מכשול מרכזי נוסף בחקר מלנומה של הענבל הוא הקושי בניטור נגעים בעכברים עם פיגמנטציה. גישות חדשות, המתגברות על קשיים אלה, נדרשות כדי לקדם את המחקר של מלנומה ענבית במודלים של בעלי חיים.
טומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCT) מספקת יכולות ייחודיות לתמונה עמוק לתוך חלקי העין השונים ברזולוציה גבוהה, שאין דומה לה במתודולוגיות אחרות, כולל אולטרסאונד18,19. הדמיית OCT שימשה במודלים של בעלי חיים לחקר מחלות עיניים שונות20. לאחרונה, הדמיית OCT הודגמה כאמצעי לא פולשני להערכת צמיחת גידול תוך עיני21. הפרוטוקול המתואר כאן מתאר את השתלת תאי המלנומה בכורואיד המוריני ואת השימוש ב-OCT לחיזוי לוקליזציה וגודל הגידול התוך-עיני בזמן חיסון התא.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 &#956;L glass syringe (Hamilton Co., Bonaduz, Switzerland)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>721711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G needles</td>
			<td>BD Microbalance</td>
			<td>2025-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezole hydrochloride</td>
			<td>Orion Phrma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B16LS9 cells</td>
			<td>from Hans Grossniklaus USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine&#160;</td>
			<td>richter pharma</td>
			<td>102047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 female mice</td>
			<td>Envigo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Essential vitamin mixture</td>
			<td>satorius</td>
			<td>01-025-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>rhenium</td>
			<td>10270106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-025-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroxyethylcellulose 1.4% eye drops</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>390862</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSight OCT segmentation software&#160;</td>
			<td>Phoenix Micron, Inc&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>bremer pharma GMBH (medimarket)</td>
			<td>17889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-020-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine&#160;</td>
			<td>zoetis (vetmarket)</td>
			<td>102532</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ofloxacin 0.3% eye drops</td>
			<td>allergan</td>
			<td>E92170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical coherence tomography&#160;</td>
			<td>Phoenix Micron, Inc&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxybuprocaine 0.4%</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>393050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin-amphoteracin</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-033-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)&#160;</td>
			<td>satorius</td>
			<td>02-023-1a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI cell media</td>
			<td>satorius</td>
			<td>01-104-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-042-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>OPMI-6 CFC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide 0.5%</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>390723</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

implantation and evaluation of melanoma in the murine choroid via optical coherence tomography

הקמת מודלים ניסיוניים למלנומה כורואידית מאתגרת מבחינת היכולת לגרום לגידולים במיקום הנכון. בנוסף, קשיים בתצפית על מלנומה כורואידית אחורית in vivo מגבילים את מיקום הגידול ואת הערכת הצמיחה בזמן אמת. הגישה המתוארת כאן מייעלת טכניקות לביסוס מלנומה כורואידית בעכברים באמצעות הליך הזרקת תאים תת-כורואידי B16LS9 רב-שלבי. כדי לאפשר דיוק בהזרקה לממדים הקטנים של העכבר uvea, ההליך המלא מבוצע תחת מיקרוסקופ. ראשית, פריטומיה הלחמית נוצרת באזור הגבי-טמפורלי של העין. לאחר מכן, נוצרת מערכת לתוך החלל התת-כורואידי על ידי החדרת מחט דרך הסקלרה החשופה. זה ואחריו החדרת מחט קהה לתוך דרכי והזרקת תאי מלנומה לתוך choroid. מיד לאחר ההזרקה, נעשה שימוש בהדמיית טומוגרפיה קוהרנטית אופטית לא פולשנית (OCT) כדי לקבוע את מיקום הגידול והתקדמותו. היפרדות הרשתית מוערכת כמנבא של אתר הגידול וגודלו. השיטה המוצגת מאפשרת השראת שחזור של מלנומה מקומית כורואידית בעכברים והדמיה חיה של הערכת צמיחת גידול. ככזה, הוא מספק כלי רב ערך לחקר גידולים תוך עיניים.

העיניים נבדקו באמצעות OCT מיד לאחר הזרקת תאי B16LS9. היפרדות רשתית מקומית נצפתה לאחר ההזרקה. העכברים הציגו שלוש תבניות של RD: מוקד (איור 2, פאנל עליון), דליפה לזגוגית (איור 2, פאנל אמצעי) ו-RD מורחב (איור 2, פאנל תחתון). RD מורחב נגרם ככל הנראה על ידי ?...

Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography at JoVE.com

Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את ההשתלה וההערכה של מלנומה בכורואיד מורין תוך שימוש בטומוגרפיה קוהרנטית אופטית.

השתלה והערכה של מלנומה בכורואיד מורין באמצעות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית

Establishing experimental choroidal melanoma models is challenging in terms of the ability to induce tumors at the correct localization. In addition, ...

ביסוס גידולים כחלק האחורי של העין הוא מאתגר. שיטה זו מאפשרת השראת גידולי מלנומה כורואידית הניתנים לשחזור בעכברים, והדמיה חיה של צמיחת הגידול לצורך הערכה. פרוטוקול זה משתמש בהדמיה חיה OCT כדי להעריך את מיקום הגידולים כבר בזמן חיסון תאי הגידול, ולעקוב אחר צמיחת הגידול בבעלי חיים חיים.מלנומה של Uveal היא מחלה הרסנית עם שיעור גרורות קרוב ל-50%. פיתוח מודלים ניסיוניים הוא המפתח לקידום מחקר המכוון לאפשרויות טיפוליות חדשות. היתרון של שיטה זו הוא שההערכה המיידית של הצלחת ההזרקה מאפשרת להגיע לקבוצות מחקר עם גידולים הומוגניים ולעקוב אחריהם ברציפות באמצעות הדמיה חיה.כדי לבחון את התקדמות הגידול. הזרקה לעיניו של העכבר הקטן דורשת תרגול. היכולת לדמיין את התאים המוזרקים מאפשרת לך להעריך את ההצלחה שלך באופן מיידי ולחזור עם עכברים נוספים לפי הצורך.מי שידגים את ההליך יהיה ד"ר דימיטרי גאבר מהמעבדה לחקר העיניים במרכז הרפואי קפלן. כדי להתחיל, להחיל 0.4% הרדמה אופתלמית אקטואלית, Oxybuprocaine על שתי העיניים של העכבר מורדם. לאחר מכן יש למרוח באופן מקומי 0.5% טרופיקמיד על שתי העיניים להרחבת האישונים, ולאחר מכן 1.4% תאית הידרוקסיאתיל כחומר סיכה למניעת ייבוש העיניים.התבונן בעין אחת של העכבר תחת מיקרוסקופ הפעלה. החזיקו את העפעפיים פתוחים בעזרת מלקחיים תוך עיניים סטריליות. לאחר מכן החזיקו את לחמית הלימבו הרקתית העליונה ומשכו לכיוון תנוחת אף אינפרא.אבטח תנוחה זו על ידי החזקת הלימבו-לחמית לאורך כל ההליך. באמצעות קצה מחט של 30 מד ליצור פריטומיה קטנה של הלחמית באזור הרקתי הגבי כמילימטר עד שני מילימטרים אחוריים ללימבוס. הסר את קפסולת הגידים העודפים מפתח הצפק.הכנס את קצה המחט כדי לחדור את לובן העין וליצור מסילה לתוך החלל הסובכורואידי עד שהצבע החום של הכורואיד מופיע דרך החומר הלבן החשוף של הסקלרה. העמיסו את התאים לתוך מזרק המילטון סטרילי מזכוכית 10 מיקרוליטר המורכב עם מחט קהה 32 מד מעוותת בזווית של 45 מעלות. הכנס את המחט של המזרק הטעון כשני מילימטרים לתוך מערכת שנוצרה, והזריק שני מיקרוליטר של השעיית התא.החזיקו את המחט במקומה לאחר ההזרקה למשך שתיים עד שלוש שניות עד שכל הנוזלים התפנו. הסר את המחט על ידי שליפתה החוצה בעדינות כדי למנוע דליפה מדרכי הנשימה. מיד לאחר חיסון תאי המלנומה, התבוננו בעין המוזרקת של החיה על ידי סריקות OCT.בהתבסס על הסריקות, סווגו את ניתוק הרשתית או דפוסי RD לפי שלוש קטגוריות RD מקומי, דליפה לתוך הזגוגית, או RD מורחב. פתח תוכנת ניתוח פילוח OCT כדי לחזות את גודל הגידול בהתבסס על גובה RD. מדוד את הגובה של RD מקומי בסריקות OCT וסווג אותן לשלוש קבוצות. בשלב שלאחר הניתוח, להחיל 0.3% של Ofloxacin באופן מקומי.החיזוי מבוסס OCT של צמיחת הגידול לאחר הזרקת תאים subchoroidal מתואר באיור זה. העכברים הציגו שלושה דפוסים של RD, מוקד, דליפה לזגוגית ו- RD מורחב. נמצא קשר בין דפוס RD מיד לאחר ההזרקה, לבין לוקליזציה של הגידולים חמישה ימים לאחר ההזרקה. RD מוקד היה קשור לצמיחת תאי הגידול שהייתה מוגבלת לכורואיד.עם זאת, תצפית על תאים בזגוגית לאחר הזרקה בבעלי חיים המציגים RD מוקדי הצביעה על צמיחת הגידול בחלל הזגוגית ובכורואיד. כאשר נצפתה RD מורחב לאחר ההזרקה, הגידולים התפזרו לאורך הכורואיד והזגוגית לאחר חמישה ימים. ניתן לחלק את טווח גדלי הגידול המושרה במודל זה לקטנים, בינוניים וגדולים.מוצגות כאן תמונות מייצגות של מדידת OCT של גובה RD לאחר הזרקה, ותמונת הפונדוס המתאימה, סריקת OCT אופקית של גובה הגידול ורוחבו ביום החמישי לאחר ההזרקה, ותמונת הפונדוס המתאימה לו, ואזור העין המוכתם H&E המתאים המדגים מדידות גידול דומות. מדידות נפח הגידול של עכברים שהציגו RD קטן, בינוני או גדול מיד לאחר הזרקת התא מוצגות כאן. התאמת כוח ההזרקה יכולה להשפיע על גודל הגידול ומיקומו.חשוב לכייל זאת ולהעריך את הדפוס של היפרדות רשתית מושרית על ידי OCT לאחר ההזרקה. הדמיה חיה של גידולים כורואידיים היא כלי ניסיוני חשוב המאפשר לבחון את ההשפעה של גורמים שונים או טיפולים פוטנציאליים על התקדמות הגידול.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

במודל עכבר של עייפות הנגרם על ידי הקרנה ההיקפית

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

ניצול של אולטרסאונד מודרכת מכוון רקמות השרשה הסלולר להקמתה של גידול גרורתי רלוונטי מבחינה ביולוגית Xenografts

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

העשרה ואפיון של Microenvironments המערכת החיסונית והחיסון של הגידול הוקמה גידולים מאתר תת עורית

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

האורך פיזיולוגיים מורפולוגיים ניטור של Spheroids תלת מימדי הגידול באמצעות טומוגרפיה אופטית קוהרנטית

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

Rapid Generation of Primary Murine Melanocyte and Fibroblast Cultures

הדור המהיר של משפחת מלנוציט הראשית והתרבויות בפיברובלסט

Defects in fibroblast or melanocyte function are associated with skin diseases, including poor barrier function, defective wound healing, pigmentation ...

Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells

שליטה מרחבית וטמפורלית של מלנומה מורין ייזום מוטציה תאי גזע מלנוציט

Cutaneous melanoma is well known as the most aggressive skin cancer. Although the risk factors and major genetic alterations continue to be documented ...

Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice

הדור של מלנומה האדם Uveal האנושי פלטפורמת Xהשתל בעכברים חיסוני

In recent decades, subcutaneously implanted patient-derived xenograft tumors or cultured human cell lines have been increasingly recognized as more ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

אולטרה סאונד-הדרכה אורתודפית של הלבלב מורלין אדנוקרצינומה

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells

הערכה במבחנה של טרנספורמציה אונקוגנית בתאי אפיתל ממ"ר אנושיים

Tumorigenesis is a multi-step process in which cells acquire capabilities&#160;that allow their growth, survival, and dissemination under hostile ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

מידול גרורות במוח באמצעות הזרקת ורידים בזנב של תאי סרטן שד דלקתיים

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...