Name: implantation and evaluation of melanoma in the murine choroid via optical coherence tomography
Uploaded: 2022-12-02T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography at JoVE.com

इस अध्ययन को एरी मार्कोविच के लिए इज़राइल साइंस फाउंडेशन (आईएसएफ), इज़राइल से अनुदान 1304/20 द्वारा समर्थित किया गया था। हम हिस्टोलॉजी विश्लेषण के लिए पैथोलॉजी विभाग, कपलान मेडिकल सेंटर, रेहोवोट, इज़राइल से शहर ईश-शालोम और एडी योसिपोविच को धन्यवाद देते हैं।

प्रोटोकॉल में प्रयोगों को पशु प्रयोग पर इजरायल ी राष्ट्रीय परिषद द्वारा अनुमोदित किया गया था और नेत्र और दृष्टि अनुसंधान में जानवरों का उपयोग करने के लिए एआरवीओ वक्तव्य का अनुपालन किया गया था। 8-10 सप्त...

<ol>
	<li>Jager, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uveal+melanoma.">Uveal melanoma.</a> Nature Reviews Disease Primers. 6 (1), 1-25 (2020).</li><li>Bustamante, P., Piquet, L., Landreville, S., Burnier, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uveal+melanoma+pathobiology:+Metastasis+to+the+liver.">Uveal melanoma pathobiology: Metastasis to the liver.</a> Seminars in Cancer Biology. 71, 65-85 (2021).</li><li>Damato, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+treatment+of+choroidal+melanoma+in+relation+to+the+prevention+of+metastatic+death-A+personal+view.">Ocular treatment of choroidal melanoma in relation to the prevention of metastatic death-A personal view.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 66, 187-199 (2018).</li><li>Jouhi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+small+fatal+choroidal+melanoma+study.+A+survey+by+the+European+Ophthalmic+Oncology+Group.">The small fatal choroidal melanoma study. A survey by the European Ophthalmic Oncology Group.</a> American Journal of Ophthalmology. 202, 100-108 (2019).</li><li>Cao, J., Jager, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+eye+models+for+uveal+melanoma.">Animal eye models for uveal melanoma.</a> Ocular Oncology and Pathology. 1 (3), 141-150 (2015).</li><li>Uner, O. E., Gandrakota, N., Azarcon, C. P., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+uveal+melanoma.">Animal models of uveal melanoma.</a> Annals of Eye Science. 7, 21-30 (2022).</li><li>Yang, H., Dithmar, S., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon+alpha+2b+decreases+hepatic+micrometastasis+in+a+murine+model+of+ocular+melanoma+by+activation+of+intrinsic+hepatic+natural+killer+cells.">Interferon alpha 2b decreases hepatic micrometastasis in a murine model of ocular melanoma by activation of intrinsic hepatic natural killer cells.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45 (7), 2056-2064 (2004).</li><li>Yang, H., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+immunologic+and+anti-angiogenic+therapy+reduces+hepatic+micrometastases+in+a+murine+ocular+melanoma+model.">Combined immunologic and anti-angiogenic therapy reduces hepatic micrometastases in a murine ocular melanoma model.</a> Current Eye Research. 31 (6), 557-562 (2006).</li><li>Rusciano, D., Lorenzoni, P., Burger, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+liver+metastasis.">Murine models of liver metastasis.</a> Invasion &amp; Metastasis. 14 (1-6), 349-361 (1994).</li><li>Diaz, C. E., Rusciano, D., Dithmar, S., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B16LS9+melanoma+cells+spread+to+the+liver+from+the+murine+ocular+posterior+compartment+(PC).">B16LS9 melanoma cells spread to the liver from the murine ocular posterior compartment (PC).</a> Current Eye Research. 18 (2), 125-129 (1999).</li><li>Rusciano, D., Lorenzoni, P., Burger, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+liver+metastasis.">Murine models of liver metastasis.</a> Invasion &amp; Metastasis. 14 (1-6), 349-361 (1994).</li><li>Ashur-Fabian, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrac+delayed+the+onset+of+ocular+melanoma+in+an+orthotopic+mouse+model.">Tetrac delayed the onset of ocular melanoma in an orthotopic mouse model.</a> Frontiers in Endocrinology. 12, 632335 (2019).</li><li>Elia, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+c-met+overexpression+in+liver-metastatic+B16-LS9+melanoma+cells.">Mechanisms regulating c-met overexpression in liver-metastatic B16-LS9 melanoma cells.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 81 (3), 477-487 (2001).</li><li>Harning, R., Szalay, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+metastasis+of+in+vivo+and+in+vitro+derived+syngeneic+murine+melanoma.">Ocular metastasis of in vivo and in vitro derived syngeneic murine melanoma.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 28 (9), 1599-1604 (1987).</li><li>Ezra-Elia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+an+in+vivo+imaging+system+be+used+to+determine+localization+and+biodistribution+of+AAV5-mediated+gene+expression+following+subretinal+and+intravitreal+delivery+in+mice.">Can an in vivo imaging system be used to determine localization and biodistribution of AAV5-mediated gene expression following subretinal and intravitreal delivery in mice.</a> Experimental Eye Research. 176, 227-234 (2018).</li><li>Notting, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+bioluminescent+imaging+of+human+uveal+melanoma+in+a+new+mouse+model+of+local+tumor+growth+and+metastasis.">Whole-body bioluminescent imaging of human uveal melanoma in a new mouse model of local tumor growth and metastasis.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 46 (5), 1581-1587 (2005).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+xenograft+murine+human+uveal+melanoma+model+develops+hepatic+micrometastases.">In-vivo xenograft murine human uveal melanoma model develops hepatic micrometastases.</a> Melanoma Research. 18 (2), 95-103 (2008).</li><li>Murthy, R. K., Haji, S., Sambhav, K., Grover, S., Chalam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+applications+of+spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+retinal+diseases.">Clinical applications of spectral domain optical coherence tomography in retinal diseases.</a> Biomedical Journal. 39 (2), 107-120 (2016).</li><li>Drexler, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrahigh-resolution+ophthalmic+optical+coherence+tomography.">Ultrahigh-resolution ophthalmic optical coherence tomography.</a> Nature Medicine. 7 (4), 502-507 (2001).</li><li>Ochakovski, G. A., Fischer, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotyping+of+mouse+models+with+OCT.">Phenotyping of mouse models with OCT.</a> Methods in Molecular Biology. 1834, 285-291 (2019).</li><li>Zaks, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+imaging+for+assessing+tumor+growth+in+mouse+models+of+ocular+melanoma.">In-vivo imaging for assessing tumor growth in mouse models of ocular melanoma.</a> Experimental Eye Research. 204, 108431 (2021).</li><li>Brar, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Academy+of+Ophthalmology+2022-2023+BCSC.+2.">American Academy of Ophthalmology 2022-2023 BCSC. 2.</a> Fundamentals and principles of ophthalmology. , (2022).</li><li>Duker, J. S., Waheed, N. K., Goldman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Retinal OCT: Optical Coherence Tomography, 2nd Edition. , (2021).</li><li>Tomayko, M. M., Reynolds, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+subcutaneous+tumor+size+in+athymic+(nude)+mice.">Determination of subcutaneous tumor size in athymic (nude) mice.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 24 (3), 148-154 (1989).</li><li>Richards, J. R., Yoo, J. H., Shin, D., Odelberg, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+uveal+melanoma:+Strengths,+weaknesses,+and+future+directions.">Mouse models of uveal melanoma: Strengths, weaknesses, and future directions.</a> Pigment Cell &amp; Melanoma Research. 33 (2), 264 (2020).</li><li>Chen, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoacoustic+molecular+imaging-escorted+adipose+photodynamic-browning+synergy+for+fighting+obesity+with+virus-like+complexes.">Photoacoustic molecular imaging-escorted adipose photodynamic-browning synergy for fighting obesity with virus-like complexes.</a> Nature Nanotechnology. 16 (4), 455-465 (2021).</li><li>Yu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+visualization+of+early+cancer+hepatic+micrometastasis+and+intraoperative+image-guided+surgery+by+photoacoustic+imaging.">Label-free visualization of early cancer hepatic micrometastasis and intraoperative image-guided surgery by photoacoustic imaging.</a> Journal of Nuclear Medicine. 61 (7), 1079-1085 (2020).</li></ol>

यूवियल मेलेनोमा एक विनाशकारी बीमारी है जिसके लिए नए चिकित्सीय दृष्टिकोण की बहुत आवश्यकता है। हालांकि, यूवियल मेलेनोमा और संभावित उपचार पर शोध यूवियल मेलेनोमा पशु मॉडल 1,25 की तकन?...

यूवियल मेलेनोमा (यूएम) वयस्कों में सबसे लगातार इंट्राओकुलर प्राथमिक दुर्दमता है। लगभग 90% ओकुलर मेलेनोमा यूवियल ट्रैक्ट1 के कोरॉयड क्षेत्र में मेलानोसाइट्स से उत्पन्न होते हैं। यूएम रुग्णता और मृत्यु दर का एक प्रमुख कारण है, क्योंकि यह अनुमान लगाया गया है कि लगभग 50% रोगी मेटास्टैटिक बीमारी विकसित करते हैं, यकृत मेटास्टेसिस2 की प्रमुख साइट है। प्राथमिक घावों का प्रारंभिक उपचार मेटास्टेस की संभावना को कम कर सकता है, फिर भी कोई प्रभावी उपचार मेटास्टेसगठन को रोकता नहीं है।
यूवियल मेलेनोमा के मानक उपचार में विकिरण चिकित्सा शामिल है, जो ऑप्टिक न्यूरोपैथी, रेटिनोपैथी, सूखी आंख सिंड्रोम और मोतियाबिंद के कारण दृष्टि के नुकसान से जुड़ी है। सर्जिकल रिसेक्शन में आमतौर पर देरी होती है जब तक कि घाव के विकास को पहचाना और विशेषता नहीं दी जाती है। हालांकि, इस तरह की देरी मेटास्टैटिक रोग के विकास की अनुमति दे सकतीहै। कुछ मामलों में, व्यर्थ न्यूक्लियेशन की आवश्यकता होती है। बेशक, यह कट्टरपंथी प्रक्रिया दृष्टि से समझौता करती है और इसके परिणामस्वरूप नाटकीय सौंदर्य गिरावट होती है।
यूवियल मेलेनोमा का अध्ययन करने के लिए प्रयोगात्मक मॉडल विकसित करने के लिए समर्पित कई प्रयास किए गए हैं। प्रीक्लिनिकल पशु मॉडल जो इस घातकता के सटीक मूल्यांकन की अनुमति देते हैं, यूवियल मेलेनोमा के लिए नवीन नैदानिक और चिकित्सीय रणनीतियों की जांच के लिए महत्वपूर्ण हैं। ओकुलर मेलेनोमा के प्रयोगात्मक पशु मॉडल मुख्य रूप से चूहों, चूहों और खरगोशों में ट्यूमर कोशिकाओं के टीकाकरण पर आधारित हैं। माउस मॉडल लागत प्रभावी हैं और उनकी तेजी से प्रजनन दर और मनुष्यों के लिए उच्च जीनोम समानता के कारण मेलेनोमा अध्ययन के लिए व्यापक रूप से उपयोग किए जाते हैं। म्यूरिन त्वचीय मेलेनोमा सेल लाइन बी 16 का उपयोग आमतौर पर सी 57बीएल 6 चूहों को टीका लगाने और सिंजेनिक ट्यूमर को प्रेरित करने के लिए किया जाता है। यूवियल मेलेनोमा को प्रेरित करने के लिए इस मॉडल का उपयोग करते समय, ट्यूमर-असर वाली आंखों को आमतौर पर टीकाकरण के 7-14 दिन बाद एन्यूक्लिएट करने की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, बी 16 एक अत्यधिक आक्रामक मॉडल है। आंख की प्रतिरक्षा-विशेषाधिकार प्राप्त प्रकृति मेटास्टेसिस का समर्थन करती है, और मेटास्टेस आमतौर पर ट्यूमर सेल टीकाकरण के 3-4 सप्ताह बाद पता लगाया जा सकता है। मूल बी 16 लाइन के उपसंस्कृति अलग-अलग मेटास्टैटिकगुण प्रदर्शित करते हैं। उदाहरण के लिए, क्वींस मेलेनोमा लाइन में उच्च मेटास्टैटिक दर 7,8 है। बी 16एलएस 9 सेल लाइन में डेंड्राइटिक सेल आकृति विज्ञान है और इसे सी 57बीएल /6 चूहों के यकृत मेटास्टेस से प्राप्त किया गया था जिसे पैतृक त्वचीय मेलेनोमा लाइन बी 16 एफ 19 के साथ इंजेक्ट किया गया था। जब आंख के पीछे के डिब्बे में इंजेक्शन दिया जाता है, तो इन कोशिकाओं को इंट्राओकुलर ट्यूमर बनाने के लिए दिखाया गया था, जो हिस्टोलॉजिकल रूप से मानव यूवियल मेलेनोमा से मिलते जुलते हैं और सी 57बीएल / 6 में यकृत-विशिष्ट मेटास्टेस बनाते हैं, लेकिन बाल्ब / सी, चूहों10,11,12 नहीं। आनुवंशिक रूप से, कोशिकाओं को सी-मेट प्रोटो-ऑन्कोजीन की उच्च अभिव्यक्ति की विशेषता है, जो हेपेटोसाइट विकास कारक13 के लिए सेलुलर रिसेप्टर के रूप में कार्य करता है। इसके विपरीत, बी 16 एफ 10, माता-पिता के बी 16 का 10वां मार्ग, मुख्य रूप से फेफड़ों में मेटास्टेसाइज करता है जब इंट्राओकुलर रूप से14 को टीका लगाया जाता है। B16F10 और B16LS9 दोनों पिगमेंटेड12 हैं।
कई प्रमुख चुनौतियां म्यूरिन यूवियल मेलेनोमा मॉडल की सफलता को सीमित करती हैं। सबसे पहले, ट्यूमर सेल रिफ्लक्स से एक्स्ट्राओकुलर या सबकंजंक्टिवल मेलेनोमा हो सकता है। दूसरा, मेलेनोमा कोशिकाओं के इंट्राओकुलर टीकाकरण के बाद ट्यूमर की वृद्धि अक्सर अत्यधिक परिवर्तनशील होती है, जिससे उपचार और प्रगति का मूल्यांकन करने में कठिनाइयों का सामना करना पड़ता है। एक और बड़ी कठिनाई विवो में ट्यूमर के विकास का पालन करने की सीमित क्षमता है। जबकि बायोल्यूमिनेसेंट इमेजिंग, जैसे कि ल्यूसिफेरस ट्यूमर व्यक्त करना, आमतौर पर ओकुलर ट्यूमर के विकास15,16 की निगरानी के लिए उपयोग किया जाता है, यह ट्यूमर के इंट्राओकुलर स्थान पर जानकारी प्रदान नहीं कर सकता है। इसलिए, ट्यूमर का मूल्यांकन आमतौर पर आंख10,17 के न्यूक्लियेशन के बाद किया जाता है। यह ट्यूमर की प्रगति और उपचार के लिए प्रतिक्रिया को बड़े पैमाने पर चिह्नित करने की क्षमता को बहुत सीमित करता है। यूवियल मेलेनोमा का अध्ययन करने में एक और बड़ी बाधा रंजित चूहों में घावों की निगरानी में कठिनाई है। नए दृष्टिकोण, जो इन कठिनाइयों को दूर करते हैं, पशु मॉडल में यूवियल मेलेनोमा के शोध को बढ़ावा देने के लिए आवश्यक हैं।
ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी (ओसीटी) उच्च रिज़ॉल्यूशन में आंख के विभिन्न वर्गों में गहराई से छवि बनाने के लिए विशिष्ट क्षमताएं प्रदान करता है, जो अल्ट्रासाउंड18,19 सहित अन्य पद्धतियों से अद्वितीय है। ओसीटी इमेजिंग का उपयोग पशु मॉडल में विभिन्न ओकुलर रोगों का अध्ययन करने के लिए किया गयाहै। हाल ही में, ओसीटी इमेजिंग को इंट्राओकुलर ट्यूमरके विकास का मूल्यांकन करने के लिए गैर-आक्रामक साधनों के रूप में प्रदर्शित किया गया था। यहां वर्णित प्रोटोकॉल मुराइन कोरॉयड में मेलेनोमा कोशिकाओं के आरोपण और सेल टीकाकरण के समय इंट्राओकुलर ट्यूमर स्थानीयकरण और आकार की भविष्यवाणी करने के लिए ओसीटी के उपयोग को दर्शाता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 &#956;L glass syringe (Hamilton Co., Bonaduz, Switzerland)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>721711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G needles</td>
			<td>BD Microbalance</td>
			<td>2025-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezole hydrochloride</td>
			<td>Orion Phrma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B16LS9 cells</td>
			<td>from Hans Grossniklaus USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine&#160;</td>
			<td>richter pharma</td>
			<td>102047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 female mice</td>
			<td>Envigo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Essential vitamin mixture</td>
			<td>satorius</td>
			<td>01-025-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>rhenium</td>
			<td>10270106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-025-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroxyethylcellulose 1.4% eye drops</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>390862</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSight OCT segmentation software&#160;</td>
			<td>Phoenix Micron, Inc&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>bremer pharma GMBH (medimarket)</td>
			<td>17889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-020-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine&#160;</td>
			<td>zoetis (vetmarket)</td>
			<td>102532</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ofloxacin 0.3% eye drops</td>
			<td>allergan</td>
			<td>E92170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical coherence tomography&#160;</td>
			<td>Phoenix Micron, Inc&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxybuprocaine 0.4%</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>393050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin-amphoteracin</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-033-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)&#160;</td>
			<td>satorius</td>
			<td>02-023-1a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI cell media</td>
			<td>satorius</td>
			<td>01-104-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-042-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>OPMI-6 CFC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide 0.5%</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>390723</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

implantation and evaluation of melanoma in the murine choroid via optical coherence tomography

प्रयोगात्मक कोरॉयडल मेलेनोमा मॉडल स्थापित करना सही स्थानीयकरण पर ट्यूमर को प्रेरित करने की क्षमता के संदर्भ में चुनौतीपूर्ण है। इसके अलावा, विवो में पश्चवर्ती कोरॉइडल मेलेनोमा को देखने में कठिनाइयां वास्तविक समय में ट्यूमर स्थान और विकास मूल्यांकन को सीमित करती हैं। यहां वर्णित दृष्टिकोण एक बहु-चरण उप-कोरॉयडल बी 16एलएस 9 सेल इंजेक्शन प्रक्रिया के माध्यम से चूहों में कोरॉयडल मेलेनोमा स्थापित करने के लिए तकनीकों का अनुकूलन करता है। माउस यूवा के छोटे आयामों में इंजेक्शन लगाने में सटीकता को सक्षम करने के लिए, पूरी प्रक्रिया एक माइक्रोस्कोप के तहत की जाती है। सबसे पहले, आंख के पृष्ठीय-अस्थायी क्षेत्र में एक नेत्रश्लेष्मला पेरिटॉमी का गठन होता है। फिर, उजागर श्वेतपटल के माध्यम से एक सुई डालकर उप-कोरॉयडल स्थान में एक पथ बनाया जाता है। इसके बाद पथ में एक कुंद सुई का सम्मिलन और कोरॉइड में मेलेनोमा कोशिकाओं का इंजेक्शन होता है। इंजेक्शन के तुरंत बाद, ट्यूमर स्थान और प्रगति निर्धारित करने के लिए नॉनइनवेसिव ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी (ओसीटी) इमेजिंग का उपयोग किया जाता है। रेटिना डिटेचमेंट का मूल्यांकन ट्यूमर साइट और आकार के भविष्यवक्ता के रूप में किया जाता है। प्रस्तुत विधि चूहों में कोरॉयड-स्थानीयकृत मेलेनोमा के प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रेरण और ट्यूमर विकास मूल्यांकन की लाइव इमेजिंग को सक्षम बनाती है। जैसे, यह इंट्राओकुलर ट्यूमर का अध्ययन करने के लिए एक मूल्यवान उपकरण प्रदान करता है।

बी 16एलएस 9 कोशिकाओं के इंजेक्शन के तुरंत बाद ओसीटी के माध्यम से आंखों की जांच की गई। इंजेक्शन के बाद स्थानीय रेटिना डिटेचमेंट देखा गया। चूहों ने आरडी के तीन पैटर्न प्रदर्शित किए: फोकल (चित्रा 2, ऊपरी प?...

Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography at JoVE.com

Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography

वर्तमान प्रोटोकॉल ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी का उपयोग करके मुराइन कोरॉयड में मेलेनोमा के आरोपण और मूल्यांकन का वर्णन करता है।

ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी के माध्यम से मुराइन कोरॉयड में मेलेनोमा का आरोपण और मूल्यांकन

Establishing experimental choroidal melanoma models is challenging in terms of the ability to induce tumors at the correct localization. In addition, ...

आंख के पीछे के हिस्से के रूप में ट्यूमर स्थापित करना चुनौतीपूर्ण है। यह विधि चूहों में प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य कोरॉयडल मेलेनोमा ट्यूमर के प्रेरण और मूल्यांकन के लिए ट्यूमर के विकास की लाइव इमेजिंग को सक्षम करती है। यह प्रोटोकॉल ट्यूमर सेल टीकाकरण के समय पहले से ही ट्यूमर के स्थान का आकलन करने और जीवित जानवरों में ट्यूमर के विकास का पालन करने के लिए ओसीटी लाइव इमेजिंग का उपयोग करता है।यूवियल मेलेनोमा मेटास्टेसिस की 50% दर के करीब एक विनाशकारी बीमारी है। प्रयोगात्मक मॉडल विकसित करना नई चिकित्सीय संभावनाओं के उद्देश्य से अनुसंधान को आगे बढ़ाने के लिए महत्वपूर्ण है। इस पद्धति का एक लाभ यह है कि इंजेक्शन की सफलता का तत्काल मूल्यांकन समरूप ट्यूमर वाले अध्ययन समूहों तक पहुंचने और लाइव इमेजिंग द्वारा लगातार उनका पालन करने की अनुमति देता है।ट्यूमर की प्रगति की जांच करने के लिए। छोटे माउस की आंखों में इंजेक्शन लगाने के लिए अभ्यास की आवश्यकता होती है। इंजेक्शन कोशिकाओं की कल्पना करने की क्षमता आपको तुरंत अपनी सफलता का आकलन करने और आवश्यकतानुसार अधिक चूहों के साथ दोहराने की अनुमति देती है।प्रक्रिया का प्रदर्शन कपलान मेडिकल सेंटर में ओप्थाल्मोलॉजी रिसर्च लेबोरेटरी से डॉ दिमित्री गैबर करेंगे। शुरू करने के लिए, एनेस्थेटाइज्ड माउस की दोनों आंखों पर 0.4% सामयिक नेत्र एनेस्थेटिक, ऑक्सीबुप्रोकेन लागू करें। फिर शीर्ष रूप से पुतलियों को पतला करने के लिए दोनों आंखों पर 0.5% ट्रॉपिकामाइड लागू करें, इसके बाद आंखों के सूखने से बचने के लिए स्नेहक के रूप में 1.4% हाइड्रॉक्सीथाइल सेल्यूलोज लगाएं।एक ऑपरेटिंग माइक्रोस्कोप के तहत माउस की एक आंख का निरीक्षण करें। बाँझ इंट्राओकुलर बल के साथ पलकें खुली रखें। फिर बेहतर टेम्पोरल लिंबो-कंजंक्टिवा को पकड़ें और एक इन्फ्रा नाक की स्थिति की ओर खींचें।पूरी प्रक्रिया के दौरान लिंबो-नेत्रश्लेष्मला को पकड़कर इस स्थिति को सुरक्षित करें। 30 गेज सुई टिप का उपयोग करके पृष्ठीय अस्थायी क्षेत्र में एक छोटा नेत्रश्लेष्मला पेरिटॉमी बनाएं जो लिम्बस से लगभग एक से दो मिलीमीटर पीछे है। पेरिटॉमी के उद्घाटन से अतिरिक्त टेंडन कैप्सूल को हटा दें।श्वेतपटल में प्रवेश करने के लिए सुई की नोक डालें, जब तक कि कोरॉइड का भूरा रंग श्वेतपटल के उजागर सफेद पदार्थ के माध्यम से दिखाई न दे। कोशिकाओं को एक बाँझ 10 माइक्रोलीटर ग्लास हैमिल्टन सिरिंज में लोड करें जो 45 डिग्री कोण पर 32 गेज कुंद सुई के साथ मुड़ा हुआ है। लोड किए गए सिरिंज की सुई को बनाए गए पथ में लगभग दो मिलीमीटर डालें, और सेल निलंबन के दो माइक्रोलीटर इंजेक्ट करें।इंजेक्शन के बाद सुई को दो से तीन सेकंड तक रखें जब तक कि सभी तरल पदार्थ साफ न हो जाएं। पथ से रिसाव से बचने के लिए सुई को धीरे से खींचकर निकालें। मेलेनोमा सेल टीकाकरण के तुरंत बाद, ओसीटी स्कैन द्वारा जानवर की इंजेक्शन आंख का निरीक्षण करें।स्कैन के आधार पर, रेटिना डिटेचमेंट या आरडी पैटर्न को तीन श्रेणियों के अनुसार वर्गीकृत करें स्थानीय आरडी, रिसाव में विट्रस, या विस्तारित आरडी। आरडी ऊंचाई के आधार पर ट्यूमर के आकार की भविष्यवाणी करने के लिए एक ओसीटी विभाजन विश्लेषण सॉफ्टवेयर खोलें। ओसीटी स्कैन में स्थानीय आरडी की ऊंचाई को मापें, और उन्हें तीन समूहों में वर्गीकृत करें। पोस्टऑपरेटिव चरण में, ओफ्लॉक्सासिन का 0.3% शीर्ष पर लागू करें।सबकोरॉइडल सेल इंजेक्शन के बाद ट्यूमर के विकास की ओसीटी-आधारित भविष्यवाणी को इस आंकड़े में दर्शाया गया है। चूहों ने आरडी, फोकल, लीकेज टू द विट्रस और एक्सटेंडेड आरडी के तीन पैटर्न प्रदर्शित किए। इंजेक्शन के तुरंत बाद आरडी के पैटर्न और इंजेक्शन के पांच दिन बाद ट्यूमर के स्थानीयकरण के बीच एक संबंध था। फोकल आरडी ट्यूमर सेल के विकास से जुड़ा था जो कोरॉयड तक सीमित था।हालांकि, फोकल आरडी प्रदर्शित करने वाले जानवरों में इंजेक्शन के बाद विट्रस में कोशिकाओं के अवलोकन ने विट्रल गुहा और कोरॉयड में ट्यूमर के विकास का संकेत दिया। जब इंजेक्शन के बाद विस्तारित आरडी देखा गया, तो ट्यूमर पांच दिनों के बाद कोरॉयड और विट्रस में फैल गए। इस मॉडल में प्रेरित ट्यूमर के आकार की सीमा को छोटे, मध्यम और बड़े में विभाजित किया जा सकता है।यहां इंजेक्शन के बाद आरडी ऊंचाई के ओसीटी माप की प्रतिनिधि छवियां हैं, और संबंधित फंडस छवि, इंजेक्शन के बाद पांचवें दिन ट्यूमर की ऊंचाई और चौड़ाई का एक क्षैतिज ओसीटी स्कैन, और इसकी संबंधित फंडस छवि, और संबंधित एच एंड ई सना हुआ आंख अनुभाग तुलनीय ट्यूमर माप का प्रदर्शन करता है। सेल इंजेक्शन के तुरंत बाद छोटे, मध्यम या बड़े आरडी प्रस्तुत करने वाले चूहों के ट्यूमर की मात्रा माप यहां प्रस्तुत किए गए हैं। इंजेक्शन के बल को समायोजित करना ट्यूमर के आकार और स्थान को प्रभावित कर सकता है।इसे कैलिब्रेट करना और इंजेक्शन के बाद ओसीटी द्वारा प्रेरित रेटिना डिटेचमेंट के पैटर्न का मूल्यांकन करना महत्वपूर्ण है। कोरॉयडल ट्यूमर की लाइव इमेजिंग एक महत्वपूर्ण प्रयोगात्मक उपकरण है जो ट्यूमर की प्रगति पर विभिन्न कारकों या संभावित उपचारों के प्रभाव की जांच करने की अनुमति देता है।

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

थकान के एक माउस मॉडल परिधीय विकिरण से प्रेरित

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

अल्ट्रासाउंड निर्देशित ऊतक के उपयोग-जैविक रूप से प्रासंगिक मेटास्टेटिक ट्यूमर की स्थापना के लिए सेलुलर आरोपण निर्देशित Xenografts

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

संवर्धन और ट्यूमर प्रतिरक्षा और गैर प्रतिरक्षा Microenvironments के लक्षण विस्थापन में स्थापित चमड़े के नीचे Murine ट्यूमर

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

अनुदैर्ध्य रूपात्मक और तीन आयामी ट्यूमर की शारीरिक निगरानी Spheroids ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी का उपयोग

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

Rapid Generation of Primary Murine Melanocyte and Fibroblast Cultures

प्राथमिक मूत्र मेलेनोसाइट और फाइब्रोब्लास्ट संस्कृति की तीव्र पीढ़ी

Defects in fibroblast or melanocyte function are associated with skin diseases, including poor barrier function, defective wound healing, pigmentation ...

Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells

स्थानिक और अस्थाई Mutant मेलेनोमा के नियंत्रण से उत्परिवर्ती Melanocyte स्टेम कोशिकाओं

Cutaneous melanoma is well known as the most aggressive skin cancer. Although the risk factors and major genetic alterations continue to be documented ...

Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice

इम्यूनोडिफिएंट चूहों में लिवर ऑर्थोटोपिक ह्यूमन यूवील मेलानोमा ज़ेनोबेड़ा प्लेटफॉर्म की पीढ़ी

In recent decades, subcutaneously implanted patient-derived xenograft tumors or cultured human cell lines have been increasingly recognized as more ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

मैरिन अग्नाशय के डक्टल एडेनोकार्सिनोमा के अल्ट्रासाउंड-गाइडेड ऑर्थोटोपिक इम्प्लांटेशन

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells

मानव स्तन एपिथेलियल कोशिकाओं में ओंकोजेनिक परिवर्तन का विट्रो मूल्यांकन

Tumorigenesis is a multi-step process in which cells acquire capabilities&#160;that allow their growth, survival, and dissemination under hostile ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

भड़काऊ स्तन कैंसर कोशिकाओं के टेल-वेन इंजेक्शन के माध्यम से मस्तिष्क मेटास्टेसिस मॉडलिंग

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...