Name: implantation and evaluation of melanoma in the murine choroid via optical coherence tomography
Uploaded: 2022-12-02T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography at JoVE.com

Denne studien ble delvis støttet av stipend 1304/20 fra Israel Science Foundation (ISF), Israel, for Arie Marcovich. Vi takker Shahar Ish-Shalom og Ady Yosipovich, fra Institutt for patologi, Kaplan Medical Center, Rehovot, Israel, for histologianalyse.

Forsøkene i protokollen ble godkjent av det israelske nasjonale rådet for dyreforsøk og i samsvar med ARVO-erklæringen for bruk av dyr i oftalmisk og synsforskning. Kvinnelige C57BL/6-mus, i alderen 8-10 uker, ble brukt i denne studien og ble utsatt for 12/12 timers lys-mørke sykluser. Dyrene ble hentet fra en kommersiell kilde (se materialtabell).
1. Cellekultur
<ol><li>Kultur B16LS9 celler i RPMI 1640 medium, supplert med 10% føtal bovint serum, 2 mM...

<ol>
	<li>Jager, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uveal+melanoma.">Uveal melanoma.</a> Nature Reviews Disease Primers. 6 (1), 1-25 (2020).</li><li>Bustamante, P., Piquet, L., Landreville, S., Burnier, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uveal+melanoma+pathobiology:+Metastasis+to+the+liver.">Uveal melanoma pathobiology: Metastasis to the liver.</a> Seminars in Cancer Biology. 71, 65-85 (2021).</li><li>Damato, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+treatment+of+choroidal+melanoma+in+relation+to+the+prevention+of+metastatic+death-A+personal+view.">Ocular treatment of choroidal melanoma in relation to the prevention of metastatic death-A personal view.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 66, 187-199 (2018).</li><li>Jouhi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+small+fatal+choroidal+melanoma+study.+A+survey+by+the+European+Ophthalmic+Oncology+Group.">The small fatal choroidal melanoma study. A survey by the European Ophthalmic Oncology Group.</a> American Journal of Ophthalmology. 202, 100-108 (2019).</li><li>Cao, J., Jager, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+eye+models+for+uveal+melanoma.">Animal eye models for uveal melanoma.</a> Ocular Oncology and Pathology. 1 (3), 141-150 (2015).</li><li>Uner, O. E., Gandrakota, N., Azarcon, C. P., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+uveal+melanoma.">Animal models of uveal melanoma.</a> Annals of Eye Science. 7, 21-30 (2022).</li><li>Yang, H., Dithmar, S., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon+alpha+2b+decreases+hepatic+micrometastasis+in+a+murine+model+of+ocular+melanoma+by+activation+of+intrinsic+hepatic+natural+killer+cells.">Interferon alpha 2b decreases hepatic micrometastasis in a murine model of ocular melanoma by activation of intrinsic hepatic natural killer cells.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45 (7), 2056-2064 (2004).</li><li>Yang, H., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+immunologic+and+anti-angiogenic+therapy+reduces+hepatic+micrometastases+in+a+murine+ocular+melanoma+model.">Combined immunologic and anti-angiogenic therapy reduces hepatic micrometastases in a murine ocular melanoma model.</a> Current Eye Research. 31 (6), 557-562 (2006).</li><li>Rusciano, D., Lorenzoni, P., Burger, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+liver+metastasis.">Murine models of liver metastasis.</a> Invasion &amp; Metastasis. 14 (1-6), 349-361 (1994).</li><li>Diaz, C. E., Rusciano, D., Dithmar, S., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B16LS9+melanoma+cells+spread+to+the+liver+from+the+murine+ocular+posterior+compartment+(PC).">B16LS9 melanoma cells spread to the liver from the murine ocular posterior compartment (PC).</a> Current Eye Research. 18 (2), 125-129 (1999).</li><li>Rusciano, D., Lorenzoni, P., Burger, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+liver+metastasis.">Murine models of liver metastasis.</a> Invasion &amp; Metastasis. 14 (1-6), 349-361 (1994).</li><li>Ashur-Fabian, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrac+delayed+the+onset+of+ocular+melanoma+in+an+orthotopic+mouse+model.">Tetrac delayed the onset of ocular melanoma in an orthotopic mouse model.</a> Frontiers in Endocrinology. 12, 632335 (2019).</li><li>Elia, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+c-met+overexpression+in+liver-metastatic+B16-LS9+melanoma+cells.">Mechanisms regulating c-met overexpression in liver-metastatic B16-LS9 melanoma cells.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 81 (3), 477-487 (2001).</li><li>Harning, R., Szalay, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+metastasis+of+in+vivo+and+in+vitro+derived+syngeneic+murine+melanoma.">Ocular metastasis of in vivo and in vitro derived syngeneic murine melanoma.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 28 (9), 1599-1604 (1987).</li><li>Ezra-Elia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+an+in+vivo+imaging+system+be+used+to+determine+localization+and+biodistribution+of+AAV5-mediated+gene+expression+following+subretinal+and+intravitreal+delivery+in+mice.">Can an in vivo imaging system be used to determine localization and biodistribution of AAV5-mediated gene expression following subretinal and intravitreal delivery in mice.</a> Experimental Eye Research. 176, 227-234 (2018).</li><li>Notting, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+bioluminescent+imaging+of+human+uveal+melanoma+in+a+new+mouse+model+of+local+tumor+growth+and+metastasis.">Whole-body bioluminescent imaging of human uveal melanoma in a new mouse model of local tumor growth and metastasis.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 46 (5), 1581-1587 (2005).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+xenograft+murine+human+uveal+melanoma+model+develops+hepatic+micrometastases.">In-vivo xenograft murine human uveal melanoma model develops hepatic micrometastases.</a> Melanoma Research. 18 (2), 95-103 (2008).</li><li>Murthy, R. K., Haji, S., Sambhav, K., Grover, S., Chalam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+applications+of+spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+retinal+diseases.">Clinical applications of spectral domain optical coherence tomography in retinal diseases.</a> Biomedical Journal. 39 (2), 107-120 (2016).</li><li>Drexler, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrahigh-resolution+ophthalmic+optical+coherence+tomography.">Ultrahigh-resolution ophthalmic optical coherence tomography.</a> Nature Medicine. 7 (4), 502-507 (2001).</li><li>Ochakovski, G. A., Fischer, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotyping+of+mouse+models+with+OCT.">Phenotyping of mouse models with OCT.</a> Methods in Molecular Biology. 1834, 285-291 (2019).</li><li>Zaks, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+imaging+for+assessing+tumor+growth+in+mouse+models+of+ocular+melanoma.">In-vivo imaging for assessing tumor growth in mouse models of ocular melanoma.</a> Experimental Eye Research. 204, 108431 (2021).</li><li>Brar, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Academy+of+Ophthalmology+2022-2023+BCSC.+2.">American Academy of Ophthalmology 2022-2023 BCSC. 2.</a> Fundamentals and principles of ophthalmology. , (2022).</li><li>Duker, J. S., Waheed, N. K., Goldman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Retinal OCT: Optical Coherence Tomography, 2nd Edition. , (2021).</li><li>Tomayko, M. M., Reynolds, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+subcutaneous+tumor+size+in+athymic+(nude)+mice.">Determination of subcutaneous tumor size in athymic (nude) mice.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 24 (3), 148-154 (1989).</li><li>Richards, J. R., Yoo, J. H., Shin, D., Odelberg, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+uveal+melanoma:+Strengths,+weaknesses,+and+future+directions.">Mouse models of uveal melanoma: Strengths, weaknesses, and future directions.</a> Pigment Cell &amp; Melanoma Research. 33 (2), 264 (2020).</li><li>Chen, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoacoustic+molecular+imaging-escorted+adipose+photodynamic-browning+synergy+for+fighting+obesity+with+virus-like+complexes.">Photoacoustic molecular imaging-escorted adipose photodynamic-browning synergy for fighting obesity with virus-like complexes.</a> Nature Nanotechnology. 16 (4), 455-465 (2021).</li><li>Yu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+visualization+of+early+cancer+hepatic+micrometastasis+and+intraoperative+image-guided+surgery+by+photoacoustic+imaging.">Label-free visualization of early cancer hepatic micrometastasis and intraoperative image-guided surgery by photoacoustic imaging.</a> Journal of Nuclear Medicine. 61 (7), 1079-1085 (2020).</li></ol>

Uveal melanom er en ødeleggende sykdom for hvilken nye terapeutiske tilnærminger er sterkt nødvendig. Imidlertid er forskning på uveal melanom og potensielle behandlinger begrenset av de tekniske utfordringene med uveal melanom dyremodeller 1,25. Okulære svulster, som induseres ved intraokulær injeksjon av kreftceller, er svært variable i både lokalisering og størrelse, sannsynligvis på grunn av de små dimensjonene i museøyet. Slik variabilitet er et ...

Uvealt melanom (UM) er den hyppigste intraokulære primære maligniteten hos voksne. Omtrent 90% av okulære melanomer stammer fra melanocytter i åreoidearegionen i uvealkanalen1. UM er en viktig årsak til sykelighet og dødelighet, da det er anslått at nær 50% av pasientene utvikler metastatisk sykdom, med leveren som det viktigste stedet for metastase2. Tidlig behandling av primære lesjoner kan redusere sjansen for metastaser, men ingen effektiv behandling forhindrer metastasedannelse3.
Standard behandling av uveal melanom inkluderer bestrålingsbehandling, som er forbundet med tap av syn på grunn av optisk nevropati, retinopati, tørrøysyndrom og katarakt. Kirurgisk reseksjon er vanligvis forsinket til veksten av lesjonen er anerkjent og karakterisert. En slik forsinkelse kan imidlertid tillate metastatisk sykdomsutvikling4. I noen tilfeller er det nødvendig med nytteløs enukleasjon. Selvfølgelig kompromitterer denne radikale prosedyren visjonen og resulterer i dramatisk estetisk forverring.
Det har vært mange anstrengelser dedikert til å utvikle eksperimentelle modeller for å studere uveal melanom. Prekliniske dyremodeller som tillater nøyaktig vurdering av denne maligniteten er nøkkelen til å undersøke nye diagnostiske og terapeutiske strategier for uveal melanom. Eksperimentelle dyremodeller av okulær melanom er hovedsakelig basert på inokulering av tumorceller hos mus, rotter og kaniner 5,6. Musemodeller er kostnadseffektive og mye brukt til melanomstudier på grunn av deres raske reproduksjonshastighet og høye genomlikhet med mennesker. Murine kutant melanomcellelinje B16 brukes ofte til å inokulere C57BL6-mus og indusere syngene svulster. Når du bruker denne modellen for å indusere uveal melanom, må tumorbærende øyne vanligvis enucleated 7-14 dager etter inokulering. Videre er B16 en svært invasiv modell. Øyets immunprivilegerte natur støtter metastase, og metastaser kan typisk oppdages 3-4 uker etter tumorcelleinokulasjon. Subkulturer av den opprinnelige B16-linjen viser distinkte metastatiske egenskaper6. For eksempel har Queens melanomlinjen en høy metastatisk hastighet 7,8. B16LS9-cellelinjen har dendrittisk cellemorfologi og ble avledet fra levermetastaser av C57BL/6-mus injisert med foreldrenes kutane melanomlinje B16F19. Når de ble injisert i øyets bakre rom, ble disse cellene vist å danne intraokulære svulster, som histologisk ligner humant uveal melanom og danner leverspesifikke metastaser i C57BL/6, men ikke Balb/C, mus10,11,12. Genetisk er cellene preget av høyere ekspresjon av c-met proto-onkogenet, som virker som en cellulær reseptor for hepatocyttvekstfaktor13. I motsetning til dette metastaserer B16F10, den 10. passasjen av foreldrenes B16, primært til lungene når inokulert intraokulært14. Både B16F10 og B16LS9 er pigmentert12.
Flere viktige utfordringer begrenser suksessen til murine uveal melanommodeller. For det første kan tumorcelle refluks føre til ekstraokulært eller subkonjunktivalt melanom. For det andre er tumorvekst etter intraokulær inokulering av melanomceller ofte svært variabel, noe som gir vanskeligheter med å evaluere behandling og fremgang. En annen stor vanskelighet er den begrensede evnen til å følge tumorvekst in vivo. Mens bioluminescerende avbildning, for eksempel av luciferase uttrykkende svulster, ofte brukes til å overvåke okulær tumorvekst15,16, kan den ikke gi informasjon om den intraokulære plasseringen av svulsten. Derfor utføres evaluering av svulsten vanligvis etter enukleasjon av øyet10,17. Dette begrenser i stor grad evnen til å karakterisere tumorprogresjon og respons på behandlinger i stor utstrekning. En annen stor hindring i å studere uveal melanom er vanskeligheten med å overvåke lesjoner i pigmenterte mus. Nye tilnærminger, som overvinner disse vanskelighetene, er nødvendige for å fremme forskningen av uveal melanom i dyremodeller.
Optisk koherenstomografi (OCT) gir særegne evner til å avbilde dypt inn i de forskjellige delene av øyet i høy oppløsning, noe som er uten sidestykke med andre metoder, inkludert ultralyd18,19. OCT-avbildning har blitt brukt i dyremodeller for å studere ulike øyesykdommer20. Nylig ble OCT-avbildning demonstrert som ikke-invasiv middel for å evaluere intraokulær tumorvekst21. Protokollen beskrevet her viser implantasjonen av melanomceller i murine choroid og utnyttelsen av OCT for å forutsi intraokulær tumorlokalisering og størrelse på tidspunktet for celleinokulasjon.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 &#956;L glass syringe (Hamilton Co., Bonaduz, Switzerland)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>721711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G needles</td>
			<td>BD Microbalance</td>
			<td>2025-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezole hydrochloride</td>
			<td>Orion Phrma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B16LS9 cells</td>
			<td>from Hans Grossniklaus USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine&#160;</td>
			<td>richter pharma</td>
			<td>102047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 female mice</td>
			<td>Envigo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Essential vitamin mixture</td>
			<td>satorius</td>
			<td>01-025-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>rhenium</td>
			<td>10270106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-025-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroxyethylcellulose 1.4% eye drops</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>390862</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSight OCT segmentation software&#160;</td>
			<td>Phoenix Micron, Inc&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>bremer pharma GMBH (medimarket)</td>
			<td>17889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-020-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine&#160;</td>
			<td>zoetis (vetmarket)</td>
			<td>102532</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ofloxacin 0.3% eye drops</td>
			<td>allergan</td>
			<td>E92170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical coherence tomography&#160;</td>
			<td>Phoenix Micron, Inc&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxybuprocaine 0.4%</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>393050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin-amphoteracin</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-033-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)&#160;</td>
			<td>satorius</td>
			<td>02-023-1a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI cell media</td>
			<td>satorius</td>
			<td>01-104-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-042-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>OPMI-6 CFC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide 0.5%</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>390723</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

implantation and evaluation of melanoma in the murine choroid via optical coherence tomography

Etablering av eksperimentelle koroidale melanommodeller er utfordrende med tanke på evnen til å indusere svulster ved riktig lokalisering. I tillegg begrenser vanskeligheter med å observere bakre koroidalt melanom in vivo tumorplassering og vekstevaluering i sanntid. Tilnærmingen beskrevet her optimaliserer teknikker for å etablere choroidalt melanom hos mus via en flertrinns sub-choroidal B16LS9-celleinjeksjonsprosedyre. For å muliggjøre presisjon ved injeksjon i de små dimensjonene til musen uvea, utføres hele prosedyren under et mikroskop. For det første dannes en konjunktival peritomi i øyets dorsale-temporale område. Deretter opprettes en kanal inn i sub-choroidal rommet ved å sette inn en nål gjennom den eksponerte sclera. Dette etterfølges av innsetting av en stump nål i kanalen og injeksjon av melanomceller i årehinnen. Umiddelbart etter injeksjon benyttes ikke-invasiv optisk koherenstomografi (OCT) avbildning for å bestemme tumorplassering og fremgang. Retinal detachment evalueres som en prediktor for tumorsted og størrelse. Den presenterte metoden muliggjør reproduserbar induksjon av choroid-lokalisert melanom hos mus og levende avbildning av tumorvekstevaluering. Som sådan gir det et verdifullt verktøy for å studere intraokulære svulster.

Øynene ble undersøkt via OCT umiddelbart etter injeksjon av B16LS9-cellene. Lokal netthinneløsning ble observert etter injeksjon. Musene viste tre mønstre av RD: fokal (figur 2, øvre panel), lekkasje til glasslegemet (figur 2, midtpanel) og utvidet RD (figur 2, bunnpanel). Utvidet RD er sannsynligvis forårsaket av skade fra injeksjonen. Det var en sammenheng mellom mønsteret av RD umiddelbart etter injeksjon og lokal...

Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography at JoVE.com

Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography

Denne protokollen beskriver implantasjon og evaluering av melanom i murine choroid ved bruk av optisk koherenstomografi.

Implantasjon og evaluering av melanom i Murine Choroid via optisk koherenstomografi

Establishing experimental choroidal melanoma models is challenging in terms of the ability to induce tumors at the correct localization. In addition, ...

Å etablere svulster som den bakre delen av øyet er utfordrende. Denne metoden muliggjør induksjon av reproduserbare choroidale melanomtumorer hos mus, og levende avbildning av tumorvekst for evaluering. Denne protokollen benytter OCT levende bildebehandling for å vurdere plasseringen av svulstene allerede på tidspunktet for tumorcelleinokulering, og å følge tumorvekst hos levende dyr.Uveal melanom er en ødeleggende sykdom med nær 50% rate av metastase. Utvikling av eksperimentelle modeller er nøkkelen til å fremme forskning rettet mot nye terapeutiske muligheter. En fordel med denne metoden er at den umiddelbare vurderingen av injeksjonens suksess gjør det mulig å nå studiegrupper med homogene svulster og kontinuerlig følge dem ved levende bildebehandling.Å undersøke tumorprogresjon. Injisering i den lille musens øyne krever øvelse. Evnen til å visualisere de injiserte cellene lar deg vurdere suksessen din umiddelbart og gjenta med flere mus etter behov.Demonstrere prosedyren vil være Dr.Dimitri Gaber fra Oftalmologi Research Laboratory ved Kaplan Medical Center. For å begynne, bruk 0,4% aktuell oftalmisk bedøvelse, oksybuprokain til begge øynene til den bedøvede musen. Påfør deretter lokalt 0,5% Tropicamide på begge øynene for å utvide elevene, etterfulgt av 1,4% hydroksyetylcellulose som smøremiddel for å unngå tørking av øynene.Observer ett øye av musen under et operasjonsmikroskop. Hold øyelokkene åpne med steril intraokulær tang. Hold deretter den øvre temporale limbo-conjunctiva og trekk mot en infra nasal stilling.Sikre denne posisjonen ved å holde limbo-conjunctiva gjennom hele prosedyren. Bruk en 30 gauge nålespiss til å lage en liten konjunktival peritomi i det dorsale temporale området omtrent en til to millimeter bakenfor limbus. Fjern overflødig sener kapsel fra åpningen av peritomi.Sett nålespissen for å trenge inn i scleraen og skape et spor inn i subchoroidalrommet til den brune fargen på choroid vises gjennom den eksponerte hvite substansen i scleraen. Legg cellene i en steril 10 mikroliter glass Hamilton sprøyte montert med en 32 gauge stump nål vridd i en 45 graders vinkel. Sett nålen på den fylte sprøyten omtrent to millimeter inn i den opprettede kanalen, og injiser to mikroliter av cellesuspensjonen.Hold nålen på plass etter injeksjon i to til tre sekunder til all væske er borte. Fjern nålen ved å trekke den forsiktig ut for å unngå lekkasje fra kanalen. Umiddelbart etter melanomcelleinokulasjonen, observer det injiserte øyet til dyret ved OCT-skanninger.Basert på skanningene, klassifiser retinal detachment eller RD mønstre i henhold til tre kategorier lokal RD, lekkasje i glasslegemet eller utvidet RD. Åpne en OCT-segmenteringsanalyseprogramvare for å forutsi tumorstørrelsen basert på RD-høyde. Mål høyden på lokal RD i OCT-skanningene, og klassifiser dem i tre grupper. I den postoperative fasen, bruk 0,3% av Ofloxacin lokalt.Den OCT-baserte prediksjonen av tumorvekst etter subchoroidal celleinjeksjon er avbildet i denne figuren. Musene viste tre mønstre av RD, Focal, Leakage To The Vitreous og Extended RD. Det var en sammenheng mellom mønsteret av RD umiddelbart etter injeksjon, og lokalisering av svulstene fem dager etter injeksjon. Fokal RD var assosiert med tumorcelleveksten som var begrenset til årehinnen.Observasjon av celler i glasslegemet etter injeksjon hos dyr som viste Focal RD indikerte imidlertid tumorvekst i vitrealhulen og årehinnen. Når utvidet RD ble observert etter injeksjon, ble svulster spredt over hele årehinnen og glasslegemet etter fem dager. Utvalget av tumorstørrelser indusert i denne modellen kan deles inn i små, mellomstore og store.Her vises representative bilder av OCT-måling av RD-høyde etter injeksjon, og tilhørende fundusbilde, horisontal OCT-skanning av tumorhøyde og -bredde på dag fem etter injeksjon, og tilhørende fundusbilde, og tilsvarende H&E-farget øyesnitt som viser sammenlignbare tumormålinger. Tumorvolummålinger av mus som presenterte liten, middels eller stor RD umiddelbart etter celleinjeksjon presenteres her. Justering av injeksjonskraften kan påvirke tumorstørrelse og plassering.Det er viktig å kalibrere dette og evaluere mønsteret av indusert netthinneløsning ved OCT etter injeksjon. Live imaging av choroidale svulster er et viktig eksperimentelt verktøy som gjør det mulig å undersøke effekten av forskjellige faktorer eller potensielle terapier på tumorprogresjon.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

En musemodell av Fatigue indusert av Peripheral Bestråling

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

Utnyttelse av ultralyd guidet vev-rettet mobilnettet implantasjon for etablering av biologisk relevante metastatisk svulst Xenografts

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Berikelse og karakterisering av svulst immun og ikke-immune Microenvironments i etablerte subkutan Murine svulster

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

Langsgående morfologiske og fysiologiske overvåking av tredimensjonale svulst Spheroids bruker Optical Coherence tomografi

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

Rapid Generation of Primary Murine Melanocyte and Fibroblast Cultures

Rapid Generation av primær murine melanocyte og Fibroblast kulturer

Defects in fibroblast or melanocyte function are associated with skin diseases, including poor barrier function, defective wound healing, pigmentation ...

Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells

Romlig og Temporal kontroll av murine melanom innvielse fra mutant melanocyte stamceller

Cutaneous melanoma is well known as the most aggressive skin cancer. Although the risk factors and major genetic alterations continue to be documented ...

Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice

Generering av en Liver Orthotopic Human uveal melanom Xenograft Platform i Immunodeficient mus

In recent decades, subcutaneously implanted patient-derived xenograft tumors or cultured human cell lines have been increasingly recognized as more ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Ultralyd-guidet Orthotopic implantation av murine bukspyttkjertelen ductal Adenokarsinom

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells

In Vitro evaluering av onkogen transformasjon i humane pattedyr epitelceller

Tumorigenesis is a multi-step process in which cells acquire capabilities&#160;that allow their growth, survival, and dissemination under hostile ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modellering av hjernemetastase via hale-vene-injeksjon av inflammatoriske brystkreftceller

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...