Name: implantation and evaluation of melanoma in the murine choroid via optical coherence tomography
Uploaded: 2022-12-02T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography at JoVE.com

Это исследование было частично поддержано грантом 1304/20 от Израильского научного фонда (ISF), Израиль, для Арье Марковича. Благодарим Шахар Иш-Шалом и Ади Йосиповича из отделения патологии Медицинского центра Каплан, Реховот, Израиль, за гистологический анализ.

Эксперименты в протоколе были одобрены Израильским национальным советом по экспериментам на животных и соответствуют Заявлению ARVO об использовании животных в офтальмологических исследованиях и исследованиях зрения. Самки мышей C57BL / 6 в возрасте 8-10 недель были использованы для насто?...

<ol>
	<li>Jager, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uveal+melanoma.">Uveal melanoma.</a> Nature Reviews Disease Primers. 6 (1), 1-25 (2020).</li><li>Bustamante, P., Piquet, L., Landreville, S., Burnier, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uveal+melanoma+pathobiology:+Metastasis+to+the+liver.">Uveal melanoma pathobiology: Metastasis to the liver.</a> Seminars in Cancer Biology. 71, 65-85 (2021).</li><li>Damato, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+treatment+of+choroidal+melanoma+in+relation+to+the+prevention+of+metastatic+death-A+personal+view.">Ocular treatment of choroidal melanoma in relation to the prevention of metastatic death-A personal view.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 66, 187-199 (2018).</li><li>Jouhi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+small+fatal+choroidal+melanoma+study.+A+survey+by+the+European+Ophthalmic+Oncology+Group.">The small fatal choroidal melanoma study. A survey by the European Ophthalmic Oncology Group.</a> American Journal of Ophthalmology. 202, 100-108 (2019).</li><li>Cao, J., Jager, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+eye+models+for+uveal+melanoma.">Animal eye models for uveal melanoma.</a> Ocular Oncology and Pathology. 1 (3), 141-150 (2015).</li><li>Uner, O. E., Gandrakota, N., Azarcon, C. P., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+uveal+melanoma.">Animal models of uveal melanoma.</a> Annals of Eye Science. 7, 21-30 (2022).</li><li>Yang, H., Dithmar, S., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon+alpha+2b+decreases+hepatic+micrometastasis+in+a+murine+model+of+ocular+melanoma+by+activation+of+intrinsic+hepatic+natural+killer+cells.">Interferon alpha 2b decreases hepatic micrometastasis in a murine model of ocular melanoma by activation of intrinsic hepatic natural killer cells.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45 (7), 2056-2064 (2004).</li><li>Yang, H., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+immunologic+and+anti-angiogenic+therapy+reduces+hepatic+micrometastases+in+a+murine+ocular+melanoma+model.">Combined immunologic and anti-angiogenic therapy reduces hepatic micrometastases in a murine ocular melanoma model.</a> Current Eye Research. 31 (6), 557-562 (2006).</li><li>Rusciano, D., Lorenzoni, P., Burger, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+liver+metastasis.">Murine models of liver metastasis.</a> Invasion &amp; Metastasis. 14 (1-6), 349-361 (1994).</li><li>Diaz, C. E., Rusciano, D., Dithmar, S., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B16LS9+melanoma+cells+spread+to+the+liver+from+the+murine+ocular+posterior+compartment+(PC).">B16LS9 melanoma cells spread to the liver from the murine ocular posterior compartment (PC).</a> Current Eye Research. 18 (2), 125-129 (1999).</li><li>Rusciano, D., Lorenzoni, P., Burger, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+liver+metastasis.">Murine models of liver metastasis.</a> Invasion &amp; Metastasis. 14 (1-6), 349-361 (1994).</li><li>Ashur-Fabian, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrac+delayed+the+onset+of+ocular+melanoma+in+an+orthotopic+mouse+model.">Tetrac delayed the onset of ocular melanoma in an orthotopic mouse model.</a> Frontiers in Endocrinology. 12, 632335 (2019).</li><li>Elia, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+c-met+overexpression+in+liver-metastatic+B16-LS9+melanoma+cells.">Mechanisms regulating c-met overexpression in liver-metastatic B16-LS9 melanoma cells.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 81 (3), 477-487 (2001).</li><li>Harning, R., Szalay, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+metastasis+of+in+vivo+and+in+vitro+derived+syngeneic+murine+melanoma.">Ocular metastasis of in vivo and in vitro derived syngeneic murine melanoma.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 28 (9), 1599-1604 (1987).</li><li>Ezra-Elia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+an+in+vivo+imaging+system+be+used+to+determine+localization+and+biodistribution+of+AAV5-mediated+gene+expression+following+subretinal+and+intravitreal+delivery+in+mice.">Can an in vivo imaging system be used to determine localization and biodistribution of AAV5-mediated gene expression following subretinal and intravitreal delivery in mice.</a> Experimental Eye Research. 176, 227-234 (2018).</li><li>Notting, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+bioluminescent+imaging+of+human+uveal+melanoma+in+a+new+mouse+model+of+local+tumor+growth+and+metastasis.">Whole-body bioluminescent imaging of human uveal melanoma in a new mouse model of local tumor growth and metastasis.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 46 (5), 1581-1587 (2005).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+xenograft+murine+human+uveal+melanoma+model+develops+hepatic+micrometastases.">In-vivo xenograft murine human uveal melanoma model develops hepatic micrometastases.</a> Melanoma Research. 18 (2), 95-103 (2008).</li><li>Murthy, R. K., Haji, S., Sambhav, K., Grover, S., Chalam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+applications+of+spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+retinal+diseases.">Clinical applications of spectral domain optical coherence tomography in retinal diseases.</a> Biomedical Journal. 39 (2), 107-120 (2016).</li><li>Drexler, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrahigh-resolution+ophthalmic+optical+coherence+tomography.">Ultrahigh-resolution ophthalmic optical coherence tomography.</a> Nature Medicine. 7 (4), 502-507 (2001).</li><li>Ochakovski, G. A., Fischer, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotyping+of+mouse+models+with+OCT.">Phenotyping of mouse models with OCT.</a> Methods in Molecular Biology. 1834, 285-291 (2019).</li><li>Zaks, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+imaging+for+assessing+tumor+growth+in+mouse+models+of+ocular+melanoma.">In-vivo imaging for assessing tumor growth in mouse models of ocular melanoma.</a> Experimental Eye Research. 204, 108431 (2021).</li><li>Brar, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Academy+of+Ophthalmology+2022-2023+BCSC.+2.">American Academy of Ophthalmology 2022-2023 BCSC. 2.</a> Fundamentals and principles of ophthalmology. , (2022).</li><li>Duker, J. S., Waheed, N. K., Goldman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Retinal OCT: Optical Coherence Tomography, 2nd Edition. , (2021).</li><li>Tomayko, M. M., Reynolds, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+subcutaneous+tumor+size+in+athymic+(nude)+mice.">Determination of subcutaneous tumor size in athymic (nude) mice.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 24 (3), 148-154 (1989).</li><li>Richards, J. R., Yoo, J. H., Shin, D., Odelberg, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+uveal+melanoma:+Strengths,+weaknesses,+and+future+directions.">Mouse models of uveal melanoma: Strengths, weaknesses, and future directions.</a> Pigment Cell &amp; Melanoma Research. 33 (2), 264 (2020).</li><li>Chen, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoacoustic+molecular+imaging-escorted+adipose+photodynamic-browning+synergy+for+fighting+obesity+with+virus-like+complexes.">Photoacoustic molecular imaging-escorted adipose photodynamic-browning synergy for fighting obesity with virus-like complexes.</a> Nature Nanotechnology. 16 (4), 455-465 (2021).</li><li>Yu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+visualization+of+early+cancer+hepatic+micrometastasis+and+intraoperative+image-guided+surgery+by+photoacoustic+imaging.">Label-free visualization of early cancer hepatic micrometastasis and intraoperative image-guided surgery by photoacoustic imaging.</a> Journal of Nuclear Medicine. 61 (7), 1079-1085 (2020).</li></ol>

Увеальная меланома является разрушительным заболеванием, для которого крайне необходимы новые терапевтические подходы. Однако исследования увеальной меланомы и потенциальных методов лечения ограничены техническими проблемами моделей увеальной меланомына животных ...

Увеальная меланома (УМ) является наиболее частым внутриглазным первичным злокачественным новообразованием у взрослых. Приблизительно 90% меланом глаза происходят из меланоцитов в сосудистой оболочке увеального тракта1. UM является основной причиной заболеваемости и смертности, поскольку, по оценкам, около 50% пациентов развивают метастатическое заболевание, причем печень является основным местом метастазирования2. Раннее лечение первичных поражений может снизить вероятность метастазов, однако никакое эффективное лечение не предотвращает образование метастазов3.
Стандартное лечение увеальной меланомы включает лучевую терапию, которая связана с потерей зрения из-за оптической нейропатии, ретинопатии, синдрома сухого глаза и катаракты. Хирургическая резекция обычно откладывается до тех пор, пока рост поражения не будет распознан и охарактеризован. Однако такая задержка может привести к развитию метастатического заболевания4. В некоторых случаях требуется бесполезная энуклеация. Конечно, эта радикальная процедура ставит под угрозу зрение и приводит к резкому ухудшению эстетики.
Было предпринято много усилий, посвященных разработке экспериментальных моделей для изучения увеальной меланомы. Доклинические модели на животных, которые позволяют точно оценить это злокачественное новообразование, являются ключевыми для изучения новых диагностических и терапевтических стратегий увеальной меланомы. Экспериментальные модели меланомы глаза на животных в основном основаны на инокуляции опухолевых клеток у мышей, крыс и кроликов 5,6. Мышиные модели экономически эффективны и широко используются для исследований меланомы из-за их быстрой скорости размножения и высокого сходства генома с людьми. Клеточная линия меланомы кожи мышей B16 обычно используется для инокуляции мышей C57BL6 и индуцирования сингенных опухолей. При использовании этой модели для индукции увеальной меланомы опухолевидные глаза обычно необходимо энуклеировать через 7-14 дней после инокуляции. Кроме того, B16 является высокоинвазивной моделью. Иммунно-привилегированная природа глаза поддерживает метастазирование, и метастазы обычно могут быть обнаружены через 3-4 недели после инокуляции опухолевых клеток. Субкультуры исходной линии B16 проявляют отчетливые метастатические свойства6. Например, линия меланомы Квинса имеет высокий показатель метастазов 7,8. Клеточная линия B16LS9 имеет морфологию дендритных клеток и была получена из метастазов в печень мышей C57BL / 6, которым была введена родительская линия кожной меланомы B16F19. Было показано, что при введении в задний отдел глаза эти клетки образуют внутриглазные опухоли, которые гистологически напоминают увеальную меланому человека и образуют специфические для печени метастазы у C57BL / 6, но не у Balb / C, мышей10,11,12. Генетически клетки характеризуются более высокой экспрессией протоонкогена c-met, который действует как клеточный рецептор для фактора роста гепатоцитов13. Напротив, B16F10,10-й пассаж родительского B16, в первую очередь метастазирует в легкие при инокуляциивнутриглазно 14. И B16F10, и B16LS9 пигментированы12.
Несколько ключевых проблем ограничивают успех моделей увеальной меланомы у мышей. Во-первых, рефлюкс опухолевых клеток может привести к экстраокулярной или субконъюнктивальной меланоме. Во-вторых, рост опухоли после внутриглазной инокуляции клеток меланомы часто сильно варьируется, что создает трудности в оценке лечения и прогресса. Другой серьезной трудностью является ограниченная способность следить за ростом опухоли in vivo. В то время как биолюминесцентная визуализация, такая как опухоли, экспрессирующие люциферазу, обычно используется для мониторинга роста опухолиглаза 15,16, она не может предоставить информацию о внутриглазном расположении опухоли. Поэтому оценка опухоли обычно проводится после энуклеации глаза10,17. Это значительно ограничивает способность характеризовать прогрессирование опухоли и широкий ответ на лечение. Еще одним серьезным препятствием в изучении увеальной меланомы является трудность мониторинга поражений у пигментированных мышей. Новые подходы, которые преодолевают эти трудности, необходимы для содействия исследованию увеальной меланомы на животных моделях.
Оптическая когерентная томография (ОКТ) предоставляет отличительные возможности для получения изображений вглубь различных участков глаза с высоким разрешением, что не имеет аналогов в других методологиях, включая ультразвук18,19. ОКТ-визуализация использовалась на животных моделях для изучения различных глазных заболеваний20. Недавно ОКТ-визуализация была продемонстрирована как неинвазивное средство оценки внутриглазного роста опухоли21. Описанный здесь протокол изображает имплантацию клеток меланомы в сосудистую оболочку мыши и использование ОКТ для прогнозирования локализации и размера внутриглазной опухоли во время инокуляции клеток.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 &#956;L glass syringe (Hamilton Co., Bonaduz, Switzerland)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>721711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G needles</td>
			<td>BD Microbalance</td>
			<td>2025-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezole hydrochloride</td>
			<td>Orion Phrma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B16LS9 cells</td>
			<td>from Hans Grossniklaus USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine&#160;</td>
			<td>richter pharma</td>
			<td>102047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 female mice</td>
			<td>Envigo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Essential vitamin mixture</td>
			<td>satorius</td>
			<td>01-025-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>rhenium</td>
			<td>10270106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-025-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroxyethylcellulose 1.4% eye drops</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>390862</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSight OCT segmentation software&#160;</td>
			<td>Phoenix Micron, Inc&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>bremer pharma GMBH (medimarket)</td>
			<td>17889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-020-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine&#160;</td>
			<td>zoetis (vetmarket)</td>
			<td>102532</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ofloxacin 0.3% eye drops</td>
			<td>allergan</td>
			<td>E92170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical coherence tomography&#160;</td>
			<td>Phoenix Micron, Inc&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxybuprocaine 0.4%</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>393050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin-amphoteracin</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-033-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)&#160;</td>
			<td>satorius</td>
			<td>02-023-1a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI cell media</td>
			<td>satorius</td>
			<td>01-104-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-042-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>OPMI-6 CFC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide 0.5%</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>390723</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

implantation and evaluation of melanoma in the murine choroid via optical coherence tomography

Создание экспериментальных моделей меланомы хориоидеи является сложной задачей с точки зрения способности индуцировать опухоли в правильной локализации. Кроме того, трудности в наблюдении за меланомой задней хориоидеи in vivo ограничивают локализацию опухоли и оценку роста в режиме реального времени. Описанный здесь подход оптимизирует методы определения меланомы хориоидеи у мышей с помощью многоступенчатой процедуры субхориоидальной инъекции клеток B16LS9. Чтобы обеспечить точность при введении в небольшие размеры сосудистой оболочки мыши, вся процедура выполняется под микроскопом. Сначала конъюнктивальная перитомия формируется в дорсально-височной области глаза. Затем путем введения иглы через обнаженную склеру создается тракт в подхориоидальное пространство. Затем следует введение тупой иглы в тракт и инъекция клеток меланомы в сосудистую оболочку. Сразу после инъекции используется неинвазивная оптическая когерентная томография (ОКТ) для определения местоположения и прогрессирования опухоли. Отслойка сетчатки оценивается как предиктор локализации и размера опухоли. Представленный метод позволяет воспроизвести индукцию меланомы, локализованной в сосудистой оболочке у мышей, и визуализировать оценку роста опухоли в реальном времени. Таким образом, он является ценным инструментом для изучения внутриглазных опухолей.

Глаза исследовали с помощью ОКТ сразу после инъекции клеток B16LS9. После инъекции наблюдалась локальная отслойка сетчатки. У мышей наблюдалось три паттерна РД: очаговая (рис. 2, верхняя панель), утечка в стекловидное тело (рис. 2, средняя панель) и расширенная РД (рис<strong ...

Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography at JoVE.com

Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography

Настоящий протокол описывает имплантацию и оценку меланомы в сосудистой оболочке мыши с использованием оптической когерентной томографии.

Имплантация и оценка меланомы в сосудистой оболочке мыши с помощью оптической когерентной томографии

Establishing experimental choroidal melanoma models is challenging in terms of the ability to induce tumors at the correct localization. In addition, ...

Установление опухолей в качестве задней части глаза является сложной задачей. Этот метод позволяет индукцию воспроизводимых опухолей меланомы хориоидеи у мышей и визуализацию роста опухоли в реальном времени для оценки. Этот протокол использует ОКТ-визуализацию в реальном времени для оценки местоположения опухолей уже во время инокуляции опухолевых клеток и для отслеживания роста опухоли у живых животных.Увеальная меланома является разрушительным заболеванием с почти 50-процентным уровнем метастазирования. Разработка экспериментальных моделей является ключом к продвижению исследований, направленных на новые терапевтические возможности. Преимущество этого метода заключается в том, что немедленная оценка успешности инъекции позволяет охватить исследуемые группы с однородными опухолями и непрерывно следить за ними с помощью визуализации в реальном времени.Изучить опухолевую прогрессию. Инъекция в глаза маленькой мыши требует практики. Возможность визуализировать инъецированные клетки позволяет немедленно оценить свой успех и повторить с большим количеством мышей по мере необходимости.Продемонстрирует процедуру доктор Димитри Габер из Научно-исследовательской лаборатории офтальмологии Медицинского центра Каплан. Для начала нанесите 0,4% местный офтальмологический анестетик, оксибупрокаин, на оба глаза анестезированной мыши. Затем местно нанесите 0,5% тропикамида на оба глаза для расширения зрачков, а затем 1,4% гидроксиэтилцеллюлозы в качестве смазки, чтобы избежать высыхания глаз.Понаблюдайте за одним глазом мыши под операционным микроскопом. Держите веки открытыми стерильными внутриглазными щипцами. Затем возьмитесь за верхнюю височную лимбоконъюнктиву и потяните к подносовому положению.Закрепите это положение, удерживая лимбо-конъюнктиву на протяжении всей процедуры. Используя кончик иглы 30 калибра, сделайте небольшую перитомию конъюнктивы в дорсальной височной области примерно на один-два миллиметра позади лимба. Удалите лишнюю сухожильную капсулу из отверстия перитомии.Вставьте кончик иглы, чтобы проникнуть в склеру, создавая дорожку в субхориоидальном пространстве до тех пор, пока коричневый цвет сосудистой оболочки не появится через открытое белое вещество склеры. Загрузите клетки в стерильный стеклянный шприц Hamilton объемом 10 микролитров, установленный с тупой иглой 32 калибра, скрученной под углом 45 градусов. Введите иглу загруженного шприца примерно на два миллиметра в созданный тракт и введите два микролитра клеточной суспензии.Удерживайте иглу на месте после инъекции в течение двух-трех секунд, пока вся жидкость не очистится. Извлеките иглу, осторожно вытащив ее, чтобы избежать утечки из тракта. Сразу после инокуляции клеток меланомы наблюдайте за инъецированным глазом животного с помощью ОКТ-сканирования.На основе сканирования классифицируйте отслоение сетчатки или паттерны RD в соответствии с тремя категориями: локальный RD, утечка в стекловидное тело или расширенный RD. Откройте программное обеспечение для анализа сегментации ОКТ, чтобы предсказать размер опухоли на основе роста RD. Измерьте высоту локального RD при сканировании OCT и разделите их на три группы. В послеоперационном периоде применяют 0,3% офлоксацина местно.На этом рисунке показано прогнозирование роста опухоли после инъекции субхориоидальных клеток на основе ОКТ. У мышей наблюдались три паттерна: RD, FoCal, Leakage To The Vitreous и Extended RD. Была обнаружена связь между паттерном РД сразу после инъекции и локализацией опухолей через пять дней после инъекции. Фокальный RD был связан с ростом опухолевых клеток, который был ограничен сосудистой оболочкой.Однако наблюдение за клетками стекловидного тела после инъекции у животных с фокальным РД указывало на рост опухоли в витреальной полости и сосудистой оболочке. при расширенном РД после инъекции опухоли рассеивались по всей сосудистой оболочке и стекловидному телу через пять дней. Диапазон размеров опухолей, индуцированных в этой модели, можно разделить на маленькие, средние и большие.Здесь показаны репрезентативные изображения ОКТ-измерения высоты RD после инъекции и соответствующее изображение глазного дна, горизонтальное ОКТ-сканирование высоты и ширины опухоли на пятый день после инъекции, а также соответствующее изображение глазного дна, а также соответствующий окрашенный H&E разрез глаза, демонстрирующий сопоставимые измерения опухоли. Здесь представлены измерения объема опухоли у мышей, у которых был маленький, средний или большой RD сразу после инъекции клеток. Регулировка силы инъекции может повлиять на размер и расположение опухоли.Важно откалибровать это и оценить характер индуцированной отслойки сетчатки с помощью ОКТ после инъекции. Живая визуализация опухолей хориоидеи является важным экспериментальным инструментом, который позволяет изучить влияние различных факторов или потенциальных методов лечения на прогрессирование опухоли.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Мышь Модель усталости, индуцированный Peripheral Облучение

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

Использование УЗИ руководствоваться ткани направленных сотовой имплантации для создания ксенотрасплантатов биологически соответствующих метастатические опухоли

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Обогащение и характеристика опухоли иммунной и неиммунизированных микросреды в установленных подкожной мышиных опухоли

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

Продольные морфологических и физиологических мониторинг сфероидов трехмерной опухоли с помощью оптическая когерентная томография

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

Rapid Generation of Primary Murine Melanocyte and Fibroblast Cultures

Быстрое поколение первичных культур Мурин Меланоцит и Фибробласт

Defects in fibroblast or melanocyte function are associated with skin diseases, including poor barrier function, defective wound healing, pigmentation ...

Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells

Пространственный и временный контроль Мурин Меланомы Инициация от мутантных меланоцитов стволовых клеток

Cutaneous melanoma is well known as the most aggressive skin cancer. Although the risk factors and major genetic alterations continue to be documented ...

Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice

Поколение печени ортотопические человека увеянные меланомы Ксенотрансплантат Платформы в иммунодефицитных мышей

In recent decades, subcutaneously implanted patient-derived xenograft tumors or cultured human cell lines have been increasingly recognized as more ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Ультразвуковая ортотопическая имплантация мурин поджелудочной железы Ductal Аденокарцинома

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells

In Vitro Оценка онкогенной трансформации в эпителиальных клетках молочной железы человека

Tumorigenesis is a multi-step process in which cells acquire capabilities&#160;that allow their growth, survival, and dissemination under hostile ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Моделирование метастазирования в головной мозг с помощью инъекции воспалительных клеток рака молочной железы в хвостовую вену

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...