Name: implantation and evaluation of melanoma in the murine choroid via optical coherence tomography
Uploaded: 2022-12-02T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography at JoVE.com

Denna studie stöddes delvis av bidrag 1304/20 från Israel Science Foundation (ISF), Israel, för Arie Marcovich. Vi tackar Shahar Ish-Shalom och Ady Yosipovich, från Institutionen för patologi, Kaplan Medical Center, Rehovot, Israel, för histologianalys.

Experimenten i protokollet godkändes av Israels nationella råd för djurförsök och överensstämmer med ARVO-uttalandet för användning av djur i oftalmisk och synforskning. Honmöss av typen C57BL/6 i åldern 8-10 veckor användes i den aktuella studien och utsattes för 12/12 timmar ljus-mörka cykler. Djuren erhölls från en kommersiell källa (se Materialförteckning).
1. Cellodling
<ol><li>Odla B16LS9-celler i RPMI 1640-medium, kompletterat med 10...

<ol>
	<li>Jager, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uveal+melanoma.">Uveal melanoma.</a> Nature Reviews Disease Primers. 6 (1), 1-25 (2020).</li><li>Bustamante, P., Piquet, L., Landreville, S., Burnier, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uveal+melanoma+pathobiology:+Metastasis+to+the+liver.">Uveal melanoma pathobiology: Metastasis to the liver.</a> Seminars in Cancer Biology. 71, 65-85 (2021).</li><li>Damato, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+treatment+of+choroidal+melanoma+in+relation+to+the+prevention+of+metastatic+death-A+personal+view.">Ocular treatment of choroidal melanoma in relation to the prevention of metastatic death-A personal view.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 66, 187-199 (2018).</li><li>Jouhi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+small+fatal+choroidal+melanoma+study.+A+survey+by+the+European+Ophthalmic+Oncology+Group.">The small fatal choroidal melanoma study. A survey by the European Ophthalmic Oncology Group.</a> American Journal of Ophthalmology. 202, 100-108 (2019).</li><li>Cao, J., Jager, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+eye+models+for+uveal+melanoma.">Animal eye models for uveal melanoma.</a> Ocular Oncology and Pathology. 1 (3), 141-150 (2015).</li><li>Uner, O. E., Gandrakota, N., Azarcon, C. P., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+uveal+melanoma.">Animal models of uveal melanoma.</a> Annals of Eye Science. 7, 21-30 (2022).</li><li>Yang, H., Dithmar, S., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon+alpha+2b+decreases+hepatic+micrometastasis+in+a+murine+model+of+ocular+melanoma+by+activation+of+intrinsic+hepatic+natural+killer+cells.">Interferon alpha 2b decreases hepatic micrometastasis in a murine model of ocular melanoma by activation of intrinsic hepatic natural killer cells.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45 (7), 2056-2064 (2004).</li><li>Yang, H., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+immunologic+and+anti-angiogenic+therapy+reduces+hepatic+micrometastases+in+a+murine+ocular+melanoma+model.">Combined immunologic and anti-angiogenic therapy reduces hepatic micrometastases in a murine ocular melanoma model.</a> Current Eye Research. 31 (6), 557-562 (2006).</li><li>Rusciano, D., Lorenzoni, P., Burger, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+liver+metastasis.">Murine models of liver metastasis.</a> Invasion &amp; Metastasis. 14 (1-6), 349-361 (1994).</li><li>Diaz, C. E., Rusciano, D., Dithmar, S., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B16LS9+melanoma+cells+spread+to+the+liver+from+the+murine+ocular+posterior+compartment+(PC).">B16LS9 melanoma cells spread to the liver from the murine ocular posterior compartment (PC).</a> Current Eye Research. 18 (2), 125-129 (1999).</li><li>Rusciano, D., Lorenzoni, P., Burger, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+liver+metastasis.">Murine models of liver metastasis.</a> Invasion &amp; Metastasis. 14 (1-6), 349-361 (1994).</li><li>Ashur-Fabian, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrac+delayed+the+onset+of+ocular+melanoma+in+an+orthotopic+mouse+model.">Tetrac delayed the onset of ocular melanoma in an orthotopic mouse model.</a> Frontiers in Endocrinology. 12, 632335 (2019).</li><li>Elia, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+c-met+overexpression+in+liver-metastatic+B16-LS9+melanoma+cells.">Mechanisms regulating c-met overexpression in liver-metastatic B16-LS9 melanoma cells.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 81 (3), 477-487 (2001).</li><li>Harning, R., Szalay, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+metastasis+of+in+vivo+and+in+vitro+derived+syngeneic+murine+melanoma.">Ocular metastasis of in vivo and in vitro derived syngeneic murine melanoma.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 28 (9), 1599-1604 (1987).</li><li>Ezra-Elia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+an+in+vivo+imaging+system+be+used+to+determine+localization+and+biodistribution+of+AAV5-mediated+gene+expression+following+subretinal+and+intravitreal+delivery+in+mice.">Can an in vivo imaging system be used to determine localization and biodistribution of AAV5-mediated gene expression following subretinal and intravitreal delivery in mice.</a> Experimental Eye Research. 176, 227-234 (2018).</li><li>Notting, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+bioluminescent+imaging+of+human+uveal+melanoma+in+a+new+mouse+model+of+local+tumor+growth+and+metastasis.">Whole-body bioluminescent imaging of human uveal melanoma in a new mouse model of local tumor growth and metastasis.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 46 (5), 1581-1587 (2005).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+xenograft+murine+human+uveal+melanoma+model+develops+hepatic+micrometastases.">In-vivo xenograft murine human uveal melanoma model develops hepatic micrometastases.</a> Melanoma Research. 18 (2), 95-103 (2008).</li><li>Murthy, R. K., Haji, S., Sambhav, K., Grover, S., Chalam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+applications+of+spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+retinal+diseases.">Clinical applications of spectral domain optical coherence tomography in retinal diseases.</a> Biomedical Journal. 39 (2), 107-120 (2016).</li><li>Drexler, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrahigh-resolution+ophthalmic+optical+coherence+tomography.">Ultrahigh-resolution ophthalmic optical coherence tomography.</a> Nature Medicine. 7 (4), 502-507 (2001).</li><li>Ochakovski, G. A., Fischer, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotyping+of+mouse+models+with+OCT.">Phenotyping of mouse models with OCT.</a> Methods in Molecular Biology. 1834, 285-291 (2019).</li><li>Zaks, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+imaging+for+assessing+tumor+growth+in+mouse+models+of+ocular+melanoma.">In-vivo imaging for assessing tumor growth in mouse models of ocular melanoma.</a> Experimental Eye Research. 204, 108431 (2021).</li><li>Brar, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Academy+of+Ophthalmology+2022-2023+BCSC.+2.">American Academy of Ophthalmology 2022-2023 BCSC. 2.</a> Fundamentals and principles of ophthalmology. , (2022).</li><li>Duker, J. S., Waheed, N. K., Goldman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Retinal OCT: Optical Coherence Tomography, 2nd Edition. , (2021).</li><li>Tomayko, M. M., Reynolds, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+subcutaneous+tumor+size+in+athymic+(nude)+mice.">Determination of subcutaneous tumor size in athymic (nude) mice.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 24 (3), 148-154 (1989).</li><li>Richards, J. R., Yoo, J. H., Shin, D., Odelberg, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+uveal+melanoma:+Strengths,+weaknesses,+and+future+directions.">Mouse models of uveal melanoma: Strengths, weaknesses, and future directions.</a> Pigment Cell &amp; Melanoma Research. 33 (2), 264 (2020).</li><li>Chen, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoacoustic+molecular+imaging-escorted+adipose+photodynamic-browning+synergy+for+fighting+obesity+with+virus-like+complexes.">Photoacoustic molecular imaging-escorted adipose photodynamic-browning synergy for fighting obesity with virus-like complexes.</a> Nature Nanotechnology. 16 (4), 455-465 (2021).</li><li>Yu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+visualization+of+early+cancer+hepatic+micrometastasis+and+intraoperative+image-guided+surgery+by+photoacoustic+imaging.">Label-free visualization of early cancer hepatic micrometastasis and intraoperative image-guided surgery by photoacoustic imaging.</a> Journal of Nuclear Medicine. 61 (7), 1079-1085 (2020).</li></ol>

Uvealt melanom är en förödande sjukdom för vilken nya terapeutiska metoder är mycket nödvändiga. Forskning om uvealt melanom och potentiella behandlingar begränsas dock av de tekniska utmaningarna med uvealt melanom djurmodeller 1,25. Okulära tumörer, som induceras genom intraokulär injektion av cancerceller, är mycket varierande i både lokalisering och storlek, troligen på grund av musögats små dimensioner. Sådan variabilitet är ett hinder för...

Uvealt melanom (UM) är den vanligaste intraokulära primära maligniteten hos vuxna. Cirka 90% av okulära melanom härrör från melanocyter i choroidregionen i uvealkanalen1. UM är en viktig orsak till sjuklighet och dödlighet, eftersom det uppskattas att nära 50% av patienterna utvecklar metastaserad sjukdom, med levern som den viktigaste platsen för metastasering2. Tidig behandling av primära lesioner kan minska risken för metastaser, men ingen effektiv behandling förhindrar bildning av metastaser3.
Standardbehandlingen av uvealt melanom inkluderar bestrålningsbehandling, som är förknippad med synförlust på grund av optisk neuropati, retinopati, torra ögonsyndrom och grå starr. Kirurgisk resektion fördröjs typiskt tills tillväxten av lesionen känns igen och karakteriseras. En sådan fördröjning kan dock möjliggöra metastaserad sjukdomsutveckling4. I vissa fall krävs meningslös enukleation. Naturligtvis äventyrar detta radikala förfarande synen och resulterar i dramatisk estetisk försämring.
Det har gjorts många ansträngningar för att utveckla experimentella modeller för att studera uvealt melanom. Prekliniska djurmodeller som möjliggör noggrann bedömning av denna malignitet är nyckeln till att undersöka nya diagnostiska och terapeutiska strategier för uvealt melanom. Experimentella djurmodeller av okulärt melanom baseras huvudsakligen på inokulering av tumörceller hos möss, råttor och kaniner 5,6. Musmodeller är kostnadseffektiva och används ofta för melanomstudier på grund av deras snabba reproduktionshastighet och höga genomlikhet med människor. Den murina kutana melanomcellinjen B16 används ofta för att inokulera C57BL6-möss och inducera syngena tumörer. När man använder denna modell för att inducera uvealt melanom måste tumörbärande ögon vanligtvis enukleeras 7-14 dagar efter inokulering. Vidare är B16 en mycket invasiv modell. Ögats immunprivilegierade natur stöder metastaser, och metastaser kan vanligtvis detekteras 3-4 veckor efter tumörcellsinokulering. Subkulturer av den ursprungliga B16-linjen visar distinkta metastatiska egenskaper6. Till exempel har Queens melanomlinje en hög metastatisk hastighet 7,8. B16LS9-cellinjen har dendritisk cellmorfologi och härleddes från levermetastaser av C57BL / 6-möss injicerade med föräldrakutan melanomlinje B16F19. När de injicerades i ögats bakre fack visade sig dessa celler bilda intraokulära tumörer, som histologiskt liknar humant uvealt melanom och bildar leverspecifika metastaser i C57BL / 6, men inte Balb / C, möss10,11,12. Genetiskt kännetecknas cellerna av högre uttryck av c-met proto-onkogen, som fungerar som en cellulär receptor för hepatocyttillväxtfaktor13. Däremot metastaserar B16F10, den 10: e passagen av föräldern B16, främst till lungorna när de inokuleras intraokulärt14. Både B16F10 och B16LS9 är pigmenterade12.
Flera viktiga utmaningar begränsar framgången för murina uveala melanommodeller. För det första kan tumörcellreflux leda till extraokulärt eller subkonjunktivalmelanom. För det andra är tumörtillväxt efter intraokulär inokulering av melanomceller ofta mycket varierande, vilket medför svårigheter att utvärdera behandling och framsteg. En annan stor svårighet är den begränsade förmågan att följa tumörtillväxt in vivo. Medan bioluminescerande avbildning, såsom av luciferasuttryckande tumörer, vanligtvis används för att övervaka okulär tumörtillväxt15,16, kan den inte ge information om tumörens intraokulära placering. Därför utförs utvärdering av tumören typiskt efter enukleation av ögat10,17. Detta begränsar kraftigt förmågan att karakterisera tumörprogression och svar på behandlingar i stor utsträckning. Ett annat stort hinder för att studera uvealt melanom är svårigheten att övervaka lesioner hos pigmenterade möss. Nya tillvägagångssätt, som övervinner dessa svårigheter, krävs för att främja forskning av uvealt melanom i djurmodeller.
Optisk koherenstomografi (OCT) ger distinkta möjligheter att avbilda djupt in i de olika delarna av ögat i hög upplösning, vilket är oöverträffat av andra metoder, inklusive ultraljud18,19. OCT-avbildning har använts i djurmodeller för att studera olika ögonsjukdomar20. Nyligen demonstrerades OCT-avbildning som icke-invasivt medel för att utvärdera intraokulär tumörtillväxt21. Protokollet som beskrivs här visar implantation av melanomceller i murin choroid och användningen av OCT för att förutsäga intraokulär tumörlokalisering och storlek vid tidpunkten för cellinokulering.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 &#956;L glass syringe (Hamilton Co., Bonaduz, Switzerland)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>721711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G needles</td>
			<td>BD Microbalance</td>
			<td>2025-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezole hydrochloride</td>
			<td>Orion Phrma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B16LS9 cells</td>
			<td>from Hans Grossniklaus USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine&#160;</td>
			<td>richter pharma</td>
			<td>102047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 female mice</td>
			<td>Envigo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Essential vitamin mixture</td>
			<td>satorius</td>
			<td>01-025-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>rhenium</td>
			<td>10270106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-025-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroxyethylcellulose 1.4% eye drops</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>390862</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSight OCT segmentation software&#160;</td>
			<td>Phoenix Micron, Inc&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>bremer pharma GMBH (medimarket)</td>
			<td>17889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-020-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine&#160;</td>
			<td>zoetis (vetmarket)</td>
			<td>102532</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ofloxacin 0.3% eye drops</td>
			<td>allergan</td>
			<td>E92170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical coherence tomography&#160;</td>
			<td>Phoenix Micron, Inc&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxybuprocaine 0.4%</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>393050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin-amphoteracin</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-033-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)&#160;</td>
			<td>satorius</td>
			<td>02-023-1a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI cell media</td>
			<td>satorius</td>
			<td>01-104-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>satorius</td>
			<td>03-042-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>OPMI-6 CFC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide 0.5%</td>
			<td>Fisher Pharmaceutical</td>
			<td>390723</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

implantation and evaluation of melanoma in the murine choroid via optical coherence tomography

Att etablera experimentella koroidala melanommodeller är utmanande när det gäller förmågan att inducera tumörer vid rätt lokalisering. Dessutom begränsar svårigheter att observera bakre koroidalt melanom in vivo tumörplats och tillväxtutvärdering i realtid. Tillvägagångssättet som beskrivs här optimerar tekniker för att etablera koroidalt melanom hos möss via en flerstegs subkoroidal B16LS9-cellinjektionsprocedur. För att möjliggöra precision vid injektion i de små dimensionerna av musuvea, utförs hela proceduren under ett mikroskop. Först bildas en konjunktival peritomi i ögats dorsala temporala område. Därefter skapas ett område i det subkoroidala utrymmet genom att sätta in en nål genom den exponerade sclera. Detta följs av införandet av en trubbig nål i kanalen och injektionen av melanomceller i choroid. Omedelbart efter injektion används icke-invasiv optisk koherenstomografi (OCT) avbildning för att bestämma tumörens plats och framsteg. Retinal frigöring utvärderas som en prediktor för tumörplats och storlek. Den presenterade metoden möjliggör reproducerbar induktion av koroid-lokaliserat melanom hos möss och levande avbildning av tumörtillväxtutvärdering. Som sådan ger det ett värdefullt verktyg för att studera intraokulära tumörer.

Ögon undersöktes via OCT omedelbart efter injektion av B16LS9-cellerna. Lokal näthinneavlossning observerades efter injektion. Mössen uppvisade tre mönster av RD: fokal (figur 2, övre panel), läckage till glaskroppen (figur 2, mittpanel) och utökad RD (figur 2, nedre panelen). Förlängd RD orsakas sannolikt av skador från injektionen. Det fanns ett samband mellan mönstret av RD omedelbart efter injektion och loka...

Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography at JoVE.com

Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography

Detta protokoll beskriver implantation och utvärdering av melanom i murin choroid med hjälp av optisk koherenstomografi.

Implantation och utvärdering av melanom i murin choroid via optisk koherenstomografi

Establishing experimental choroidal melanoma models is challenging in terms of the ability to induce tumors at the correct localization. In addition, ...

Att etablera tumörer som den bakre delen av ögat är utmanande. Denna metod möjliggör induktion av reproducerbara koroidala melanomtumörer hos möss och levande avbildning av tumörtillväxt för utvärdering. Detta protokoll använder OCT live imaging för att bedöma tumörernas placering redan vid tidpunkten för tumörcellsinokulering och för att följa tumörtillväxt hos levande djur.Uvealt melanom är en förödande sjukdom med nära 50% metastasering. Att utveckla experimentella modeller är nyckeln till att främja forskning som syftar till nya terapeutiska möjligheter. En fördel med denna metod är att den omedelbara bedömningen av injektionens framgång gör det möjligt att nå studiegrupper med homogena tumörer och kontinuerligt följa dem genom levande avbildning.Att undersöka tumörprogression. Att injicera i den lilla musens ögon kräver övning. Möjligheten att visualisera de injicerade cellerna gör att du kan bedöma din framgång omedelbart och upprepa med fler möss vid behov.Demonstrerar proceduren kommer att vara Dr.Dimitri Gaber från Ophthalmology Research Laboratory vid Kaplan Medical Center. Börja med att applicera 0,4% topisk oftalmisk bedövning, Oxybuprocaine på båda ögonen på den bedövade musen. Applicera sedan topiskt 0,5% Tropicamid på båda ögonen för att utvidga pupillerna, följt av 1,4% hydroxietylcellulosa som smörjmedel för att undvika torkning av ögonen.Observera ett musöga under ett operativt mikroskop. Håll ögonlocken öppna med sterila intraokulära pincett. Håll sedan den överlägsna temporala limbo-konjunktiva och dra mot en infra nasal position.Säkra denna position genom att hålla limbo-konjunktiva under hela proceduren. Använd en 30 gauge nålspets för att göra en liten konjunktival peritomi i det dorsala temporala området ungefär en till två millimeter bakom limbus. Ta bort överflödig senkapsel från peritomiöppningen.Sätt in nålspetsen för att tränga in i sclera och skapa ett spår i det subkoroidala utrymmet tills den bruna färgen på choroid framträder genom den exponerade vita substansen i sclera. Ladda cellerna i en steril 10 mikroliter glas Hamilton spruta monterad med en 32 gauge trubbig nål vriden i 45 graders vinkel. Sätt in nålen på den laddade sprutan ungefär två millimeter i det skapade området och injicera två mikroliter av cellsuspensionen.Håll nålen på plats efter injektionen i två till tre sekunder tills all vätska har försvunnit. Ta bort nålen genom att dra ut den försiktigt för att undvika läckage från kanalen. Omedelbart efter melanomcellinokuleringen, observera djurets injicerade öga genom OCT-skanningar.Baserat på skanningarna, klassificera näthinneavlossningen eller RD-mönstren enligt tre kategorier lokal RD, läckage i glaskroppen eller utökad RD. Öppna en OCT-segmenteringsanalysprogramvara för att förutsäga tumörstorleken baserat på RD-höjd. Mät höjden på lokal RD i OCT-skanningarna och klassificera dem i tre grupper. I den postoperativa fasen applicera 0,3% Ofloxacin lokalt.Den OCT-baserade förutsägelsen av tumörtillväxt efter subkoroidal cellinjektion visas i denna figur. Mössen uppvisade tre mönster av RD, Focal, Leakage To The Glasreous och Extended RD. Det fanns ett samband mellan mönstret av RD omedelbart efter injektion och lokaliseringen av tumörerna fem dagar efter injektionen. Fokal RD var associerad med tumörcelltillväxten som var begränsad till åderhinnan.Observation av celler i glaskroppen efter injektion hos djur som uppvisade fokal RD indikerade dock tumörtillväxt i vitrealhålan och åderhinnan. när förlängd RD observerades efter injektion dispergerades tumörer i hela åderhinnan och glaskroppen efter fem dagar. Utbudet av tumörstorlekar inducerade i denna modell kan delas in i små, medelstora och stora.Här visas representativa bilder av OCT-mätningen av RD-höjd efter injektion och motsvarande fundusbild, en horisontell OCT-skanning av tumörens höjd och bredd dag fem efter injektionen och motsvarande fundusbild och motsvarande H&E-färgade ögonsektion som visar jämförbara tumörmätningar. Tumörvolymmätningar av möss som presenterade små, medelstora eller stora RD omedelbart efter cellinjektion presenteras här. Justering av injektionskraften kan påverka tumörens storlek och plats.Det är viktigt att kalibrera detta och att utvärdera mönstret av inducerad näthinneavlossning av OCT efter injektion. Levande avbildning av koroidala tumörer är ett viktigt experimentellt verktyg som gör det möjligt att undersöka effekten av olika faktorer eller potentiella terapier på tumörprogression.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

En musmodell av trötthet inducerad av perifera bestrålning

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

Användningen av ultraljud guidade vävnad-regisserad cellulära Implantation för etableringen av biologiskt relevanta metastaserande tumör xenograft

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Anrikning och karakterisering av de tumör immun och icke-immun mikromiljö i etablerade subkutan murina tumörer

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

Längsgående morfologiska och fysiologiska övervakning av tredimensionella tumör Spheroids använder optisk koherenstomografi

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

Rapid Generation of Primary Murine Melanocyte and Fibroblast Cultures

Snabb generering av primär murina melanocyte och fibroblast kulturer

Defects in fibroblast or melanocyte function are associated with skin diseases, including poor barrier function, defective wound healing, pigmentation ...

Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells

Rumslig och temporal kontroll av murina melanom initiering från Mutant melanocyte stamceller

Cutaneous melanoma is well known as the most aggressive skin cancer. Although the risk factors and major genetic alterations continue to be documented ...

Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice

Generering av en lever Ortoämne humant uvealt melanom xenograft plattform i Immunobristfällig möss

In recent decades, subcutaneously implanted patient-derived xenograft tumors or cultured human cell lines have been increasingly recognized as more ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Ultraljud-guidad ortotopisk implantation av murin Pancreatic ductal adenocarcinom

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells

In Vitro Utvärdering av Oncogenic Transformation i mänskliga mammary Epitelial celler

Tumorigenesis is a multi-step process in which cells acquire capabilities&#160;that allow their growth, survival, and dissemination under hostile ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modellering av hjärnmetastaser via svansveninjektion av inflammatoriska bröstcancerceller

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...