Name: a rapid, simple, and standardized homogenization method to prepare antigen/adjuvant emulsions for inducing experimental autoimmune encephalomyelitis
Uploaded: 2022-12-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Rapid, Simple, and Standardized Homogenization Method to Prepare Antigen/Adjuvant Emulsions for Inducing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis at JoVE.c

著者は、ルンド大学の動物飼育ユニットであるカミラ・ビョルクレフとアグニエシュカ・チョペックの支援、および英国オックスフォード大学ケネディリウマチ研究所のリチャード・ウィリアムズがこの原稿の作成について建設的な批判と言語的支援を行ったことに感謝したいと思います。

すべての動物の手順は、スウェーデン動物研究委員会の慣行に従って実行され、スウェーデンのルンドマルメにある動物倫理委員会によって承認されました(許可番号:M126-16)。
注: この方法の概略フローを 図 1 に示します。
1.材料の準備
注:すべての試薬を滅菌フードで無菌的に調製し、指定され...

<ol>
	<li>Walton, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rising+prevalence+of+multiple+sclerosis+worldwide:+Insights+from+the+Atlas+of+MS,+third+edition.">Rising prevalence of multiple sclerosis worldwide: Insights from the Atlas of MS, third edition.</a> Multiple Sclerosis. 26 (14), 1816-1821 (2020).</li><li>van Langelaar, J., Rijvers, L., Smolders, J., van Luijn, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B+and+T+cells+driving+multiple+sclerosis:+identity,+mechanisms+and+potential+triggers.">B and T cells driving multiple sclerosis: identity, mechanisms and potential triggers.</a> Frontiers in Immunology. 11, 760 (2020).</li><li>Sambucci, M., Gargano, F., Guerrera, G., Battistini, L., Borsellino, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One,+No+One,+and+One+Hundred+Thousand:+T+Regulatory+Cells'+Multiple+Identities+in+Neuroimmunity.">One, No One, and One Hundred Thousand: T Regulatory Cells' Multiple Identities in Neuroimmunity.</a> Frontiers in Immunology. 10, 2947 (2019).</li><li>Mix, E., Meyer-Rienecker, H., Hartung, H. P., Zettl, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+multiple+sclerosis--potentials+and+limitations.">Animal models of multiple sclerosis--potentials and limitations.</a> Progress in Neurobiology. 92 (3), 386-404 (2010).</li><li>Terry, R. L., Ifergan, I., Miller, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Autoimmune+Encephalomyelitis+in+Mice.">Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice.</a> Methods in Molecular Biology. 1304, 145-160 (2016).</li><li>Topping, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+antigen-emulsion+preparations+for+the+induction+of+autoimmune+disease+models.">Standardization of antigen-emulsion preparations for the induction of autoimmune disease models.</a> Frontiers in Immunology. 13, 892251 (2022).</li><li>Flies, D. B., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+rapid+vortex+method+for+preparing+antigen/adjuvant+emulsions+for+immunization.">A simple and rapid vortex method for preparing antigen/adjuvant emulsions for immunization.</a> Journal of Immunological Methods. 276 (1-2), 239-242 (2003).</li><li>M&#228;&#228;tt&#228;, J. A., Er&#228;linna, J. P., R&#246;ytt&#228;, M., Salmi, A. A., Hinkkanen, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+state+of+the+neuroantigen+in+adjuvant+emulsions+determines+encephalitogenic+status+in+the+BALB/c+mouse.">Physical state of the neuroantigen in adjuvant emulsions determines encephalitogenic status in the BALB/c mouse.</a> Journal of Immunological Methods. 190 (1), 133-141 (1996).</li><li>Moncada, C., Torres, V., Israel, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+method+for+the+preparation+of+antigen+emulsions+for+immunization.">Simple method for the preparation of antigen emulsions for immunization.</a> Journal of Immunological Methods. 162 (1), 133-140 (1993).</li><li>Waksman, B. H., Adams, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allergic+neuritis:+an+experimental+disease+of+rabbits+induced+by+the+injection+of+peripheral+nervous+tissue+and+adjuvants.">Allergic neuritis: an experimental disease of rabbits induced by the injection of peripheral nervous tissue and adjuvants.</a> The Journal of Experimental Medicine. 102 (2), 213-236 (1955).</li><li>Vladutiu, A. O., Rose, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmune+murine+thyroiditis+relation+to+histocompatibility+(H-2)+type.">Autoimmune murine thyroiditis relation to histocompatibility (H-2) type.</a> Science. 174 (4014), 1137-1139 (1971).</li><li>Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+uveoretinitis+in+the+rat+and+mouse.">Experimental autoimmune uveoretinitis in the rat and mouse.</a> Current Protocols in Immunology. , (2003).</li><li>Tuzun, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+standard+preclinical+experiments+in+the+mouse+model+of+myasthenia+gravis+induced+by+acetylcholine+receptor+immunization.">Guidelines for standard preclinical experiments in the mouse model of myasthenia gravis induced by acetylcholine receptor immunization.</a> Experimental Neurology. 270, 11-17 (2015).</li><li>Brinckerhoff, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Terminal+modifications+inhibit+proteolytic+degradation+of+an+immunogenic+MART-1(27-35)+peptide:+implications+for+peptide+vaccines.">Terminal modifications inhibit proteolytic degradation of an immunogenic MART-1(27-35) peptide: implications for peptide vaccines.</a> International Journal of Cancer. 83 (3), 326-334 (1999).</li><li>Kool, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alum+adjuvant+boosts+adaptive+immunity+by+inducing+uric+acid+and+activating+inflammatory+dendritic+cells.">Alum adjuvant boosts adaptive immunity by inducing uric acid and activating inflammatory dendritic cells.</a> The Journal of Experimental Medicine. 205 (4), 869-882 (2008).</li><li>Hasselmann, J. P. C., Karim, H., Khalaj, A. J., Ghosh, S., Tiwari-Woodruff, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consistent+induction+of+chronic+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL/6+mice+for+the+longitudinal+study+of+pathology+and+repair.">Consistent induction of chronic experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice for the longitudinal study of pathology and repair.</a> Journal of Neuroscience Methods. 284, 71-84 (2017).</li><li>Freund, J., Lipton, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+allergic+encephalomyelitis+after+the+excision+of+the+injection+site+of+antigen-adjuvant+emulsion.">Experimental allergic encephalomyelitis after the excision of the injection site of antigen-adjuvant emulsion.</a> The Journal of Immunology. 75 (6), 454-459 (1955).</li><li>Stromnes, I. M., Goverman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+induction+of+experimental+allergic+encephalomyelitis.">Active induction of experimental allergic encephalomyelitis.</a> Nature Protocols. 1 (4), 1810-1819 (2006).</li><li>Shaw, M. K., Zhao, X. Q., Tse, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+unresponsiveness+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+(EAE)+resistant+mouse+strains+by+adoptive+transfer+and+antigenic+challenge.">Overcoming unresponsiveness in experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) resistant mouse strains by adoptive transfer and antigenic challenge.</a> Journal of Visualized Experiments. (62), e3778 (2012).</li><li>Arevalo-Herrera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Randomized+clinical+trial+to+assess+the+protective+efficacy+of+a+Plasmodium+vivax+CS+synthetic+vaccine.">Randomized clinical trial to assess the protective efficacy of a Plasmodium vivax CS synthetic vaccine.</a> Nature Communications. 13 (1), 1603 (2022).</li><li>Jiang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+association+factors+for+developing+effective+peptide-based+cancer+vaccines.">Potential association factors for developing effective peptide-based cancer vaccines.</a> Frontiers in Immunology. 13, 931612 (2022).</li><li>Neninger Vinageras, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+II+randomized+controlled+trial+of+an+epidermal+growth+factor+vaccine+in+advanced+non-small-cell+lung+cancer.">Phase II randomized controlled trial of an epidermal growth factor vaccine in advanced non-small-cell lung cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 26 (9), 1452-1458 (2008).</li></ol>

抗原/フロイントアジュバントなどの油中水型エマルジョンは、EAE17を誘導するために半世紀以上にわたって使用されてきました。現在、ヒトの影響に依存しない抗原乳剤を調製するための標準化された方法はありません。シリンジを使用した手動混合はほとんどの研究室で標準的ですが、この方法は時間がかかり、多くの場合、材料の過度の損失をもたらし、品質は準備す?...

免疫寛容の崩壊は、多発性硬化症(MS)などの自己免疫疾患の発生につながる可能性があります。世界中で280万人がMSとともに生活していると推定されています1。MSの正確な原因はまだほとんど不明ですが、自己反応性T細胞とB細胞の調節不全、およびTreg機能の欠陥は、疾患の病因に重要な役割を果たしています2,3。
自己免疫疾患の動物モデルは、潜在的な治療法を調査するために不可欠なツールです。実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)モデルは、MS4に関心のある研究者によってほぼ1世紀にわたって使用されてきました。初期の実験では、この病気の発生率は比較的低かった。 マイコバクテリウム と百日咳毒素を含む完全フロイントアジュバント(CFA)の導入により、マウスにおけるEAEの一貫した誘導が可能になりました4。最も重要なことは、CFAを中枢神経系(CNS)特異的抗原と混合して、EAEを誘導するための均質な油中水型エマルジョンを生成する必要があることです。現在利用可能な最も一般的なEAEモデルは、脳原性ペプチドによるマウスの能動免疫に基づいています。マウスの遺伝的背景は疾患感受性に重要な役割を果たしており、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質(MOG35-55)およびミエリンプロテオリピドタンパク質(PLP139-151)ペプチドは、それぞれC57BL/6JおよびSJLマウスにおいてEAEを誘導するために用いられている5。しかしながら、他のマウス系統およびCNS由来ペプチドも使用することができる。
CFA/ペプチドエマルジョンの品質は、能動免疫EAEモデルにおける疾患浸透率を決定する重要な要素です6。均質な油中水型エマルジョンは、水性緩衝液に溶解した脳形成ペプチドをCFAと混合することによって調製されなければならず、そうでなければ動物は疾患を発症しないであろう。CFA/ペプチドエマルジョンの調製に関する多数のプロトコルが公開されています。例としては、渦7、超音波処理8、シリンジおよび三方Tコネクタ9、または1つのシリンジのみ5の使用が含まれる。ただし、これらの方法はすべて標準化が難しく、多くの場合、長く複雑なプロトコルに関連付けられています。
上記のすべての方法と比較して、エマルジョン調製のためにここで説明する簡単な方法は、人間の違いがなく、比較的高速であるという利点を提供します。エマルジョンは、設定された速度、時間、温度で試薬を振とうするホモジナイザーによって生成され、高速で一貫した結果を保証します。この方法は、EAEモデルで疾患を誘発するだけでなく、コラーゲン誘発関節炎(CIA)や抗原誘発関節炎(AIA)などの他の自己免疫疾患モデルの研究にも使用できます6。したがって、この方法は、実験的自己免疫性神経炎(EAN)10、実験的自己免疫性甲状腺炎(EAT)11、自己免疫性ブドウ膜炎(EAU)12、重症筋無力症(MG)13など、自己抗原を含む油中水型エマルジョンに依存する他の動物モデルで疾患を一貫して誘発するために使用できることが期待されます。この方法はまた、遅延型過敏症(DTH)などの一般的な免疫応答を一貫して誘導するため6、癌やマラリアワクチンの送達に使用できる可能性があります(議論を参照)。
したがって、迅速(総調製時間~30分)、単純(すべての試薬を事前に調製して保存することができる)、および標準化された(エマルジョンは振とうホモジナイザーを使用して達成される)方法が開発され、ここに提示されています。このプロトコルを使用して調製されたCFA /抗原エマルジョンは、自己免疫動物モデルで一貫して疾患を誘発します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL Injection syringe</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>9166017V&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Injection syringe</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z683531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7 ml empty tubes with caps</td>
			<td>Bertin-Instruments</td>
			<td>P000944LYSK0A.0</td>
			<td>7 mL tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile centrifuge tube&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10788561</td>
			<td>50 mL tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bordetella pertussis toxin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2980</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispersant, light mineral oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8410</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emulsion kit</td>
			<td>Bertin-Instruments</td>
			<td>D34200.10 ea</td>
			<td>Containing a tube, cap, and plunger</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incomplete Freund&#39;s Adjuvant</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>&#160;F5506</td>
			<td>Store at +4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycobacterium tuberculosis, H37RA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>DF3114-33-8</td>
			<td>Store at +4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mastersizer 2000&#160;</td>
			<td>Malvern Panalytical</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Particle size analyzer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minilys-Personal homogenizer</td>
			<td>Bertin-Instruments</td>
			<td>P000673-MLYS0-A</td>
			<td>Shaking homogenizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MOG 35-55 Peptide&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>Innovagen</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Montanide ISA 51 VG</td>
			<td>Seppic</td>
			<td>36362Z</td>
			<td>FDA-approved oil adjuvant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pall Acrodisc Syringe Filters 0.2 &#956;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>17124381</td>
			<td>Sterlie filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, Ca2+/Mg2+ free</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14190144</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phase-Constrast Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX40-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel Beads 3.2 mm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC0445832</td>
			<td>Autoclave and store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>648463</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rapid, simple, and standardized homogenization method to prepare antigen/adjuvant emulsions for inducing experimental autoimmune encephalomyelitis

実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)は、多発性硬化症(MS)と同様の免疫学的および臨床的特徴を共有しているため、より良い患者治療のための新しい薬物標的を特定するためのモデルとして広く使用されています。MSは、再発寛解型MS(RRMS)、原発性進行型MS(PPMS)、二次進行型MS(SPMS)、およびまれな進行性再発型のMS(PRMS)など、いくつかの異なる疾患経過を特徴としています。動物モデルは、これらの対照的なヒト疾患表現型のすべてを正確に模倣するわけではありませんが、MSのさまざまな臨床症状のいくつかを反映するEAEモデルがあります。例えば、C57BL/6Jマウスのミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質(MOG)誘導性EAEはヒトPPMSを模倣し、SJL/Jマウスのミエリンプロテオリピドタンパク質(PLP)誘導EAEはRRMSに類似しています。ミエリン塩基性タンパク質(MBP)などの他の自己抗原、および多数の異なるマウス系統もEAEの研究に使用されます。これらの自己抗原免疫EAEモデルにおいて疾患を誘導するために、油中水型エマルジョンを調製し、皮下注射する。EAEモデルの大部分は、百日咳毒素の注射も必要とします 病気が発症するために。一貫性のある再現性のあるEAE誘導のためには、抗原/アジュバントエマルジョンを製造するための試薬を調製するための詳細なプロトコルが必要です。ここで説明する方法は、標準化された方法を利用して油中水型エマルジョンを生成します。シンプルで高速で、シリンジの代わりに振とうホモジナイザーを使用して品質管理されたエマルジョンを調製します。

CFA/MOGエマルジョンを調製するための迅速でシンプルで標準化されたプロトコルを 図1に示します。この方法は、最近、他の場所6に記載されている。CFA/MOGエマルジョンは、従来のシリンジ法やボルテックス法などの他の方法で調製することもできます。これらの方法は、エマルジョンの品質を評価することによってここで比較されました。すべての方?...

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A Rapid, Simple, and Standardized Homogenization Method to Prepare Antigen/Adjuvant Emulsions for Inducing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

多発性硬化症の動物モデルである実験的自己免疫性脳脊髄炎を誘発するために、マウスを自己抗原および完全なフロイントアジュバントを含む油中水型エマルジョンで免疫する。これらのエマルジョンの調製にはいくつかのプロトコルがありますが、ここでは、エマルジョン調製のための迅速で単純で標準化された均質化プロトコルを示します。

実験的自己免疫性脳脊髄炎を誘発するための抗原/アジュバントエマルジョンを調製するための迅速、簡便、標準化されたホモジナイズ法

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) shares similar immunological and clinical features with multiple sclerosis (MS), and is therefore widely ...

実験的自己免疫性脳脊髄炎またはEAEは、多発性硬化症患者の新しく改良された治療法を開発するために使用される動物モデルです。EAEで疾患を誘発するには、一貫した結果を得るために完璧な油と水のエマルジョンが必要です。ここで提示するエマルジョン調製方法は、人間の影響を伴わないため、ある実験から別の実験への矛盾が制限される。この方法はEAE用に最適化されていますが、他の自己免疫疾患モデルやがんワクチンの試験にも使用できます。7ミリリットルのチューブに100ミリグラムの凍結乾燥M結核H37 RAおよび5つの3.2ミリメートルのスチールビーズでCFAスラリーを調製した。ホモジナイザーでチューブを最高速度設定で60秒間振とうします。5ミリリットルのIFAアジュバントをチューブに加え、最高速度で60秒間再び振とうします。次に、ビーズを残してピペットでスラリーを新しいチューブに移し、使用するまで摂氏4度で保管します。CFA/ペプチドエマルジョンを調製するには、補足ファイル1をダウンロードして、各試薬に必要な量を計算してください。次に、使用するスクリューキャップ付きチューブと試薬を氷上に置きます。次に、エマルジョン成分を添加する。最初にPBS、次にペプチド、CFAスラリー。そして最後に、IFA。キャップを数回締めたり緩めたりして、キャップ付きのチューブをしっかりと閉じます。チューブを手で5〜10秒間激しく振って、試薬をプレミックスします。チューブを振とうホモジナイザーに入れ、ロッドで固定します。速度を最高設定に設定し、時間を60秒に設定します。ランニングが終了したら、チューブを氷の上に3分間置き、同じ設定でさらに1〜2回ランを繰り返します。チューブを1分から300Gで遠心分離し、閉じ込められた空気を除去し、エマルジョンを圧縮します。チューブからキャップを取り外します。プランジャーをチューブに挿入し、エマルジョンの上部に達するまでゆっくりと押し下げます。チューブの下部にあるスナップオフエンクロージャをねじって取り外します。次に、すべての注射器からプランジャーを取り外し、注射注射器に針を追加します。次に、注射器の背面をチューブの下部にある専用ロックに取り付け、短いひねりでロックします。プランジャーを軽く押して、エマルジョンをチューブから注射シリンジに移します。エマルジョンが注射器の0.15ミリリットルの目盛りに達したら停止する。注射シリンジをチューブから分離し、このシリンジに空気が入らないように注意しながらプランジャーを挿入します。エマルジョンが針から出てくるまでプランジャーを押し、チューブ内に存在する残りのエマルジョンに対してこのプロセスを繰り返します。水と油の粒子のサイズを分析するには、顕微鏡のスライドにエマルジョンの小さな滴を追加し、カバースリップで塗りつけてから、円を描くように強く押してエマルジョンを平らにします。塗抹したエマルジョンを400倍の倍率の位相差顕微鏡で調べ、エマルジョンの単層のあるフィールドに焦点を合わせます。小さい、均一な、灰色または白い粒子が見えることを確認してください。均質化法によって製造されたエマルジョンは、水と油のエマルジョンの小さな液滴を表す灰色または白豆の形をした粒子を示しました。対照的に、シリンジ法を使用して生成されたエマルジョン液滴は、より大きく、より広くなりました。ボルテックス法では、エマルション中に捕捉された気泡に対応する大きな灰色または黒色の粒子が観察された。水および油エマルジョンのレーザー屈折式粒度分析装置を用いて測定した経時的な粒度分布の変化は、6週間にわたって粒径の変化を示さなかった。新鮮な3週齢および15週齢のエマルジョンはすべて、実験全体を通して試験されたすべての動物において同様のEAE疾患を誘発した。マウスはすべての実験で同様の疾患パターンを発症し、ここに提示されたホモジナイズ法が一貫した再現性のある方法でEAEを誘導するエマルジョンを生成することを明らかにしました。実験用のエマルジョンを作る前に、補足ファイル番号1をダウンロードして、廃棄物を最小限に抑えるために必要な各成分の量を計算してください。ここで紹介した方法は、前臨床研究だけでなく、将来的には臨床でがんワクチンを調製するためのエマルジョン調製の標準化にも使用できる可能性があります。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

実験的自己免疫性下垂体炎の誘導のためのマウス下垂体免疫原の調製

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

SJLマウスにおける実験的自己免疫性下垂体炎の誘導

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

移入、抗原チャレンジにより実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）抵抗性マウス系統の応答がないことを克服する

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（MOG<sub&gt; 35〜55</sub&gt;）C57BL / 6マウスにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）誘発

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

マウスおよび種々の組織における免疫細胞の疾患に依存する分布の評価における実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

A Simple Flow Cytometric Method to Measure Glucose Uptake and Glucose Transporter Expression for Monocyte Subpopulations in Whole Blood

シンプルなフローサイトメトリー法は、全血における単球亜集団のためのグルコース取り込みおよびグルコーストランスポーターの発現を測定するために

Monocytes are innate immune cells that can be activated by pathogens and inflammation associated with certain chronic inflammatory diseases. Activation of ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

実験的自己免疫性脳脊髄炎研究のためのシンプルで効率的な生産とマウスミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質の精製

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

Visualizing Impairment of the Endothelial and Glial Barriers of the Neurovascular Unit during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis In Vivo

生体内で実験的自己免疫性脳脊髄炎時単位の内皮細胞およびグリアの障壁の障害の可視化

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with ...

Flow Cytometric Analysis of Lymphocyte Infiltration in Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

実験的自己免疫性脳脊髄炎における中枢神経系におけるリンパ球浸潤のフロー細胞量分析

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible ...