Name: visualizing mitophagy with fluorescent dyes for mitochondria and lysosome
Uploaded: 2022-11-30T14:30:00
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Diese Arbeit wurde teilweise durch das National Key Research and Development Program of China (2017YFA0105601, 2018YFA0107102), die National Natural Science Foundation of China (81970333,31901044,) und das Program for Professor of Special Appointment an Shanghai Institutions of Higher Learning (GZ2020008) finanziert.

1. Zellkultur und Passaging
HINWEIS: Das Protokoll wird am Beispiel routinemäßig kultivierter embryonaler Fibroblasten (MEFs) der Maus beschrieben.
<ol><li>Kultur von MEF-Zellen in 10 cm Zellkulturschalen mit 10 ml Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM). Inkubieren Sie bei 37 °C und 5% CO2 und überwachen Sie die Zellen unter dem Mikroskop bei 100-facher Vergrößerung.</li>
	<li>Führen Sie routinemäßiges Zell-Passaging durch.<ol><li>Wenn die Zellen 80% -90...

<ol>
	<li>Tao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+mitochondria:+evolution,+function,+and+disease.">Animal mitochondria: evolution, function, and disease.</a> Current Molecular Medicine. 14 (1), 115-124 (2014).</li><li>Henze, K., Martin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+biology:+essence+of+mitochondria.">Evolutionary biology: essence of mitochondria.</a> Nature. 426 (6963), 127-128 (2003).</li><li>Kiriyama, Y., Nochi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-+and+intercellular+quality+control+mechanisms+of+mitochondria.">Intra- and intercellular quality control mechanisms of mitochondria.</a> Cells. 7 (1), (2017).</li><li>Rossmann, M. 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V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+pH+modulates+autophagy+and+mitophagy.">Intracellular pH modulates autophagy and mitophagy.</a> Journal of Biological Chemistry. 291 (16), 8701-8708 (2016).</li><li>Takemori, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+mitophagy+using+LysoKK,+a+7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole-(arylpropyl)benzylamine+derivative.">Visualization of mitophagy using LysoKK, a 7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole-(arylpropyl)benzylamine derivative.</a> Mitochondrion. 62, 176-180 (2022).</li><li>Maeda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+new+live+imagers+MitoMM1/2+for+mitochondrial+visualization.">The new live imagers MitoMM1/2 for mitochondrial visualization.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 562, 50-54 (2021).</li><li>Feng, X. R., Yin, W., Wang, J. L., Feng, L., Kang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitophagy+promotes+the+stemness+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells.">Mitophagy promotes the stemness of bone marrow-derived mesenchymal stem cells.</a> Experimental Biology and Medicine. 246 (1), 97-105 (2021).</li><li>Chu, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiolipin+externalization+to+the+outer+mitochondrial+membrane+acts+as+an+elimination+signal+for+mitophagy+in+neuronal+cells.">Cardiolipin externalization to the outer mitochondrial membrane acts as an elimination signal for mitophagy in neuronal cells.</a> Nature Cell Biology. 15 (10), 1197-1205 (2013).</li><li>Sentelle, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ceramide+targets+autophagosomes+to+mitochondria+and+induces+lethal+mitophagy.">Ceramide targets autophagosomes to mitochondria and induces lethal mitophagy.</a> Nature Chemical Biology. 8 (10), 831-838 (2012).</li></ol>

Das hier beschriebene Protokoll bietet eine Methode zur Bewertung und Überwachung des dynamischen Prozesses der Mitophagie in lebenden Zellen, an dem Autophagosomen, Lysosomen und mitochondriale Spaltung beteiligt sind, durch Co-Färbung mit zellpermeierten Mitochondrien und Lysosomenfarbstoffen. Die Methode kann auch verwendet werden, um Mitochondrien zu identifizieren und die mitochondriale Morphologie zu beurteilen. Beide in dieser Studie verwendeten Farbstoffe sollten vor Licht geschützt werden, mehrere Gefrier-Tau...

Mitochondrien sind die Kraftwerke fast aller eukaryotischen Zellen 1,2. Neben der ATP-Produktion durch oxidative Phosphorylierung spielen Mitochondrien eine wichtige Rolle in anderen Prozessen wie Bioenergetik, Kalziumhomöostase, Erzeugung freier Radikale, Apoptose und zellulärer Homöostase 3,4,5. Da Mitochondrien reaktive Sauerstoffspezies (ROS) aus mehreren Komplexen in der Elektronentransportkette erzeugen, werden sie ständig durch potenziellen oxidativen Stress stimuliert, der schließlich zu strukturellen Schäden und Funktionsstörungen führen kann, wenn das antioxidative Abwehrsystem kollabiert 6,7. Es wurde festgestellt, dass mitochondriale Dysfunktion zu vielen Krankheiten beiträgt, einschließlich Stoffwechselstörungen, Neurodegeneration und Herz-Kreislauf-Erkrankungen8. Daher ist es wichtig, gesunde mitochondriale Populationen und ihre ordnungsgemäße Funktion zu erhalten. Mitochondrien sind hochplastische und dynamische Organellen; Ihre Morphologie und Funktion werden durch mitochondriale Qualitätskontrollmechanismen kontrolliert, einschließlich posttranslationaler Modifikationen (PTM) von mitochondrialen Proteinen, mitochondrialer Biogenese, Fusion, Spaltung und Mitophagie 9,10. Die mitochondriale Spaltung, die durch das Dynamin-verwandte Protein 1 (DRP1), eine GTPase der Dynamin-Superfamilie von Proteinen, vermittelt wird, führt zu kleinen und runden Mitochondrien und isoliert die dysfunktionalen Mitochondrien, die durch Mitophagie11,12 gereinigt und abgebaut werden können.
Mitophagie ist ein zellulärer Prozess, der Mitochondrien selektiv durch Autophagie abbaut, die normalerweise in beschädigten Mitochondrien nach Verletzungen, Alterung oder Stress auftritt. Anschließend werden diese Mitochondrien an Lysosomen zum Abbauabgegeben 10. Daher ist die Mitophagie ein kataboler Prozess, der dazu beiträgt, die Quantität und Qualität der Mitochondrien in einem gesunden Zustand in einer Vielzahl von Zelltypen zu erhalten. Es spielt eine entscheidende Rolle bei der Wiederherstellung der zellulären Homöostase unter normalen physiologischen und Stressbedingungen13,14. Zellen zeichnen sich durch einen komplexen Mitophagiemechanismus aus, der durch verschiedene Signale von zellulärem Stress und Entwicklungsveränderungen induziert wird. Mitophagie-Regulationswege werden als Ubiquitin-abhängig oder Rezeptor-abhängig klassifiziert15,16; Die Ubiquitin-abhängige Autophagie wird durch die Kinase PINK1 und die Rekrutierung der Ubiquitin-Ligase Parkin E3 an die Mitochondrienvermittelt 17,18, während die rezeptorabhängige Autophagie die Bindung von Autophagierezeptoren an die Mikrotubuli-assoziierte Protein-Leichtkette LC3 beinhaltet, die Mitophagie als Reaktion auf mitochondriale Schäden vermittelt 19.
Die Transmissionselektronenmikroskopie (TEM) ist die am häufigsten verwendete Methode und immer noch eine der besten Methoden zur Beobachtung und zum Nachweis der Mitophagie20. Die morphologischen Merkmale der Mitophagie sind Autophagosomen oder Autolysosomen, die durch die Fusion von Autophagosomen mit Lysosomen gebildet werden, was aus elektronenmikroskopischen Bildern beobachtet werden kann21. Die Schwäche der Elektronenmikroskopie (EM) ist jedoch die Unfähigkeit, die dynamischen Prozesse der Mitophagie, wie mitochondriale Depolarisation, mitochondriale Spaltung und Fusion von Autophagosomen und Lysosomen, in der lebenden Zellezu überwachen 20. Daher ist die Bewertung der Mitophagie durch Bildgebung lebender Organellen eine attraktive alternative Methode für die mitochondriale Forschung. Die hier beschriebene Lebendzellbildgebungstechnik verwendet zwei Fluoreszenzfarbstoffe, um Mitochondrien und Lysosomen zu färben. Wenn Mitophagie auftritt, werden beschädigte oder überflüssige Mitochondrien, die von Autophagosomen verschlungen werden, durch den mitochondrialen Farbstoff grün gefärbt, während der rote Farbstoff die Lysosomen färbt. Die Verschmelzung dieser Autophagosomen und Lysosomen, die als Autolysosomen bezeichnet werden, bewirkt, dass sich die grüne und rote Fluoreszenz überlappen und sich als gelbe Punkte manifestieren, was auf das Auftreten von Mitophagiehinweist 22. Der zellpermierte Mitochondrienfarbstoff (MitoTracker Green) enthält einen leicht thiolreaktiven Chlormethylanteil, um Mitochondrien23 zu markieren. Um Mitochondrien zu markieren, werden Zellen einfach mit dem Farbstoff inkubiert, der passiv über die Plasmamembran diffundiert und sich in aktiven Mitochondrien ansammelt. Dieser Mitochondrienfarbstoff kann lebende Zellen leicht färben und ist weniger wirksam bei der Färbung von aldehydfixierten oder toten Zellen. Der Lysosomenfarbstoff (LysoTracker Red) ist eine fluoreszierende acidotrope Sonde, die zur Markierung und Verfolgung saurer Organellen in lebenden Zellen verwendet wird. Dieser Farbstoff weist eine hohe Selektivität für saure Organellen auf und kann lebende Zellen bei nanomolaren Konzentrationen effektiv markieren24.
Die Verfahren zur Verwendung dieser Fluoreszenzfarbstoffe in lebenden Zellen, einschließlich der Beladung der Farbstoffe und der Visualisierung von Mitochondrien und Lysosomen, werden hier vorgestellt. Diese Methode kann Forschern helfen, Mitophagie mit lebender Zellfluoreszenzmikroskopie zu beobachten. Es kann auch verwendet werden, um Mitochondrien und Lysosomen zu quantifizieren und die mitochondriale Morphologie zu beurteilen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Automated cell counter</td>
			<td>Countstar</td>
			<td>IC1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting chamber slides</td>
			<td>Countstar</td>
			<td>12-0005-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle medium (DMEM)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline (DPBS)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-031-CVC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom cell culture dish (confocal dish)</td>
			<td>NEST</td>
			<td>801002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J (Rasband, NIH)</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>https://imagej.nih.gov/ij/download.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Krebs&#8211;Henseleit(KHB) buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Self-prepared</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LysoTracker Red</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>1818430</td>
			<td>100 &#181;mol/L, red-fluorescent lysosome dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MitoTracker Green</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>1842298</td>
			<td>200 &#181;mol/L stock, green-fluorescent mitochondria dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Embryonic Fibroblasts</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Self-prepared</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective (63x oil lens)</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>ZEISS LSM 880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA 0.25%</td>
			<td>Gibico</td>
			<td>Cat# 25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS LSM 880 Confocal Laser Scanning Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>ZEISS LSM 880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN Microscopy Software 2.1 (confocal microscope imaging software)</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>ZEN 2.1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing mitophagy with fluorescent dyes for mitochondria and lysosome

Mitochondrien, die Kraftwerke der Zelle, spielen eine wichtige Rolle bei der Bioenergetik, der Erzeugung freier Radikale, der Kalziumhomöostase und der Apoptose. Mitophagie ist der primäre Mechanismus der mitochondrialen Qualitätskontrolle und wird im Allgemeinen durch mikroskopische Beobachtung untersucht, jedoch sind In-vivo-Mitophagie-Assays schwierig durchzuführen. Die Bewertung der Mitophagie durch Bildgebung lebender Organellen ist eine alternative und notwendige Methode für die mitochondriale Forschung. Dieses Protokoll beschreibt die Verfahren zur Verwendung des zellpermierten grün-fluoreszierenden Mitochondrienfarbstoffs MitoTracker Green und des rot fluoreszierenden Lysosomenfarbstoffs LysoTracker Red in lebenden Zellen, einschließlich der Beladung der Farbstoffe, der Visualisierung der Mitochondrien und des Lysosoms sowie der erwarteten Ergebnisse. Detaillierte Schritte zur Bewertung der Mitophagie in lebenden Zellen sowie technische Hinweise zu den Einstellungen der Mikroskopsoftware werden ebenfalls bereitgestellt. Diese Methode kann Forschern helfen, Mitophagie mit lebender Zellfluoreszenzmikroskopie zu beobachten. Darüber hinaus kann es verwendet werden, um Mitochondrien und Lysosomen zu quantifizieren und die mitochondriale Morphologie zu beurteilen.

MitoTracker Green ist eine grün fluoreszierende mitochondriale Färbung, die in der Lage ist, Mitochondrien genau zu lokalisieren. Der Farbstoff kann lebende Zellen leicht färben und ist weniger wirksam bei der Färbung aldehydfixierter oder toter Zellen (Abbildung 2). Der rot fluoreszierende Lysosomenfarbstoff LysoTracker Red ist in der Lage, saure lysosomale Organellen zu markieren und zu verfolgen und kann nur lebende Zellen färben (Abbildung 2). Die konfo...

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Visualizing Mitophagy with Fluorescent Dyes for Mitochondria and Lysosome

Mitophagie ist der primäre Mechanismus der mitochondrialen Qualitätskontrolle. Die Bewertung der Mitophagie in vivo wird jedoch durch das Fehlen zuverlässiger quantitativer Assays behindert. Hier wird ein Protokoll zur Beobachtung der Mitophagie in lebenden Zellen unter Verwendung eines zellpermierten grün-fluoreszierenden Mitochondrienfarbstoffs und eines rot fluoreszierenden Lysosomenfarbstoffs vorgestellt.

Visualisierung der Mitophagie mit Fluoreszenzfarbstoffen für Mitochondrien und Lysosomen

Mitochondria, being the powerhouses of the cell, play important roles in bioenergetics, free radical generation, calcium homeostasis, and apoptosis. ...

Diese Methode hilft, Mitophagie in lebenden Zellen mit einem zellpermierten grün-fluoreszierenden Mitochondrienfarbstoff und einem rot-fluoreszierenden Lysosomenfarbstoff zu beobachten. Mitophagie spielt eine wichtige Rolle bei der Aufrechterhaltung der Mitochondrienhomöostase und verschiedener Aspekte der Zellfunktion. Diese Technik könnte einen neuen Ansatz für die Behandlung von mitochondrienbedingten Erkrankungen bieten.Dieses Verfahren ist nicht sehr kompliziert. Die Aufnahme klarer Bilder ist sehr wichtig, um die Überlagerung von Mitochondrien und Lysosomen zu zählen. Um zu beginnen, kultivieren Sie embryonale Fibroblasten oder MEF-Zellen der Maus in einer 10 Zentimeter großen Zellkulturschale mit 10 Milliliter Dulbeccos modifiziertem Adlermedium oder DMEM.Inkubieren Sie bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid und überwachen Sie die Zellen unter einem Mikroskop bei 100-facher Vergrößerung. Wenn die Zellen 80 bis 90% erreichenKonfluenz, waschen Sie sie mit zwei Milliliter Dulbeccos phosphatgepufferter Kochsalzlösung. Dann fügen Sie zwei Milliliter 0,05% Trypsin EDTA für eine Minute hinzu, um die Zellen zu dissoziieren, gefolgt von zwei Milliliter DMEM, um die Reaktion zu stoppen.Zentrifugieren Sie die Zellsuspension bei 100 G für drei Minuten und resuspendieren Sie das Pellet in einem Milliliter DMEM. Zählen Sie die Zellen mit einem automatisierten Zellzähler und Zellzählkammerobjektträgern und inokulieren Sie 1,5 mal 10 bis sechste Zellen in eine neue 10 Zentimeter große Zellkulturschale mit 10 Milliliter DMEM. Für den Mitophagie-Assay wird eine Zellsuspension wie beschrieben hergestellt und die Zellsuspension auf einmal 10 bis fünfte Zellen pro Milliliter frischem DMEM verdünnt.Fügen Sie zwei Milliliter der verdünnten Zellsuspension in eine 20 Millimeter konfokale Schale und schütteln Sie die Schale in einem Kreuz. Bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid für 24 Stunden inkubieren. Bereiten Sie Arbeitslösungen der Farbstoffe vor, indem Sie die Stammlösungen verdünnen.Fügen Sie zwei Mikroliter je 0,2 Millimolarer Mitochondrienfarbstoff und 50 Mikromol-Lysosomenfarbstoff zu zwei Milliliter DMEM hinzu, um eine Arbeitskonzentration von 0,2 Mikromolaren Mitochondrienfarbstoff und 50 Nanomol-Lysosomenfarbstoff zu erhalten. Entfernen Sie das Medium aus der konfokalen Kulturschale und fügen Sie einen Milliliter der Färbelösung hinzu, um die Zellen zu bedecken. Stellen Sie die Zellkulturschale bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid für 20 bis 30 Minuten.Stellen Sie die Parameter der konfokalen Mikroskopie-Bildgebungssoftware ein. Verwenden Sie für Bilder mit doppelter Anregung die sequentielle Anregung bei 488 Nanometern und 543 Nanometern und sammeln Sie Emissionen bei 505 bis 545 Nanometern bzw. mehr als 560 Nanometern. Die Kulturmediumschale, die den Farbstoff enthält, aus dem Inkubator nehmen und einen Milliliter Krebs-Henseleit oder KH-Puffer in die Schale geben.Um die Mitophagie zu induzieren, behandeln Sie die Zellen mit FCCP bei einem Mikromolar im KH-Puffer für 10 Minuten bei Raumtemperatur und fahren Sie sofort fort, die Zellen mit dem konfokalen Mikroskop abzubilden. Tragen Sie eine angemessene Menge Öl auf die Oberseite der 63X Öllinse auf. Legen Sie die Probe auf den Probentisch des konfokalen Mikroskops und bewegen Sie sie direkt über die Objektivlinse.Verwenden Sie die Imaging-Software, um das Beispiel zu finden, indem Sie auf die Registerkarte Suchen in der oberen linken Ecke der Softwareoberfläche klicken. Wählen Sie einen grünen Filtersatz für das Experiment aus. Verwenden Sie den groben Einstellknopf, um schnell zu fokussieren, indem Sie das Objektiv nach oben und unten bewegen.Nachdem die Zellprobe durch das Okular gut sichtbar ist, suchen und fokussieren Sie den Bereich einzelner Zellen und bewegen Sie ihn in die Mitte des Sichtfeldes. Klicken Sie auf die Registerkarte Erfassung in der oberen linken Ecke der Softwareoberfläche, um Bilder aufzunehmen. Wählen Sie nur den 488-Nanometer-Kanal und die Bildauflösung 1024 x 1024 für die Vorschau aus.Klicken Sie auf die Registerkarte Live in der oberen linken Ecke, um einen Live-Scan zu starten. Stellen Sie das Sichtfeld auf das schärfste und die Laserleistung ein, indem Sie den Schieberegler nach links oder rechts bewegen. Halten Sie die Verstärkungseinstellung unter 600, um eine Überbelichtung zu vermeiden.Stellen Sie den Lochwert auf 156, den Verstärkungswert auf 545 und den digitalen Offsetwert auf Null ein. Wählen Sie das beste Sichtfeld, überprüfen Sie die beiden Kanäle und wählen Sie die Bildauflösung 1024 x 1024. Klicken Sie auf Ausrichten, um 2D-Bilder aufzunehmen und die aufgenommenen Bilder zu speichern.In dieser Studie wurde FFCP verwendet, um Mitophagie in MEF-Zellen für die konfokale Bildgebung auszulösen. Repräsentative Bilder von Zellen, die mit dem grün-fluoreszierenden Mitochondrienfarbstoff gefärbt sind, der Mitochondrien zeigt und mit dem rot fluoreszierenden Lysosomenfarbstoff gefärbt ist, der Lysosomen zeigt, sind hier gezeigt. Wenn beschädigte grün gefärbte Mitochondrien von rot gefärbten Lysosomen verschlungen werden, überlappen sich die grüne und rote Fluoreszenz, um gelbe co-lokalisierte Mitochondrien-Lysosomen zu enthüllen.Die gelben Punkte entsprechen diesen kolokalisierten Mitochondrien-Lysosomen, die eine laufende Mitophagie darstellen und können daher gezählt werden, um das Ausmaß der Mitophagie zu bewerten. Die Herstellung einer funktionierenden Lösung von Farbstoffen für Mitochondrien und Lysosomenfärbung und die Aufrechterhaltung einer geeigneten Zellkonfluenz bei der Bildgebung mit konfokaler Mikroskopie sind wichtige Schritte, an die man sich erinnern sollte. Dieses Verfahren kann auch zur Analyse der mitochondrialen Anzahl und Morphologie verwendet werden, was für die Beurteilung der mitochondrialen Dynamik wichtig ist.Mitophagie ist eng mit einer Vielzahl von menschlichen Krankheiten verbunden und diese Technik kann verwendet werden, um den Zusammenhang zwischen Mitophagie und menschlichen Krankheiten zu erforschen.

Research

JoVE Journal

Biology

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Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Forschung

Biologie

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Our project identified GFP labeled glial structures at the developing larval fly neuromuscular synapse. To look at development of live glial-nerve-muscle ...

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Symbioses, the living together of two or more organisms, are widespread throughout all kingdoms of life. As two of the most ubiquitous organisms on ...

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The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...

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Empfindliche Messung des Mitophagy von Flow Cytometry Verwendung der pH-abhängigen fluoreszierende Reporter Mt-Otamegane

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Application of Membrane and Cell Wall Selective Fluorescent Dyes for Live-Cell Imaging of Filamentous Fungi

Anwendung von Membran- und Zellwandselektiven Fluoreszenzfarbstoffen für die Live-Zell-Bildgebung von filamentösen Pilzen

The application of membrane and cell wall selective fluorescent dyes for live-cell imaging analyses of organelle dynamics in fungal cells started two ...