Name: visualizing mitophagy with fluorescent dyes for mitochondria and lysosome
Uploaded: 2022-11-30T14:30:00
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この研究の一部は、中国国家重点研究開発プログラム(2017YFA0105601、2018YFA0107102)、中国国家自然科学基金会(81970333,31901044)、および上海高等教育機関の特別任命教授プログラム(GZ2020008)によって資金提供されました。

1. 細胞培養と継代
注:プロトコルは、例としてルーチン培養マウス胚性線維芽細胞(MEF)を使用して説明されています。
<ol><li>10 mLのダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)を含む10 cm細胞培養皿でMEF細胞を培養します。37°Cおよび5%CO2 でインキュベートし、顕微鏡下で細胞を100倍の倍率でモニターします。</li>
	<li>定期的な細胞継代を実行します。<ol><li>細胞?...

<ol>
	<li>Tao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+mitochondria:+evolution,+function,+and+disease.">Animal mitochondria: evolution, function, and disease.</a> Current Molecular Medicine. 14 (1), 115-124 (2014).</li><li>Henze, K., Martin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+biology:+essence+of+mitochondria.">Evolutionary biology: essence of mitochondria.</a> Nature. 426 (6963), 127-128 (2003).</li><li>Kiriyama, Y., Nochi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-+and+intercellular+quality+control+mechanisms+of+mitochondria.">Intra- and intercellular quality control mechanisms of mitochondria.</a> Cells. 7 (1), (2017).</li><li>Rossmann, M. 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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+as+a+therapeutic+target+for+common+pathologies.">Mitochondria as a therapeutic target for common pathologies.</a> Nature Reviews: Drug Discovery. 17 (12), 865-886 (2018).</li><li>Fan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+quality+control+in+cardiomyocytes:+a+critical+role+in+the+progression+of+cardiovascular+diseases.">Mitochondrial quality control in cardiomyocytes: a critical role in the progression of cardiovascular diseases.</a> Frontiers in Physiology. 11, 252 (2020).</li><li>Ma, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitophagy,+mitochondrial+homeostasis,+and+cell+fate.">Mitophagy, mitochondrial homeostasis, and cell fate.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 467 (2020).</li><li>Kraus, F., Roy, K., Pucadyil, T. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitophagy:+mechanisms,+pathophysiological+roles,+and+analysis.">Mitophagy: mechanisms, pathophysiological roles, and analysis.</a> Biological Chemistry. 393 (7), 547-564 (2012).</li><li>Parzych, K. R., Klionsky, D. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MitoTracker+Green+labeling+of+mitochondrial+proteins+and+their+subsequent+analysis+by+capillary+electrophoresis+with+laser-induced+fluorescence+detection.">MitoTracker Green labeling of mitochondrial proteins and their subsequent analysis by capillary electrophoresis with laser-induced fluorescence detection.</a> Journal of Chromatography B. Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences. 793 (1), 141-150 (2003).</li><li>Chazotte, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Labeling+lysosomes+in+live+cells+with+LysoTracker.">Labeling lysosomes in live cells with LysoTracker.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2011 (2), 5571 (2011).</li><li>Pickles, S., Vigie, P., Youle, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitophagy+and+quality+control+mechanisms+in+mitochondrial+maintenance.">Mitophagy and quality control mechanisms in mitochondrial maintenance.</a> Current Biology. 28 (4), 170-185 (2018).</li><li>Ashrafi, G., Schwarz, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathways+of+mitophagy+for+quality+control+and+clearance+of+mitochondria.">The pathways of mitophagy for quality control and clearance of mitochondria.</a> Cell Death and Differentiation. 20 (1), 31-42 (2013).</li><li>Berezhnov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+pH+modulates+autophagy+and+mitophagy.">Intracellular pH modulates autophagy and mitophagy.</a> Journal of Biological Chemistry. 291 (16), 8701-8708 (2016).</li><li>Takemori, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+mitophagy+using+LysoKK,+a+7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole-(arylpropyl)benzylamine+derivative.">Visualization of mitophagy using LysoKK, a 7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole-(arylpropyl)benzylamine derivative.</a> Mitochondrion. 62, 176-180 (2022).</li><li>Maeda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+new+live+imagers+MitoMM1/2+for+mitochondrial+visualization.">The new live imagers MitoMM1/2 for mitochondrial visualization.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 562, 50-54 (2021).</li><li>Feng, X. R., Yin, W., Wang, J. L., Feng, L., Kang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitophagy+promotes+the+stemness+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells.">Mitophagy promotes the stemness of bone marrow-derived mesenchymal stem cells.</a> Experimental Biology and Medicine. 246 (1), 97-105 (2021).</li><li>Chu, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiolipin+externalization+to+the+outer+mitochondrial+membrane+acts+as+an+elimination+signal+for+mitophagy+in+neuronal+cells.">Cardiolipin externalization to the outer mitochondrial membrane acts as an elimination signal for mitophagy in neuronal cells.</a> Nature Cell Biology. 15 (10), 1197-1205 (2013).</li><li>Sentelle, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ceramide+targets+autophagosomes+to+mitochondria+and+induces+lethal+mitophagy.">Ceramide targets autophagosomes to mitochondria and induces lethal mitophagy.</a> Nature Chemical Biology. 8 (10), 831-838 (2012).</li></ol>

ここで説明するプロトコルは、オートファゴソーム、リソソーム、およびミトコンドリア分裂を含む生細胞におけるマイトファジーの動的プロセスを、細胞透過性ミトコンドリアおよびリソソーム色素との共染色を通じて評価およびモニタリングする方法を提供します。この方法は、ミトコンドリアを同定し、ミトコンドリアの形態を評価するためにも使用できます。この研究で使用される?...

ミトコンドリアは、ほぼすべての真核細胞の原動力です1,2。酸化的リン酸化によるATP産生に加えて、ミトコンドリアは、生体エネルギー、カルシウム恒常性、フリーラジカル生成、アポトーシス、細胞恒常性などの他のプロセスにおいて重要な役割を果たします3,4,5。ミトコンドリアは電子伝達系内の複数の複合体から活性酸素種(ROS)を生成するため、潜在的な酸化ストレスによって絶えず刺激され、抗酸化防御システムが崩壊すると、最終的には構造的損傷や機能不全につながる可能性があります6,7。ミトコンドリア機能障害は、代謝障害、神経変性、心血管疾患など、多くの疾患に寄与することがわかっています8。したがって、健康なミトコンドリア集団とその適切な機能を維持することが重要です。ミトコンドリアは非常に可塑的で動的な細胞小器官です。それらの形態と機能は、ミトコンドリアタンパク質の翻訳後修飾(PTM)、ミトコンドリア生合成、融合、分裂、およびマイトファジーを含むミトコンドリア品質管理メカニズムによって制御されています9,10。ダイナミンスーパーファミリーのタンパク質のGTPアーゼであるダイナミン関連タンパク質1(DRP1)によって媒介されるミトコンドリア分裂は、小さくて丸いミトコンドリアをもたらし、機能不全のミトコンドリアを分離し、マイトファジーによって除去および分解することができます11,12。
マイトファジーは、オートファジーによってミトコンドリアを選択的に分解する細胞プロセスであり、通常、損傷、老化、またはストレスの後に損傷したミトコンドリアで発生します。続いて、これらのミトコンドリアは、分解のためにリソソームに送達される10。したがって、マイトファジーは、広範囲の細胞型においてミトコンドリアの量と質を健康な状態に維持するのに役立つ異化プロセスです。これは、通常の生理学的およびストレス条件下での細胞の恒常性の回復に重要な役割を果たします13,14。細胞は、細胞ストレスおよび発生変化の異なるシグナルによって誘発される複雑なマイトファジー機構によって特徴付けられる。マイトファジー調節経路は、ユビキチン依存性または受容体依存性に分類されます15,16;ユビキチン依存性オートファジーは、キナーゼPINK1とユビキチンリガーゼParkin E3のミトコンドリアへの動員によって媒介されますが17,18、受容体依存性オートファジーは、ミトコンドリア損傷に応答してマイトファジーを媒介する微小管関連タンパク質軽鎖LC3へのオートファジー受容体の結合を含みます19。
透過型電子顕微鏡(TEM)は、マイトファジーを観察および検出するために最も一般的に使用される方法であり、依然として最良の方法の1つです20。マイトファジーの形態学的特徴は、オートファゴソームまたはオートファゴソームとリソソームの融合によって形成されるオートリソソームであり、これは電子顕微鏡画像から観察することができる21。しかし、電子顕微鏡(EM)の弱点は、生細胞20におけるミトコンドリア脱分極、ミトコンドリア分裂、オートファゴソームとリソソームの融合などのマイトファジーの動的プロセスを監視できないことです。したがって、生体オルガネラのイメージングを通じてマイトファジーを評価することは、ミトコンドリア研究の魅力的な代替方法です。ここで説明するライブセルイメージング技術は、2つの蛍光色素を使用してミトコンドリアとリソソームを染色します。マイトファジーが発生すると、オートファゴソームに取り込まれた損傷または余分なミトコンドリアはミトコンドリア色素によって緑色に染色され、赤色染料はリソソームを染色します。オートリソソームと呼ばれるこれらのオートファゴソームとリソソームの融合により、緑と赤の蛍光が重なり合って黄色の点として現れ、マイトファジーの発生を示します22。細胞透過性ミトコンドリア色素(MitoTracker Green)には、ミトコンドリア23を標識するための軽度のチオール反応性クロロメチル部分が含まれています。ミトコンドリアを標識するために、細胞は単に色素と共にインキュベートされ、それは原形質膜を横切って受動的に拡散しそして活性ミトコンドリアに蓄積する。このミトコンドリア色素は生細胞を容易に染色することができ、アルデヒド固定または死細胞の染色にはあまり効果的ではありません。リソソーム色素(LysoTracker Red)は、生細胞の酸性細胞小器官の標識と追跡に使用される蛍光アシドトロピックプローブです。この色素は酸性細胞小器官に対して高い選択性を示し、ナノモル濃度で生細胞を効果的に標識することができます24。
ここでは、これらの蛍光色素を生細胞に使用する手順(色素のロード、ミトコンドリアとリソソームの可視化など)について説明します。この方法は、研究者が生細胞蛍光顕微鏡を使用してマイトファジーを観察するのに役立ちます。また、ミトコンドリアとリソソームの定量化、およびミトコンドリアの形態の評価にも使用できます。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Automated cell counter</td>
			<td>Countstar</td>
			<td>IC1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting chamber slides</td>
			<td>Countstar</td>
			<td>12-0005-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle medium (DMEM)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline (DPBS)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-031-CVC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom cell culture dish (confocal dish)</td>
			<td>NEST</td>
			<td>801002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J (Rasband, NIH)</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>https://imagej.nih.gov/ij/download.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Krebs&#8211;Henseleit(KHB) buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Self-prepared</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LysoTracker Red</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>1818430</td>
			<td>100 &#181;mol/L, red-fluorescent lysosome dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MitoTracker Green</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>1842298</td>
			<td>200 &#181;mol/L stock, green-fluorescent mitochondria dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Embryonic Fibroblasts</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Self-prepared</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective (63x oil lens)</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>ZEISS LSM 880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA 0.25%</td>
			<td>Gibico</td>
			<td>Cat# 25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS LSM 880 Confocal Laser Scanning Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>ZEISS LSM 880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN Microscopy Software 2.1 (confocal microscope imaging software)</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>ZEN 2.1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing mitophagy with fluorescent dyes for mitochondria and lysosome

細胞の原動力であるミトコンドリアは、生体エネルギー学、フリーラジカル生成、カルシウム恒常性、およびアポトーシスにおいて重要な役割を果たしています。マイトファジーはミトコンドリアの品質管理の主要なメカニズムであり、一般的に顕微鏡観察を使用して研究されていますが、 in vivo マイトファジーアッセイは実行が困難です。生きた細胞小器官をイメージングしてマイトファジーを評価することは、ミトコンドリア研究のための代替的かつ必要な方法です。このプロトコルでは、細胞透過性緑色蛍光ミトコンドリア色素MitoTracker Greenおよび赤色蛍光リソソーム色素LysoTracker Redを生細胞で使用するための手順を、色素の負荷、ミトコンドリアおよびリソソームの可視化、および期待される結果を含めて説明します。生細胞中のマイトファジーを評価するための詳細な手順、および顕微鏡ソフトウェアの設定に関するテクニカルノートも提供されています。この方法は、研究者が生細胞蛍光顕微鏡を使用してマイトファジーを観察するのに役立ちます。さらに、ミトコンドリアとリソソームの定量化やミトコンドリアの形態の評価にも使用できます。

MitoTracker Greenは、ミトコンドリアに正確に局在することができる緑色蛍光ミトコンドリア染色剤です。この色素は生細胞を簡単に染色できますが、アルデヒド固定細胞や死細胞の染色にはあまり効果がありません(図2)。赤色蛍光リソソーム色素LysoTracker Redは、酸性リソソーム細胞小器官の標識と追跡が可能で、生細胞のみを染色することができます(図2</s...

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Visualizing Mitophagy with Fluorescent Dyes for Mitochondria and Lysosome

マイトファジーは、ミトコンドリアの品質管理の主要なメカニズムです。しかしながら、 in vivoでの マイトファジーの評価は、信頼できる定量アッセイの欠如によって妨げられている。ここでは、細胞透過性の緑色蛍光ミトコンドリア色素と赤色蛍光リソソーム色素を使用して、生細胞内のマイトファジーを観察するためのプロトコルを紹介します。

ミトコンドリアとリソソームの蛍光色素によるマイトファジーの可視化

Mitochondria, being the powerhouses of the cell, play important roles in bioenergetics, free radical generation, calcium homeostasis, and apoptosis. ...

この方法は、細胞透過性緑色蛍光ミトコンドリア色素と赤色蛍光リソソーム色素を用いて、生細胞のマイトファジーを観察するのに役立ちます。マイトファジーは、ミトコンドリアの恒常性や細胞機能のさまざまな側面を維持する上で重要な役割を果たしています。この技術は、ミトコンドリア関連疾患の治療への新しいアプローチを提供する可能性があります。この手順はそれほど複雑ではありません。鮮明な画像をキャプチャすることは、ミトコンドリアとリソソームのオーバーレイをカウントするために非常に重要です。まず、マウス胚性線維芽細胞またはMEF細胞を、10ミリリットルのダルベッコ改変イーグル培地またはDMEMを含む10センチメートルの細胞培養皿で培養します。摂氏37度、二酸化炭素5%でインキュベートし、顕微鏡下で細胞を100倍の倍率でモニターします。細胞が80〜90%のコンフルエンシーに達したら、2ミリリットルのダルベッコリン酸緩衝生理食塩水で細胞を洗浄します。次に、2ミリリットルの0.05%トリプシンEDTAを1分間添加して細胞を解離し、続いて2ミリリットルのDMEMを加えて反応を停止します。細胞懸濁液を100Gで3分間遠心分離し、ペレットを1ミリリットルのDMEMに再懸濁します。自動セルカウンターとセルカウントチャンバースライドを使用して細胞をカウントし、10ミリリットルのDMEMを含む新しい10センチメートルの細胞培養皿に10〜6番目の細胞を1.5倍接種します。マイトファジーアッセイのために、記載されたように細胞懸濁液を調製し、細胞懸濁液を新鮮なDMEMのミリリットル当たり10〜5細胞に1倍に希釈する。2ミリリットルの希釈細胞懸濁液を20ミリメートルの共焦点皿に加え、皿を十字に振る。摂氏37度と5%二酸化炭素で24時間インキュベートします。原液を希釈して染料の作業溶液を調製する。2ミリリットルのDMEMに0.2ミリモルのミトコンドリア色素と50マイクロモルのリソソーム色素をそれぞれ2マイクロリットル加え、0.2マイクロモルのミトコンドリア色素と50ナノモルのリソソーム色素の使用濃度を得ます。共焦点培養皿から培地を取り出し、細胞を覆うために1ミリリットルの染色液を加えます。細胞培養皿を摂氏37度、二酸化炭素5%で20〜30分間置きます。共焦点顕微鏡イメージングソフトウェアのパラメータを設定します。二重励起画像の場合、488ナノメートルと543ナノメートルの順次励起を使用し、それぞれ505〜545ナノメートルと560ナノメートルを超える発光を収集します。色素を含む培地ディッシュをインキュベーターから取り出し、1ミリリットルのクレブスヘンゼライトまたはKHバッファーをディッシュに加えます。マイトファジーを誘導するには、細胞をKHバッファー中の1マイクロモルのFCCPで室温で10分間処理し、すぐに共焦点顕微鏡を使用して細胞のイメージングに進みます。63Xオイルレンズの上部に適量のオイルを塗布します。共焦点顕微鏡のサンプルステージにサンプルを置き、対物レンズの真上に移動します。イメージングソフトウェアを使用して、ソフトウェアインターフェイスの左上隅にある[検索]タブをクリックしてサンプルを見つけます。実験用の緑色のフィルター セットを選択します。粗調整ノブを使用して、対物レンズを上下に動かしてすばやく焦点を合わせます。細胞サンプルが接眼レンズを通してはっきりと見えるようになったら、単一細胞の領域を検索して焦点を合わせ、視野の中心に移動します。ソフトウェアインターフェイスの左上隅にある[取得]タブをクリックして、画像を取得します。プレビュー用に 488 ナノメートルのチャンネルとフレーム解像度 1024 x 1024 のみを選択します。左上隅にある[ライブ]タブをクリックして、ライブスキャンを開始します。視野を最もシャープに調整し、スライダーを左右に動かしてレーザー出力を調整します。露出オーバーを避けるために、ゲイン設定を600未満に保ちます。ピンホール値を156に、ゲイン値を545に、デジタルオフセット値をゼロに調整します。最適な視野を選択し、2つのチャンネルを確認して、フレーム解像度1024 x 1024を選択します。[スナップ]をクリックして2D画像を取得し、取得した画像を保存します。この研究では、FFCPを使用して、共焦点イメージングのためにMEF細胞のマイトファジーをトリガーしました。ミトコンドリアを示す緑色蛍光ミトコンドリア色素で染色した細胞と、リソソームを示す赤色蛍光リソソーム色素で染色した細胞の代表的な画像を示します。損傷した緑色染色ミトコンドリアが赤色染色されたリソソームに飲み込まれると、緑色と赤色の蛍光が重なり合い、黄色の共局在ミトコンドリアリソソームが現れます。黄色の点は、進行中のマイトファジーを表すこれらの共局在ミトコンドリアリソソームに対応するため、マイトファジーの程度を評価するために数えることができます。ミトコンドリアおよびリソソーム染色用の色素の作業溶液を調製し、共焦点顕微鏡でイメージングする際の適切な細胞コンフルエンシーの維持は、覚えておくべき重要なステップです。この手順は、ミトコンドリアの動態を評価するために重要なミトコンドリアの数と形態を分析するためにも使用できます。マイトファジーはさまざまな人間の病気と密接に関連しており、この技術を使用してマイトファジーと人間の病気との関係を調べることができます。

Research

JoVE Journal

Biology

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

光イメージングによる非侵襲的検出のための蛍光色素で標識幹細胞

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

ライブの視覚化ショウジョウバエ</em蛍光色素で>グリア - 神経筋接合部

Our project identified GFP labeled glial structures at the developing larval fly neuromuscular synapse. To look at development of live glial-nerve-muscle ...

Visualizing Single-molecule DNA Replication with Fluorescence Microscopy

蛍光顕微鏡による可視化単分子のDNAの複製

We describe a simple fluorescence microscopy-based real-time method for observing DNA replication at the single-molecule level. A circular, forked DNA ...

Visualizing Bacteria in Nematodes using Fluorescent Microscopy

蛍光顕微鏡を用いて線虫の中の細菌の可視化

 
Symbioses, the living together of two or more organisms, are widespread throughout all kingdoms of life. As two of the most ubiquitous organisms on ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

シングルミトコンドリアスーパーオキシド無傷ハートや点滅の共焦点イメージング<em&gt;インビボ</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

トラブルシューティングの方法と現代の定量的蛍光ウェスタンブロッティングへのガイド

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...

Genetic Barcoding with Fluorescent Proteins for Multiplexed Applications

多重化アプリケーションのための蛍光タンパク質との遺伝バーコーディング

Fluorescent proteins, fluorescent dyes and fluorophores in general have revolutionized the field of molecular cell biology. In particular, the discovery ...

Visualizing Stromule Frequency with Fluorescence Microscopy

蛍光顕微鏡でストロミュール頻度を可視化

Stromules, or "stroma-filled tubules", are narrow, tubular extensions from the surface of the chloroplast that are universally observed in plant cells but ...

Sensitive Measurement of Mitophagy by Flow Cytometry Using the pH-dependent Fluorescent Reporter mt-Keima

蛍光レポーターの pH 依存性を用いたフローサイトメトリー流 mt 桂馬によって Mitophagy の高感度測定

Mitophagy is a process of selective removal of damaged or unnecessary mitochondria using autophagy machinery. Close links have been found between ...

Application of Membrane and Cell Wall Selective Fluorescent Dyes for Live-Cell Imaging of Filamentous Fungi

糸状菌の生細胞イメージングのための膜および細胞壁選択的蛍光色素の応用

The application of membrane and cell wall selective fluorescent dyes for live-cell imaging analyses of organelle dynamics in fungal cells started two ...