Name: visualizing mitophagy with fluorescent dyes for mitochondria and lysosome
Uploaded: 2022-11-30T14:30:00
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Este trabalho foi parcialmente financiado pelo Programa Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento de Chaves da China (2017YFA0105601, 2018YFA0107102), pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (81970333,31901044) e pelo Programa de Professor de Nomeação Especial nas Instituições de Ensino Superior de Xangai (GZ2020008).

1. Cultura celular e passaging
NOTA: O protocolo é descrito usando fibroblastos embrionários de camundongos (MEFs) rotineiramente cultivados como exemplo.
<ol><li>Cultura de células MEF em placas de cultura celular de 10 cm com 10 mL de Meio Águia Modificada (DMEM) da Dulbecco. Incubar a 37 °C e 5% de CO2 e monitorizar as células ao microscópio a uma ampliação de 100x.</li>
	<li>Realizar a passagem celular de rotina.<ol><li>Quando as células atingirem 80...

<ol>
	<li>Tao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+mitochondria:+evolution,+function,+and+disease.">Animal mitochondria: evolution, function, and disease.</a> Current Molecular Medicine. 14 (1), 115-124 (2014).</li><li>Henze, K., Martin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+biology:+essence+of+mitochondria.">Evolutionary biology: essence of mitochondria.</a> Nature. 426 (6963), 127-128 (2003).</li><li>Kiriyama, Y., Nochi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-+and+intercellular+quality+control+mechanisms+of+mitochondria.">Intra- and intercellular quality control mechanisms of mitochondria.</a> Cells. 7 (1), (2017).</li><li>Rossmann, M. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitophagy:+mechanisms,+pathophysiological+roles,+and+analysis.">Mitophagy: mechanisms, pathophysiological roles, and analysis.</a> Biological Chemistry. 393 (7), 547-564 (2012).</li><li>Parzych, K. R., Klionsky, D. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitophagy+and+quality+control+mechanisms+in+mitochondrial+maintenance.">Mitophagy and quality control mechanisms in mitochondrial maintenance.</a> Current Biology. 28 (4), 170-185 (2018).</li><li>Ashrafi, G., Schwarz, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathways+of+mitophagy+for+quality+control+and+clearance+of+mitochondria.">The pathways of mitophagy for quality control and clearance of mitochondria.</a> Cell Death and Differentiation. 20 (1), 31-42 (2013).</li><li>Berezhnov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+pH+modulates+autophagy+and+mitophagy.">Intracellular pH modulates autophagy and mitophagy.</a> Journal of Biological Chemistry. 291 (16), 8701-8708 (2016).</li><li>Takemori, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+mitophagy+using+LysoKK,+a+7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole-(arylpropyl)benzylamine+derivative.">Visualization of mitophagy using LysoKK, a 7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole-(arylpropyl)benzylamine derivative.</a> Mitochondrion. 62, 176-180 (2022).</li><li>Maeda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+new+live+imagers+MitoMM1/2+for+mitochondrial+visualization.">The new live imagers MitoMM1/2 for mitochondrial visualization.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 562, 50-54 (2021).</li><li>Feng, X. R., Yin, W., Wang, J. L., Feng, L., Kang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitophagy+promotes+the+stemness+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells.">Mitophagy promotes the stemness of bone marrow-derived mesenchymal stem cells.</a> Experimental Biology and Medicine. 246 (1), 97-105 (2021).</li><li>Chu, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiolipin+externalization+to+the+outer+mitochondrial+membrane+acts+as+an+elimination+signal+for+mitophagy+in+neuronal+cells.">Cardiolipin externalization to the outer mitochondrial membrane acts as an elimination signal for mitophagy in neuronal cells.</a> Nature Cell Biology. 15 (10), 1197-1205 (2013).</li><li>Sentelle, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ceramide+targets+autophagosomes+to+mitochondria+and+induces+lethal+mitophagy.">Ceramide targets autophagosomes to mitochondria and induces lethal mitophagy.</a> Nature Chemical Biology. 8 (10), 831-838 (2012).</li></ol>

O protocolo aqui descrito fornece um método para avaliar e monitorar o processo dinâmico de mitofagia em células vivas, envolvendo autofagossomos, lisossomos e fissão mitocondrial, através da co-coloração com mitocôndrias e corantes lisossômicos permeant por células. O método também pode ser usado para identificar mitocôndrias e avaliar a morfologia mitocondrial. Ambos os corantes utilizados neste estudo devem ser protegidos da luz, múltiplos ciclos de congelamento-descongelamento devem ser evitados e os co...

As mitocôndrias são as potências de quase todas as células eucarióticas 1,2. Além da produção de ATP por meio da fosforilação oxidativa, as mitocôndrias desempenham um papel vital em outros processos, como bioenergética, homeostase do cálcio, geração de radicais livres, apoptose e homeostase celular 3,4,5. À medida que as mitocôndrias geram espécies reativas de oxigênio (EROs) a partir de múltiplos complexos na cadeia de transporte de elétrons, elas são constantemente estimuladas pelo potencial estresse oxidativo, o que pode eventualmente levar a danos estruturais e disfunção quando o sistema de defesa antioxidante entra em colapso 6,7. Descobriu-se que a disfunção mitocondrial contribui para muitas doenças, incluindo distúrbios metabólicos, neurodegeneração e doenças cardiovasculares8. Portanto, é crucial manter populações mitocondriais saudáveis e sua função adequada. As mitocôndrias são organelas altamente plásticas e dinâmicas; sua morfologia e função são controladas por mecanismos de controle de qualidade mitocondrial, incluindo modificações pós-translacionais (PTM) de proteínas mitocondriais, biogênese mitocondrial, fusão, fissão e mitofagia 9,10. A fissão mitocondrial mediada pela proteína 1 relacionada à dinamina (DRP1), uma GTPase da superfamília de proteínas dinamina, resulta em mitocôndrias pequenas e redondas e isola as mitocôndrias disfuncionais, que podem ser eliminadas e degradadas pela mitofagia11,12.
A mitofagia é um processo celular que degrada seletivamente as mitocôndrias por autofagia, geralmente ocorrendo em mitocôndrias danificadas após lesão, envelhecimento ou estresse. Posteriormente, essas mitocôndrias são entregues aos lisossomos para degradação10. Assim, a mitofagia é um processo catabólico que ajuda a manter a quantidade e a qualidade das mitocôndrias em um estado saudável em uma ampla gama de tipos de células. Desempenha um papel crucial na restauração da homeostase celular em condições fisiológicas e de estresse normais13,14. As células são caracterizadas por um complexo mecanismo de mitofagia, que é induzido por diferentes sinais de estresse celular e alterações no desenvolvimento. As vias reguladoras da mitofagia são classificadas em dependentes de ubiquitina ou dependentes de receptores15,16; a autofagia dependente de ubiquitina é mediada pela quinase PINK1 e pelo recrutamento da ubiquitina ligase Parkin E3 para as mitocôndrias 17,18, enquanto a autofagia receptor-dependente envolve a ligação dos receptores de autofagia à LC3 da cadeia leve da proteína associada aos microtúbulos que medeia a mitofagia em resposta ao dano mitocondrial19.
A microscopia eletrônica de transmissão (MET) é o método mais utilizado, e ainda um dos melhores métodos, para observar e detectar mitofagia20. As características morfológicas da mitofagia são autofagossomos ou autolisossomos formados pela fusão de autofagossomos com lisossomos, que podem ser observados a partir de imagens de microscopia eletrônica21. A fraqueza da microscopia eletrônica (EM), no entanto, é a incapacidade de monitorar os processos dinâmicos da mitofagia, como a despolarização mitocondrial, a fissão mitocondrial e a fusão de autofagossomos e lisossomos, na célula viva20. Assim, avaliar a mitofagia por meio de organelas vivas por imagem é um método alternativo atraente para a pesquisa mitocondrial. A técnica de imagem de células vivas descrita aqui usa dois corantes fluorescentes para manchar mitocôndrias e lisossomos. Quando a mitofagia ocorre, as mitocôndrias danificadas ou supérfluas engolidas por autofagossomos são coradas de verde pelo corante mitocondrial, enquanto o corante vermelho mancha os lisossomos. A fusão desses autofagossomos e lisossomos, denominados autolisossomos, faz com que a fluorescência verde e vermelha se sobreponha e se manifeste como pontos amarelos, indicando a ocorrência de mitofagia22. O corante de mitocôndrias per-celular (MitoTracker Green) contém uma porção clorometil levemente reativa ao tiol para rotular as mitocôndrias23. Para rotular as mitocôndrias, as células são simplesmente incubadas com o corante, que se difunde passivamente através da membrana plasmática e se acumula nas mitocôndrias ativas. Este corante mitocondrial pode facilmente manchar células vivas, e é menos eficaz na coloração de células fixas de aldeído ou mortas. O corante lisossomo (LysoTracker Red) é uma sonda acidotrópica fluorescente usada para marcar e rastrear organelas ácidas em células vivas. Este corante exibe uma alta seletividade para organelas ácidas e pode efetivamente rotular células vivas em concentrações nanomolares24.
Os procedimentos para o uso desses corantes fluorescentes em células vivas, incluindo o carregamento dos corantes e a visualização de mitocôndrias e lisossomos, são apresentados aqui. Este método pode ajudar os pesquisadores a observar a mitofagia usando microscopia fluorescente de células vivas. Também pode ser usado para quantificar mitocôndrias e lisossomos e avaliar a morfologia mitocondrial.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Automated cell counter</td>
			<td>Countstar</td>
			<td>IC1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting chamber slides</td>
			<td>Countstar</td>
			<td>12-0005-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle medium (DMEM)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline (DPBS)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-031-CVC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom cell culture dish (confocal dish)</td>
			<td>NEST</td>
			<td>801002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J (Rasband, NIH)</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>https://imagej.nih.gov/ij/download.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Krebs&#8211;Henseleit(KHB) buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Self-prepared</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LysoTracker Red</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>1818430</td>
			<td>100 &#181;mol/L, red-fluorescent lysosome dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MitoTracker Green</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>1842298</td>
			<td>200 &#181;mol/L stock, green-fluorescent mitochondria dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Embryonic Fibroblasts</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Self-prepared</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective (63x oil lens)</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>ZEISS LSM 880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA 0.25%</td>
			<td>Gibico</td>
			<td>Cat# 25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS LSM 880 Confocal Laser Scanning Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>ZEISS LSM 880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN Microscopy Software 2.1 (confocal microscope imaging software)</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>ZEN 2.1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing mitophagy with fluorescent dyes for mitochondria and lysosome

As mitocôndrias, sendo as potências da célula, desempenham papéis importantes na bioenergética, geração de radicais livres, homeostase do cálcio e apoptose. A mitofagia é o principal mecanismo de controle de qualidade mitocondrial e geralmente é estudada usando observação microscópica, no entanto, ensaios de mitofagia in vivo são difíceis de realizar. A avaliação da mitofagia por imagem de organelas vivas é um método alternativo e necessário para a pesquisa mitocondrial. Este protocolo descreve os procedimentos para o uso do corante de mitocôndrias verde-fluorescentes persignificado por células MitoTracker Green e o corante lisossomo vermelho-fluorescente LysoTracker Red em células vivas, incluindo a carga dos corantes, visualização das mitocôndrias e do lisossomo e resultados esperados. Etapas detalhadas para a avaliação da mitofagia em células vivas, bem como notas técnicas sobre as configurações do software do microscópio, também são fornecidas. Este método pode ajudar os pesquisadores a observar a mitofagia usando microscopia fluorescente de células vivas. Além disso, pode ser usado para quantificar mitocôndrias e lisossomos e avaliar a morfologia mitocondrial.

MitoTracker Green é uma mancha mitocondrial verde-fluorescente que é capaz de localizar com precisão as mitocôndrias. O corante pode facilmente corar células vivas e é menos eficaz na coloração de células fixas ou mortas com aldeído (Figura 2). O corante lisossomo vermelho-fluorescente LysoTracker Red é capaz de marcar e rastrear organelas lisossômicas ácidas e só pode manchar células vivas (Figura 2). A imagem em microscópio confocal permite a v...

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Visualizing Mitophagy with Fluorescent Dyes for Mitochondria and Lysosome

A mitofagia é o principal mecanismo de controle de qualidade mitocondrial. No entanto, a avaliação da mitofagia in vivo é dificultada pela falta de ensaios quantitativos confiáveis. Apresenta-se aqui um protocolo para a observação da mitofagia em células vivas usando um corante de mitocôndrias verde-fluorescente per-celular e um corante lisossomático vermelho-fluorescente.

Visualizando a mitofagia com corantes fluorescentes para mitocôndrias e lisossomos

Mitochondria, being the powerhouses of the cell, play important roles in bioenergetics, free radical generation, calcium homeostasis, and apoptosis. ...

Este método ajuda a observar a mitofagia em células vivas usando um corante de mitocôndrias verde-fluorescente persignificado celular e um corante lisossomo vermelho-fluorescente. A mitofagia desempenha um papel importante na manutenção da homeostase das mitocôndrias e em vários aspectos da função celular. Esta técnica poderia fornecer uma nova abordagem para o tratamento de doenças relacionadas às mitocôndrias.Este procedimento não é muito complicado. Capturar imagens claras é muito importante para contar a sobreposição de mitocôndrias e lisossomos. Para começar, cultive fibroblastos embrionários de camundongos ou células MEF em uma placa de cultura de células de 10 centímetros com 10 mililitros de meio de águia modificado ou DMEM da Dulbecco.Incubar a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono e monitorar as células sob um microscópio com ampliação de 100X. Quando as células atingirem 80 a 90% de confluência, lave-as com dois mililitros de solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco. Em seguida, adicione dois mililitros de 0,05% de tripsina EDTA por um minuto para dissociar as células, seguido por dois mililitros de DMEM para parar a reação.Centrifugar a suspensão da célula a 100 G durante três minutos e ressuspender o pellet em um mililitro de DMEM. Conte as células usando um contador de células automatizado e lâminas de câmara de contagem de células e inocular 1,5 vezes 10 para as sextas células em um novo prato de cultura de células de 10 centímetros contendo 10 mililitros de DMEM. Para o ensaio de mitofagia, prepare uma suspensão celular conforme descrito e dilua a suspensão celular para uma vez 10 para a quinta célula por mililitro de DMEM fresco.Adicione dois mililitros da suspensão de células diluídas a um prato confocal de 20 milímetros e agite o prato em uma cruz. Incubar a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono por 24 horas. Preparar soluções de trabalho dos corantes diluindo as soluções-estoque.Adicione dois microlitros cada de 0,2 milimolar de corante mitocondrial e 50 corantes de lisossomo micromolar a dois mililitros de DMEM para obter uma concentração de trabalho de 0,2 corante mitocondrial micromolar e 50 corantes lisossomáticos nanomolares. Retire o meio da placa de cultura confocal e adicione um mililitro da solução de coloração para cobrir as células. Coloque o prato de cultura celular a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono por 20 a 30 minutos.Defina os parâmetros do software de imagem de microscopia confocal. Para imagens de excitação dupla, use excitação sequencial a 488 nanômetros e 543 nanômetros e colete a emissão em 505 a 545 nanômetros e maiores que 560 nanômetros, respectivamente. Retire o prato do meio de cultura que contém o corante da incubadora e adicione um mililitro de Krebs-Henseleit ou tampão KH ao prato.Para induzir a mitofagia, trate as células com FCCP em um micromolar em tampão KH por 10 minutos à temperatura ambiente e proceda imediatamente à imagem das células usando o microscópio confocal. Aplique uma quantidade apropriada de óleo na parte superior da lente de óleo 63X. Coloque a amostra no estágio de amostra do microscópio confocal e mova-a diretamente acima da lente objetiva.Use o software de imagem para encontrar a amostra clicando na guia Localizar no canto superior esquerdo da interface do software. Selecione um conjunto de filtros verde para o experimento. Use o botão de ajuste grosso para focar rapidamente, movendo a lente objetiva para cima e para baixo.Depois que a amostra de célula estiver claramente visível através da ocular, procure e concentre a área de células individuais e mova-a para o centro do campo de visão. Clique na guia Aquisição no canto superior esquerdo da interface do software para adquirir imagens. Selecione apenas o canal de 488 nanômetros e a resolução de quadro 1024 por 1024 para visualização.Clique na guia Live no canto superior esquerdo para iniciar uma verificação ao vivo. Ajuste o campo de visão para o mais nítido e ajuste a potência do laser movendo o controle deslizante para a esquerda ou para a direita. Mantenha a configuração de ganho abaixo de 600 para evitar a exposição excessiva.Ajuste o valor do orifício para 156, ganhe o valor para 545 e o valor do deslocamento digital para zero. Selecione o melhor campo de visão, verifique os dois canais e escolha a resolução de quadros 1024 por 1024. Clique em Ajustar para adquirir imagens 2D e salvar as imagens adquiridas.Neste estudo, o FFCP foi utilizado para desencadear mitofagia em células MEF para imagens confocais. Imagens representativas de células coradas com o corante de mitocôndrias verde-fluorescentes mostrando mitocôndrias e coradas com o corante lisossomo vermelho-fluorescente mostrando lisossomo são mostradas aqui. Quando as mitocôndrias manchadas de verde danificadas são engolidas por lisossomos manchados de vermelho, a fluorescência verde e vermelha se sobrepõe para revelar lisossomos mitocondriais amarelos colocalizados.Os pontos amarelos correspondem a esses lisossomos mitocondriais co-localizados que representam a mitofagia em curso e, portanto, podem ser contados para avaliar a extensão da mitofagia. A preparação de uma solução funcional de corantes para mitocôndrias e coloração de lisossomos e a manutenção da confluência celular apropriada ao fazer exames de imagem com microscopia confocal são etapas fundamentais a serem lembradas. Este procedimento também pode ser usado para analisar o número mitocondrial e a morfologia, o que é importante para avaliar a dinâmica mitocondrial.A mitofagia está intimamente associada a uma variedade de doenças humanas e esta técnica pode ser usada para explorar a conexão entre a mitofagia e as doenças humanas.

Research

JoVE Journal

Biology

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

Rotulagem células-tronco com corantes fluorescentes para detecção não invasiva com imagens ópticas

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Biologia

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Visualizando o Live Drosophila Junção neuromuscular-Glial com corantes fluorescentes

Our project identified GFP labeled glial structures at the developing larval fly neuromuscular synapse. To look at development of live glial-nerve-muscle ...

Visualizing Single-molecule DNA Replication with Fluorescence Microscopy

Replicação de DNA visualizar Único molécula com microscopia de fluorescência

We describe a simple fluorescence microscopy-based real-time method for observing DNA replication at the single-molecule level. A circular, forked DNA ...

Visualizing Bacteria in Nematodes using Fluorescent Microscopy

Visualizando bactérias em nematóides por microscopia de fluorescência

 
Symbioses, the living together of two or more organisms, are widespread throughout all kingdoms of life. As two of the most ubiquitous organisms on ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Imagem confocal de Solteiro mitocondriais superóxido Pisca em coração intacto ou<em&gt; In Vivo</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

A Guide to Modern quantitativa fluorescente Western Blotting com estratégias de resolução de problemas

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...

Genetic Barcoding with Fluorescent Proteins for Multiplexed Applications

Barcoding Genetic com proteínas fluorescentes para Aplicações Multiplexados

Fluorescent proteins, fluorescent dyes and fluorophores in general have revolutionized the field of molecular cell biology. In particular, the discovery ...

Visualizing Stromule Frequency with Fluorescence Microscopy

Visualizando Frequency Stromule com microscopia de fluorescência

Stromules, or "stroma-filled tubules", are narrow, tubular extensions from the surface of the chloroplast that are universally observed in plant cells but ...

Sensitive Measurement of Mitophagy by Flow Cytometry Using the pH-dependent Fluorescent Reporter mt-Keima

Medição de Mitophagy sensível pelo repórter fluorescentes Flow Cytometry usando o pH-dependente mt-Keima

Mitophagy is a process of selective removal of damaged or unnecessary mitochondria using autophagy machinery. Close links have been found between ...

Application of Membrane and Cell Wall Selective Fluorescent Dyes for Live-Cell Imaging of Filamentous Fungi

Aplicação de corantes fluorescentes seletivos da membrana e da parede de pilha para a imagem latente da Viver-pilha de fungos de Filamentous

The application of membrane and cell wall selective fluorescent dyes for live-cell imaging analyses of organelle dynamics in fungal cells started two ...