Name: three-dimensional culture of vascularized thermogenic adipose tissue from microvascular fragments
Uploaded: 2023-02-03T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Three-Dimensional Culture of Vascularized Thermogenic Adipose Tissue from Microvascular Fragments at JoVE.com

يتم دعم الدكتور أكوستا من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح CA148724 و TL1TR002647. يتم دعم الدكتور غونزاليس بوراس من قبل المعهد الوطني للسكري وأمراض الجهاز الهضمي والكلى التابع للمعاهد الوطنية للصحة ، تحت رقم الجائزة F32-0DK122754. تم دعم هذا العمل ، جزئيا ، من قبل المعاهد الوطنية للصحة (5SC1DK122578) وجامعة تكساس في قسم الهندسة الطبية الحيوية في سان أنطونيو. المحتوى هو مسؤولية المؤلفين وحدهم ولا يمثل بالضرورة الآراء الرسمية للمعاهد الوطنية للصحة. تم إنشاء الأرقام جزئيا باستخدام Biorender.com.

أجريت هذه الدراسة وفقا لقانون رعاية الحيوان واللوائح التنفيذية لرعاية الحيوان وفقا لمبادئ دليل رعاية واستخدام المختبر. تمت الموافقة على جميع إجراءات الحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوان في جامعة تكساس في سان أنطونيو.
ملاحظة: بالنسبة للخطوات الموضحة أ?...

مجال هندسة الأنسجة الدهنية ذات اللون البني / البيج غير ناضج إلى حد كبير 22،23،24،25،26،27،28 ، مع تطوير الجزء الأكبر من النماذج الدهنية للأنسجة الدهنية البيضاء8،22...

الهدف من هذا البروتوكول هو وصف نهج لتطوير الأنسجة الدهنية البيج الوعائية من مصدر واحد ، يحتمل أن يكون ذاتيا ، جزء الأوعية الدموية الدقيقة (MVF). وقد ثبت أن الأنسجة الدهنية البنية والبيج تعرض خصائص مفيدة تتعلق بتنظيم التمثيل الغذائي. ومع ذلك ، فإن الحجم الصغير لمستودعات الأنسجة الدهنية هذه لدى البالغين يحد من التأثير المحتمل على التمثيل الغذائي الجهازي ، خاصة في الحالات المرضية مثل السمنة أو مرض السكري من النوع 21،2،3،4،5،6،7. هناك اهتمام كبير بالدهون البنية / البيج كهدف علاجي لمنع الآثار الأيضية الضارة المرتبطة بالسمنة والأمراض المصاحبةلها 8،9،10،11،12.
MVFs هي هياكل الأوعية التي يمكن عزلها مباشرة من الأنسجة الدهنية ، وزراعتها ، والحفاظ عليها في تكوين ثلاثي الأبعاد لفترات طويلة من الزمن13،14،15. بدأ العمل السابق من مجموعتنا ، وغيرها ، في استغلال القدرة متعددة الخلايا ومتعددة القدرات ل MVFs ، وتحديدا فيما يتعلق بتكوين الأنسجة الدهنية16،17،18. كتراكم لهذا العمل ، أثبتنا مؤخرا أن MVFs المشتقة من نماذج القوارض لمرض السكري الصحي والنوع 219 ومن البشر (البالغين الذين تزيد أعمارهم عن 50 عاما)20 تحتوي على خلايا قادرة على تحريضها لتشكيل أنسجة دهنية مولدة للحرارة أو بيج.
هنا هو نهج مبتكر يتم من خلاله استخدام MVF مصدر واحد ، ليس فقط قادرا على إنشاء الأنسجة الدهنية البيج ولكن أيضا المكون الوعائي المرتبط بهوالحرج 21. يمكن أن يكون استخدام هذه التقنية ذا قيمة كبيرة للدراسات التي تبحث عن نهج هندسي مباشر للأنسجة لتشكيل الأنسجة الدهنية الحرارية. على عكس الطرق الأخرى التي تطمح إلى هندسة الأنسجة الدهنية البيج22،23،24،25،26،27،28 ، لا تتطلب العملية الموضحة في هذه الدراسة استخدام أنواع متعددة من الخلايا أو أنظمة تحريض معقدة. يمكن إنشاء نماذج للدهون البيج والأبيض الوعائية باستخدام MVFs الناشئة من القوارض والمصادر البشرية ، مما يدل على إمكانات ترجمة كبيرة. المنتج النهائي لهذا البروتوكول هو نسيج دهني حراري بيج مهندس مع بنية ووظيفة أيضية مماثلة للأنسجة الدهنية البنية. بشكل عام ، يقدم هذا البروتوكول فكرة أن مصدر MVF الذي يمكن الوصول إليه بسهولة وربما يكون ذاتيا قد يكون تدخلا علاجيا مفيدا وأداة لدراسة الاضطرابات الأيضية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aminocaproic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A2504-100G</td>
			<td>Added in DMEM at the concentration of 1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt-Tipped Scissors</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>12-000-172</td>
			<td>Sterilize in autoclave</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovin Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>126575-10GM</td>
			<td>Diluted in PBS to 4 mg/mL and 1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type 1</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>NC9633623</td>
			<td>Diluted to 6 mg/mL in BSA 4 mg/mL, Digestion of minced fat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AC230302500</td>
			<td>Diluted in ethanol at a 2 mg/ml stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable underpads</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>23-666-062</td>
			<td>For fluid absorption during surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Scissors</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>08-951-5</td>
			<td>Sterilize in autoclave</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8242;s Modified Eagle&#8242;s Medium (DMEM)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>11885092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8242;s Modified Eagle&#8242;s Medium/Nutrient Mixture F-12 Ham (DMEM/F12)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D8062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum&#160;</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>16140089</td>
			<td>Added in DMEM to 20% v/v.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F8630-25G</td>
			<td>Solubilized in DMEM at the concentration of 20 mg/mL, Protein found in blood plasma and main component of hydrogel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flask, 250 mL</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>FB500250</td>
			<td>Allows for digestion of fat using a large surface area</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>50-264-21</td>
			<td>Sterilize in autoclave, For handling of tissue and filters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F6886</td>
			<td>Diluted in ethanol at a 10 mM stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human MVF</td>
			<td>Advanced Solutions Life Scienes, LLC</td>
			<td>https://www.advancedsolutions.com/microvessels</td>
			<td>Human MVFs (hMVFs) isolated from three different patients (52-, 54-, and 56-year old females) were used in the current study.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Indomethacine&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I7378</td>
			<td>Diluted in ethanol at a 12.5 mM stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin from porcine pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I5523</td>
			<td>Diluted in 0.01 N HCl at a 5 mg/ml stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MycoZap</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>NC9023832</td>
			<td>Added in DMEM to 0.2% w/v, Mycoplasma Prophylactic&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pennycilin/Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Added in DMEM to 1% v/v.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, polystyrene (100 mm x 15 mm).</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>351029</td>
			<td>3 for removal of blood vessels and mincing, 8 (lid) for presoaking of screens &#38; 8 (dish) for use when filtering with 500 or 37 &#181;M screens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, polystyrene (35 mm x 10 mm).</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>50-202-036</td>
			<td>For counting fragments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffer Saline (PBS)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>14-190-250</td>
			<td>Diluted to 1x with sterile deionized water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Clippers (Andwin Mini Arco Pet Trimmer)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>NC0854141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rosiglitazone</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>R0106200MG</td>
			<td>Diluted in DMSO at a 10 mM stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14059-11</td>
			<td>1 for initial incision, 1 for epididymal incision, 1 for tip clipping</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screen&#160; 37 &#181;M&#160;</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>652222R</td>
			<td>Cut into 3&#34; rounded squares and sterilized in ethylene oxide, Fragment entrapment and removal of very small fragments/single cells and debris</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screen 500 &#181;M&#160;</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>652222F</td>
			<td>Cut into 3&#34; rounded squares and sterilized in ethylene oxide, Removes larger fragments/debris</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serrated Hemostat</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>12-000-171</td>
			<td>Sterilize in autoclave, For clamping of skin before incision</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steriflip Filter 0.22 &#956;m&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SE1M179M6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>6051601KU</td>
			<td>Diluted in deionzed water to 10 U/mL, Used as a clotting agent turning fibrinogen to fibrin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thyroid hormone (T3)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T2877</td>
			<td>Diluted in 1N NaOH at a 0.02 mM stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zucker diabetic fatty (ZDF) rats - obese (FA/FA) or lean (FA/+) male&#160;</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>https://www.criver.com/products-services/find-model/zdf-rat-lean-fa?region=3611 
			https://www.criver.com/products-services/find-model/zdf-rat-obese?region=3611</td>
			<td>Obtained from Charles River (Wilmington, MA). Rats were acquired at 4 weeks of age and fed Purina 5008 until euthanasia (15-19 weeks of age). Glucose levels (blood from the lateral saphenous vein) were greater than 300 mg/dL in all FA/FA rats used in the study. All animals were housed in a temperature-controlled environment with a 12-h light-dark cycle and fed ad libitum.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional culture of vascularized thermogenic adipose tissue from microvascular fragments

تم التحقيق في الأنسجة الدهنية الحرارية الهندسية (على سبيل المثال ، الأنسجة الدهنية البيج أو البني) كعلاج محتمل للأمراض الأيضية أو لتصميم الأنسجة الدقيقة الشخصية للفحص الصحي واختبار الأدوية. غالبا ما تكون الاستراتيجيات الحالية معقدة للغاية وتفشل في تصوير الخصائص متعددة الخلايا والوظيفية للأنسجة الدهنية الحرارية بشكل كامل. شظايا الأوعية الدموية الدقيقة ، والأوعية الدقيقة الصغيرة السليمة التي تتكون من الشرايين والأوردة والشعيرات الدموية المعزولة من الأنسجة الدهنية ، تعمل كمصدر ذاتي واحد للخلايا التي تمكن من تكوين الأوعية الدموية والأنسجة الدهنية. توضح هذه المقالة طرقا لتحسين ظروف الاستزراع لتمكين توليد الأنسجة الدهنية ثلاثية الأبعاد والأوعية الدموية والوظيفية الحرارية من شظايا الأوعية الدموية الدقيقة ، بما في ذلك بروتوكولات عزل شظايا الأوعية الدموية الدقيقة من الأنسجة الدهنية وظروف الثقافة. بالإضافة إلى ذلك ، تتم مناقشة أفضل الممارسات ، وكذلك تقنيات توصيف الأنسجة المهندسة ، ويتم تقديم نتائج العينات من كل من شظايا القوارض والأوعية الدموية الدقيقة البشرية. هذا النهج لديه القدرة على استخدامه لفهم وتطوير علاجات السمنة وأمراض التمثيل الغذائي.

هناك عدد قليل من الخصائص المورفولوجية المظهرية الرئيسية للأنسجة الدهنية البيج / البني: إنه متعدد العيون / يحتوي على قطرات دهنية صغيرة ، ويمتلك عددا كبيرا من الميتوكوندريا (سبب مظهره "البني" المميز في الجسم الحي) ، في المقابل لديه معدل استهلاك مرتفع للأكسجين / الطاقة الحيوية للميتوكوند?...

Watch this Scientific Journal Video about Three-Dimensional Culture of Vascularized Thermogenic Adipose Tissue from Microvascular Fragments at JoVE.com

Three-Dimensional Culture of Vascularized Thermogenic Adipose Tissue from Microvascular Fragments

هنا ، نقدم بروتوكولا مفصلا يحدد استخدام شظايا الأوعية الدموية الدقيقة المعزولة من القوارض أو الأنسجة الدهنية البشرية كنهج مباشر لهندسة الأنسجة الدهنية الوظيفية ذات الأوعية الدموية البيج.

ثقافة ثلاثية الأبعاد للأنسجة الدهنية الحرارية الوعائية من شظايا الأوعية الدموية الدقيقة

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for ...

يصف هذا البروتوكول توليد الدهون الحرارية الوعائية ثلاثية الأبعاد والوظيفية من شظايا الأوعية الدموية الدقيقة ، أو MVFs. الاستراتيجيات الحالية لهندسة الأنسجة الدهنية الحرارية معقدة ولا تصور خصائصها الوظيفية والمتعددة الخلايا بشكل كامل. MVFs هي مصدر واحد للخلايا التي تمكن من تكوين الأوعية الدموية والأنسجة الدهنية.كونها طريقة بسيطة وحيدة المصدر لإنشاء تقليد بيولوجي للدهون البيج ، فإن MVFs تحمل إمكانات كبيرة لتعزيز فهم أو تطوير علاجات للسمنة وأمراض التمثيل الغذائي. ضع الحيوان المحلوق والقتل الرحيم المعالج بنسبة 70٪ من الإيثانول في وضع ضعيف وابدأ في عزل الدهون الأربية. ارفع الجلد أسفل القضيب بمقص وقم بإجراء الشق ، بدءا من المركز والقطع بشكل جانبي ، لتشكيل شكل V ، قبل التكرار إلى مؤخرة الحيوان للوصول إلى رواسب الدهون بالكامل.أثناء القطع ، تأكد من فصل الجلد عن الدهون عن طريق قطع أنسجة اللفافة المترابطة. بمجرد قطع اللفافة بشكل مناسب ، تأكد من أن الدهون الأربية من كلا الجانبين ، الممتدة من الفخذ نحو الخلف ، مرئية. بعد ذلك ، قم بإزالة الدهون من الجانبين في أنابيب مخروطية منفصلة تحتوي على 10 ملليلتر من BSA في PBS ، بتركيز ملليغرام واحد لكل ملليلتر.لحصاد الدهون البربخية ، قطع من خلال جلد البطن ، تليها قطع بعناية من خلال الطبقة الرقيقة المحيطة الخصيتين. اسحب الأنسجة الدهنية برفق باستخدام الملقط واقطعها باستخدام المقص ، مع تجنب تشريح أي أوعية دموية رئيسية مرئية. الآن ، ضع الدهون التي تمت إزالتها في أنبوب مخروطي سعة 50 ملليلتر يحتوي على 10 ملليلتر من ملليغرام واحد لكل ملليلتر BSA في برنامج تلفزيوني.لعزل الدهون الخلفية تحت الجلد ، اقلب الفئران عرضة واستخدم مقصا كبيرا لقطع الجلد السميك للظهر وصولا إلى فروة الرأس ، مع الحرص على عدم قطع عميق جدا تحت الجلد. قطع اللفافة التي تربط الجلد بالأنسجة. التفريق بين الدهون تحت الجلد ، الموجودة في المنطقة داخل الكتف ، من الدهون البنية الموجودة بالقرب من العمود الفقري قبل عزل ووضع الدهون تحت الجلد في أنبوب مخروطي سعة 50 ملليلتر يحتوي على 10 ملليلتر من ملليغرام واحد لكل ملليلتر BSA في برنامج تلفزيوني.أثناء العمل داخل غطاء حيوي ، استخدم ملقط لوضع الدهون المستأصلة في طبق بتري قياسي سعة 100 ملليلتر يحتوي على 0.5 ملليلتر من ملليغرام واحد لكل ملليلتر BSA في برنامج تلفزيوني. إزالة أي أوعية دموية مرئية أو عضلات أو أنسجة غريبة من الدهون. باستخدام المقص ، فرم الدهون لمدة 10 دقائق وتحقق من وجود كتل عن طريق إضافة المزيد من BSA.استمر في الفرم ، إذا لزم الأمر ، قبل نقل معلق الدهون المفرومة إلى قارورة معقمة سعة 250 ملليلتر مع ماصة 10 ملليلتر. اجعل الحجم في القارورة يصل إلى 20 ملليلتر عن طريق إضافة ما يكفي من BSA في PBS. أضف الآن BSA في PBS إلى كولاجيناز ، وقم بتجانس المحلول عن طريق رجه برفق قبل ترشيحه معقم من خلال مرشح صافي نايلون 0.22 ميكرون.أضف على الفور الكمية المطلوبة من محلول كولاجيناز إلى معلق الدهون المفرومة ، وهضم الدهون عن طريق هز القارورة بحركة دائرية في حمام مائي عند 37 درجة مئوية لفترة زمنية مناسبة. نقل الدهون المهضومة إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر المسمى الدهون المهضومة أو الدهون المفرومة. جهاز طرد مركزي الأنبوب عند 400 جرام لمدة أربع دقائق لتدوير شظايا الأوعية الدموية الدقيقة ، أو MVFs ، إلى حبيبات حمراء.صب المادة الطافية برفق في أنبوب مخروطي سعة 50 ملليلتر يحمل علامة النفايات دون إزعاج الحبيبات. بعد ذلك ، أضف 10 ملليلتر من ملليغرام واحد لكل ملليلتر BSA في PBS إلى الأنبوب الذي يحتوي على الحبيبات ، وامزج تعليق الحبيبات عن طريق سحبه برفق لأعلى ولأسفل مرتين دون تعطيل الشظايا. الآن ، خذ شاشة 500 ميكرون غارقة مسبقا في طبق بتري معقم يحتوي على خمسة ملليلتر من ملليغرام واحد لكل ملليلتر BSA في PBS وضعه فوق حامل الشاشة البلاستيكي المحفوظ على طبق بتري جديد.ماصة 10 ملليلتر من التعليق من أنبوب بيليه المهضوم على الشاشة في دوائر متحدة المركز. اغسل الفلتر بخمسة ملليلتر إضافية من ملليغرام واحد لكل ملليلتر BSA في PBS وتخلص منه ، مع الاحتفاظ بالترشيح داخل طبق بتري. ثم ضع الشاشة المنقوعة مسبقا 37 ميكرون فوق حامل الشاشة البلاستيكي على طبق بتري جديد.باستخدام ماصة جديدة ، انقل المرشح من الترشيح الأول إلى الشاشة في دوائر متحدة المركز. كما هو موضح سابقا ، اغسل الشاشة باستخدام BSA في PBS ، وهذه المرة ، تخلص من المرشح مع الاحتفاظ بشاشة 37 ميكرون. حرك الشاشة التي يبلغ حجمها 37 ميكرون إلى طبق بتري جديد يحتوي على خمسة ملليلتر من ملليغرام واحد لكل ملليلتر BSA في PBS.أزاح الشظايا عن طريق النقر برفق على الطبق على حامل مخروطي ، دون انسكاب أي سائل. شطف المرشح مع خمسة ملليلتر إضافية من BSA في PBS. بعد ذلك ، انقل السائل من طبق بتري إلى أنبوب مخروطي معقم سعة 50 ملليلتر.شطف الشاشة 37 ميكرون عدة مرات ، إضافة الغسيل إلى الأنبوب المخروطي حتى الحجم الإجمالي الذي تم جمعه هو 15 إلى 20 ملليلتر. تخلص من الشاشة بعد الشطف النهائي. قطع نهاية طرف ماصة 20 ميكرولتر باستخدام مقص.هز الأنبوب الذي يحتوي على السائل برفق قبل سحب قسامتين من 20 ميكرولتر باستخدام طرف الماصة المقطوع ، وماصة كل من الحصص في طبق بتري نظيف 35 ملم. احسب عدد الشظايا في العينة في كل طبق بتري باستخدام مجهر ضوئي قياسي ، وباستخدام الصيغة المذكورة في المخطوطة ، احصل على العدد الإجمالي لشظايا الأوعية الدموية الدقيقة المعزولة. قم بتدوير السائل المتبقي في الأنبوب المخروطي سعة 50 ملليلتر عند 400 جم لمدة أربع دقائق لجمع MVF.بعد الدوران ، صب معظم المادة الطافية من الأنبوب المخروطي واستخدم ماصة لإزالة الحجم الصغير من السائل المتبقي على حافة الأنبوب. بعد ذلك ، أضف الثرومبين إلى الآبار المخصصة لصب المواد الهلامية. قم بقص نهاية طرف ماصة سعة 200 ميكرولتر ، وباستخدامه ، أعد تعليق MVFs برفق في الفيبرينوجين للحصول على الكثافة النهائية المطلوبة.ماصة التعليق في محلول الثرومبين في البئر وتجانس الخليط بسرعة عن طريق السحب لأعلى ولأسفل. بمجرد صب جميع المواد الهلامية ، ضع صفيحة البئر في حاضنة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 15 دقيقة للسماح بربط الهلام. لوحظت الدهون والخلايا الشحمية المتمايزة عن طريق التصوير المجهري متحد البؤر للهلاميات المائية باستخدام BODIPY كصبغة دهنية.أدى استزراع الأنسجة الدهنية غير الوعائية باستخدام وسائط دهنية بيضاء أو بيج إلى تكوين أنسجة دهنية بيضاء أو بيج غير وعائية ، على التوالي ، من كل من MVFs المشتقة من القوارض الخالية من الدهون وكذلك القوارض السكرية. وبالمثل ، أدى استزراع الأنسجة الدهنية الوعائية باستخدام وسائط دهنية بيضاء أو بيج إلى تكوين أنسجة دهنية بيضاء أو بيج ، على التوالي ، من MVFs المشتقة من القوارض. كما لوحظت الأنسجة الدهنية البيضاء والبيج غير الوعائية التي تم الحصول عليها من MVFs البشرية بواسطة المجهر متحد البؤر.تم تأكيد قدرة MVFs على التمايز إلى أنسجة دهنية باللون البيج وراثيا باستخدام RT-qPCR. تم تقييم MVFs الهزيل والقوارض السكري المعرضة لوسائط أديبوجينية بيضاء مباشرة أو بيج المنشأ من أجل تكوين الدهون وتوليد الحرارة وتكوين الأوعية. كان التعبير عن فصل البروتين 1 كما هو متوقع أعلى بكثير في الأنسجة الدهنية البيج.وقد لوحظ اتجاه مماثل في MVFs القوارض المعرضة لوسائط دهنية بيضاء أو بيضاء غير مباشرة ، وكذلك في MVFs البشرية المعرضة لوسائط adipogenic بيضاء مباشرة أو وسائط adipogenic باللون البيج. أخيرا ، من الطاقة الحيوية للميتوكوندريا ، كان من الواضح أنه من الناحية الوظيفية ، كان للأنسجة الدهنية البيج معدل استهلاك أكسجين أعلى بشكل مميز ، أو OCR ، في جميع الحالات. يجب تحسين الهضم الأنزيمي للأنسجة الدهنية لإعادة إنتاج MVFs ذات الحجم والجودة المماثلة باستمرار.بعد الهضم ، يجب التعامل مع MVFs بلطف ، مع توخي الحذر بشكل خاص لتجنب المزيد من تفكك الشظايا. ساعدت هذه التقنية على تعزيز توازن نمو الأوعية وتمايز الخلايا الشحمية ، والتي ثبت أنها تعتمد على العوامل التي تم إدخالها.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Three-dimensional Optical-resolution Photoacoustic Microscopy

ثلاثي الأبعاد البصرية الميكروسكوب الضوئي الاستبانة

Optical microscopy, providing valuable insights at the cellular and organelle levels, has been widely recognized as an enabling biomedical technology. As ...

Alginate Hydrogels for Three-Dimensional Organ Culture of Ovaries and Oviducts

ألجينات الهلاميات المائية للثقافة الجهاز ثلاثي الأبعاد من المبيضين وناقلة البيضات

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer deaths in women and has a 63% mortality rate in the United States1. The cell type of origin for ...

Planar and Three-Dimensional Printing of Conductive Inks

مستو وثلاثي الابعاد من أحبار الطباعة موصل

Printed electronics rely on low-cost, large-area fabrication routes to create flexible or multidimensional electronic, optoelectronic, and biomedical ...

Three-dimensional Cell Culture Model for Measuring the Effects of Interstitial Fluid Flow on Tumor Cell Invasion

نموذج ثلاثي الأبعاد للخلية ثقافة قياس آثار تدفق السائل الخلالي على غزو الخلايا السرطانية

The growth and progression of most solid tumors depend on the initial transformation of the cancer cells and their response to stroma-associated signaling ...

Human Cartilage Tissue Fabrication Using Three-dimensional Inkjet Printing Technology

الغضروف الإنسان الأنسجة التصنيع باستخدام ثلاثي الأبعاد تكنولوجيا الطباعة النافثة للحبر

Bioprinting, which is based on thermal inkjet printing, is one of the most attractive enabling technologies in the field of tissue engineering and ...

Analysis of Cell Migration within a Three-dimensional Collagen Matrix

تحليل الهجرة خلية داخل الكولاجين مصفوفة ثلاثية الأبعاد

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

جيل من سمك ثلاثي الأبعاد الجلد كامل أي ما يعادل واصابة الآلي

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Fabrication of Inverted Colloidal Crystal Poly(ethylene glycol) Scaffold: A Three-dimensional Cell Culture Platform for Liver Tissue Engineering

Fabrication of Inverted Colloidal Crystal Polyethylene glycol Scaffold: A Three-dimensional Cell Culture Platform for Liver Tissue Engineering

تصنيع مقلوب الغروية كريستال بولي (جلايكول الإثيلين) سقالة: وثلاثي الأبعاد منصة الثقافة خلية للهندسة الأنسجة الكبد

The ability to maintain hepatocyte function in vitro, for the purpose of testing xenobiotics&#39; cytotoxicity, studying virus infection and developing ...

Isolation of Murine Adipose Tissue-derived Microvascular Fragments as Vascularization Units for Tissue Engineering

عزل الفئران الدهنية المشتقة من الأنسجة الاوعية الدموية الدقيقة شظايا كما وحدات الأوعية الدموية للهندسة الأنسجة

A functional microvascular network is of pivotal importance for the survival and integration of engineered tissue constructs. For this purpose, several ...

Three-dimensional Tissue Engineered Aligned Astrocyte Networks to Recapitulate Developmental Mechanisms and Facilitate Nervous System Regeneration

ثلاثي الأبعاد الأنسجة المهندسة الانحياز شبكات Astrocyte الخص الآليات الإنمائية وتيسير التجدد العصبي

Neurotrauma and neurodegenerative disease often result in lasting neurological deficits due to the limited capacity of the central nervous system (CNS) to ...