Name: three-dimensional culture of vascularized thermogenic adipose tissue from microvascular fragments
Uploaded: 2023-02-03T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Three-Dimensional Culture of Vascularized Thermogenic Adipose Tissue from Microvascular Fragments at JoVE.com

ד"ר אקוסטה נתמך על ידי מענקי המכונים הלאומיים לבריאות CA148724 ו- TL1TR002647. ד"ר גונזלס פוראס נתמך על ידי המכון הלאומי לסוכרת ומחלות עיכול וכליות של המכונים הלאומיים לבריאות, תחת פרס מספר F32-0DK122754. עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (5SC1DK122578) ואוניברסיטת טקסס במחלקה להנדסה ביו-רפואית בסן אנטוניו. התוכן הוא באחריותם הבלעדית של המחברים ואינו מייצג בהכרח את הדעות הרשמיות של המכונים הלאומיים לבריאות. הדמויות נוצרו חלקית עם Biorender.com.

מחקר זה נערך בהתאם לחוק צער בעלי חיים ולתקנות צער בעלי חיים בהתאם לעקרונות המדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה. כל ההליכים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת טקסס בסן אנטוניו.
הערה: עבור השלבים המתוארים להלן, עכברושי לואיס זכרים משמשים...

תחום הנדסת רקמת השומן החומה/בז' אינו בשל ברובו 22,23,24,25,26,27,28, כאשר רוב דגמי השומן מפותחים עבור רקמת שומן לבנה 8,22,31</su...

מטרת פרוטוקול זה היא לתאר גישה לפיתוח רקמת שומן בז' וסקולרית ממקור יחיד, שעשוי להיות אוטולוגי, מקטע מיקרו-וסקולרי (MVF). רקמות שומן חומות ובז' הוכחו כבעלות תכונות מועילות הקשורות לוויסות מטבולי; עם זאת, הנפח הקטן של מחסני רקמת שומן אלה במבוגרים מגביל את ההשפעה הפוטנציאלית על חילוף החומרים המערכתי, במיוחד במצבים חולים כגון השמנת יתר או סוכרת מסוג 2 1,2,3,4,5,6,7. קיים עניין משמעותי בשומן חום/בז' כיעד טיפולי למניעת ההשפעות המטבוליות המזיקות הקשורות להשמנת יתר ותחלואה נלווית 8,9,10,11,12.
MVFs הם מבני כלי דם שניתן לבודד ישירות מרקמת השומן, לגדל בתרבית ולתחזק אותם בתצורה תלת ממדית לפרקי זמן ממושכים 13,14,15. עבודות קודמות של הקבוצה שלנו, ואחרות, החלו לנצל את היכולת הרב-תאית והרב-פוטנטית של MVFs, במיוחד בכל הנוגע להיווצרות רקמת שומן16,17,18. כהצטברות של עבודה זו, הדגמנו לאחרונה כי MVFs שמקורם במודלים של מכרסמים של סוכרת בריאה ומסוג 219 ומנבדקים אנושיים (מבוגרים מעל גיל 50)20 הכילו תאים המסוגלים לקבל השראה ליצירת רקמת שומן תרמוגנית, או בז'.
זוהי גישה חדשנית שממנה נעשה שימוש ב-MVF ממקור יחיד, המסוגל לא רק ליצור רקמת שומן בצבע בז' אלא גם את מרכיב כלי הדם הקשור והקריטי שלה21. השימוש בטכניקה זו יכול להיות בעל ערך רב עבור מחקרים המחפשים גישה פשוטה מהונדסת רקמות להיווצרות רקמת שומן תרמוגנית. בניגוד לשיטות אחרות השואפות להנדס רקמת שומן בצבע בז' 22,23,24,25,26,27,28, התהליך המתואר במחקר זה אינו דורש שימוש במספר סוגי תאים או משטרי אינדוקציה מורכבים. ניתן ליצור מודלים של שומן ובז' ולבן עם MVFs שמקורם במכרסמים ובמקורות אנושיים, מה שמדגים פוטנציאל תרגום גדול. התוצר הסופי של פרוטוקול זה הוא רקמת שומן תרמוגנית בצבע בז' מהונדס, בעלת מבנה ותפקוד מטבולי הדומים לרקמת שומן חומה. בסך הכל, פרוטוקול זה מציג את הרעיון כי MVF מקור נגיש ואולי אוטולוגי עשוי להיות התערבות טיפולית ראויה וכלי לחקר הפרעות מטבוליות.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aminocaproic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A2504-100G</td>
			<td>Added in DMEM at the concentration of 1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt-Tipped Scissors</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>12-000-172</td>
			<td>Sterilize in autoclave</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovin Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>126575-10GM</td>
			<td>Diluted in PBS to 4 mg/mL and 1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type 1</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>NC9633623</td>
			<td>Diluted to 6 mg/mL in BSA 4 mg/mL, Digestion of minced fat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AC230302500</td>
			<td>Diluted in ethanol at a 2 mg/ml stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable underpads</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>23-666-062</td>
			<td>For fluid absorption during surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Scissors</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>08-951-5</td>
			<td>Sterilize in autoclave</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8242;s Modified Eagle&#8242;s Medium (DMEM)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>11885092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8242;s Modified Eagle&#8242;s Medium/Nutrient Mixture F-12 Ham (DMEM/F12)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D8062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum&#160;</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>16140089</td>
			<td>Added in DMEM to 20% v/v.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F8630-25G</td>
			<td>Solubilized in DMEM at the concentration of 20 mg/mL, Protein found in blood plasma and main component of hydrogel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flask, 250 mL</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>FB500250</td>
			<td>Allows for digestion of fat using a large surface area</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>50-264-21</td>
			<td>Sterilize in autoclave, For handling of tissue and filters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F6886</td>
			<td>Diluted in ethanol at a 10 mM stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human MVF</td>
			<td>Advanced Solutions Life Scienes, LLC</td>
			<td>https://www.advancedsolutions.com/microvessels</td>
			<td>Human MVFs (hMVFs) isolated from three different patients (52-, 54-, and 56-year old females) were used in the current study.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Indomethacine&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I7378</td>
			<td>Diluted in ethanol at a 12.5 mM stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin from porcine pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I5523</td>
			<td>Diluted in 0.01 N HCl at a 5 mg/ml stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MycoZap</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>NC9023832</td>
			<td>Added in DMEM to 0.2% w/v, Mycoplasma Prophylactic&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pennycilin/Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Added in DMEM to 1% v/v.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, polystyrene (100 mm x 15 mm).</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>351029</td>
			<td>3 for removal of blood vessels and mincing, 8 (lid) for presoaking of screens &#38; 8 (dish) for use when filtering with 500 or 37 &#181;M screens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, polystyrene (35 mm x 10 mm).</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>50-202-036</td>
			<td>For counting fragments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffer Saline (PBS)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>14-190-250</td>
			<td>Diluted to 1x with sterile deionized water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Clippers (Andwin Mini Arco Pet Trimmer)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>NC0854141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rosiglitazone</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>R0106200MG</td>
			<td>Diluted in DMSO at a 10 mM stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14059-11</td>
			<td>1 for initial incision, 1 for epididymal incision, 1 for tip clipping</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screen&#160; 37 &#181;M&#160;</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>652222R</td>
			<td>Cut into 3&#34; rounded squares and sterilized in ethylene oxide, Fragment entrapment and removal of very small fragments/single cells and debris</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screen 500 &#181;M&#160;</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>652222F</td>
			<td>Cut into 3&#34; rounded squares and sterilized in ethylene oxide, Removes larger fragments/debris</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serrated Hemostat</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>12-000-171</td>
			<td>Sterilize in autoclave, For clamping of skin before incision</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steriflip Filter 0.22 &#956;m&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SE1M179M6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>6051601KU</td>
			<td>Diluted in deionzed water to 10 U/mL, Used as a clotting agent turning fibrinogen to fibrin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thyroid hormone (T3)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T2877</td>
			<td>Diluted in 1N NaOH at a 0.02 mM stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zucker diabetic fatty (ZDF) rats - obese (FA/FA) or lean (FA/+) male&#160;</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>https://www.criver.com/products-services/find-model/zdf-rat-lean-fa?region=3611 
			https://www.criver.com/products-services/find-model/zdf-rat-obese?region=3611</td>
			<td>Obtained from Charles River (Wilmington, MA). Rats were acquired at 4 weeks of age and fed Purina 5008 until euthanasia (15-19 weeks of age). Glucose levels (blood from the lateral saphenous vein) were greater than 300 mg/dL in all FA/FA rats used in the study. All animals were housed in a temperature-controlled environment with a 12-h light-dark cycle and fed ad libitum.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional culture of vascularized thermogenic adipose tissue from microvascular fragments

רקמת שומן תרמוגנית הנדסית (למשל, רקמות שומן בצבע בז' או חום) נחקרה כטיפול פוטנציאלי למחלות מטבוליות או לתכנון מיקרו-רקמות מותאמות אישית לבדיקת בריאות ובדיקות סמים. האסטרטגיות הנוכחיות הן לעתים קרובות מורכבות למדי ואינן מצליחות לתאר במדויק את התכונות הרב-תאיות והתפקודיות של רקמת השומן התרמוגנית. שברים מיקרו-וסקולריים, מיקרו-כלים קטנים ושלמים המורכבים מעורקים, ורידים ונימים שבודדו מרקמת השומן, משמשים כמקור אוטולוגי יחיד של תאים המאפשרים וסקולריזציה ויצירת רקמת שומן. מאמר זה מתאר שיטות לאופטימיזציה של תנאי תרבית כדי לאפשר יצירה של רקמות שומן תרמוגניות תלת-ממדיות, וסקולריות ומתפקדות ממקטעים מיקרו-וסקולריים, כולל פרוטוקולים לבידוד מקטעים מיקרו-וסקולריים מרקמת השומן ומתנאי תרבית. בנוסף, נדונות שיטות עבודה מומלצות, כמו גם טכניקות לאפיון הרקמות המהונדסות, ותוצאות דגימה הן ממכרסמים והן מקטעים מיקרו-וסקולריים אנושיים מסופקות. לגישה זו יש פוטנציאל לשמש להבנה ופיתוח של טיפולים להשמנת יתר ומחלות מטבוליות.

ישנם מספר מאפיינים מורפולוגיים פנוטיפיים עיקריים של רקמת שומן בצבע בז'/חום: הוא רב-לוקולרי/מכיל טיפות שומנים קטנות, בעל מספר רב של מיטוכונדריה (הסיבה להופעתו ה"חומה" האופיינית in vivo), יש לו בהתאמה קצב צריכת חמצן גבוה/ביו-אנרגטיקה מיטוכונדריאלית, הוא מאוד וסקולרי, יש לו ספיגת גלוקוז מוגבר...

Watch this Scientific Journal Video about Three-Dimensional Culture of Vascularized Thermogenic Adipose Tissue from Microvascular Fragments at JoVE.com

Three-Dimensional Culture of Vascularized Thermogenic Adipose Tissue from Microvascular Fragments

כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט המתאר את השימוש בשברים מיקרו-וסקולריים שבודדו מרקמת מכרסם או מרקמת שומן אנושית כגישה פשוטה להנדסת רקמת שומן פונקציונלית בצבע בז' וסקולרית.

תרבית תלת מימדית של רקמת שומן תרמוגנית וסקולרית מקטעים מיקרו-וסקולריים

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for ...

פרוטוקול זה מתאר את היצירה של שומן תרמוגני תלת-ממדי ופונקציונלי ממקטעים מיקרו-וסקולריים, או MVFs. האסטרטגיות הנוכחיות להנדסת רקמת שומן תרמוגנית הן מורכבות ואינן מתארות במלואן את תכונותיה הרב-תאיות והתפקודיות. MVFs הם מקור יחיד של תאים המאפשרים וסקולריזציה ויצירת רקמת שומן.בהיותה שיטה פשוטה ליצירת חיקויים ביולוגיים של שומן בז', MVFs טומנים בחובם פוטנציאל משמעותי לקידום הבנה או פיתוח של טיפולים להשמנת יתר ומחלות מטבוליות. הניחו את בעל החיים המגולח והמורדם כראוי שטופל באתנול 70% במצב שכיבה והתחילו לבודד את השומן המפשעה. הרימו את העור מתחת לפין בעזרת זוג מספריים ובצעו את החתך, החל במרכז וחיתוך לרוחב, תוך יצירת צורת V, לפני הלולאה לישבן החיה כדי לגשת לכל מאגר השומן.בזמן החיתוך, הקפידו על הפרדת העור מהשומן על ידי חיתוך רקמת הפאשיה המחוברת. ברגע שהפאשיה נחתכת כראוי, יש לוודא שהשומן המפשעתי משני הצדדים, המשתרע מהמפשעה לכיוון הגב, גלוי. לאחר מכן, הסר את השומן משני הצדדים בצינורות חרוטיים נפרדים המכילים 10 מיליליטר של BSA ב- PBS, בעל ריכוז של מיליגרם אחד למיליליטר.כדי לקצור את השומן האפידידימלי, לחתוך דרך עור הבטן, ואחריו לחתוך בזהירות דרך השכבה הדקה המקיפה את האשכים. משכו בעדינות את רקמת השומן באמצעות מלקחיים וגזרו אותה באמצעות מספריים, תוך הימנעות מדיסקציה של כלי דם גדולים הנראים לעין. כעת, הניחו את השומן שהוסר לתוך צינור חרוטי של 50 מיליליטר המכיל 10 מיליליטר של מיליגרם אחד למיליליטר BSA ב- PBS.כדי לבודד את השומן התת עורי האחורי, הפכו את החולדה לנוטה והשתמשו במספריים גדולים כדי לחתוך את העור העבה של הגב עד הקרקפת, תוך הקפדה לא לחתוך עמוק מדי מתחת לעור. חותכים את הפאשיה המחברת את העור לרקמה. להבדיל את השומן התת עורי, הממוקם באזור intrascapular, מן השומן החום הממוקם קרוב יותר לעמוד השדרה לפני בידוד והנחת השומן תת עורי בצינור חרוטי 50 מיליליטר המכיל 10 מיליליטר של מיליגרם אחד למיליליטר BSA ב PBS.תוך כדי עבודה בתוך ביוהוד, השתמשו במלקחיים כדי להכניס את השומן שנכרת לצלחת פטרי סטנדרטית של 100 מיליליטר המכילה 0.5 מיליליטר של מיליגרם אחד למיליליטר BSA ב-PBS. הסר כל כלי דם גלויים, שרירים או רקמה חיצונית מן השומן. בעזרת מספריים, לטחון את השומן במשך 10 דקות ולבדוק גושים על ידי הוספת עוד קצת BSA.ממשיכים לטחון, במידת הצורך, לפני העברת תרחיף השומן הטחון לבקבוק סטרילי של 250 מיליליטר עם פיפטה של 10 מיליליטר. הפוך את נפח הבקבוק עד 20 מיליליטר על ידי הוספת מספיק BSA PBS. כעת הוסיפו BSA ב-PBS לקולגנאז, והפכו את התמיסה להומוגנית על ידי ניעור עדין לפני שתסננו אותה סטרילית דרך מסנן ניילון נטו של 0.22 מיקרון.מיד להוסיף את הכמות הנדרשת של תמיסת collagenase לתרחיף שומן טחון, ולעכל את השומן על ידי ניעור הבקבוק בתנועה סיבובית באמבט מים ב 37 מעלות צלזיוס למשך הזמן המתאים. מעבירים את השומן המעוכל לתוך צינור חרוטי של 50 מיליליטר המסומן כשומן מעוכל או שומן טחון. צנטריפוגה את הצינור ב 400 G במשך ארבע דקות כדי לסובב את שברי כלי הדם, או MVFs, לתוך גלולה אדומה.מרוקנים בעדינות את הסופרנאטנט לתוך צינור חרוטי של 50 מיליליטר המסומן כפסולת מבלי להפריע לכדורית. לאחר מכן, הוסף 10 מיליליטר של מיליגרם אחד למיליליטר BSA ב- PBS לצינור המכיל את הכדור, וערבב את מתלה הגלולה על ידי פיפטציה עדינה למעלה ולמטה פעמיים מבלי להפריע לשברים. כעת, קחו את המסך בגודל 500 מיקרון שהושרה מראש בצלחת פטרי סטרילית המכילה חמישה מיליליטר של מיליגרם אחד למיליליטר BSA ב-PBS והניחו אותו מעל מחזיק מסך הפלסטיק שנשמר על צלחת פטרי חדשה.פיפטה 10 מיליליטר של השעיה מצינור הגלולה המעוכל אל המסך במעגלים קונצנטריים. שטפו את הפילטר עם חמישה מיליליטר נוספים של מיליגרם אחד למיליליטר BSA ב-PBS והשליכו אותו, תוך שמירה על התסנין בתוך צלחת הפטרי. לאחר מכן הניחו את המסך הספוג מראש בגודל 37 מיקרון מעל מחזיק מסך הפלסטיק על צלחת פטרי חדשה.בעזרת פיפטה טרייה, מעבירים את התסנין מהסינון הראשון אל המסך במעגלים קונצנטריים. כפי שתואר קודם לכן, שטפו את המסך עם BSA ב-PBS, והפעם, השליכו את התסנין תוך שמירה על מסך 37 מיקרון. החלק את המסך בגודל 37 מיקרון לתוך צלחת פטרי חדשה המכילה חמישה מיליליטר של מיליגרם אחד למיליליטר BSA ב- PBS.עקרו את השברים על ידי הקשה עדינה של הכלי על מחזיק חרוט, מבלי לשפוך נוזל. שטוף את המסנן עם חמישה מיליליטר נוספים של BSA ב- PBS. לאחר מכן, להעביר את הנוזל מן צלחת פטרי לתוך צינור חרוטי סטרילי 50 מיליליטר.שטפו את המסך בגודל 37 מיקרון מספר פעמים נוספות, והוסיפו את השטיפה לצינור החרוטי עד שהנפח הכולל שנאסף הוא 15 עד 20 מיליליטר. יש להשליך את המסך לאחר השטיפה הסופית. חותכים קצה של קצה פיפטה 20 מיקרוליטר באמצעות מספריים.נערו בעדינות את הצינור המכיל את הנוזל לפני שתוציאו שני אליציטוטים של 20 מיקרוליטר באמצעות קצה הפיפטה החתוך, ופיפטה כל אחד מהאליציטוטים לצלחת פטרי נקייה בקוטר 35 מ"מ. ספרו את מספר השברים בדגימה בכל צלחת פטרי באמצעות מיקרוסקופ אור סטנדרטי, ובאמצעות הנוסחה המוזכרת בכתב היד, קבלו את המספר הכולל של שברי כלי דם מבודדים. סובבו את הנוזל שנותר בצינור החרוטי של 50 מיליליטר ב-400 גרם במשך ארבע דקות כדי לאסוף את ה-MVF.לאחר הסיבוב, מרוקנים את רוב הסופרנאטנט מהצינור החרוטי ומשתמשים בפיפטה כדי להסיר את נפח הנוזל הקטן שנותר על שפת הצינור. לאחר מכן, להוסיף טרומבין לתוך בארות המיועדות יציקת ג'לים. חתכו את קצהו של קצה פיפטה של 200 מיקרוליטר, והשתמשו בו השהה מחדש בעדינות את ה-MVFs בפיברינוגן כדי להשיג את הצפיפות הסופית הרצויה.פיפטה את התרחיף לתוך תמיסת תרומבין בבאר במהירות הומוגנית את התערובת על ידי pipeting למעלה ולמטה. לאחר יציקת כל הג'לים, הניחו את צלחת הבאר באינקובטור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ופחמן דו חמצני של 5% למשך כ-15 דקות כדי לאפשר הצלבת ג'ל. השומנים והאדיפוציטים המובחנים נצפו על ידי הדמיה במיקרוסקופ קונפוקלי של ההידרוג'לים באמצעות BODIPY ככתם השומנים.תרבית של רקמת שומן לא וסקולרית באמצעות מדיה אדיפוגנית לבנה או בז' אדיפוגנית הביאה להיווצרות רקמת שומן לבנה או בז' לא וסקולרית, בהתאמה, הן מ- MVF רזים והן ממכרסמים סוכרתיים. באופן דומה, תרבית של רקמת שומן וסקולרית באמצעות מדיה אדיפוגנית לבנה או בז' אדיפוגנית הביאה להיווצרות רקמת שומן לבנה או בז' וסקולרית, בהתאמה, מ- MVF שמקורם במכרסמים. רקמת שומן לבנה ובז' לא וסקולרית שהושגה מ- MVF אנושיים נצפתה גם על ידי מיקרוסקופ קונפוקלי.היכולת של MVFs להתמיין לרקמת שומן בצבע בז' אושרה גנטית באמצעות RT-qPCR. MVF של מכרסמים רזים וסוכרתיים שנחשפו למדיה אדיפוגנית לבנה ישירה או בז' הוערכו עבור אדיפוגנזה, תרמוגנזה ואנגיוגנזה. הביטוי של חלבון 1 כצפוי, היה גבוה משמעותית ברקמה אדיפוגנית בצבע בז'.מגמה דומה נצפתה במכרסמים MVF שנחשפו למדיה אדיפוגנית לבנה או בז' אדיפוגנית עקיפה, כמו גם בMVF אנושיים שנחשפו למדיה אדיפוגנית לבנה ישירה או בז'. לבסוף, מביו-אנרגטיקה מיטוכונדריאלית, היה ברור כי מבחינה תפקודית, רקמת השומן בצבע בז' הייתה בעלת קצב צריכת חמצן גבוה יותר, או OCR, בכל המקרים. העיכול האנזימטי של רקמת השומן צריך להיות אופטימלי כדי לשחזר באופן עקבי MVF בגודל ובאיכות דומים.לאחר העיכול, MVFs צריך להיות מטופל בעדינות, עם תשומת לב מיוחדת כדי למנוע פירוק נוסף של שברים. טכניקה זו סייעה לקדם את האיזון של צמיחת כלי הדם והתמיינות אדיפוציטים, הוכח להיות תלוי בגורמים שהוכנסו.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Three-dimensional Optical-resolution Photoacoustic Microscopy

תלת ממדית ברזולוציה אופטית photoacoustic מיקרוסקופית

Optical microscopy, providing valuable insights at the cellular and organelle levels, has been widely recognized as an enabling biomedical technology. As ...

Alginate Hydrogels for Three-Dimensional Organ Culture of Ovaries and Oviducts

אלגינט הידרוג לתרבות תלת ממדי איברים של השחלות Oviducts

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer deaths in women and has a 63% mortality rate in the United States1. The cell type of origin for ...

Planar and Three-Dimensional Printing of Conductive Inks

הדפסה מישוריים תלת ממדי של דיו מוליך

Printed electronics rely on low-cost, large-area fabrication routes to create flexible or multidimensional electronic, optoelectronic, and biomedical ...

Three-dimensional Cell Culture Model for Measuring the Effects of Interstitial Fluid Flow on Tumor Cell Invasion

תלת מימדי תרבית תאים מודל למדידת השפעת זרימת הנוזל ביניים על הפלישה תאים סרטניים

The growth and progression of most solid tumors depend on the initial transformation of the cancer cells and their response to stroma-associated signaling ...

Human Cartilage Tissue Fabrication Using Three-dimensional Inkjet Printing Technology

ייצור רקמת סחוס אנושי באמצעות שלושה ממדי הזרקת דיו טכנולוגיית הדפסה

Bioprinting, which is based on thermal inkjet printing, is one of the most attractive enabling technologies in the field of tissue engineering and ...

Analysis of Cell Migration within a Three-dimensional Collagen Matrix

ניתוח של נדידת תאים בתוך קולגן מטריקס תלת ממדי

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

דור של עור בעובי מלא תלת ממדי Equivalent ואוטומטי פציעה

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Fabrication of Inverted Colloidal Crystal Poly(ethylene glycol) Scaffold: A Three-dimensional Cell Culture Platform for Liver Tissue Engineering

Fabrication of Inverted Colloidal Crystal Polyethylene glycol Scaffold: A Three-dimensional Cell Culture Platform for Liver Tissue Engineering

המצאה של הפוך קולואיד קריסטל פולי (אתילן גליקול) פיגום: פלטפורמת תרבית תאים תלת ממדי עבור הנדסת רקמות כבדה

The ability to maintain hepatocyte function in vitro, for the purpose of testing xenobiotics&#39; cytotoxicity, studying virus infection and developing ...

Isolation of Murine Adipose Tissue-derived Microvascular Fragments as Vascularization Units for Tissue Engineering

בידוד של נגזרות רקמה שומנית Murine כלי דם שבר כיחידות כלי דם של הנדסת רקמות

A functional microvascular network is of pivotal importance for the survival and integration of engineered tissue constructs. For this purpose, several ...

Three-dimensional Tissue Engineered Aligned Astrocyte Networks to Recapitulate Developmental Mechanisms and Facilitate Nervous System Regeneration

תלת מימדי רקמות מהונדסים מיושר אסטרוציט רשתות כדי לסכם מנגנונים התפתחותית וכדי להקל על מערכת העצבים התחדשות

Neurotrauma and neurodegenerative disease often result in lasting neurological deficits due to the limited capacity of the central nervous system (CNS) to ...