Name: three-dimensional culture of vascularized thermogenic adipose tissue from microvascular fragments
Uploaded: 2023-02-03T13:30:00
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Acosta 박사는 국립 보건원 보조금 CA148724 및 TL1TR002647의 지원을 받습니다. 곤잘레스 포라스 박사는 국립 보건원 (National Institutes of Health)의 당뇨병 및 소화기 및 신장 질환 연구소 (National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases)의 지원을 받고 있습니다. 이 연구는 국립 보건원 (National Institutes of Health, 5SC1DK122578)과 텍사스 대학교 샌 안토니오 생물 의학 공학과 (University of Texas at San Antonio Department of Biomedical Engineering)의 지원을 받았습니다. 내용은 전적으로 저자의 책임이며 반드시 국립 보건원의 공식 견해를 나타내는 것은 아닙니다. 그림은 부분적으로 Biorender.com 로 만들어졌습니다.

본 연구는 동물복지법 및 동물복지 시행규정에 따라 실험동물 관리 및 사용 가이드의 원칙에 따라 수행되었다. 모든 동물 절차는 샌안토니오에 있는 텍사스 대학교의 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았습니다.
참고: 아래에 설명된 단계에서는 수컷 Lewis Rats가 사용됩니다. 암컷과 생쥐 미세혈관 조각(MVF) 수집에 대해 약간의 프로토콜 조정이 이루어져야 한다<sup clas...

갈색 / 베이지 색 지방 조직 공학 분야는 대체로 미성숙 22,23,24,25,26,27,28이며, 대부분의 지방 모델은 백색 지방 조직 8,22,31을 위해 개발되고 있습니다 ....

이 프로토콜의 목표는 잠재적으로 자가 소스인 단일 미세혈관 단편(MVF)에서 혈관화된 베이지색 지방 조직을 개발하기 위한 접근 방식을 설명하는 것입니다. 갈색 및 베이지색 지방 조직은 대사 조절과 관련된 유익한 특성을 나타내는 것으로 입증되었습니다. 그러나, 성인의 이러한 지방 조직 저장소의 소량은 특히 비만이나 제2형 당뇨병과 같은 질병 상태에서 전신 대사에 대한 잠재적 영향을 제한한다 1,2,3,4,5,6,7. 비만 및 그 동반 질환과 관련된 유해한 대사 효과를 예방하기 위한 치료 표적으로서 갈색/베이지색 지방에 상당한 관심이 있습니다 8,9,10,11,12.
MVF는 지방 조직으로부터 직접 분리되고, 배양되고, 연장된 기간 동안 3차원 구성으로 유지될 수 있는 혈관 구조이다(13,14,15). 우리 그룹과 다른 사람들의 이전 연구는 특히 지방 조직 형성과 관련하여 MVF의 다세포 및 다능성 능력을 활용하기 시작했습니다16,17,18. 이 연구의 축적으로, 우리는 최근 건강한 제2형 당뇨병 및 제2형 당뇨병의 설치류 모델(19)과 인간 피험자(50세 이상의 성인)20에서 파생된 MVF가 열발생 또는 베이지색 지방 조직을 형성하도록 유도될 수 있는 세포를 함유하고 있음을 입증했습니다.
본원은 베이지색 지방 조직뿐만 아니라 그의 관련되고 중요한 혈관 성분(21)을 생성할 수 있는 단일 공급원 MVF가 활용되는 혁신적인 접근법이다. 이 기술의 사용은 열 발생 지방 조직 형성을 위한 간단한 조직 공학적 접근 방식을 찾는 연구에 큰 가치가 있을 수 있습니다. 베이지색 지방 조직 22,23,24,25,26,27,28을 조작하려는 다른 방법과 달리 이 연구에 설명된 프로세스는 여러 세포 유형이나 복잡한 유도 요법을 사용할 필요가 없습니다. 혈관화된 베이지색 및 백색 지방 모델은 설치류 및 인간 소스에서 유래한 MVF로 생성할 수 있어 뛰어난 번역 잠재력을 보여줍니다. 이 프로토콜의 최종 제품은 갈색 지방 조직에 필적하는 구조와 대사 기능을 가진 엔지니어링된 베이지색 열 발생 지방 조직입니다. 전반적으로, 이 프로토콜은 쉽게 접근할 수 있고 자가 소스 MVF가 대사 장애를 연구하기 위한 가치 있는 치료 개입 및 도구가 될 수 있다는 아이디어를 제시합니다.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Aminocaproic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A2504-100G</td>
			<td>Added in DMEM at the concentration of 1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt-Tipped Scissors</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>12-000-172</td>
			<td>Sterilize in autoclave</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovin Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>126575-10GM</td>
			<td>Diluted in PBS to 4 mg/mL and 1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type 1</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>NC9633623</td>
			<td>Diluted to 6 mg/mL in BSA 4 mg/mL, Digestion of minced fat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AC230302500</td>
			<td>Diluted in ethanol at a 2 mg/ml stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable underpads</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>23-666-062</td>
			<td>For fluid absorption during surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Scissors</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>08-951-5</td>
			<td>Sterilize in autoclave</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8242;s Modified Eagle&#8242;s Medium (DMEM)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>11885092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8242;s Modified Eagle&#8242;s Medium/Nutrient Mixture F-12 Ham (DMEM/F12)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D8062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum&#160;</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>16140089</td>
			<td>Added in DMEM to 20% v/v.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F8630-25G</td>
			<td>Solubilized in DMEM at the concentration of 20 mg/mL, Protein found in blood plasma and main component of hydrogel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flask, 250 mL</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>FB500250</td>
			<td>Allows for digestion of fat using a large surface area</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>50-264-21</td>
			<td>Sterilize in autoclave, For handling of tissue and filters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F6886</td>
			<td>Diluted in ethanol at a 10 mM stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human MVF</td>
			<td>Advanced Solutions Life Scienes, LLC</td>
			<td>https://www.advancedsolutions.com/microvessels</td>
			<td>Human MVFs (hMVFs) isolated from three different patients (52-, 54-, and 56-year old females) were used in the current study.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Indomethacine&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I7378</td>
			<td>Diluted in ethanol at a 12.5 mM stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin from porcine pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I5523</td>
			<td>Diluted in 0.01 N HCl at a 5 mg/ml stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MycoZap</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>NC9023832</td>
			<td>Added in DMEM to 0.2% w/v, Mycoplasma Prophylactic&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pennycilin/Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Added in DMEM to 1% v/v.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, polystyrene (100 mm x 15 mm).</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>351029</td>
			<td>3 for removal of blood vessels and mincing, 8 (lid) for presoaking of screens &#38; 8 (dish) for use when filtering with 500 or 37 &#181;M screens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, polystyrene (35 mm x 10 mm).</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>50-202-036</td>
			<td>For counting fragments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffer Saline (PBS)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>14-190-250</td>
			<td>Diluted to 1x with sterile deionized water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Clippers (Andwin Mini Arco Pet Trimmer)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>NC0854141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rosiglitazone</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>R0106200MG</td>
			<td>Diluted in DMSO at a 10 mM stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14059-11</td>
			<td>1 for initial incision, 1 for epididymal incision, 1 for tip clipping</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screen&#160; 37 &#181;M&#160;</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>652222R</td>
			<td>Cut into 3&#34; rounded squares and sterilized in ethylene oxide, Fragment entrapment and removal of very small fragments/single cells and debris</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screen 500 &#181;M&#160;</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>652222F</td>
			<td>Cut into 3&#34; rounded squares and sterilized in ethylene oxide, Removes larger fragments/debris</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serrated Hemostat</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>12-000-171</td>
			<td>Sterilize in autoclave, For clamping of skin before incision</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steriflip Filter 0.22 &#956;m&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SE1M179M6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>6051601KU</td>
			<td>Diluted in deionzed water to 10 U/mL, Used as a clotting agent turning fibrinogen to fibrin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thyroid hormone (T3)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T2877</td>
			<td>Diluted in 1N NaOH at a 0.02 mM stock concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zucker diabetic fatty (ZDF) rats - obese (FA/FA) or lean (FA/+) male&#160;</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>https://www.criver.com/products-services/find-model/zdf-rat-lean-fa?region=3611 
			https://www.criver.com/products-services/find-model/zdf-rat-obese?region=3611</td>
			<td>Obtained from Charles River (Wilmington, MA). Rats were acquired at 4 weeks of age and fed Purina 5008 until euthanasia (15-19 weeks of age). Glucose levels (blood from the lateral saphenous vein) were greater than 300 mg/dL in all FA/FA rats used in the study. All animals were housed in a temperature-controlled environment with a 12-h light-dark cycle and fed ad libitum.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional culture of vascularized thermogenic adipose tissue from microvascular fragments

공학적 열 발생 지방 조직(예: 베이지색 또는 갈색 지방 조직)은 대사 질환에 대한 잠재적 치료법 또는 건강 검진 및 약물 검사를 위한 개인화된 미세 조직의 설계를 위한 것으로 조사되었습니다. 현재의 전략은 종종 매우 복잡하며 열 발생 지방 조직의 다세포 및 기능적 특성을 정확하게 완전히 묘사하지 못합니다. 지방 조직에서 분리된 세동맥, 세정맥 및 모세혈관으로 구성된 작고 손상되지 않은 미세혈관인 미세혈관 단편은 혈관화 및 지방 조직 형성을 가능하게 하는 단일 자가 세포 공급원 역할을 합니다. 이 기사에서는 지방 조직 및 배양 조건에서 미세혈관 단편을 분리하기 위한 프로토콜을 포함하여 미세혈관 조각에서 3차원, 혈관화 및 기능적 열발생 지방 조직을 생성할 수 있도록 배양 조건을 최적화하는 방법을 설명합니다. 또한 조작된 조직을 특성화하는 기술과 마찬가지로 모범 사례에 대해 논의하고 설치류 및 인간 미세혈관 단편의 샘플 결과를 제공합니다. 이 접근법은 비만 및 대사 질환 치료법의 이해와 개발에 활용될 가능성이 있습니다.

베이지색/갈색 지방 조직의 몇 가지 주요 표현형 형태학적 특징이 있습니다: 다안성/작은 지질 방울을 포함하고, 많은 수의 미토콘드리아를 보유하고(생체 내에서 특징적으로 "갈색"으로 보이는 이유), 이에 따라 높은 산소 소비율/미토콘드리아 생물 에너지를 가지며, 혈관이 많이 형성되고, 지방 분해/인슐린 자극 포도당 흡수가 증가하고, 가장 악명 높게, 열 발생 호흡에 관여하는 미토콘?...

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Three-Dimensional Culture of Vascularized Thermogenic Adipose Tissue from Microvascular Fragments

여기에서 우리는 기능적 혈관화된 베이지색 지방 조직을 엔지니어링하기 위한 간단한 접근 방식으로 설치류 또는 인간 지방 조직에서 분리된 미세혈관 조각의 사용을 설명하는 자세한 프로토콜을 제시합니다.

Microvascular Fragments에서 Vascularized Thermogenic Adipose Tissue의 3차원 배양

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for ...

이 프로토콜은 미세혈관 조각(MVF)에서 3차원 혈관화 및 기능적 열 발생 지방의 생성을 설명합니다. 열 발생 지방 조직을 엔지니어링하기 위한 현재 전략은 복잡하며 다세포 및 기능적 특성을 완전히 묘사하지 않습니다. MVF는 혈관 형성 및 지방 조직 형성을 가능하게 하는 단일 세포 공급원입니다.베이지색 지방의 생물학적 모조품을 만드는 간단한 유일한 방법인 MVF는 비만 및 대사 질환 치료법의 이해 또는 개발을 촉진할 수 있는 상당한 잠재력을 가지고 있습니다. 적절하게 면도하고 안락사시킨 동물을 70 % 에탄올로 처리 한 앙와위 자세로 놓고 사타구니 지방의 분리를 시작합니다. 가위로 음경 아래의 피부를 들어 올리고 중앙에서 시작하여 옆으로 절단하여 V 자 모양을 형성 한 다음 동물의 뒤쪽으로 고리를 만들어 전체 지방 침전물에 접근합니다.절단하는 동안 상호 연결된 근막 조직을 절단하여 지방에서 피부를 분리하십시오. 근막이 적절하게 절단되면 사타구니에서 뒤쪽으로 뻗어 있는 양쪽의 사타구니 지방이 보이는지 확인합니다. 다음으로, 밀리리터당 1밀리그램의 농도를 갖는 PBS 중 10밀리리터의 BSA를 함유하는 별도의 원뿔형 튜브에서 양면으로부터 지방을 제거한다.부고환 지방을 채취하려면 복부 피부를 자른 다음 고환을 둘러싼 얇은 층을 조심스럽게 자릅니다. 집게를 사용하여 지방 조직을 부드럽게 당기고 가위를 사용하여 잘라내면서 눈에 보이는 주요 혈관의 절개를 피하십시오. 이제 제거된 지방을 PBS에서 밀리리터당 1밀리그램 BSA의 10밀리리터가 들어 있는 50밀리리터 원뿔형 튜브에 넣습니다.후방 피하 지방을 분리하려면 쥐를 엎드려 큰 가위를 사용하여 등의 두꺼운 피부를 두피까지 자르고 피부 아래를 너무 깊게 자르지 않도록주의하십시오. 피부와 조직을 연결하는 근막을 자릅니다. 견갑골 내 부위에 위치한 피하 지방을 척추에 더 가까운 갈색 지방과 구별한 후 PBS에서 밀리리터당 1밀리그램 BSA 10밀리리터가 들어 있는 50밀리리터 원추형 튜브에 피하 지방을 분리하고 배치합니다.바이오후드 내부에서 작업하는 동안 집게를 사용하여 절제된 지방을 PBS에서 밀리리터당 1밀리그램 BSA의 0.5밀리리터가 들어 있는 표준 100밀리리터 페트리 접시에 넣습니다. 지방에서 눈에 보이는 혈관, 근육 또는 외부 조직을 제거하십시오. 가위를 사용하여 10분 동안 지방을 다지고 BSA를 더 추가하여 덩어리가 있는지 확인합니다.다진 지방 현탁액을 10 밀리리터 피펫으로 멸균 된 250 밀리리터 플라스크로 옮기기 전에 필요한 경우 계속 다진 것입니다. PBS에 충분한 BSA를 첨가하여 플라스크의 부피를 최대 20밀리리터로 만듭니다. 이제 PBS의 BSA를 콜라게나제에 첨가하고 0.22미크론 나일론 네트 필터를 통해 멸균된 여과하기 전에 부드럽게 흔들어 용액을 균질화합니다.다진 지방 현탁액에 필요한 양의 콜라게나제 용액을 즉시 첨가하고, 섭씨 37 도의 수조에서 플라스크를 원형으로 흔들어 지방을 소화시킨다. 소화된 지방을 소화된 지방 또는 다진 지방이라고 표시된 50밀리리터 원추형 튜브에 옮깁니다. 튜브를 400G에서 4분 동안 원심분리하여 미세혈관 조각(MVF)을 빨간색 펠릿으로 회전시킵니다.펠릿을 방해하지 않고 폐기물이라고 표시된 50밀리리터 원뿔형 튜브에 상층액을 부드럽게 디캔팅합니다. 다음으로, PBS 중 1밀리리터당 1밀리그램 BSA 10밀리리터를 펠릿이 들어 있는 튜브에 첨가하고, 파편을 파괴하지 않고 부드럽게 위아래로 두 번 피펫팅하여 펠릿 현탁액을 혼합합니다. 이제 PBS에서 밀리리터당 1밀리그램 BSA 5밀리리터가 들어 있는 멸균 페트리 접시에 미리 담근 500미크론 스크린을 새 페트리 접시에 보관된 플라스틱 스크린 홀더 위에 놓습니다.소화된 펠릿 튜브에서 10밀리리터의 현탁액을 동심원으로 스크린에 피펫팅합니다. PBS에서 밀리리터 BSA당 1밀리그램의 추가 5밀리리터로 필터를 세척하고 여과액을 페트리 접시 내부에 유지하면서 폐기합니다. 그런 다음 미리 담근 37미크론 스크린을 새 페트리 접시의 플라스틱 스크린 홀더 위에 놓습니다.새로운 피펫을 사용하여 첫 번째 여과액의 여과액을 동심원의 스크린으로 옮깁니다. 앞서 설명한 바와 같이, PBS에서 BSA로 스크린을 세척하고, 이번에는 37 마이크론 스크린을 유지하면서 여과액을 버린다. 37미크론 스크린을 PBS에서 밀리리터당 1밀리그램 BSA의 5밀리리터가 들어 있는 새 페트리 접시에 밀어 넣습니다.액체를 흘리지 않고 원뿔형 홀더에 접시를 부드럽게 두드려 조각을 제거합니다. PBS에서 추가로 5밀리리터의 BSA로 필터를 헹굽니다. 다음으로, 페트리 접시에서 멸균 된 50 밀리리터 원추형 튜브로 액체를 옮깁니다.37 미크론 스크린을 여러 번 더 헹구고 수집 된 총 부피가 15-20 밀리리터가 될 때까지 원추형 튜브에 세척액을 추가합니다. 마지막 헹굼 후 스크린을 버리십시오. 가위를 사용하여 20마이크로리터 피펫 팁의 끝을 자릅니다.절단된 피펫 팁을 사용하여 20마이크로리터의 분취액 2개를 추출하기 전에 액체가 들어 있는 튜브를 부드럽게 흔들고 각 분취량을 깨끗한 35mm 페트리 접시에 피펫팅합니다. 표준 광학 현미경을 사용하여 각 페트리 접시의 샘플에서 단편 수를 세고 원고에 언급된 공식을 사용하여 분리된 미세혈관 단편의 총 수를 얻습니다. 400G에서 50밀리리터 원뿔형 튜브에 남아 있는 액체를 4분 동안 회전시켜 MVF를 수집합니다.회전 후 원추형 튜브에서 대부분의 상청액을 디캔팅하고 피펫을 사용하여 튜브 가장자리에 남아 있는 소량의 액체를 제거합니다. 다음으로, 젤 주조를 위해 지정된 우물에 트롬빈을 첨가하십시오. 200마이크로리터 피펫 팁의 끝을 잘라낸 후 MVF를 피브리노겐에 부드럽게 재현탁하여 원하는 최종 밀도를 얻습니다.현탁액을 웰에 있는 트롬빈 용액으로 피펫팅하고, 위아래로 피펫팅하여 혼합물을 신속하게 균질화한다. 모든 겔이 캐스팅되면 웰 플레이트를 섭씨 37도, 5% 이산화탄소의 인큐베이터에 약 15분 동안 넣어 겔 가교를 허용합니다. 지질과 분화된 지방세포는 BODIPY를 지질 염색으로 사용하여 하이드로젤의 공초점 현미경 이미징으로 관찰되었습니다.백색 지방생성 또는 베이지색 지방생성 배지를 사용하여 비혈관화 지방화 지방조직을 배양한 결과, 마른 조직과 당뇨병성 설치류 유래 MVF 모두에서 각각 비혈관화된 백색 또는 베이지색 지방조직이 형성되었습니다. 유사하게, 백색 지방생성 또는 베이지색 지방생성 배지를 사용하여 혈관화된 지방 조직의 배양은 설치류-유래된 MVF로부터 각각 혈관화된 백색 또는 베이지색 지방 조직의 형성을 초래하였다. 인간 MVF로부터 얻어진 비-혈관화된 백색 및 베이지색 지방 조직도 공초점 현미경에 의해 관찰되었다.베이지색 지방 조직으로 분화하는 MVF의 능력은 RT-qPCR을 사용하여 유전적으로 확인되었습니다. 직접적인 백색 지방생성 또는 베이지색 지방생성 배지에 노출된 살코기 및 당뇨병성 설치류 MVF는 지방 생성, 열 발생 및 혈관 신생에 대해 평가되었습니다. 예상대로 분리된 단백질 1의 발현은 베이지색 지방형성 조직에서 유의하게 더 높았다.간접 백색 지방생성 또는 베이지색 지방생성 배지에 노출된 설치류 MVF와 직접적인 백색 지방생성 또는 베이지색 지방생성 배지에 노출된 인간 MVF에서도 유사한 경향이 관찰되었습니다. 마지막으로, 미토콘드리아 생물 에너지학에서 기능적으로 베이지색 지방 조직은 모든 경우에 특징적으로 더 높은 산소 소비율(OCR) 수준을 갖는 것이 분명했습니다. 지방 조직의 효소 분해는 유사한 크기와 품질의 MVF를 일관되게 재현하도록 최적화되어야 합니다.소화 후 MVF는 파편이 더 이상 분해되지 않도록 특별한 주의를 기울여 부드럽게 다루어야 합니다. 이 기술은 도입된 요인에 의존하는 것으로 입증된 혈관 성장과 지방 세포 분화의 균형을 더욱 촉진하는 데 도움이 되었습니다.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Three-dimensional Optical-resolution Photoacoustic Microscopy

입체 광학 해상도 Photoacoustic 현미경

Optical microscopy, providing valuable insights at the cellular and organelle levels, has been widely recognized as an enabling biomedical technology. As ...

연구

생체공학

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