Name: an in vitro dissolution determination of multi-index components in tibetan medicine rhodiola granules
Uploaded: 2022-11-04T15:00:00
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Ce travail a été financé par le Programme national de recherche et de développement clé de Chine (2017YFC1703904), le projet de coopération Université (Université de Chengdu de MTC) - entreprise (Tibet Rhodiola Pharmaceutical Holding Co. LTD) (1052022040101); le projet régional d’innovation et de coopération du Département de la science et de la technologie de la province du Sichuan (2020YFQ0032); et le programme clé de R&D et de transformation du Département de la science et de la technologie de la province du Qinghai (2020-SF-C33).

1. Préparation de la solution
<ol><li>Préparer la solution mère de la substance de référence : Peser 10,6 mg de salidroside, 5,24 mg d’acide gallique et 5,21 mg d’acide éthylgallique séparément sur une balance d’analyse électronique et les ajouter individuellement dans une fiole jaugée de 5 mL. Ensuite, ajouter du méthanol de qualité CLHP pour le dissoudre et le diluer à 5 mL. Enfin, bien agiter pour obtenir la solution mère de la substance de référence avec des concentrations mas...

<ol>
	<li>Smith, S. C., Zheng, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impending+cardiovascular+pandemic+in+China.">The impending cardiovascular pandemic in China.</a> Circulation Cardiovascular Quality and Outcomes. 3 (3), 226-227 (2010).</li><li>Wang, D., Wang, P., Zhang, R., Xi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+and+safety+of+Xuefu+Zhuyu+decoction+combined+with+Western+medicine+for+angina+pectoris+in+coronary+heart+disease:+A+protocol+for+systematic+review+and+meta-analysis.">Efficacy and safety of Xuefu Zhuyu decoction combined with Western medicine for angina pectoris in coronary heart disease: A protocol for systematic review and meta-analysis.</a> Medicine. 99 (50), 23195 (2020).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+traditional+Chinese+medicine+in+the+regulation+of+stress+in+treating+coronary+heart+disease.">The role of traditional Chinese medicine in the regulation of stress in treating coronary heart disease.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2019, 3231424 (2019).</li><li>Yang, J., Tian, S., Zhao, J., Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+mechanism+of+TCM+formulae+in+the+treatment+of+different+types+of+coronary+heart+disease+by+network+pharmacology+and+machining+learning.">Exploring the mechanism of TCM formulae in the treatment of different types of coronary heart disease by network pharmacology and machining learning.</a> Pharmacological Research. 159, 105034 (2020).</li><li>Pu, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+effects+of+Rhodiola+rosea+L.:+A+review.">Anti-inflammatory effects of Rhodiola rosea L.: A review.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 121, 109552 (2020).</li><li>Tao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhodiola+species:+A+comprehensive+review+of+traditional+use,+phytochemistry,+pharmacology,+toxicity,+and+clinical+study.">Rhodiola species: A comprehensive review of traditional use, phytochemistry, pharmacology, toxicity, and clinical study.</a> Medicinal Research Reviews. 39 (5), 1779-1850 (2019).</li><li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+biochemical+basis+of+the+meridian+tropism+theory+for+the+qi-invigorating+traditional+Chinese+medicine+herb+Panax+ginseng.">Exploring the biochemical basis of the meridian tropism theory for the qi-invigorating traditional Chinese medicine herb Panax ginseng.</a> Journal of Evidence-Based Integrative Medicine. 26, 2515690 (2021).</li><li>Pang, Y., Liang, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Nordicam+on+hemodynamics+in+rats+with+myocardial+ischemia-reperfusion+injury.">Effect of Nordicam on hemodynamics in rats with myocardial ischemia-reperfusion injury.</a> Journal of Chinese Medicinal Materials. 36 (2), 276-279 (2013).</li><li>Nickerson, B., Kong, A., Gerst, P., Kao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+dissolution+and+disintegration+results+for+an+immediate-release+tablet.">Correlation of dissolution and disintegration results for an immediate-release tablet.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 150, 333-340 (2018).</li><li>Kambayashi, A., Yomota, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+clinically+relevant+dissolution+specifications+for+oral+solid+dosage+forms+of+weak+acid+drugs+using+an+in+silico+modeling+and+simulation+approach.">Exploring clinically relevant dissolution specifications for oral solid dosage forms of weak acid drugs using an in silico modeling and simulation approach.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 159, 105728 (2021).</li><li>Meng, S., Jiang, T. 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B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calculation+of+drug+solubility+Weibull+distribution+parameters+by+Origin+software.">Calculation of drug solubility Weibull distribution parameters by Origin software.</a> Herald of Medicine. 30 (06), 721-723 (2011).</li><li>Hu, C. Q., Pan, R. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+evaluation/prediction+of+bioequivalence+of+solid+oral+preparations+by+dissolution+test.">Progress in evaluation/prediction of bioequivalence of solid oral preparations by dissolution test.</a> Chinese Journal of New Drugs. 23 (01), 44-51 (2014).</li><li>Zhang, H., Yu, L. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytical+strategies+for+the+discovery+and+validation+of+quality-markers+of+traditional+Chinese+medicine.">Analytical strategies for the discovery and validation of quality-markers of traditional Chinese medicine.</a> Phytomedicine. 67, 153165 (2020).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+modified+biopharmaceutics+classification+system+absorption+model+for+oral+Traditional+Chinese+Medicine+(Sanye+Tablet).">Establishment of modified biopharmaceutics classification system absorption model for oral Traditional Chinese Medicine (Sanye Tablet).</a> Journal of Ethnopharmacology. 244, 112148 (2019).</li><li>Song, X. Y., Li, Y. D., Shi, Y. P., Jin, L., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+control+of+traditional+Chinese+medicines:+a+review.">Quality control of traditional Chinese medicines: a review.</a> Chinese Journal of Natural Medicines. 11 (6), 596-607 (2013).</li><li>Wu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+markers+based+on+biological+activity:+A+new+strategy+for+the+quality+control+of+traditional+Chinese+medicine.">Quality markers based on biological activity: A new strategy for the quality control of traditional Chinese medicine.</a> Phytomedicine. 44, 103-108 (2018).</li><li>Wei, N. -. N., Wang, X., Su, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+of+dissolution+test+methodologies.">Progress of dissolution test methodologies.</a> Chinese Journal of New Drugs. 22 (10), 1119-1124 (2013).</li><li>Chi, Z., Azhar, I., Khan, H., Yang, L., Feng, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automatic+dissolution+testing+with+high-temporal+resolution+for+both+immediate-release+and+fixed-combination+drug+tablets.">Automatic dissolution testing with high-temporal resolution for both immediate-release and fixed-combination drug tablets.</a> Scientific Reports. 9 (1), 17114 (2019).</li><li>Haidar, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioequivalence+approaches+for+highly+variable+drugs+and+drug+products.">Bioequivalence approaches for highly variable drugs and drug products.</a> Pharmaceutical Research. 25 (1), 237-241 (2008).</li></ol>

Le test de dissolution est une méthode in vitro idéale pour simuler la désintégration et la dissolution de préparations orales solides dans le tractus gastro-intestinal15. C’est un indice important pour évaluer et contrôler la qualité des préparations orales solides. Par conséquent, le test de dissolution joue un rôle essentiel dans le développement de préparations orales médicamenteuses solides16. En particulier, avec le développement de la techno...

En Chine, la prévalence des maladies cardiovasculaires continue d’augmenter et les taux de morbidité et de mortalité des maladies cardiovasculaires occupent la première place parmi les résidents chinois1. L’angine de poitrine de la maladie coronarienne est causée par une sténose luminale due à l’athérosclérose coronarienne, ce qui entraîne un apport sanguin coronaire relativement insuffisant et une ischémie myocardique et une hypoxie2. Ces dernières années, l’effet curatif de la médecine traditionnelle chinoise dans le traitement des maladies coronariennes a été reconnu par de nombreux médecins3.
La médecine traditionnelle chinoise joue un rôle important dans le soulagement des symptômes cliniques et l’amélioration de la qualité de vie des patients4. Les granules de Rhodiola (RG) sont extraits et raffinés de la plante médicinale du plateau tibétain Rhodiola rosea L. Les principaux composants de RG sont le salidroside, la rhodiosine et les flavonoïdes 5,6. RG a pour effet de compléter le Qi7 et d’activer et de favoriser la circulation sanguine pour soulager la douleur. Cliniquement, il est utilisé pour traiter les obstructions thoraciques causées par une carence en Qi et une stase sanguine, une maladie coronarienne, une angine de poitrine8. La détermination du contenu ne reflète pas entièrement la qualité intrinsèque des médicaments, car la désintégration et la dissolution in vitro peuvent affecter la biodisponibilité et l’efficacité des médicaments 9,10. Les méthodes d’inspection pour la dissolution de la médecine chinoise comprennent la méthode du panier rotatif, la méthode de la pagaie et la méthode de la petite tasse. L’inconvénient de la méthode du panier rotatif est que seule la partie extérieure du panier rotatif entre en contact avec le milieu de dissolution pendant la rotation, ce qui ne reflète pas le comportement de dissolution réel. La méthode de la pagaie peut surmonter la lacune ci-dessus, ce qui la rend plus appropriée que la méthode du panier pour certaines préparations de médecine chinoise solides11. À l’heure actuelle, il n’existe aucun rapport sur l’analyse de dissolution in vitro du RG. Afin de contrôler la qualité du RG de manière plus complète, le comportement de dissolution des trois composants de l’indice (acide gallique, salidroside et gallate d’éthyle) dans le RG a été étudié. Cette étude fournit des données pour le contrôle de la qualité du RG et une référence méthodologique pour l’évaluation de la qualité d’autres préparations de composés ethniques.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chromatographic column</td>
			<td>ZORBAX Eclipse&#160;&#160;</td>
			<td>XDB-C18</td>
			<td>4.6 mm x 250 mm, 5 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drug dissolution tester</td>
			<td>Shanghai Huanghai Pharmaceutical Inspection Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>RCZ-6B3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic analytical balance</td>
			<td>Shanghai Liangping Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>FA1004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl gallate (HPLC, &#8805;98%)</td>
			<td>Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>DSTDM006301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Function drawing software</td>
			<td>OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA</td>
			<td>2022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gallic acid (HPLC, &#8805;98%)</td>
			<td>Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>DSTDM000802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High performance liquid chromatography</td>
			<td>Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd.</td>
			<td>Agilent 1260 Infinity <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/64670/64670eq01.jpg" style="margin: auto;" /></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC grade methanol</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific (China) Co., Ltd.</td>
			<td>216565</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injector</td>
			<td>Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus &#38; Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>0.7 (22 G)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millipore filter</td>
			<td>Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd</td>
			<td>&#966;13 0.22 Nylon66</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhodiola granules</td>
			<td>Tibet Nodikang Pharmaceutical Co., Ltd.</td>
			<td>210501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salidroside (HPLC, &#8805;98%)</td>
			<td>Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>DST200425-037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra pure water systemic</td>
			<td>Merck Millipore Ltd.</td>
			<td>Milli-Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleansing machine</td>
			<td>Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd</td>
			<td>SB-8200 DTS</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro dissolution determination of multi-index components in tibetan medicine rhodiola granules

La composition des granules de rhodiola (RG) de la médecine tibétaine est complexe et la qualité globale du RG est difficile à déterminer. Par conséquent, l’établissement d’une méthode pour déterminer la dissolution in vitro multicomposant du RG est d’une grande importance pour le contrôle de la qualité. Cette étude utilise la deuxième méthode de pagaie de la quatrième règle générale 0931 de la pharmacopée chinoise (édition 2020), conforme à l’appareil 2 de la pharmacopée des États-Unis (USP). L’appareil de dissolution a été réglé sur une vitesse de rotation de 100 tr/min avec de l’eau ultrapure comme milieu de dissolution. Un volume d’échantillon de 1 mL a été prélevé à chaque point temporel. De plus, la dissolution cumulative de l’acide gallique, du salidroside et de l’acide éthylgallique dans le RG à différents moments a été déterminée par chromatographie liquide à haute performance (CLHP). Enfin, les courbes de dissolution ont été dessinées et les courbes ont été ajustées aux équations de GompertzMod, de Gompertz, de logistique et de Weibull. Les résultats ont montré que la dissolution cumulative de l’acide gallique dans RG était supérieure à 80% à 1 min, la dissolution cumulative du salidroside et de l’acide éthylgallique était supérieure à 65% à 5 min, et la dissolution cumulative de chaque composant de l’indice diminuait après 30 min. L’ajustement de la courbe a démontré que l’équation de GompertzMod était le modèle le mieux ajusté pour chaque composante d’indice de RG. En conclusion, la méthode d’essai de dissolution décrite dans ce protocole est simple, précise et fiable. Il peut caractériser le comportement de dissolution des composants de l’indice dans RG in vitro, ce qui fournit une référence méthodologique pour le contrôle de la qualité du RG et l’évaluation de la qualité d’autres composés ethniques.

Dans cette étude, la précision, la stabilité, la répétabilité et la récupération de l’échantillon de RG se situaient toutes dans la plage méthodologique spécifiée dans la pharmacopée chinoise (volume 4, 2020)12, ce qui indique que la méthode était réalisable. Après un débogage répété, il a été déterminé que le gradient d’élution utilisé dans cette étude avait une bonne résolution (figure 1) pour les trois composantes de l’indice dans...

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An In Vitro Dissolution Determination of Multi-Index Components in Tibetan Medicine Rhodiola Granules

Ici, nous testons la dissolution des granules de Rhodiola (RG) in vitro, traçons des courbes de dissolution du salidroside, de l’acide gallique et du gallate d’éthyle dans de l’eau ultrapure, et ajustons les courbes à différents modèles mathématiques. Ce protocole fournit des informations et des conseils pour les études de bioéquivalence in vivo et de corrélation in vivo-in vitro de RG.

Détermination in vitro de la dissolution de composants multi-index en médecine tibétaine Granules de rhodiola

The composition of the Tibetan medicine Rhodiola granules (RG) is complex, and the overall quality of RG is difficult to determine. Therefore, ...

La mesure in vitro est une mesure appropriée pour inspecter la dissolution des solutions de préparation solide de la médecine chinoise qui tiennent compte des effets de la désintégration du médicament, du comportement de dissolution et de la teneur en ingrédient actif. La détection d’une composante multi-index peut mieux refléter l’influence neutre et la différence de dissolution des différentes composantes. La démonstration de la procédure sera Quinyun Du, un étudiant extraordinaire de mon laboratoire.Pour commencer, préparer la solution mère de la substance de référence en pesant 10,6 milligrammes de salidrocide, 5,24 milligrammes d’acide gallique et 5,21 milligrammes d’acide éthylgallique séparément sur une balance analytique électronique. Ensuite, ajoutez-les individuellement dans une fiole jaugée de cinq millilitres. Ajoutez ensuite du méthanol de qualité CLHP pour le dissoudre et diluez à cinq millilitres.Et enfin, bien agiter pour obtenir la solution mère de la substance de référence avec des concentrations massiques de 2,120, 1,048 et 1,042 milligrammes par millilitre, respectivement. Pour préparer la solution de l’échantillon d’essai, extraire 2,8 grammes de granules de rhodiola avec 10 millilitres de méthanol de qualité CLHP, à l’aide d’une machine de nettoyage à ultrasons pendant 30 minutes. Ensuite, filtrez-le avec un filtre de 0,22 micromètre pour le test d’adaptabilité du système.Ensuite, préparez une solution de référence mélangée qui contient 0,590 milligramme par millilitre de salidrocide, 2,030 milligrammes par millilitre d’acide gallique et 1,930 milligrammes par millilitre de gallate d’éthyle. Pour obtenir la teneur théorique de chaque composant caractéristique des granules de rhodiola, placer 2,8 grammes de granulés de rhodiola dans une fiole conique de 500 millilitres. Ajouter 200 millilitres d’eau ultrapure et extraire par ultrasons pendant 60 minutes.Ensuite, filtrez-le avec un filtre de 0,22 micromètre. Après avoir déterminé le contenu de la solution d’essai, fixer les conditions chromatographiques pour la chromatographie liquide à haute performance telles que décrites dans le manuscrit. Pour étudier la relation linéaire, diluer les solutions mères de référence d’acide gallique et de gallate d’éthyle, et les solutions mères de référence de salidrocide pour obtenir la solution de concentration de gradient permettant de tracer une courbe étalon.Injectez ensuite 10 microlitres de la solution de référence mélangée dans le système HPLC six fois par jour et exécutez les échantillons avec les mêmes conditions HPLC, tout en enregistrant la surface de pic de chaque composant de la caractéristique. Ensuite, injectez 10 microlitres de la solution d’échantillon préparée et déterminez les zones de pic de la CLHP en fonction des conditions chromatographiques à différents intervalles de temps. Prélever six échantillons du même lot de granulés de rhodiola pour préparer la solution d’échantillon d’essai comme démontré précédemment, et injecter 10 microlitres de chaque échantillon dans le système CLHP.Exécutez les échantillons comme indiqué précédemment pour déterminer la reproductibilité. Après avoir préparé six portions du même lot de granulés de rhodiola pour la solution d’essai, ajouter environ 50 % du substrat de référence de chaque composant d’indice. Exécutez ces échantillons dans le système HPLC, comme démontré précédemment, pour calculer le taux de récupération tel que décrit dans le manuscrit.Pour effectuer le test de dissolution, ajoutez 100 millilitres d’eau ultrapure dans la coupelle de dissolution de l’appareil de dissolution du médicament et maintenez la température à 37 degrés Celsius avec une vitesse de rotation de 100 tr / min. Ensuite, ajoutez 2,8 grammes de granules de rhodiola dans une tasse de dissolution et commencez immédiatement à enregistrer la durée de la dissolution. Prélever un total d’un millilitre de l’échantillon avec un injecteur à différents intervalles de temps et compléter immédiatement le volume dans la coupelle de dissolution avec un milieu de dissolution à la même température.Remplissez immédiatement les échantillons prélevés à travers une membrane microporeuse de 0,22 micromètre et prenez le filtrat suivant. Après avoir déterminé le contenu de chaque composant, à chaque point temporel par CLHP, calculer la dissolution de chaque point temporel et la dissolution cumulative comme décrit dans le manuscrit. Le chromatogramme de l’échantillon et la solution de référence ont été obtenus.Trois pics différents correspondant à l’acide gallique, au salidrocide et au gallate d’éthyle montrent que le gradient d’élution avait une bonne résolution pour les trois composants de l’indice dans les granules de rhodiola. Les courbes de dissolution de chaque composant montrent que la dissolution cumulée de l’acide gallique était supérieure à 80% après une minute. Alors que pour le salidrocide et l’acide éthylgallique, il était supérieur à 65% après cinq minutes.Cependant, la dissolution cumulative de chaque composante de l’indice a diminué après 30 minutes. En ajustant le problème de dilution de la courbe standard, en fonction de l’expérience préliminaire du traitement de l’échantillon, les échantillons doivent être prélevés rapidement pour éviter qu’ils ne manquent un point de temps de collecte spécial.

Research

JoVE Journal

Medicine

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