Name: an in vitro dissolution determination of multi-index components in tibetan medicine rhodiola granules
Uploaded: 2022-11-04T15:00:00
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Diese Arbeit wurde finanziert durch das National Key Research and Development Program of China (2017YFC1703904), das Kooperationsprojekt der Universität (Chengdu University of TCM) - Enterprise (Tibet Rhodiola Pharmaceutical Holding Co. LTD) (1052022040101); das regionale Innovations- und Kooperationsprojekt des Ministeriums für Wissenschaft und Technologie der Provinz Sichuan (2020YFQ0032); und das wichtige F&E- und Transformationsprogramm der Abteilung für Wissenschaft und Technologie der Provinz Qinghai (2020-SF-C33).

1. Vorbereitung der Lösung
<ol><li>Bereiten Sie die Referenzsubstanz-Stammlösung vor: 10,6 mg Salidrosid, 5,24 mg Gallussäure und 5,21 mg Ethylgallussäure werden separat auf einer elektronischen Analysenwaage abgewogen und einzeln in einen 5-ml-Messkolben gegeben. Fügen Sie dann Methanol in HPLC-Qualität hinzu, um es aufzulösen und auf 5 ml zu verdünnen. Zum Schluss gut schütteln, um die Stammlösung der Referenzsubstanz mit Massenkonzentrationen von 2,120 mg/ml, 1,048 mg/ml bzw. 1,042 mg/ml z...

<ol>
	<li>Smith, S. C., Zheng, Z. 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H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioequivalence+approaches+for+highly+variable+drugs+and+drug+products.">Bioequivalence approaches for highly variable drugs and drug products.</a> Pharmaceutical Research. 25 (1), 237-241 (2008).</li></ol>

Der Freisetzungstest ist eine ideale In-vitro-Methode, um den Zerfall und die Auflösung von festen oralen Präparaten im Magen-Darm-Trakt zu simulieren15. Es ist ein wichtiger Index zur Bewertung und Kontrolle der Qualität fester oraler Präparate. Daher spielt der Auflösungstest eine wesentliche Rolle bei der Entwicklung von oralen Präparaten mit festen Arzneimitteln16. Insbesondere mit der Entwicklung der Qualitätskontrolltechnologie der Traditionellen Chine...

In China steigt die Prävalenz von Herz-Kreislauf-Erkrankungen weiter an, und die Morbiditäts- und Mortalitätsraten von Herz-Kreislauf-Erkrankungen stehen bei den chinesischen Einwohnern an erster Stelle1. Die Angina pectoris der koronaren Herzkrankheit wird durch eine luminale Stenose aufgrund einer koronaren Atherosklerose verursacht, die zu einer relativ unzureichenden koronaren Blutversorgung und Myokardischämie und Hypoxie führt2. In den letzten Jahren wurde die heilende Wirkung der traditionellen chinesischen Medizin bei der Behandlung der koronaren Herzkrankheit von vielen Ärzten erkannt3.
Die Traditionelle Chinesische Medizin spielt eine wichtige Rolle bei der Linderung klinischer Symptome und der Verbesserung der Lebensqualität der Patienten4. Rhodiola-Granulat (RG) wird aus der tibetischen Plateau-Heilpflanze Rhodiola rosea L gewonnen und veredelt. Die Hauptbestandteile von RG sind Salidrosid, Rhodiosin und Flavonoide 5,6. RG hat die Wirkung, Qi7 zu ergänzen und die Durchblutung zu aktivieren und zu fördern, um Schmerzen zu lindern. Klinisch wird es zur Behandlung von Thoraxobstruktionen eingesetzt, die durch Qi-Mangel und Blutstauung, koronare Herzkrankheit und Angina pectorisverursacht werden 8. Die Bestimmung des Gehalts allein spiegelt die intrinsische Qualität der Arzneimittel nicht vollständig wider, da sowohl der Zerfall als auch die Auflösung in vitro die Bioverfügbarkeit und Wirksamkeit der Arzneimittel beeinflussen können9,10. Zu den Inspektionsmethoden für die Auflösung der chinesischen Medizin gehören die rotierende Korbmethode, die Paddelmethode und die kleine Tassenmethode. Der Nachteil des rotierenden Korbverfahrens besteht darin, dass nur der äußere Teil des rotierenden Korbes während der Rotation mit dem Auflösungsmedium in Kontakt kommt, was das reale Auflösungsverhalten nicht widerspiegelt. Die Paddelmethode kann den oben genannten Mangel überwinden, wodurch sie für einige Präparate der festen chinesischen Medizin besser geeignet ist als die Korbmethode11. Derzeit gibt es keinen Bericht über die In-vitro-Auflösungsanalyse von RG. Um die Qualität von RG umfassender kontrollieren zu können, wurde das Auflösungsverhalten der drei Indexkomponenten (Gallussäure, Salidrosid und Ethylgallat) in RG untersucht. Diese Studie liefert Daten für die Qualitätskontrolle von RG und eine methodische Referenz für die Qualitätsbewertung anderer ethnischer Präparate.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chromatographic column</td>
			<td>ZORBAX Eclipse&#160;&#160;</td>
			<td>XDB-C18</td>
			<td>4.6 mm x 250 mm, 5 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drug dissolution tester</td>
			<td>Shanghai Huanghai Pharmaceutical Inspection Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>RCZ-6B3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic analytical balance</td>
			<td>Shanghai Liangping Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>FA1004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl gallate (HPLC, &#8805;98%)</td>
			<td>Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>DSTDM006301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Function drawing software</td>
			<td>OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA</td>
			<td>2022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gallic acid (HPLC, &#8805;98%)</td>
			<td>Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>DSTDM000802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High performance liquid chromatography</td>
			<td>Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd.</td>
			<td>Agilent 1260 Infinity <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/64670/64670eq01.jpg" style="margin: auto;" /></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC grade methanol</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific (China) Co., Ltd.</td>
			<td>216565</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injector</td>
			<td>Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus &#38; Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>0.7 (22 G)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millipore filter</td>
			<td>Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd</td>
			<td>&#966;13 0.22 Nylon66</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhodiola granules</td>
			<td>Tibet Nodikang Pharmaceutical Co., Ltd.</td>
			<td>210501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salidroside (HPLC, &#8805;98%)</td>
			<td>Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>DST200425-037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra pure water systemic</td>
			<td>Merck Millipore Ltd.</td>
			<td>Milli-Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleansing machine</td>
			<td>Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd</td>
			<td>SB-8200 DTS</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro dissolution determination of multi-index components in tibetan medicine rhodiola granules

Die Zusammensetzung des tibetischen Arzneimittels Rhodiola-Granulat (RG) ist komplex und die Gesamtqualität von RG ist schwer zu bestimmen. Daher ist die Etablierung einer Methode zur Bestimmung der Mehrkomponenten-In-vitro-Auflösung von RG von großer Bedeutung für die Qualitätskontrolle. In dieser Studie wird die zweite Paddelmethode der vierten allgemeinen Regel 0931 des chinesischen Arzneibuchs (Ausgabe 2020) verwendet, die mit dem Gerät 2 des Arzneibuchs der Vereinigten Staaten (USP) übereinstimmt. Die Auflösungsvorrichtung wurde auf eine Drehzahl von 100 U/min mit Reinstwasser als Auflösungsmedium eingestellt. Zu jedem Zeitpunkt wurde ein Probenvolumen von 1 ml entnommen. Darüber hinaus wurde die kumulative Auflösung von Gallussäure, Salidrosid und Ethylgallussäure in RG zu verschiedenen Zeitpunkten mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) bestimmt. Schließlich wurden die Auflösungskurven gezeichnet und die Kurven an die GompertzMod-, Gompertz-, Logistik- und Weibull-Gleichungen angepasst. Die Ergebnisse zeigten, dass die kumulative Auflösung von Gallussäure in RG nach 1 min über 80% betrug, die kumulative Auflösung von Salidrosid und Ethylgallussäure nach 5 min über 65% betrug und die kumulative Auflösung jeder Indexkomponente nach 30 min abnahm. Die Kurvenanpassung zeigte, dass die GompertzMod-Gleichung das am besten passende Modell für jede Indexkomponente von RG war. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die in diesem Protokoll beschriebene Auflösungstestmethode einfach, genau und zuverlässig ist. Es kann das Auflösungsverhalten der Indexkomponenten in RG in vitro charakterisieren, was eine methodische Referenz für die Qualitätskontrolle von RG und die Qualitätsbewertung anderer ethnischer Verbindungen darstellt.

In dieser Studie lagen die Präzision, Stabilität, Wiederholbarkeit und Probenrückgewinnung von RG alle innerhalb des methodischen Bereichs, der im chinesischen Arzneibuch (Band 4, 2020)12 angegeben ist, was darauf hindeutet, dass die Methode durchführbar ist. Nach wiederholtem Debuggen wurde festgestellt, dass der in dieser Studie verwendete Elutionsgradient eine gute Auflösung (Abbildung 1) für die drei Indexkomponenten in RG aufwies. Die drei Indexkomponenten ...

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An In Vitro Dissolution Determination of Multi-Index Components in Tibetan Medicine Rhodiola Granules

Hier testen wir die Auflösung von Rhodiola-Granulat (RG) in vitro, zeichnen Auflösungskurven von Salidrosid, Gallussäure und Ethylgallat in Reinstwasser und passen die Kurven an verschiedene mathematische Modelle an. Dieses Protokoll enthält Informationen und Leitlinien für In-vivo-Bioäquivalenz- und In-vivo-In-vitro-Korrelationsstudien von RG.

Eine In-vitro-Auflösungsbestimmung von Multi-Index-Komponenten in der tibetischen Medizin Rhodiola-Granulat

The composition of the Tibetan medicine Rhodiola granules (RG) is complex, and the overall quality of RG is difficult to determine. Therefore, ...

Die In-vitro-Maßnahme ist eine geeignete Maßnahme zur Inspektion der Auflösung von Lösungen fester chinesischer Medizin, die die Auswirkungen des Arzneimittelzerfalls und das Auflösungsverhalten sowie den Wirkstoffgehalt berücksichtigen. Die Detektion von Multi-Index-Komponenten kann den neutralen Einfluss und die Auflösungsdifferenz verschiedener Komponenten besser widerspiegeln. Das Verfahren wird von Quinyun Du demonstriert, einem außergewöhnlichen Studenten aus meinem Labor.Bereiten Sie zunächst die Stammlösung der Referenzsubstanz vor, indem Sie 10,6 Milligramm Salidrocide, 5,24 Milligramm Gallussäure und 5,21 Milligramm Ethylgallussäure separat auf einer elektronischen Analysenwaage wiegen. Dann geben Sie sie einzeln in einen Fünf-Milliliter-Messkolben. Fügen Sie dann Methanol in HPLC-Qualität hinzu, um es aufzulösen, und verdünnen Sie es auf fünf Milliliter.Zum Schluss gut schütteln, um die Stammlösung der Referenzsubstanz mit Massenkonzentrationen von 2,120, 1,048 bzw. 1,042 Milligramm pro Milliliter zu erhalten. Zur Herstellung der Testprobenlösung werden 2,8 Gramm Rhodiola-Granulat mit 10 Millilitern Methanol in HPLC-Qualität 30 Minuten lang mit einer Ultraschallreinigungsmaschine extrahiert. Filtern Sie es dann mit einem 0,22-Mikrometer-Filter für den Test der Anpassungsfähigkeit des Systems.Stellen Sie dann eine gemischte Referenzlösung her, die 0,590 Milligramm pro Milliliter Salidrocide, 2,030 Milligramm pro Milliliter Gallussäure und 1,930 Milligramm pro Milliliter Ethylgallat enthält. Um den theoretischen Gehalt jeder charakteristischen Komponente von Rhodiola-Granulat zu erhalten, geben Sie 2,8 g Rhodiola-Granulat in einen 500-Milliliter-Kegelkolben. Fügen Sie 200 Milliliter Reinstwasser hinzu und extrahieren Sie es 60 Minuten lang mit Ultraschall.Filtern Sie es dann mit einem 0,22-Mikrometer-Filter. Nachdem Sie den Inhalt der Testlösung bestimmt haben, stellen Sie die chromatographischen Bedingungen für die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie wie im Manuskript beschrieben ein. Um die lineare Beziehung zu untersuchen, verdünnen Sie die Referenzstammlösungen von Gallussäure und Ethylgallat und die Referenzstammlösungen von Salidroczid, um die Gradientenkonzentrationslösung zum Zeichnen einer Standardkurve zu erhalten.Dann injizieren Sie sechsmal täglich 10 Mikroliter der gemischten Referenzlösung in das HPLC-System und lassen Sie die Proben unter den gleichen HPLC-Bedingungen laufen, während Sie die Peakfläche jeder Merkmalskomponente aufzeichnen. Als nächstes injizieren Sie 10 Mikroliter der vorbereiteten Probenlösung und bestimmen Sie die Peakflächen der HPLC gemäß den chromatographischen Bedingungen in verschiedenen Zeitintervallen. Nehmen Sie sechs Proben derselben Charge von Rhodiola-Granulat, um die zuvor gezeigte Testprobenlösung herzustellen, und injizieren Sie 10 Mikroliter jeder Probe in das HPLC-System.Führen Sie die Proben wie zuvor gezeigt aus, um die Reproduzierbarkeit zu bestimmen. Nachdem sechs Portionen derselben Charge von Rhodiola-Granulat für die Testlösung hergestellt wurden, werden etwa 50% des Referenzsubstrats jeder Indexkomponente zugegeben. Führen Sie diese Proben im HPLC-System aus, wie zuvor gezeigt, um die im Manuskript beschriebene Wiederfindungsrate zu berechnen.Um den Auflösungstest durchzuführen, geben Sie 100 Milliliter Reinstwasser in den Auflösungsbecher des Arzneimittelauflösungsgeräts und halten Sie die Temperatur bei 37 Grad Celsius mit einer Drehzahl von 100 U / min. Als nächstes geben Sie 2,8 Gramm Rhodiola-Granulat in einen Auflösungsbecher und beginnen Sie sofort mit der Aufzeichnung der Auflösungsdauer. Sammeln Sie insgesamt einen Milliliter der Probe mit einem Injektor in verschiedenen Zeitintervallen und füllen Sie das Volumen im Auflösungsbecher sofort mit einem Auflösungsmedium bei gleicher Temperatur auf.Füllen Sie die gesammelten Proben sofort durch eine 0,22 Mikrometer mikroporöse Membran und entnehmen Sie das anschließende Filtrat. Nachdem Sie den Inhalt jeder Komponente zu jedem Zeitpunkt durch HPLC bestimmt haben, berechnen Sie die Auflösung jedes Zeitpunkts und die kumulative Auflösung, wie im Manuskript beschrieben. Das Chromatogramm der Probe und die Referenzlösung wurden erhalten.Drei verschiedene Peaks, die Gallussäure, Salidrozid und Ethylgallat entsprechen, zeigen, dass der Elutionsgradient eine gute Auflösung für die drei Indexkomponenten in Rhodiola-Granulaten hatte. Die Auflösungskurven jeder Komponente zeigen, dass die kumulative Auflösung von Gallussäure nach einer Minute über 80% betrug. Bei Salidrazid und Ethylgallussäure lag sie nach fünf Minuten bei über 65 %.Die kumulative Auflösung jeder Indexkomponente nahm jedoch nach 30 Minuten ab. Bei der Anpassung des Verdünnungsproblems der Standardkurve gemäß dem Vorexperiment der Probenbehandlung müssen die Proben schnell entnommen werden, um zu vermeiden, dass sie einen speziellen Zeitpunkt für die Entnahme verpassen.

Research

JoVE Journal

Medicine

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