Name: an in vitro dissolution determination of multi-index components in tibetan medicine rhodiola granules
Uploaded: 2022-11-04T15:00:00
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この作業は、中国の国家重点研究開発プログラム(2017YFC1703904)、大学(成都TCM大学)-企業(チベットロディオラ製薬ホールディング株式会社)協力プロジェクト(1052022040101)によって資金提供されました。四川省科学技術局の地域イノベーションと協力プロジェクト(2020YFQ0032);青海省科学技術局の主要研究開発および変革プログラム(2020-SF-C33)。

1. 溶液調製
<ol><li>参照物質ストック溶液を調製する:電子分析天秤でサリドロシド10.6 mg、没食子酸5.24 mg、没食子酸エチル5.21 mgを別々に計量し、5 mLメスフラスコに個別に加えます。次に、HPLCグレードのメタノールを加えて溶解し、5 mLに希釈します。最後によく振とうして、質量濃度がそれぞれ2.120 mg/mL、1.048 mg/mL、1.042 mg/mLの標準物質原液を得ます。 注:参照物質ストック溶液...

<ol>
	<li>Smith, S. C., Zheng, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impending+cardiovascular+pandemic+in+China.">The impending cardiovascular pandemic in China.</a> Circulation Cardiovascular Quality and Outcomes. 3 (3), 226-227 (2010).</li><li>Wang, D., Wang, P., Zhang, R., Xi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+and+safety+of+Xuefu+Zhuyu+decoction+combined+with+Western+medicine+for+angina+pectoris+in+coronary+heart+disease:+A+protocol+for+systematic+review+and+meta-analysis.">Efficacy and safety of Xuefu Zhuyu decoction combined with Western medicine for angina pectoris in coronary heart disease: A protocol for systematic review and meta-analysis.</a> Medicine. 99 (50), 23195 (2020).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+traditional+Chinese+medicine+in+the+regulation+of+stress+in+treating+coronary+heart+disease.">The role of traditional Chinese medicine in the regulation of stress in treating coronary heart disease.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2019, 3231424 (2019).</li><li>Yang, J., Tian, S., Zhao, J., Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+mechanism+of+TCM+formulae+in+the+treatment+of+different+types+of+coronary+heart+disease+by+network+pharmacology+and+machining+learning.">Exploring the mechanism of TCM formulae in the treatment of different types of coronary heart disease by network pharmacology and machining learning.</a> Pharmacological Research. 159, 105034 (2020).</li><li>Pu, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+effects+of+Rhodiola+rosea+L.:+A+review.">Anti-inflammatory effects of Rhodiola rosea L.: A review.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 121, 109552 (2020).</li><li>Tao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhodiola+species:+A+comprehensive+review+of+traditional+use,+phytochemistry,+pharmacology,+toxicity,+and+clinical+study.">Rhodiola species: A comprehensive review of traditional use, phytochemistry, pharmacology, toxicity, and clinical study.</a> Medicinal Research Reviews. 39 (5), 1779-1850 (2019).</li><li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+biochemical+basis+of+the+meridian+tropism+theory+for+the+qi-invigorating+traditional+Chinese+medicine+herb+Panax+ginseng.">Exploring the biochemical basis of the meridian tropism theory for the qi-invigorating traditional Chinese medicine herb Panax ginseng.</a> Journal of Evidence-Based Integrative Medicine. 26, 2515690 (2021).</li><li>Pang, Y., Liang, J. 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H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioequivalence+approaches+for+highly+variable+drugs+and+drug+products.">Bioequivalence approaches for highly variable drugs and drug products.</a> Pharmaceutical Research. 25 (1), 237-241 (2008).</li></ol>

溶出試験は、胃腸管15における固体経口製剤の崩壊および溶解をシミュレートするための理想的なインビトロ法である。固形経口製剤の品質を評価・管理するための重要な指標です。したがって、溶出試験は、固形製剤経口製剤16の開発に不可欠な役割を果たす。特に、伝統的な漢方薬(TCM)品質管理技術の開発に伴い、溶解の決定は、中国および民族?...

中国では、心血管疾患の有病率は上昇し続けており、心血管疾患の罹患率と死亡率は中国居住者の間で第1位にランクされています1。冠状動脈性心臓病の狭心症は、冠動脈アテローム性動脈硬化症による管腔狭窄によって引き起こされ、これは比較的不十分な冠状動脈血液供給および心筋虚血および低酸素症をもたらす2。近年、冠状動脈性心臓病の治療における伝統的な漢方薬の治療効果は、多くの医師によって認識されています3。
伝統的な漢方薬は、臨床症状を緩和し、患者の生活の質を改善する上で重要な役割を果たします4。イワニオラ顆粒(RG)は、チベット高原の薬用植物ロディオラロゼアLから抽出および精製されます。RGの主成分は、サリドロシド、ロジオシン、およびフラボノイド5,6です。RGには気7を補い、血行を活性化・促進して痛みを和らげる効果があります。臨床的には、気の欠乏やうっ血、冠状動脈性心臓病、狭心症によって引き起こされる胸部閉塞の治療に使用されます8。インビトロでの崩壊と溶解の両方が薬物のバイオアベイラビリティと有効性に影響を与える可能性があるため、含量決定だけでは薬物の本質的な品質を完全には反映していません9,10。漢方薬の溶解の検査方法には、回転バスケット法、パドル法、およびスモールカップ法が含まれます。回転バスケット方式の欠点は、回転中に回転バスケットの外側部分のみが溶解媒体と接触することであり、これは実際の溶解挙動を反映していない。パドル法は上記の欠点を克服することができ、バスケット法よりもいくつかの固形漢方薬製剤に適しています11。現在のところ、RGのin vitro溶解分析に関する報告はない。RGの品質をより包括的に制御するために、RG中の3つの指標成分(没食子酸、サリドロシド、没食子酸エチル)の溶解挙動を調べた。この研究は、RGの品質管理のためのデータと、他の民族化合物製剤の品質評価のための方法論的参照を提供します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chromatographic column</td>
			<td>ZORBAX Eclipse&#160;&#160;</td>
			<td>XDB-C18</td>
			<td>4.6 mm x 250 mm, 5 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drug dissolution tester</td>
			<td>Shanghai Huanghai Pharmaceutical Inspection Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>RCZ-6B3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic analytical balance</td>
			<td>Shanghai Liangping Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>FA1004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl gallate (HPLC, &#8805;98%)</td>
			<td>Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>DSTDM006301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Function drawing software</td>
			<td>OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA</td>
			<td>2022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gallic acid (HPLC, &#8805;98%)</td>
			<td>Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>DSTDM000802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High performance liquid chromatography</td>
			<td>Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd.</td>
			<td>Agilent 1260 Infinity <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/64670/64670eq01.jpg" style="margin: auto;" /></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC grade methanol</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific (China) Co., Ltd.</td>
			<td>216565</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injector</td>
			<td>Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus &#38; Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>0.7 (22 G)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millipore filter</td>
			<td>Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd</td>
			<td>&#966;13 0.22 Nylon66</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhodiola granules</td>
			<td>Tibet Nodikang Pharmaceutical Co., Ltd.</td>
			<td>210501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salidroside (HPLC, &#8805;98%)</td>
			<td>Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>DST200425-037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra pure water systemic</td>
			<td>Merck Millipore Ltd.</td>
			<td>Milli-Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleansing machine</td>
			<td>Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd</td>
			<td>SB-8200 DTS</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro dissolution determination of multi-index components in tibetan medicine rhodiola granules

チベット薬ロディオラ顆粒(RG)の組成は複雑であり、RGの全体的な品質を決定することは困難です。したがって、RGの多成分 in vitro 溶解を測定する方法を確立することは、品質管理にとって非常に重要です。本研究では、米国薬局方(USP)の装置2に準拠した中国薬局方(2020年版)の第4一般規則0931の第2パドル法を使用しています。溶解装置は、溶解媒体として超純水で回転数100rpmとした。各時点で1mLのサンプル容量を採取した。さらに、異なる時点でのRG中の没食子酸、サリドロシド、および没食子酸エチルの累積溶解を高速液体クロマトグラフィー(HPLC)によって決定した。最後に、溶解曲線が描かれ、その曲線がゴンペルツモッド、ゴンペルツ、ロジスティック、ワイブル方程式に適合しました。その結果、RGにおける没食子酸の累積溶解は1分で80%以上、サリドロシドと没食子酸エチルの累積溶解は5分で65%以上、各指標成分の累積溶解は30分後に減少した。カーブフィッティングは、GompertzMod方程式がRGの各インデックス成分のベストフィッティングモデルであることを示しました。結論として、このプロトコルに記載されている溶出試験方法は、単純で、正確で、信頼性があります。in vitroでのRGにおける指標成分の溶解挙動を特徴付けることができ、RGの品質管理および他のエスニック化合物の品質評価のための方法論的リファレンスを提供します。

本研究では、RGの精度、安定性、再現性、サンプル回収率は、いずれも中国薬局方(第4巻、2020年)12に規定されている方法論的範囲内であり、この方法が実現可能であることが示された。デバッグを繰り返した後、本研究で使用した溶出勾配は、RGの3つの指標成分に対して良好な分解能(図1)を有することが判明しました。RGの3つの指標成分は、特定の濃?...

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An In Vitro Dissolution Determination of Multi-Index Components in Tibetan Medicine Rhodiola Granules

ここでは、ロディオラ顆粒(RG)のin vitroでの溶解をテストし、超純水中でのサリドロシド、没食子酸、没食子酸エチルの溶解曲線を描き、その曲線をさまざまな数学モデルに適合させます。このプロトコルは、RGのin vivo生物学的同等性およびin vivo-in vitro相関研究のための情報とガイダンスを提供します。

チベット医学ロディオラ顆粒におけるマルチインデックス成分の in vitro 溶解測定

The composition of the Tibetan medicine Rhodiola granules (RG) is complex, and the overall quality of RG is difficult to determine. Therefore, ...

in vitro測定は、薬物崩壊の影響、溶解挙動、および有効成分の含有量を考慮した固形漢方薬製剤の溶液の溶解を検査するのに適した尺度です。マルチインデックス成分の検出は、中立的な影響と異なる成分の溶解差をよりよく反映することができます。手順を実演するのは、私の研究室の並外れた学生であるQuinyun Duです。はじめに、電子分析天びん上で10.6ミリグラムのサリドロサイド、5.24ミリグラムの没食子酸、および5.21ミリグラムの没食子酸エチルを別々に計量することによって、参照物質ストック溶液を調製する。次に、それらを5ミリリットルのメスフラスコに個別に追加します。次に、HPLCグレードのメタノールを加えて溶解し、5ミリリットルに希釈します。そして最後に、よく振って、質量濃度がそれぞれ2.120、1.048、および1.042ミリグラム/ミリリットルの基準物質ストック溶液を得る。試験試料溶液を調製するには、超音波洗浄機を使用して30分間、10ミリリットルのHPLCグレードのメタノールで2.8グラムのロディオラ顆粒を抽出します。次に、システム適応性テスト用に0.22マイクロメートルのフィルターでフィルタリングします。次に、ミリリットルサリドロサイドあたり0.590ミリグラム、没食子酸1ミリリットルあたり2.030ミリグラム、および没食子酸エチルあたり1.930ミリグラムを含む混合参照溶液を調製します。ロディオラ顆粒の各特性成分の理論的含有量を得るために、2.8グラムのロディオラ顆粒を500ミリリットルの円錐フラスコに入れる。200ミリリットルの超純水を加え、60分間超音波抽出します。次に、0.22マイクロメートルのフィルターでろ過します。試験液の含有量を決定した後、原稿に記載されているように高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラフィー条件を設定する。線形関係を調べるには、没食子酸と没食子酸エチルの基準ストック溶液とサリドロサイドの基準ストック溶液を希釈して、検量線を描くための勾配濃度溶液を取得します。次に、10マイクロリットルの混合参照溶液をHPLCシステムに1日6回注入し、各特徴成分のピーク面積を記録しながら、同じHPLC条件でサンプルを実行します。次に調製した試料溶液を10マイクロリットル注入し、異なる時間間隔でクロマトグラフィー条件に従ってHPLCのピーク面積を決定した。前に示したように、同じバッチのロディオラ顆粒の6つのサンプルを採取して試験サンプル溶液を調製し、各サンプルの10マイクロリットルをHPLCシステムに注入します。前述のようにサンプルを実行して、再現性を判断します。試験液用のロディオラ顆粒の同じバッチの6つの部分を調製した後、各指標成分の参照基質の約50%を添加する。前述のように、これらのサンプルをHPLCシステムで実行して、原稿に記載されているように回収率を計算します。溶出試験を行うには、薬物溶解装置の溶解カップに超純水100ミリリットルを加え、回転数100rpmで温度を摂氏37度に維持する。次に、2.8グラムのロディオラ顆粒を溶解カップに加え、すぐに溶解期間の記録を開始します。異なる時間間隔でインジェクターで合計1ミリリットルのサンプルを収集し、すぐに同じ温度で溶解カップ内の体積を溶解媒体で補います。収集したサンプルをすぐに0.22マイクロメートルの微多孔膜に通し、その後の濾液を採取します。各成分の含有量を決定した後、HPLCにより各時点における、各時点の溶出度を算出し、原稿に記載されているように累積溶解量とする。サンプルのクロマトグラム、および参照溶液を得た。没食子酸、サリドロサイド、没食子酸エチルに対応する3つの異なるピークは、ロディオラ顆粒の3つの指標成分に対して溶出勾配が良好な分解能を示したことを示しています。各成分の溶出曲線は、没食子酸の累積溶解が1分後に80%以上であったことを示しています。一方、サリドロシドと没食子酸エチルについては、5分後に65%を超えました。しかし、各指標成分の累積溶解は30分後に減少した。サンプル処理の予備実験に従って、標準曲線の希釈の問題を調整し、サンプルは特別な収集時点を逃さないように迅速に収集する必要があります。

Research

JoVE Journal

Medicine

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マウスの気管の迅速な挿管のための改善された方法

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